多药耐药基因在睾丸恶性肿瘤血睾屏障中的作用研究

目的探讨睾丸恶性肿瘤血睾屏障产生机制,为采用分子生物学方法克服血睾屏障从而提高化疗疗效提供依据.方法采用P-糖蛋白(P-gp)单克隆抗体、免疫组化法检测睾丸恶性肿瘤组织P-gp表达部位及强度.进行统计分析,对比睾丸组织各类细胞间的P-gp表达情况.结果睾丸恶性肿瘤细胞P-gp表达率及程度远低于睾丸肿瘤毛细血管内皮细胞P-gp表达(P<0.01).结论睾丸恶性肿瘤病人存在抗癌药物血睾屏障,其机制为肿瘤间质毛细血管内皮细胞过量表达P-gp所引起,而非肿瘤细胞自身表达P-gp所引起.     

柯萨奇病毒-腺病毒受体siRNA对体外血睾屏障完整性的影响

目的观察柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)siRNA对体外血睾屏障完整性的影响,探讨睾丸CAR分子功能。方法体外建立血睾屏障模型,以CAR siRNA和阴性对照siRNA进行转染,然后以RTPCR和Western blot法检测相关基因mRNA或蛋白表达的变化,免疫荧光法检测蛋白分布,以及测量跨上皮电阻的改变。结果 CAR siRNA组较对照组CAR表达显著降低。与对照组比较,CAR siRNA显著降低了跨上皮电阻,同时,也显著降低了ZO-1的表达,使其分布发生紊乱。结论 CAR siRNA降低支持细胞上皮屏障功能,CAR是血睾屏障的重要调控分子。     

H-ras、ERK1和Ki-67在鼠口腔癌变黏膜中的表达

目的 检测鼠口腔黏膜癌变组织、增生组织和正常组织中H-ras、ERK1和Ki-67的表达,初步探讨H-ras、ERK1和Ki-67在鼠肿瘤发生发展中的作用。方法 应用免疫组化SP法检测鼠口腔正常黏膜(15例)、增生黏膜(26例)和癌变黏膜(28例)中H-ras、ERK1和Ki-67的表达。结果 H-ras、ERK1和Ki-67蛋白在鼠口腔正常黏膜中不表达或微表达,在异常增生黏膜和癌黏膜中表达依次增高,3组间差异有统计学意义(P<0.01)。经spearman相关性分析,H-ras、ERK1和Ki-67蛋白染色强度与细胞增殖程度相关(P<0.05)。H-ras、ERK1和Ki-67蛋白水平呈正相关(P<0.01)。结论 H-ras、ERK1和Ki-67蛋白在鼠口腔癌的发生发展中发挥重要作用。     

邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯对血睾屏障完整性的损伤及机制

目的 探讨邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(DEHP)破坏睾丸血睾屏障完整性的机制研究.方法 将出生后60 d的SD雄鼠随机分为两组,即玉米油对照组和DEHP暴露组,DEHP的用药剂量为750 mg/kg,采用灌胃的方式给药,每天1次,连续处理30 d,并于最后1次处理后麻醉处死.HE染色观察睾丸的组织病理学改变情况;Western blot检测睾丸组织中构成血睾屏障的关键连接蛋白N-cadberin、β-catenin、occludin和connexin43 (Cx43)的膜蛋白表达水平;MTT检测睾丸支持细胞(Sertoli cell)的活力,活性氧检测试剂盒检测细胞中活性氧(Reactive oxygen species,ROS)生成水平;Western blot检测抗氧化应激蛋白Nrf2以及p-p38的蛋白表达水平.结果 与对照组相比,DEHP暴露后的睾丸曲细精管结构紊乱,管腔中可见圆形的精子细胞,精子排列失去极性;Western blot结果表明occludin和connexin43的表达明显降低,N-cadherin和β-catenin表达明显升高(P＜0.05);Sertoli细胞随着DEHP暴露浓度的增加,活力显著降低,ROS生成水平明显增加,Nrf2和p-p38的蛋白表达明显增高(P＜0.05).结论 DEHP暴露可通过氧化应激激活p38 MAPK信号通路,破坏血睾屏障完整性,并最终损伤生精功能.     

慢性铝暴露对小鼠精子质量及睾丸细胞焦亡的影响

目的 研究铝暴露对小鼠精子质量及睾丸细胞焦亡的影响。方法 将12只成熟雄性c57bl/6j小鼠分为两组：对照组(n=6)、铝模型组(n=6),对照组用蒸馏水灌胃，铝模型组采用10 mg/(kg·d) AlCl₃灌胃，8周后，获取小鼠睾丸组织、附睾组织及附睾精子。对附睾精子进行精子质量分析，对睾丸及附睾HE染色进行病理检测；运用PCR、免疫组化检测睾丸组织细胞焦亡关键基因的mRNA和蛋白表达。结果 与对照组相比，铝暴露的小鼠睾丸重量、附睾重量、精子活力、精子数量均显著下降(P<0.01),精子畸形率显著增加(P<0.01)。睾丸形态学观察结果显示，铝暴露小鼠睾丸生精小管中细胞排列紊乱，生精小管的面积和直径减小，管内精子减少。PCR及免疫组化结果显示，铝暴露小鼠睾丸组织中焦亡关键基因Nlrp3、Caspase-1、Gsdmd和IL-1b的mRNA及蛋白表达均上调(P<0.01)。结论 铝暴露可降低小鼠的精子质量，促进睾丸细胞焦亡，从而损伤雄性生殖系统。     

细胞周期蛋白 D1和 Ki-67在喉癌组织中表达的相关性研究

目的：初步探讨细胞周期蛋白D1和Ki-67在喉鳞状细胞癌组织中表达的相关性。方法应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法（ SP）检测Cyclin D1和Ki-67在喉鳞状细胞癌组织中的蛋白表达情况,分析两者在喉鳞状细胞癌组织中表达的相关性。结果在Ki-67阳性高表达的56例喉癌组织中,有41例出现Cyclin D1阳性高表达;在Cyclin D1阳性低度表达的51例患者中,有36例出现Ki-67阳性低度表达,经Spearman等级相关性检验：两者在喉鳞状细胞癌组织中的表达呈正相关（ rs ＝0.620, P ＜0.01）。结论 Cyclin D1和Ki-67高表达与喉鳞状细胞癌发生密切相关。     

Ki-67在肾癌中的表达及临床意义

目的 为探讨Ki-67蛋白在肾癌中的表达和临床意义.方法 应用免疫组化方法对40例肾癌组织进行Ki-67蛋白检测.结果 肾癌细胞中Ki-67蛋白表达阳性率为65%,Ki-67的表达与肾癌的病理类型无关(P>0.05),和肾细胞癌分级、分期和预后相关(P<0.05),Ki-67高表达和肾癌的术后转移相关.结论 Ki-67在肾癌组织中呈差异性表达,Ki-67高表达时(>30%)预示发生术后转移的可能性较大.     

脐带间充质干细胞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)抑制人卵巢癌SKOV3细胞增 殖及促进其凋亡的作用。方法：采用Transwell共培养观察UC-MSCs向卵巢癌细胞靶向归巢的作用;MTT 实验检测UCMSCs 条件培养基抑制SKOV3细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染法检测其凋亡率;实时PCR检测与SKOV3细胞增殖 和凋亡相关基因Ki-67,Bax,Bcl-2的表达。结果：UC-MSCs体外向SKOV3细胞靶向归巢。MTT 结果显示UC-MSCs条件 培养基明显抑制SKOV3细胞的增殖(P<0.01)。Annexin V-FITC/PI双染法提示75%条件培养基组的凋亡率明显高于对照 组(P<0.05)。实时PCR发现增殖相关基因Ki-67的表达明显下降(P<0.01),凋亡相关基因Bcl-2的表达明显降低(P<0.01), Bax的表达明显增加(P<0.01)。结论：UC-MSCs体外能向卵巢癌细胞靶向归巢,通过调节增殖相关基因Ki-67的表达, 抑制SKOV3细胞增殖;通过调节凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,促进SKOV3细胞凋亡。     

DcR3和Ki-67在胃癌的表达及临床意义

目的探讨诱捕受体3(DcR3)蛋白和细胞核增殖抗原(Ki-67)在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征之间的关系.方法采用免疫组织化学SP法检测98例胃癌组织和56例癌旁正常胃组织中DcR3和Ki-67的表达,分析其与多种临床病理特征之间的关系.结果 (1)98例胃癌组织中DcR3和Ki-67阳性表达率分别为55.1%(54/98)、68.4%(67/98).56例癌旁正常胃组织未发现DcR3和Ki-67的阳性表达.(2)DcR3的表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移及TNM分期显著正相关(P<0.01),与患者性别、年龄、肿瘤部位及浸润深度等无相关性(P>0.05).(3)Ki-67的表达与胃癌的分化程度、浸润深度(P<0.01)及TNM分期(P<0.05)显著相关,与患者性别、年龄、肿瘤部位及淋巴结转移等无相关性(P>0.05).(4)DcR3和Ki-67的表达显著正相关(P<0.01).结论 (1)DcR3在胃癌组织中具有较高的表达率.(2)DcR3和Ki-67的异常表达可促进胃癌的发生发展,其蛋白检测可作为判断胃癌分化、浸润、转移、分期的重要参考指标.     

Effects of Aging on Spermatogenesis, Sperm Maturation and Fertility in Mice

Aging is a normal physiological process. During the process of aging, the human organ- ism undergoes a series of morphological and functional modifications. Testis is the site forspermatogenesis, and testicular sperm are further maturated in the epididymi…     

Wnt/β-catenin信号通路在成人睾丸支持细胞增殖中的作用及其机制

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在成人睾丸支持细胞增殖中的作用及其作用机制。方法取成人睾丸组织采用两步酶法消化,分离纯化支持细胞,后行传代培养,并经波形蛋白免疫荧光染色鉴定其纯度。将支持细胞分为3组:正常对照组(Con组)、添加Gsk-3β特异性抑制剂SB216763组(SB组)和添加氯化锂组(LiCl组)。通过BrdU标记和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期;采用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR和Western blot-ting检测细胞中β-catenin和c-myc的表达状况;采用RNA干扰技术,下调支持细胞中c-myc基因表达。结果BrdU标记和流式细胞仪检测结果显示,SB和LiCl组支持细胞增殖明显高于Con组;加入SB216763和LiCl可明显促进细胞β-catenin和c-myc入核,c-myc mRNA和蛋白水平明显高于Con组;转染c-myc siRNA后,可明显降低SB216763引起的支持细胞增殖。结论激活Wnt/β-catenin信号通路可促进成人睾丸支持细胞的增殖,其作用机制可能是通过上调c-myc基因表达来实现的。     

Serum Hormone and Cellular Proliferation Changes of Testis in Rats with Experimental Orchitis Induced by Lipopolysaccharide

Objective To explore the changes of serum male hormone, androgen binding protein (ABP) expression as well as the proliferation of testicular cells in rats with experimen- tal orchitis induced by bacterial lipoplysaccharide (LPS) in vivo and to elucidate the putative mechanism of LPS on spermatogenesis of testis. Methods The serum testosterone (T), luteinizing hormone (LH) levels were detected with magnetic enzyme immunoassay. The expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and ABP expression at mRNA level of testis were studied with immuno- histochemical staining and in situ hybrydization respectively. Results The serum T level in rats with experimental orchitis was significantly higher than that in the rats of control (P<0.05) and ABP mRNA expression in Sertoli cells of testis was significantly increased (P<0.05) while PCNA expression in seminiferous epithelium in experimental rats significantly was decreased as compared with that of the control (P<0.05). No significant change in serum LH level was seen between ex- perimental orchitis and control groups (P>0.05). Conclusion The serum level of T and ABP expression significantly increased in rats with experimental aspecific orchitis induced by LPS, and at the same time inhibition of cellular proliferation of seminiferous epithelium can be detected, which may be the possible mechanism of male infertility in inflammatory process.     

雄性裸鼹鼠可育个体与不可育个体生殖系统结构与功能差异初探

目的 观察和分析雄性裸鼹鼠中可育个体和不可育个体生殖系统结构和功能的差异,初步探索雄性不可育个体不能繁育后代的原因。方法 健康雄性裸鼹鼠可育个体和不可育个体各5只,先采集一侧睾丸和附睾组织,称重后换算脏器系数;再采集另一侧睾丸组织,用中性福尔马林溶液进行固定后制备组织切片;取另一侧附睾用作精子计数、精子活动度的测定;采集血清测定血清中黄体生成素（LH）和睾酮（T）浓度。结果 与可育个体组相比较,不可育个体组的睾丸重量下降（P＜0.05）,附睾重量显著下降（P＜0.01）,且睾丸系数和附睾系数均显著下降（P＜0.01）;精子数量显著减少（P＜0.01）,精子活动度也显著减弱（P＜0.01）;血清黄体生成素和睾酮水平均显著降低（P＜0.01）;睾丸组织切片观察显示,不可育个体各级生精细胞严重脱落,排列混乱无序,支持细胞和间质细胞均有减少。 结论 雄性裸鼹鼠不可育个体生殖系统存在睾丸和附睾萎缩、生精功能下降和性激素分泌减少等现象。     

Rad18缺失对雄小鼠生殖细胞的影响

[目的]了解Rad18敲除雄小鼠生殖细胞的变化。[方法]用免疫组织化学方法检测2、6、12月龄Rad18-/-雄小鼠生精小管生殖细胞的特异性标记物TRA98的表达及分布,并与野生(WT)雄小鼠比较;用原位杂交技术检测Rad18在1周龄WT雄小鼠生精小管未分化精原细胞中的表达。[结果]缺失TRA98标记的早期精原细胞的生精小管比例在12月龄Rad18-/-和WT雄小鼠中分别为39.50%和2.76%,差异有显著性意义(P<0.05);但Rad18-/-退化生精小管中保留正常的Sertoli细胞,其附睾中未见TRA98阳性的生殖细胞,且精子形态正常;1周龄WT小鼠睾丸未分化精原细胞中有Rad18蛋白表达。[结论]Rad18可能对精原干细胞有维持作用。     

Study on the Specific Gene Expression during Spermatogenesis of Rat

Testicular spermatogenic cells possess the characteristics of selectable geneexpression during the germ cell differential process. There is a property oftransitional expression of the gene types during spermatogenesis[1 ] .For example,when structure genetic expression of testicular somatic cells was terminated,thespecific gene expressions of the testicular germ cell were activated[2 ] . Therefore,differential process of germ cells of differentdevelopmental stage is performed underthe programme…     

HSL表达和活性与豚鼠血清睾酮水平的相关性

目的研究不同发育阶段的豚鼠睾丸和附睾组织中激素敏感性脂肪（hormone-sensitive lipase,HSL）的表达及活性与生殖能力成熟的关系。方法取不同天龄阶段的豚鼠18只分为3组：6d龄幼鼠组;16d龄青春期豚鼠组;70d龄成年豚鼠组。用RT-PCR方法检测睾丸和附睾组织中HSL的mRNA表达,37℃下比色法对酶活性进行测定,放免法测定血清中睾酮水平,HE染色睾丸和附睾组织切片进行组织形态学分析。结果发育阶段的豚鼠随着天龄的增加,睾丸特异性HSL mRNA表达也增加（P〈0.05）,酶活性增强（P〈0.05）,血清中睾酮水平升高（P〈0.01）。组织病理学显示16d的豚鼠睾丸和附睾中开始出现精子,70d精子发育成熟。HSL的表达和酶活性与血清睾酮水平高度相关（r=0.75,P〈0.01;r=0.96,P〈0.01）。结论发育成熟豚鼠睾丸和附睾组织有较强的HSL表达及活性,HSL与睾丸的发育成熟以及精子发生可能存在相关关系。     

小鼠睾丸Ⅳ型胶原的合成与分布

目的研究小鼠睾丸内Ⅳ型胶原的合成与分布。方法应用生物素－抗生物素蛋白ＤＣＳ体系间接免疫荧光法和原位杂交法检测幼年、成年及老年小鼠睾丸内Ⅳ型胶原的合成与分布的变化。结果小鼠睾丸支持细胞具有合成Ⅳ型胶原的功能,小鼠睾丸曲细精管基膜内Ⅳ型胶原的含量及支持细胞内Ⅳ型胶原ｍＲＮＡ水平随小鼠年龄的增加而变化。１５天幼鼠睾丸内含量最高,成年及老年小鼠睾丸内含量依次减少。结论睾丸内的细胞外基质可能在生精过程中起重要作用。     

Ki-67、Thy-1和Oct4在小鼠生精恢复过程中的表达及其意义

目的:探讨精子再生过程中Ki-67、Thy-1和Oct4的表达及其意义。方法:采用间隔24d2次白消安[10mg/(kg.次)]小鼠腹腔内注射建立精子再生模型,于第2次给药后第1,2,3,4,6和8周运用免疫组化检测Ki-67、Thy-1和Oct4在生精上皮表达及其表达规律。结果:形态学显示第2次给药后3周主要为精原干细胞增殖期,4周为分化期,6-8周为精子发生恢复期。Ki-67表达见于精原细胞和少量精母细胞。精原细胞Ki-67阳性率在第2次给药后3周最高,第4周明显下降,6-8周恢复至正常对照组水平。Thy-1表达于精原细胞,在精子再生各阶段阳性表达率均较高,其中,第3周表达最高,第2周次之。Oct4表达仅见于紧贴曲细精管基底膜的精原细胞,在第3周表达较对照组显著上调,第4周下降,6-8周恢复至对照组水平。精原细胞Oct4和Ki-67阳性率之间的相关系数为0.779。结论:Thy-1并非特异性表达于精原干细胞。Oct4表达上调是促进精原干细胞增殖的重要因素。