疟疾的实时荧光PCR快速检测方法探讨

目的探讨疟疾的实时荧光PCR快速检测方法。方法选择本市国际旅行卫生保健中心提供的疟疾镜检阳性血样20份,另选择健康者(疟疾镜检阴性)血样20份作为待测血样。本研究设计了疟疾病原体实时荧光PCR快速检测的引物和探针,总结了快速检测方法,疟疾镜检阳性/阴性血样均各分为4次检测完毕,统计各份血样检测结果和每次检测时间,计算平均用时和疟疾镜检与实时荧光PCR检测符合率。结果疟疾镜检阳性血样20份,检测4次,平均用时(19.15±1.34)min,疟疾镜检阴性血样平均用时为(19.52±1.49)min,40份血样荧光PCR检测平均用时(19.34±1.65)min。在荧光PCR检测与疟疾镜检符合率方面,阳性血样(100%)和阴性血样(90.00%)比较,无显著差异P>0.05,认为无统计学意义。40份待测血样荧光PCR检测和疟疾镜检符合率为95.00%(38/40)。结论本研究疟疾病原体实时荧光PCR快速检测准确性高,阳性检出高,检测时间段,用于疟疾快速检验可行性较强,不易发生漏检情况。     

Taqman荧光定量PCR法在药品沙门菌快速检测中的应用

目的：建立药品中沙门菌的荧光定量PCR快速检测方法。方法：根据沙门菌的特异基因序列合成引物和探针,提取沙门菌DNA进行检测。结果：该方法特异性好,灵敏度达到160cfu·ml-1,人工污染的药品检出率为100％．结论：荧光定量PCR法可用于药品沙门菌的快速检测。     

实时荧光定量PCR法检测中药制剂中沙门菌

目的 采用实时荧光定量PCR技术,建立一种中药制剂中沙门菌的快速检测方法。方法 将中药制剂加入适量的胰酪大豆胨液体培养基中进行增菌后,取增菌液以热裂解法提取总DNA,采用实时荧光定量PCR法特异性检测沙门菌。结果 建立了中药制剂中沙门菌的实时荧光定量PCR检测法,检测可在24 h内完成,灵敏度达每10 g（10 mL）供试品1 cfu,特异性为100%,采用该方法检测18批次样品结果与药典方法一致。结论 采用实时荧光定量PCR法可明显缩短中药制剂中沙门菌检测周期,具有良好的灵敏度和特异性,可作为药典检测方法的有效补充。     

乌梢蛇实时荧光定量PCR法的建立及与普通PCR鉴别方法的比较研究

目的 为了进一步优化乌梢蛇药材鉴别的准确性,提高鉴别速度。方法 基于CO1片段序列特征,该研究设计了乌梢蛇的特异性引物、探针,通过条件的优化建立了乌梢蛇的实时荧光定量PCR 快速鉴别方法。结果 利用该方法对正品及伪品15个物种30份样本进行了验证,结果全部8 份乌梢蛇正品均能从30 个药材样本中准确地鉴别出来。结论  该方法与药典方法比较,准确性一致,但所用设备少、检测所需要时间短,仅需40 min至1 h即可得出结果,而药典方法需要4 h左右;灵敏度高,检测限可达到1×10-3ng/反应,检测结果在0.001%~100%范围内具有良好的线性关系,相关系数R²=1,而药典方法仅为1×10-2ng/反应。该方法具有特异性强、检测速度快、灵敏度高、所需设备少的特点,适用于乌梢蛇中药材及其饮片真伪快速检测。     

实时荧光定量PCR检测乙型肝炎血清DNA的临床观察

目的:探讨乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒DNA定量与乙型肝炎标志物关系.方法:采用荧光探针杂交技术为基础的实时荧光定量PCR检测259例乙型肝炎患者血清中DNA含量,与HBV标志物作对比分析.结果:血清HBeAg阳性组HBV-DNA阳性率为98.6%,HBeAb组阳性率为61.5%;HBeAg组阳性率含量明显高于HBeAb阳性组.结论:实时荧光定量PCR检测具有较高的灵敏度和特异性,定量准确、结果可靠,为临床了解病毒复制情况,制定治疗方案及疗效观察提供了确切依据.     

探讨实时荧光定量PCR在乙型肝炎病毒DNA定量检测中应用价值

目的:探讨实时荧光定量PCR在乙型肝炎病毒DNA定量检测中应用价值。方法:选择2021年4月至2023年4月我院收治的120例疑似慢性乙型病毒性肝炎患者为研究对象,分别采用实时荧光定量PCR与酶联免疫吸附法(ELISA)对所有患者HBV-DNA含量进行检测。以试纸法检测结果为标准,比较实时荧光定量PCR、ELISA检测结果的一致性;比较实时荧光定量PCR、ELISA对慢性乙型肝炎的诊断效能;比较不同HBV感染状态下HBV-DNA含量的差异。结果:120例疑似慢性乙型肝炎患者经试纸法检查确诊为慢性乙型肝炎107例。Kappa检验分析结果显示,实时荧光定量PCR检查结果与试纸法检查结果具有高度的一致性(Kappa值=0.897,P<0.05)。实时荧光定量PCR对慢性乙型肝炎的诊断灵敏度、特异性与准确率均高于ELISA(P<0.05)。大三阳HBV-DNA含量均高于小三阳与急慢性感染期(P<0.05);小三阳HBV-DNA含量与急慢性感染期比较无明显差异(P>0.05)。结论:实时荧光定量PCR在慢性乙型肝炎诊断中的应用价值较高,不但能完成疾病的准确诊断,还能通过对...     

实时荧光定量PCR对川贝母的鉴别应用

摘 要 目的：探讨实时荧光定量PCR对川贝母鉴别的可行性。方法: 采用磁珠法从试样中提取DNA,利用实时荧光定量PCR进行引物扩增,并通过其Cq值和扩增曲线对样品进行判断。结果: 5批川贝母的Cq值均低于30,曲线有明显的指数增长期;平贝母、浙贝母和土贝母则无Cq值,曲线为一直线。结论:本方法用于鉴别川贝母操作简单,准确率高,重现性好,可行有效。     

实时荧光定量PCR技术在乙型肝炎脱氧核酸检测中的应用价值

聚合酶链反应polymerase chain reuction PCR又称无细胞分子克隆系统或体外酶促基因扩增法。PCR技术是Cetus公司Kary mullist和加利福尼亚大学Henery A Erlich于1985年联合创办,自问世以来,因其对基因特定核酸序列在短时间内具有极大的扩增效率,被广泛应用于分子生物学、微生物学、医学及遗传学分子克隆、序列分析、基因突变、遗传病、传染病及法医制定和考古研究等多领域。乙型肝炎作为我国最常见的传染性疾病之一,抗病毒是常规治疗方法,为检测抗病毒治疗的疗效,需要定量检测患者的血清(浆)中的乙型肝炎的病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)…     

荧光定量PCR快速检测小儿巨细胞病毒感染标本的选择

目的优化检测标本,提高小儿巨细胞病毒感染的阳性检出率,准确量化巨细胞病毒拷贝数,为临床诊断和治疗提供可靠依据。方法荧光定量PCR检测患儿血、尿中的HCMV—DNA,比较其阳性检出率、Ct值、HCMV拷贝数。结果523例患儿标本中,血标本488倒,阳性89例（18．24％）;尿标本85例,阳性36例（42．35％）;其中有50例患儿同时采集血、尿进行HCMV—DNA定量检测,血标本阳性9例（18％）;尿标本阳性23例（46％）。血、尿标本HCMV的检出率出现明显差异。结论采用荧光定量PCR检测小儿巨细胞病毒感染,用尿作标本明显优于血标本,可提高HCMV的阳性检出率。     

实时荧光定量PCR检测人乳头瘤病毒HPV 23分型的临床研究

目的：建立实时荧光定量PCR检测人乳头瘤病毒HPV 23分型的方法。方法采用实时荧光定量 PCR检测 HPV DNA。结果在60例检测患者中,有19例患者检测出HPV人乳头瘤病毒感染阳性。结论实时荧光定量PCR方法检测人乳头瘤病毒灵敏度高、特异性强,可以为宫颈癌的预防、发展监测、手术预后等提供重要的临床指导。     

氧化葡萄糖酸杆菌实时定量PCR检测方法的建立与应用

选取氧化葡萄糖酸杆菌16S rRNA作为看家基因,利用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物,以总基因组为模板,建立氧化葡萄糖酸杆菌实时定量PCR方法.选取山梨醇脱氢酶大亚基sldA和小亚基sldB为研究对象,以看家基因16S rRNA的表达作为内参,测得山梨醇脱氢酶大小亚基的转录水平一致,均为看家基因的68%.     

Simultaneous Detection of Ricin and Abrin DNA by Real-Time PCR (qPCR)

Ricin and abrin are two of the most potent plant toxins known and may be easily obtained in high yield from the seeds using rather simple technology. As a result, both toxins are potent and available toxins for criminal or terrorist acts. However, as the production of highly purified ricin or abrin requires sophisticated equipment and knowledge, it may be more likely that crude extracts would be used by non-governmental perpetrators. Remaining plant-specific nucleic acids in these extracts allow the application of a real-time PCR (qPCR) assay for the detection and identification of abrin or ricin genomic material. Therefore, we have developed a duplex real-time PCR assays for simultaneous detection of ricin and abrin DNA based on the OmniMix HS bead PCR reagent mixture. Novel primers and hybridization probes were designed for detection on a SmartCycler instrument by using 5′-nuclease technology. The assay was thoroughly optimized and validated in terms of analytical sensitivity. Evaluation of the assay sensitivity by probit analysis demonstrated a 95% probability of detection at 3 genomes per reaction for ricin DNA and 1.2 genomes per reaction for abrin DNA. The suitability of the assays was exemplified by detection of ricin and abrin contaminations in a food matrix.     

荧光PCR法检测人胃组织中幽门螺旋杆菌核酸的实验研究

目的 探讨荧光定量PCR方法检测人胃组织中幽门螺杆菌的意义.方法 收集399例上消化道疾病患者的胃粘膜活检标本.其中食管炎8例,食管溃疡5例,食管癌15例,胃炎301例,胃溃疡30例,胃癌5例,十二指肠炎4例,十二指肠溃疡29例,十二指肠癌2例.核酸测序作为金标准方法,分析荧光定量PCR方法检测胃粘膜幽门螺杆菌的价值....     

Detection of viable Salmonella in ice cream by TaqMan real-time polymerase chain reaction assay combining propidium monoazide

Real-time polymerase chain reaction (PCR) allows rapid detection of Salmonella in frozen dairy products, but it might cause a false positive detection result because it might amplify DNA from dead target cells as well. In this study, Salmonella-free frozen ice cream was initially inoculated with heat-killed Salmonella Typhimurium cells and stored at −18°C. Bacterial DNA extracted from the sample was amplified using TaqMan probe-based real-time PCR targeting the invA gene. Our results indicated that DNA from the dead cells remained stable in frozen ice cream for at least 20 days, and could produce fluorescence signal for real-time PCR as well. To overcome this limitation, propidium monoazide (PMA) was combined with real-time PCR. PMA treatment can effectively prevent PCR amplification from heat-killed Salmonella cells in frozen ice cream. The PMA real-time PCR assay can selectively detect viable Salmonella at as low as 10³ CFU/mL. Combining 18 hours of pre-enrichment with the assay allows for the detection of viable Salmonella at 10⁰ CFU/mL and avoiding the false-positive result of dead cells. The PMA real-time PCR assay provides an alternative specifically for detection of viable Salmonella in ice cream. However, when the PMA real-time PCR assay was evaluated in ice cream subjected to frozen storage, it obviously underestimated the contamination situation of viable Salmonella, which might lead to a false negative result. According to this result, the use of enrichment prior to PMA real-time PCR analysis remains as the more appropriate approach.     

乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂临床研究要点

目的阐述乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的临床研究要点。方法结合体外诊断试剂现行法规和此类试剂自身的特点,对其管理分类、研究方法、临床试验方案设计、临床试验样本选择、结果的统计学分析以及临床试验报告撰写等方面进行了详细解析。结果与结论乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的临床研究应从试剂本身的临床预期用途出发,重点针对试剂定量准确性、特异性进行科学的临床考察。     

TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测支原体的研究

目的:建立特异、敏感、快速检测支原体的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法。方法:针对支原体16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立支原体TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008～2010年期间在北京采集的680份小型猪、小鼠、大鼠样本中的支原体进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测。结果:建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对支原体的检测具有高度的特异性,对空肠弯曲菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌均无交叉反应,检测的灵敏度达9.2拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.328,TaqManMGB探针实时荧光定量PCR效率为100%。对680份动物样本进行检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出77份支原体阳性样本,但分离培养未能检出支原体阳性样本。结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从动物样本中检出支...     

炭疽杆菌双重实时荧光PCR检测方法的建立

目的 建立同时检测炭疽杆菌capA基因、PA基因的双重实时定量荧光PCR方法,用于应对突发传染病疫情和流行病学调查、突发公共卫生事件应急处置的早期检测及防范生物恐怖威胁.方法 设计和合成分别针对炭疽杆菌capA基因、PA基因的引物对和荧光双标记探针,构建质粒标准品,通过优化探针、引物浓度、反应体系试剂组分等参数,建立可同时检测capA基因、PA基因的双重实时荧光PCR方法,测试方法的灵敏度和特异性,并在实战检测中应用.结果 双重实时荧光定量PCR的炭疽杆菌capA基因、PA基因检测的灵敏度分别可达到每反应5和50拷贝,并具有良好的特异性,在实战应用中亦经过考验.结论 双重实时荧光定量PCR技术具有可以同时筛查、经济、快速、特异性强等优点,在炭疽杆菌检测方面有良好应用价值.