裸鼠动物模型在卵巢癌研究中的应用与进展

裸小鼠（nude mice）是1962年英国格拉斯医院Grist在非近交的小鼠中偶然发现的先天性免疫缺陷的动物，用“nu”表示裸基因符号。1969年丹麦Rygaard首先将人类结肠腺癌移植裸小鼠成功，从而为免疫缺陷动物研究和应用开创了新局面。卵巢癌在女性生殖系统恶性肿瘤中发病率居第3位，而死亡率却位居榜首，这主要是由于目前卵巢癌发病病因尚不明确及其早期诊断的困难。随着人类肿瘤组织及肿瘤细胞株移植的成功，动物模型成为各项肿瘤实验研究领域的重要工具。特别是裸小鼠动物模型在卵巢癌中的应用更为广泛。现就近年裸鼠动物模型在卵巢癌中的应用予以概述。     

JM216对人卵巢癌抑制作用的实验研究

目的：研究抗癌新药α－氨－ｂｄ－二乙酰基－ｃｆ－二氯－ｃ环已氨合铂（Ⅳ）（ｂｌｓ－ａｃｅｔａｔｏ－ａｍｍｉｎｅ－ｄｉｃｈｌｏｒｏ－ｃｙｃｌｏ－ｈｅｘｙｌａｍｉｃｅ－ｐｌａｔｉｎｕｍ Ⅳ,ＪＭ２１６）对人卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０增殖昨经口给药对ＨＯ－８９１０裸小鼠移植瘤生长的抑制ＨＯ－８９１０裸小鼠移植癌为模型,观察ＪＭ２１６经口给药对肿瘤生长的抑制作用,用抑制作用,用半数抑制浓并ＩＣ５０表示,以     

小鼠卵巢癌荷瘤动物模型的构建及其细胞系生物学特性分析

背景与目的:目前缺少可靠特异性早期发现卵巢癌,并防止复发和预防耐药的方法。良好的实验模型不仅可以很好地理解影响此疾病表型特征的生物遗传因素,还可以为干预策略的发展提供理论基础。本研究旨在构建小鼠的卵巢癌模型,建立卵巢癌细胞系,分析其生物学特性。方法:对8周龄的C57BL/6N×C3H/He杂交一代(F1)雌性小鼠,用剂量2.7Gy的252Cf的中子放射源给予全身放射线照射,诱导成卵巢癌后进行鼠间传代11次,取瘤组织体外分离培养瘤细胞并传代和建立肿瘤细胞系,应用细胞、分子生物学实验手段对建立的细胞系进行生物学特性检测。结果:经放射线照射成瘤的细胞在鼠间历时23个月传至第11代,皮下移植瘤存活率为100%,体外建立的细胞系OV99与阳性对照卵巢癌细胞系OVHM一样,在体外生长性能稳定。OV99细胞形态学和超微结构符合卵巢癌上皮组织基本特征;细胞含有76条染色体,呈端着丝粒,为鼠肿瘤细胞异常染色体;OV-99的细胞生长状态、细胞周期分布、癌基因p21、p185和抑癌基因p53的蛋白表达定量以及细胞周期蛋白PCNA和CyclinD,MHC表达量,和MAGE-1,MAGE-3mRNA表达等细胞生物学行为和OVHM的结果差异无显著性,但与鼠的正常卵巢组织中癌基因p21、p185和抑癌基因p53的蛋白表达定量以及细胞周期蛋白PCNA和CyclinD以及MHC表达量相比明显升高,MAGE-1、MAGE-3mRNA表达增强。结论:小鼠卵巢癌荷瘤模型及其细胞系OV99的建立为卵巢癌的研究提供了良好的实验材料。通过对OV99细胞的病理形态学、超微结构、染色体分布、细胞周期分布及不同肿瘤特征性基因等生物学行为分析,OV99符合卵巢癌细胞系的特征。     

纽卡斯尔病毒疫苗和白细胞介素-12对荷人卵巢癌裸鼠模型作用的实验研究

目的:探讨纽卡斯尔病毒疫苗(ATV-NDV)和白细胞介素-12(IL-12]对3AO裸鼠皮下移植瘤的影响及其作用机制.方法:建立3AO裸鼠移植瘤模型,随机分为4组,每组10只.Ⅰ组注射ATV-NDV(0.2 mL);Ⅱ组注射IL-12(100 ng/kg);Ⅲ组注射IL-12(100 ng/kg)加ATV-NDV(0.2 mL);Ⅳ组为对照组,腹腔注射生理盐水0.2 mL;观察各组裸鼠成瘤率、生存期和生存延长率及肿瘤生长曲线.流式细胞术(FCM)观察裸鼠移植瘤细胞凋亡率及细胞周期,双标记计数NK细胞比例;称取裸鼠脾脏质量;移植瘤瘤体及各组裸鼠肝、脾、肾行组织病理学变化检查.结果:治疗组在荷瘤裸鼠生长延长率,裸鼠移植瘤细胞凋亡率,NK细胞群计数,裸鼠脾脏重量方面明显高于对照组,Ⅲ组高于Ⅰ组和Ⅱ组.组织病理学检查各治疗组中均可见有肿瘤坏死,肿瘤内及周围有明显的淋巴细胞浸润.结论:ATV-NDV和IL-12对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用.IL-12可增强ATV-NDV对卵巢癌的抑制作用.     

实验性持续腹腔化疗裸小鼠人卵巢癌腹腔移植瘤

目的：评价持续腹腔冲洗化对人卵巢上皮癌裸鼠腹腔瘤治疗的效果,方法：首先用裸鼠建立卵巢浆液性上皮癌细胞株SKOV3腹腔瘤动物模型,然后分3组,即常规cDDP化疗组（常规组）、持续冲洗化疗组（冲洗组）和对照组进行腹腔化疗的动物实验,二疗程后处死裸鼠,测其本重,腹腔瘤大小;流式细胞术（FCM）检测腹腔冲认的细胞周期及凋亡率、瘤组织C-erbB2,Fas的表达,结果：冲洗组的裸鼠末体重（FBW）／初体重（IBW）＝0．886,冲洗组腹腔瘤的体积明显小于常规组,抑瘤率明显增高,差异显著（P＜0．05）,腹腔冲洗液中G1期、S期比例明显下降（P＜0．05）,细胞凋亡率明显升高（P＜0．05）,而细胞数无明显下降（P＞0．05,C－erbB2在常规组、冲洗组和对照缄的表达率分别为59％、42％、和66％,3组之间比较均具有显著意义（P＜0．05－P＜0．01）。Fas凋亡基因在3组的表达率分别为22％、29％和13％,均具有显著意义（P＜0．05－P＜0．01）。结论腹腔持续冲洗化疗治疗裸鼠腹腔瘤与常规方法相比具有显著疗效,且毒性并未有增加的趋势。     

人类卵巢癌原位移植自发转移裸小鼠模型的构建

 目的　用人类卵巢癌组织块原位移植构建与人类卵巢癌最相似的裸鼠原位移植自发转移模型。方法　将人类卵巢癌高转移细胞系8910PM在裸鼠皮下注射成瘤,然后将瘤组织运用显微外科的方法植入裸鼠卵巢包膜内,原位移植成功后继续在鼠间卵巢包膜内传代,并运用透射电镜进一步验证肿瘤形成和转移效果。结果　裸鼠皮下与卵巢部位成瘤率均为100 %（分别为2／2和16／16）,原位移植瘤转移率为50 %。卵巢包膜间传代,第2代、第4代分别出现卵巢癌的肝转移,其他部位尚未见转移灶。最早成瘤时间1周,最早转移出现时间2周。在连续传代过程中移植瘤仍保持原癌组织病理形态特点及人类肿瘤染色体的特点。结论　成功构建了人类卵巢癌原位移植自发转移裸鼠模型,为卵巢癌的转移机制及治疗研究提供了一个理想的动物模型。     

两种荷人卵巢癌腹腔移植瘤的免疫重建SCID小鼠模型的建立及比较

背景与目的:卵巢癌的死亡率在妇科恶性肿瘤居首位。目前,常规的手术、化疗和放疗难以再提高患者的生存率,因此,生物治疗成为卵巢癌的第四大治疗模式,而生物治疗的评价需要合适的动物模型。本实验目的是建立两种荷人卵巢癌腹腔移植瘤的免疫重建的严重联合免疫缺陷(severecombinedimmunodeficiency,SCID)小鼠模型,通过比较选出较适宜的模型。方法:分别用人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和SKOV3.ip1细胞腹腔注射6只和10只C.B17/SCID小鼠建立腹腔瘤模型,比较其生物学、组织学和免疫学特性;并将SKOV3.ip1组小鼠的腹水转种6只小鼠的腹腔,观察成瘤情况。以上22只SCID小鼠均用人外周血淋巴细胞腹腔注射进行人免疫功能重建。结果:用SKOV3细胞和SKOV3.ip1细胞分别建立的两种模型小鼠成瘤率均为100%;成瘤潜伏期分别为20～41天和22～30天(P>0.05);生存期分别为50～78天和32～43天(P<0.0001)。SKOV3.ip1组小鼠的腹水进行转种后有83.3%(5/6)能形成腹腔肿瘤和腹水。两种模型小鼠尸检发现肿瘤分布相似,均形成广泛的盆腔播散;但SKOV3.ip1组伴有0.35～5.60ml血性腹水,而SKOV3组仅有1只有0.20ml腹水。组织学显示两种模型都保持了人卵巢浆液性乳头状腺癌的特点,免疫组化结果表明两种模型都表达卵巢癌相关抗原OC166-9。72.7%(16/22)     

人类胃癌裸鼠原位移植模型的建立

 目的：探讨建立人胃癌裸鼠原位移植转移模型简便易行的方法，比较三种方法的成瘤率。方法：用人胃癌细胞SGC7901悬液接种于裸鼠皮下，形成稳定传代的皮下移植瘤，连续传八代。15只裸鼠随机分为三组，以第八代裸鼠皮下移植瘤组织为移植材料，分别用困扎法、医用OB胶法以及两种联合的方法把皮下肿瘤组织移植裸鼠胃浆膜下形成原位移植肿瘤。结果：6～7周后，处死全部裸鼠，捆扎组、医用OB胶组和联合组成瘤率分别为4／5、3／5和5／5，捆扎联合医用OB组成瘤率最高。结论：应用缝线困扎联合OB胶建立人胃癌裸鼠原位移植模型是一种简便易行的方法，值得推广和应用。     

ATRA增强HSV1-TK/GCV系统联合topotecan治疗卵巢癌的动物实验

目的：探讨全反式维甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）提高Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplex virus thymidine kinase，HSV1-TK）／丙氧乌苷（ganciclovir，GCV）系统联合拓扑替康（topotecan，TPT）对卵巢癌的体内治疗作用。方法：首先用携带HSV1-TK基因的重组逆转录病毒上清转染人卵巢癌细胞系SKOV-3，在含有G418的培养液中筛选获得抗性克隆细胞（命名为SKOV-3／TK）。PCR方法检测HSV1-TK基因整合情况；用SKOV-3细胞与SKOV-3／TK细胞按8：2比例混合建立荷瘤鼠模型，作为HSV1-TK／GCV组、HSV1-TK／GCV＋TPT组、ATRA联合HSV1-TK／GCV组及ATRA联合HSV1-TK／GCV＋TPT组4个实验组，再单用SKOV-3细胞建立荷瘤鼠模型作为对照组；从用药第1天开始每5d测量肿瘤体积1次，至用药结束后1周，绘制肿瘤生长曲线，计算抑瘤率，并取瘤组织做病理学检查。结果：各组肿瘤体积与对照组比较抑瘤率分别为38．8％、53．2％、62．3％及95．7％，差异均有显著性（P〈0．01），而且联合ATRA组与未用ATRA组比较差异亦有显著性（P〈0．01）。病理结果显示实验组肿瘤组织均出现不同程度的点、片状坏死，以ATRA联合HSV1-TK／GCV＋TPT组为重。结论：HSV1-TK／GCV系统联合TPT治疗卵巢癌可起到协同作用；ARTA可以提高HSV1-TK／GCV系统联合TPT对卵巢癌的体内杀伤作用。     

小鼠肿瘤模型及其在胰腺癌治疗研究中的应用

恶性肿瘤严重危害人类健康。但迄今为止 ,尚无确实有效的治疗方法。因此 ,针对各种恶性肿瘤的化疗方案研究也就成了当今医学领域的重点。对于新的肿瘤化疗方案 ,实验验证是必须的 ,也就是说要证明这种治疗方法的可行性和有效性。验证方法决定了对这种化疗方案评估的准确性。决定了其应用于临床后是否可产生令人满意的效果 ,因此至关重要。通常来讲 ,对化疗方案的验证包括 3个步骤 ,体外实验、体内实验和临床实验。这里重点讨论体内实验。体内实验就是应用动物模型模拟人类肿瘤环境 ,从而进行肿瘤相关研究 ,此过程必然要涉及动物模型。在评估…     

蛋白质组学在卵巢癌研究中的应用

蛋白质组学具有高通量、全面和动态地研究蛋白质变化的特点，尤其在筛选早期诊断卵巢癌的肿瘤标记物方面更具有优越性，并且利用不同肿瘤标记物的数目重新对卵巢肿瘤进行更为有利于治疗的分型。还可根据变化的蛋白质，分析卵巢癌的信号转导、凋亡、浸润和化疗耐药性机制。现将近年来蛋白质组学在卵巢癌研究中的应用综述如下。     

长必安协同顺铂在裸鼠体内抗转移作用研究

为研究中药长必安在裸鼠体内是否具有抗肿瘤生物和抗转移作用.取中药长必安用胃管灌喂载有高转移人卵巢癌的裸鼠,进行体内实验性治疗,将42只裸鼠实验分6组:低浓度组、中浓度组、高浓度组、联合组(顺铂 长必安)、顺铂组、对照组、治疗于接种移植瘤后12d开始,历时82d.观察到联合组肿瘤体积(3.6815±1.1699)与对照组(9.3436±1.5227)比较有显著性差异(p<0.05).联合组瘤重(2.345±0.641)与对照组(5.496±0.864)比较有显著性差异(P<0.     

蛋白质组学在卵巢癌研究中的应用

蛋白质组学具有高通量、全面和动态地研究蛋白质变化的特点,尤其在筛选早期诊断卵巢癌的肿瘤标记物方面更具有优越性,并且利用不同肿瘤标记物的数目重新对卵巢肿瘤进行更为有利于治疗的分型.还可根据变化的蛋白质,分析卵巢癌的信号转导、凋亡、浸润和化疗耐药性机制.现将近年来蛋白质组学在卵巢癌研究中的应用综述如下.     

卵巢癌药物敏感基因治疗实验研究——(Ⅱ)体内实验

为探索将单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因／羟甲基无环鸟苷（ＨＳＶ１－ｔｋ／ＧＣＶ）药物敏感基因治疗系统应用于卵巢癌,本刊［１］已介绍体外实验结果,现将体内实验情况介绍如下。材料与方法１．细胞来源及培养详见文献［１］　ＧＣＶ仍由ＲｏｃｈＳｙｎｔｅｘ公司惠赠;４～６周龄ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠由上海市肿瘤研究所动物室提供并饲养。２．ＡＯ皮下移植瘤治疗　本组１２只裸鼠,每只裸鼠左右侧前背部皮下以５号针头分别接种５×１０６的ＡＯ细胞或ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ细胞。２周后选取左右两侧背部皮下触摸肿块大小较一致的９…     

Endostatin影响大肠癌裸鼠血管内皮生长因子及其受体机理的实验研究

目的：探讨Endostatin对裸鼠大肠癌血管内皮生成因子(VEGF)及其受体(Flk—1)的抑制作用的机理。方法：建立大肠癌裸鼠模型，将裸鼠分为2组，分别给予Endostatin和生理盐水治疗，15d后处死裸鼠，采集肿瘤标本，免疫组化法检测瘤株的VEGF和Flk—1的表达情况。结果：Endostatin对VEGF没有抑制作用(P＞0．05)，对Flk—1有抑制作用(P＜0．05)。结论：Endostatin通过竞争性抑制VEGF与其Flk—1结合实现抑制肿瘤生长的目的。     

MK886在人结肠癌裸鼠模型中的抗血管生成作用

目的通过动物体内实验研究5脂氧合酶活化蛋白（FLAP）抑制剂MK886对人结肠癌的抗血管形成作用,从而进一步探讨其抗肿瘤机制。方法将皮下接种HT-29人结肠癌细胞后建立人结肠癌模型的15只裸鼠随机分为三组,治疗组以MK886溶解在二甲基亚砜中投药;两对照组分别为投以二甲基亚砜和空白对照组。治疗一月后处死裸鼠并取瘤,用免疫组化方法检测各组肿瘤微血管密度,并比较结果。结果15只裸鼠全部成瘤,且实验过程中无一裸鼠死亡;免疫组化检测肿瘤微血管密度结果显示,两对照组肿瘤微血管密度差异无统计学意义（P>0.05）,而治疗组肿瘤微血管密度显著低于两对照组（P<0.05）。结论MK886可通过抑制肿瘤微血管形成抑制人结肠癌的生长。     

人卵巢癌裸鼠移植模型的建立和形态学观察

作者利用人体卵巢癌的转移瘤建立了裸鼠移植瘤模型,现已传至第8代。移植成功率为100％。发现传代后仍具有原人卵巢癌转移的生物学行为。经光学显微镜检查传至8代的瘤组织结构与原发瘤相同。电镜检查证明具有卵巢癌特有的特征,癌细胞间组成徽腔——原始腺腔,表面可见微绒毛,核中常染色质占绝对优势,胞浆中有丰富的多聚核糖体。该模型为研究人卵巢癌生物学特性、实验治疗等提供了有用工具。