结核分枝杆菌耐药突变检测的临床研究

<正>近年来,中国的结核病发病率和耐药率均有上升趋势,每年有将近12万新发耐多药结核病患者,未来数年内可能出现耐药菌为主的流行态势[1]。耐药结核病常规的疫情监测不仅是临床用药和评价化疗方案的重要依据,也是流行病学和结核病控制工作的重要指标[2]。如何快速、准确检测结核分枝杆菌对主要一线药物的耐药性具有重要的临床意义。据报道异烟肼耐药与过氧化氢酶-过氧化物酶的编码基因Kat G有关[3],同     

结核分枝杆菌耐药性检测研究进展

自2 0世纪80年代以来,结核病疫情重新上升,据WHO估计,目前全球约有2 0亿人感染结核分枝杆菌(TB) ,其中约有5 0 0 0万人感染耐药TB[1 ] 。因此对TB耐药机制和耐药性检测的研究意义重大。分子生物学技术的发展,为研究TB提供了良好技术平台,极大地促进了TB耐药性检测的研究进程。目前临床正在使用和研究的药敏试验方法归纳起来有表型和基因检测2类。一、表型检测1 .常规药敏试验方法　用L J或Middlebrook7H1 0培养基做直接或间接药敏试验。此法由于受TB生长速度的影响而费力费时(需6～8周甚至更长时间) ,不能满足临床之急需,目前已较少…     

惠州市结核分枝杆菌的耐药性调查

收集惠州市2011~2013年结核病患者痰标本,进行分离培养及耐药性检测。结果 943株结核分枝杆菌的总耐药率为48.5%,初治和复治耐药率分别为43.3%和67.2%。耐药率由高到低依次为链霉素>异烟肼>利福平>乙胺丁醇。2013年耐药率较2011年有明显升高(P<0.01)。惠州市结核病的耐药率有逐年上升的趋势,需采取更多措施降低耐药率。     

利用基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐药性的研究

本研究利用基因芯片技术 ,研制一种结核分枝杆菌耐药性筛选检测的基因芯片 ;该芯片能够快速、准确、高效地针对结核菌对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇 4种药物产生的耐药性进行一次性的检测和筛选 ,在一次反应中进行多种信息的平行分析 ,同时利用该基因芯片对 5株临床分离的结核分枝杆菌的耐药性进行检测分析 ,现报道如下。一、材料与方法1.主要材料 :醛基修饰玻片ＳｉｌａｎｅＳｌｉｄｅ ,购自Ｔｅｌｅｃｈｅｍ公司 ;结核分枝杆菌Ｈ3 7Ｒｖ株由中国药品生物制品检定所提供 ;结核分枝杆菌临床分离株由成都市结核病防治研究院提供。2 .方…     

结核分枝杆菌耐药性检测研究进展

自20世纪80年代以来，结核病疫情重新上升，据WHO估计，目前全球约有20亿人感染结核分枝杆菌(TB)，其中约有5000万人感染耐药TB。因此对TB耐药机制和耐药性检测的研究意义重大。分子生物学技术的发展，为研究TB提供了良好技术平台，极大地促进了TB耐药性检测的研究进程。目前临床正在使用和研究的药敏试验方法归纳起来有表型和基因检测2类。     

某区252株结核分枝杆菌耐药性分析

目的：探讨宝安区就诊的肺结核患者结核分枝杆菌耐药状况,为结核病的防治提供依据。方法按世界卫生组织和国际防结核病与肺部疾病联合会制订的《全球结核病耐药监测指南》的要求,采用比例浓度法检测结核分枝杆菌的耐药情况。结果252株结核分枝杆菌中耐药菌株126株,总耐药率为50．0％;耐多药菌株89株,多药耐药率为35．3％。4种抗结核药物的耐药率由高至低依次为利福平（RFP）38．1％,异烟肼（INH）36．5％,链霉素（SM）27．0％,乙胺丁醇（EMB）13．9％。结论结核分枝杆菌耐药情况仍不容乐观,应加强耐药结核病的临床治疗和管理工作。     

绍兴市60株非结核分枝杆菌的耐药性检测

目的：分析绍兴市1997—2003年非结核分枝杆菌(NTM)耐药情况。方法：对60株NTM进行菌种鉴定及药敏试验。结果：NTM对对氨柳酸呈高度耐药，对链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇的耐药性较高．对阿米卡星、乙硫异烟胺较为敏感。堪萨斯分枝杆菌对抗结核药物较敏感，瘰疬、鸟一胞内、偶发分枝杆菌对抗结核药物耐药性较高。结论：绍兴市NTM引起肺病所占比例小，仅为2．8％，明显低于全国水平，NTM高耐药率应引起重视，有待解决的是研制新药与更有效的治疗手段。     

结核分枝杆菌耐药性分子检测方法的新进展

我国是世界第二大结核病高负担国家,2013年我国的结核病发病例数为90万~110万,约占世界总发病人数的11%[1]。耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)菌株的产生和耐药结核病的流行是结核病控制的最大障碍。2010年,第五次全国结核病流行病学调查显示[2],我国一线抗结核药物的耐药率为36.8%,二线抗结核药物的耐药率     

上海市普陀区1996～2003年间原发结核分枝杆菌感染的耐药性分析

目的 了解我区1996～2003年间结核分枝杆菌原发耐药性.方法 采用绝对浓度法进行异烟肼（INH）、利福平（RFP）、链霉素（SM）、乙胺丁醇（EMB）4种抗结核药物的耐受性测定.结果 总原发耐药率由1996～1997年的14.6%上升至2002～2003年的19.7%（上升了34.9%）.耐INH、SM、RFP率由1996～1997年的8.9%、9.8%、5.7%上升至2002～2003年的15.3%、10.9%、8.0%,（分别上升了71.9%、11.2%和40.4%）,耐EMB率由2.4%下降至0.7%,原发耐多药率2002～2003年为5.8%,与1996年相比,无明显上升.结论 本区结核分枝杆菌原发耐药性呈上升趋势,耐多药菌株仍占一定比例.     

上海市普陀区1996～2003年间原发结核分枝杆菌感染的耐药性分析

目的了解我区1996~2003年间结核分枝杆菌原发耐药性。方法采用绝对浓度法进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)4种抗结核药物的耐受性测定。结果总原发耐药率由1996~1997年的14.6%上升至2002~2003年的19.7%(上升了34.9%)。耐INH、SM、RFP率由1996~1997年的8.9%、9.8%、5.7%上升至2002~2003年的15.3%、10.9%、8.0%,(分别上升了71.9%、11.2%和40.4%),耐EMB率由2.4%下降至0.7%,原发耐多药率2002~2003年为5.8%,与1996年相比,无明显上升。结论本区结核分枝杆菌原发耐药性呈上升趋势,耐多药菌株仍占一定比例。     

淮安地区350株痰结核分枝杆菌药敏结果及初复治耐药结果分析

目的分析淮安地区住院及门诊随访患者痰标本中分离出的结核分枝杆菌对4种常用抗结核药物的耐药情况,比较初治及复治患者对4种结核药物的敏感度差异,为临床治疗提供用药参考,减少经验用药加强规范合理用药减少结核分枝杆菌耐多药率的发生。方法采用比例法 对350株结核分枝杆菌进行两种一线抗结核药（异烟肼,利福平）两种抗结核药（氧氟沙星,卡那霉素）敏感性测定。结果350株结核分枝杆菌总体耐药率为37.7%（131/350）,而初治耐药率为30.4%（71/233）,复治耐药率为51.3%（60/117）。另外350株结核分枝杆菌的总体耐多药率为15.4%（54/350）,而初治耐多药率为11.2%（26/233）,复制耐多药率为23.9%（28/117）。与全国第五次结核病流行病学调查比较耐药率及耐多药率均有提高。结论复治肺结核患者分离出的结核分枝杆菌耐药率及耐多药率均较初治患者高。加强患者管理,规范治疗对初治患者尤为重要。     

镇江市结核病患者耐药情况抽样调查分析

目的了解镇江市耐药结核病流行状况,为耐药结核病的预防与控制提供依据。方法按世界卫生组织/国际防痨和肺病联合会《结核病耐药监测指南》的要求进行抽样调查和药敏试验检测,采用SPSS13.0进行数据统计分析。结果镇江市总耐药率达41.7%,其中初始耐药率为31.1%,复治耐药率为58.7%;总耐多药率为19.2%,其中初治耐多药率为9.5%,复治耐多药率为34.8%;女性患者耐多药率高于男性(P<0.05);(>30～50)岁患者耐多药率较高;用药超过1个月的患者耐多药率较高。结论镇江市肺结核患者耐药情况接近全省水平,但不容乐观,需进一步加强耐多药结核病的预防与控制。     

结核分枝杆菌对氧氟沙星、左氧氟沙星体外耐药监测

目的了解菌阳肺结核患者对氟喹诺酮药物的耐药现状,为临床制定标准化方案提供参考依据。方法选取2008年3月至2009年3月期间天津市海河医院门诊及住院菌阳肺结核病患者119例,对其结核分枝杆菌（MTB）临床分离株做氧氟沙星（OFLX）,左氧氟沙星（LVFX）药物敏感性试验。结果初治患者耐OFLX 10例（14.5%）,耐LVFX 3例（4.3%）;复治患者耐OFLX 30例（60.0%）,耐LVFX 22例（44.0%）;敏感菌耐OFLX 16例（19.0%）,耐LVFX 8例（9.5%）,耐药菌耐OFLX 24例（68.6%）,耐LVFX 17例（48.6%）;单耐药、多耐药、耐多药、严重耐多药耐OFLX分别为2例（40.0%）、10例（66.7%）、7例（77.8%）、5例（83.3%）,耐LVFX分别为2例（40.0%）、6例（40.0%）、5例（55.6%）、4例（66.7%）;氟喹诺酮用药时间≤2周、2周至1月、〉1-3月、〉3-6月、〉6月,耐OFLX分别为2例（33.3%）、4例（36.4%）、7例（50.0%）、9例（100%）、5例（100%）;耐LVFX分别为1例（16.7%）、2例（18.2%）、6例（42.9%）、6例（66.7%）、5例（100%）。结论复治结核病对氟喹诺酮的耐药率较高,耐药结核菌对氟喹诺酮耐药率也明显高于敏感菌,而严重耐多药及耐多药菌株耐药率明显高于其他耐药类型结核病。试管内耐药浓度与耐药率呈负相关。制定标准方案时LVFX优于OFLX。     

母牛分支杆菌菌苗辅助治疗初治肺结核的临床研究

目的　观察和评价母牛分支杆菌菌苗对初治肺结核患者免疫功能的影响和疗效。方法　采用随机配对分组法将 80例痰涂片阳性初治肺结核患者分为Ⅰ组 (4 0例 )和Ⅱ组 (4 0例 ) ,均采用 2个月异烟肼 (H)、利福平 (R)、吡嗪酰胺 (Z)、乙胺丁醇 (E)和 4个月异烟肼、利福平 (2HRZE/ 4HR)化疗方案治疗 ,Ⅰ组加用母牛分支杆菌菌苗治疗 6个月 ;观察治疗后临床症状改善、肺部病灶吸收、痰菌阴转及免疫功能改善情况。结果　Ⅰ、Ⅱ组临床改善情况比较 ,差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;Ⅰ组第 1个月痰涂片阴转率 30 .0 % ,痰培养阴转率 30 .0 % ,第 2个月痰涂片阴转率70 .0 % ,痰培养阴转率 70 .0 % ,Ⅱ组第 1个月痰涂片阴转率 2 5 .0 % ,痰培养阴转率 2 7.5 % ,第 2个月痰涂片阴转率4 5 .0 % ,痰培养阴转率 4 7.5 % ;初始 2个月痰菌阴转率Ⅰ组显著高于Ⅱ组 (P <0 .0 5 ) ;治疗 6个月后Ⅰ组痰涂片阴转率 97.5 % ,痰培养阴转率 97.5 % ,Ⅱ组痰涂片阴转率 95 .0 % ,痰培养阴转率 95 .0 % ,两组痰菌阴转率比较差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;Ⅰ组病灶吸收好转及空洞缩小关闭速度优于Ⅱ组 ;Ⅰ组的细胞免疫功能显著改善。结论　母牛分支杆菌菌苗能加快痰菌阴转、病灶吸收及空洞缩小关闭的速度 ,提高免疫细胞活性 ,是一种较     

结核杆菌耐药性调查与基因突变分析

目的了解结核分支杆菌耐药性与基因突变情况,分析耐药表型与基因突变的相关性。方法从临床标本中分离培养、鉴定结核分支杆菌;应用药敏试验、单链探针反向杂交试验技术(LiPA)和基因测序分析结核分支杆菌耐药性与基因突变情况。结果50株结核分支杆菌中,12株耐异烟肼(INH),7株耐利福平(RFP),15株耐链霉素(SM),2株耐乙胺丁醇(EMB)。LiPA检测耐RFP菌株,4株rpoB基因531位TCG→TTG突变;耐INH菌株中5株KatG基因315位AGC→ACC突变;耐SM菌株中6株、SM敏感株1株rpsl基因43位AAG→AGG突变,1株耐SM菌株rpsl基因88位AAG→AGG突变;rrs基因未检测到突变;1株耐EMB菌株与1株EMB敏感株的embB基因306位发生ATG→GTG突变。结论本市结核分支杆菌的耐药性增加的趋势显著,加强监测与综合干预非常必要。     

徐州市结核分枝杆菌耐药情况调查

目的了解徐州市结核分枝杆菌的耐药情况。方法采用整群抽样的方法连续收集徐州市城区结核防治门诊2008年8月至2010年4月痰菌阳性的肺结核患者的痰标本193例,用比例法做一线药物（异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇）的敏感试验,耐多药的患者做二线药物（左氧氟沙星、阿米卡星、卷曲霉素、丙硫异烟胺）的敏感试验。结果符合条件并纳入调查的细菌有178株;178株结核分枝杆菌总的耐药率为38.8%,初治和复治耐药率分别为21.4%、72.1%,耐多药率为18.0%,初治和复治耐多药率分别为4.3%、44.3%,4种一线药物耐药顺序由高到低分别为耐异烟肼30.3%,耐链霉素29.2%,耐利福平22.5%,耐乙胺丁醇19.1%,复治患者对4种一线药物的耐药率明显高于初治患者;同时耐1种、2种、3种、4种药物的初治和复治耐药率分别为6.8%、8.5%、2.6%、4.3%,9.8%、14.8%、9.8%、29.5%,复治患者同时耐3、4种药物的耐药率明显高于初治者;32例耐多药患者对4种二线药物总耐药率为37.5%,耐药顺序由高到低分别为耐左氧氟沙星28.1%,耐丙硫异烟胺15.6%,耐阿米卡星12.5%,耐卷曲霉素6.3%。结论徐州市结核分枝杆菌整体耐药率仍处于高水平,各部门的结核病防治工作者应采取切实有效的措施,降低耐药结核病的发生。     

结核分枝杆菌快速培养基临床应用研究

目的 评价分枝杆菌变色液体培养基快速检测痰标本结核分枝杆菌的可靠性.方法 将230例疑似肺结核患者痰标本接种于分枝杆菌变色液体培养基和酸性罗氏培养基培养,进行对照平行测定.结果 230例痰涂片标本检出阳性率为27.8%;变色液体培养基和酸性罗氏培养基培养阳性率分别为47.4%,47.0%,两种方法阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 分枝杆菌变色液体培养基检测结核分枝杆菌具有特异、快速、可靠等优点,对结核病患者的早发现、早治疗具有积极意义.     

快速检测耐异烟肼结核分支杆菌方法的研究

目的 应用多重聚合酶链反应-单链构象多态性分析（multiple—Polymerase Chain Reaction—Single Strand Conformation Polymorphism,multi—PCR—SSCP）方法,快速、特异地同时检出耐异烟肼（isoniazid,INH）结核分支杆菌aphC启动子、inhA、katG基因的突变情况,并与直接测序（derictsequencing,DS）结果相比较,参照药敏试验,探讨该方法的可行性。 方法 根据结核分支杆菌的aphC启动子序列、inhA序列、katG序列,分别设计出3对特异性寡聚核苷酸引物,采用multi—PCR-SSCP技术,同时检测对结核分支杆菌耐INH起作用的这三个基因的突变情况;同时进行耐药株的测序分析。 结果 对H37Rv标准株、临床分离INH敏感株（23株）及INH耐药株（35株）进行multi—PCR—SSCP分析,突变检出率82．9％（29／35）;耐药株测序分析突变检出率为85．7（30／35）。两种方法的符合率为97．1％E（29＋5／）／35]。 结论 耐药基因检测指导治疗是一种新探索,multi—PCR—SSCP方法敏感、特异,能同时快速有效地检测结核分支杆菌aphC启动子、inhA、katG三个INH耐药基因的突变,提高检验效率,有望成为临床指导用药的好方法。     

荧光PCR熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药检测中的临床应用

目的评价荧光PCR熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药检出中的临床应用价值。方法以改良罗氏培养法及绝对浓度法作为对比,利用荧光PCR熔解曲线法检测53例肺结核患者对利福平、异烟肼耐药情况。结果两种方法的单耐药率、耐多药率比较差异无统计学意义(P0.05)。同一标本两种方法检测对比显示,与绝对浓度法相比,熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药的敏感度分别为80.0%和81.0%,特异度分别为100.0%和93.8%,准确度分别为92.2%和86.8%,两种方检测法的一致性分析Kappa值分别为0.754和0.710,表明两者一致性佳。结论相对于传统方法,熔解曲线法敏感度、特异度良好且安全、高效,在耐药肺结核治疗中有良好的应用价值。     

结核分枝杆菌检测方法临床应用的对比研究

目的用涂片、聚合酶链反应(PCR)法检测结核分枝杆菌,探讨其临床应用价值。方法对169例临床确诊的肺结核患者、可疑肺结核患者和非结核患者痰标本用涂片、PCR两种方法进行检测,对结果进行对比分析。结果 169例痰标本中,痰涂片检查阳性率为7.1%(12/169),PCR检测阳性率为32.54%(55/169);痰涂片、PCR法检测42例临床确诊的肺结核患者痰标本阳性率分别为11.9%(5/42)、57.1%(24/42);检测82例临床可疑肺结核患者痰标本阳性率分别为8.54%(7/82)、37.8%(31/82)。比较两种方法的阳性检测率,差异有统计学意义(χ2=19.729,P<0.01),检测45例非结核患者痰标本,涂片及PCR检测均为阴性。结论 PCR法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核病检测诊断的有效方法之一。