HOXB5对结直肠癌细胞有氧糖酵解和恶性增殖的影响

目的 探讨同源盒蛋白（HOX）B5对结直肠癌（CRC）细胞有氧糖酵解和恶性增殖的影响。方法 通过预实验选取CRC细胞株Caco2构建过表达HOXB5的细胞株,HCT116构建敲低HOXB5的细胞株;分别采用CCK-8法、平板克隆实验、糖代谢检测试剂盒、Western blot法检测过表达或敲低HOXB5对CRC细胞增殖能力、平板克隆形成能力、有氧糖酵解、糖酵解相关蛋白的影响。结果 在Caco2细胞中,过表达HOXB5能明显增强细胞增殖及平板克隆形成能力（均P<0.05）,增加细胞葡萄糖消耗量以及乳酸、三磷酸腺苷（ATP）含量（均P<0.05）,上调丙酮酸激酶同工酶2(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)蛋白表达水平（均P<0.05）;在HCT116细胞中,敲低HOXB5能明显减弱细胞增殖及平板克隆形成能力（均P<0.05）,减少细胞葡萄糖消耗量以及乳酸、ATP含量（均P<0.05）,下调PKM2、LDHA、GLUT1蛋白表达水平（均P<0.05）。结论HOXB5通过促进CRC细胞有氧糖酵解来增强其恶性增殖。     

促凋亡蛋白Bax在结直肠癌中的研究进展

结直肠癌恶性程度较高,易发生血行、淋巴转移和肝转移。结直肠癌的发生和发展与凋亡密切相关。Bax是Bcl-2家族的重要的促凋亡蛋白,可启动细胞凋亡过程诱导肿瘤细胞发生凋亡。研究表明,Bax的表达预示着结直肠癌的良性预后,而且多数研究认为Bax在结直肠癌中存在高表达。但是Bax是否增强结直肠癌对化疗药物的敏感性,还存有争议。本文就最近的相关文献研究作一综述。     

基于lncRNA DGCR5介导miR-1180/SFRP1/Wnt通路对结直肠癌细胞生长转移的影响

目的 分析长链编码RNA (lncRNA) DiGeorge综合征临界区基因5 (DGCR5)对结直肠癌细胞生长转移的影响,并基于miR-1180/分泌型卷曲相关蛋白1 (SFRP1)/Wnt通路分析其中的机制。方法 选取人结直肠癌细胞系SW480进行培养。将SW480细胞分为对照组（C组,正常培养SW480细胞）、DGCR5 NC组（SW480细胞+转染DGCR5 NC载体）、DGCR5 mimic组（SW480细胞+转染DGCR5 mimic载体）以及DGCR5 inhibitor组（SW480细胞+转染DGCR5inhibitor载体）。转染完成后采用qPCR检测各组细胞中DGCR5的表达,验证细胞是否转染成功;分别采用CCK8法、克隆形成实验、平板划痕实验以及Transwell实验检测细胞活力、增值、迁移以及侵袭情况。荧光素酶报告测定lncRNA DGCR5与miR-1180的靶向关系;qPCR检测转染后各组细胞miR-1180/SFRP1的表达;WB检测各组细胞SFRP1、Wnt和β-catenin蛋白表达水平。结果 与DGCR5 NC组比较,DGCR5 inhibitor组...     

Lnc-CRCMSL在结直肠癌中的表达及对癌细胞生长的影响

目的探讨长链非编码RNA-CRCMSL(Lnc-CRCMSL)在结直肠癌组织和癌细胞中的表达及对癌细胞生长的影响。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测Lnc-CRCMSL在结肠癌组织和癌旁正常组织、正常结肠上皮细胞及结直肠癌细胞中的表达特点。建立SW480耐药株SW480/DDP,并通过基因干扰实验过表达其Lnc-CRCMSL水平,采用流式细胞术测定细胞的凋亡率,CCK-8测定细胞的增殖活力,划痕愈合实验测定细胞的迁移能力,Transwell测定细胞的侵袭能力,免疫蛋白印迹实验测定基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果Lnc-CRCMSL在结直肠癌组织的表达低于癌旁正常组织,在Ⅱ期、Ⅲ期结直肠癌组织中的表达低于Ⅰ期,且在结直肠癌细胞中的表达量低于正常结肠上皮细胞(P＜0.05)。过表达Lnc-CRCMSL提高了SW480/DDP的凋亡率,抑制了SW480/DDP的增殖、迁移和侵袭活力(P＜0.05)。同时,过表达Lnc-CRCMSL降低了SW480/DDP的MMP2和MMP9表达水平(P＜0.05)。结论Lnc-CRCMSL在结直肠癌中表达异常,对结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭行为具有调控作用。     

RasGRF1在结直肠癌细胞中的表达及其对癌细胞生物学行为的影响

目的 探究RasGRF1在结直肠癌细胞中的表达及对癌细胞生物学功能的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测不同结直肠癌细胞系DiFi、SNU175、HT-29、HCT-15细胞中RasGRF1mRNA;体外培养人结肠癌细胞,随机分为si-RasGRF1-NC组（阴性对照）、si-RasGRF1组（沉默RasGRF1表达）、NG组（空白对照）。采用qRT-PCR检测各组RasGRF1 mRNA,CCK-8法检测细胞存活情况,AnnexinV/PITC双染法检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞PI3K/Akt通路蛋白。结果 DiFi细胞中RasGRF1 mRNA相对表达量最高（P <0.05）,选择DiFi细胞进行后续实验。si-RasGRF1组光密度值低于NG组、si-RasGRF1-NC组（P <0.05）。si-RasGRF1组细胞凋亡率高于NG组和si-RasGRF1-NC组（P <0.05）。si-RasGRF1组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量低于NG组和si-RasGRF1-NC组（P <...     

5F对胰腺癌细胞生长的影响及机制

目的:观察研究半边旗中二萜类化合物5F(1la-羟基-15-氧-16-烯-ent贝壳杉烷-19酸)诱导人胰腺癌细胞株AsPC-1凋亡的效果及其机制。方法:用脂质体转染法将PUMA/siRNA导入AsPC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆。将转染载体的AsPC-1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC-1细胞分别暴露于浓度8.875,37.5,142μmol/L浓度的5F中作用72h。RT-PCR检测不同组细胞经5F作用24h后的PUMA表达;MTT检测细胞生长抑制,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Ho-echst33258和PI双染色染色了解细胞凋亡的变化。结果:5F促进AsPC-1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调;当PUMA表达抑制后,受5F作用的细胞出现PUMA表达的降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞的明显增殖。结论:5F促进体外AsPC-1细胞凋亡,并抑制其生长,其诱导凋亡与上调PUMA有关。     

KIF5B过表达和干扰慢病毒载体的构建及对结直肠癌细胞增殖的影响

目的 构建马达蛋白KIF5B基因重组慢病毒过表达和RNA干扰载体并进一步构建稳定转染结直肠癌细胞模型,检测敲低KIF5B蛋白对结直肠癌细胞增殖的影响。方法 将PCR扩增的人KIF5B基因序列和设计合成的shRNA序列分别插入GV-358和GV-248表达载体。采用慢病毒三质粒包装系统共转染HEK293T细胞,进行病毒包装和扩增。重组慢病毒感染结直肠癌细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western blot法检测KIF5B过表达和沉默效率。CCK-8检测KIF5B干扰后HCT116和SW480细胞的增殖,并检测细胞内周期相关蛋白的表达。结果 KIF5B过表达及shRNA载体测序与原设计序列完全符合。重组病毒感染结直肠癌细胞中,可见绿色荧光蛋白表达。KIF5B过表达组细胞中KIF5B-FLAG蛋白大量表达,KIF5B沉默细胞中,KIF5B的蛋白表达量显著下降。KIF5B被敲低后,HCT116和SW480细胞增殖加快,细胞内p21、p16两种蛋白表达下调。结论 成功建立了KIF5B过表达和沉默的结直肠癌细胞模型,并且发现KIF5B表达被干扰后,可能会抑制p21与p16蛋白的表达,加速细胞周期,从而促进结直肠癌细胞增殖。     

Bcl—2蛋白在地直肠腺瘤及结直肠癌组织中的表达

了解Ｂｃｌ－２蛋白在结直肠腺癌及结直肠癌组织中的表达意义。用流工细胞技术对１３例结直肠癌瘤及３６例结直肠癌组织中Ｂｃｌ－２蛋白表达进行分析。结果：３６例结直肠癌瘤组织中Ｂｃｌ－２蛋白表达水平显著高于癌旁粘膜组织中Ｂｃｌ－２蛋白表达（Ｐ〈０．０５）,也显著高于结直肠腺癌组织中Ｂｃｌ－２蛋白表达（Ｐ〈０．０５）。癌组织中Ｂｃｌ－２蛋白表达与癌细胞分化程度无关,与ＤｕｋｅｓＡ、Ｂ、Ｃ期分期无关（Ｐ〉０．     

巨噬细胞在结肠癌CT-26细胞获得性5-FU耐药中的作用

目的 探讨巨噬细胞在结肠癌CT26细胞对5-FU产生获得性耐药过程中的作用及其机制.方法 分别用正常培养基(NM)、巨噬细胞培养上清(CM)及预先用低剂量5-FU处理过的巨噬细胞培养上清[CM(5-FU)]处理CT-26细胞,并给予10μmol/L 5-FU处理,用CCK-8检测各组细胞增殖情况,PI/Annexin-V流式细胞术检测各组细胞凋亡情况及Western blot检测各组细胞凋亡信号通路.建立CT26小鼠皮下移植瘤模型,应用上述条件培养基处理联合5-FU化疗,动态观察移植瘤生长情况.结果 检测细胞凋亡情况发现,5-FU处理组CT26细胞的凋亡细胞百分比显著高于对照组(P＜0.05);Western blot检测结果显示5-FU处理组凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及P-JNK的表达较对照组显著上调(P＜0.05);Western blot检测结果及结肠癌CT26细胞小鼠移植瘤模型发现P-JNK抑制剂可显著抑制由5-FU诱导的CT26细胞Caspase-3凋亡信号通路的激活;CCK-8检测结果及小鼠移植瘤模型中均发现CM(5-FU)能够显著降低CT26细胞对5-FU的化疗敏感性;细胞凋亡检测及Western blot检测结果发现CM(5-FU)可抑制由5-FU诱导的P-JNK/Caspase-3凋亡信号通路的激活.结论 5-FU可激活结肠癌CT-26细胞的P-JNK依赖的Caspase-3凋亡信号通路以发挥抗癌作用;5-FU诱导的巨噬细胞可导致结肠癌CT26细胞产生5-FU获得性耐药,其机制可能是5-FU诱导的巨噬细胞上清可拮抗CT-26细胞中5-FU激活的P-JNK/Caspase-3凋亡信号.     

下调STYK1基因表达可抑制结直肠癌细胞生长与侵袭

目的 探讨STYK1基因下调对结直肠癌细胞HCT-15增殖、凋亡和迁移以及MEK/ERK和PI3 K/AKT信号通路的影响.方法 采用基因干扰技术抑制结直肠癌细胞HCT-15中STYK1的表达,Western blot检测抑制效果,CCK-8检测STYK1表达下调对HC-T15细胞增殖的影响,流式细胞仪检测STYK1表达下调对HC-T15细胞凋亡的影响,Transwell小室实验检测STYK1表达下调对HCT-15细胞侵袭的影响,通过Western blot检测STYK1表达下调对HCT-15细胞MEK/ERK和PI3 K/AKT信号通路活性的影响.结果 与干扰对照组相比,STYK1表达下调明显抑制HCT-15细胞增殖活性(P＜0.01)和侵袭能力(P＜0.01),并诱导细胞凋亡(P＜0.01);同时,STYK1表达下调明显抑制HCT-15细胞ERK1/2和AKT蛋白的磷酸水平.结论 STYK1基因干扰可以抑制结直肠癌细胞的增殖和侵袭,并诱导凋亡,其机制可能与抑制MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路活性有关.     

Increased sensitivity of colorectal cancer cell lines with microsatellite instability to 5-fluorouracil in vitro

Objective To study the relationship between sensitivity to 5-FU and the status of a panel of microsatellite loci in three human colon cancer cell lines.Methods Cell viability in several concentrations of 5-FU was assessed by the MTT test. Expression of hMSH2 and hMLH1 in LoVo, SW480 and SW1116 cells were analyzed by immunocytochemical staining. Ten mononucleotide and dinucleotide microsatellite loci were analyzed by the PCR-SSLP-silver staining method. Results By MTT assay, it showed that LoVo cells were more sensitive than SW480 and SW1116 cells (0.8 μmol/L, 2.2 μmol/L and 1.9 μmol/L, respectively,P&lt;0.05). By immunocytochemical staining, hMSH2 was expressed in SW480 and SW1116 cells but not in LoVo cells, while hMLH1 was positive in all three cell lines. The PCR-SSLP-silver staining of 10 microsatellite loci revealed that LoVo cells had a different pattern of electrophoretic bands compared with SW480 and SW1116 cells, manifesting both additions and band-shifts. Conclusion Together with hMSH2 and hMLH1, the status of a panel of microsatellite loci may be used as convenient predictors for drug-optimization or prognosis-assessment in colorectal cancer patients before chemotherapy.     

生长激素对结肠癌肿瘤细胞体外影响

目的: 检测生长激素对体外培养的结直肠癌细胞的影响,并探讨其作用机制?方法:结肠癌细胞株Lovo细胞随机分组,加或不加不同浓度的生长激素孵育不同时间后,以MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况?结果:MTT法测定表明,生长激素对Lovo细胞有明显的促进增殖效应,12~24 h起效,48 h时达高峰,生长激素达到一定浓度后,其促增殖作用不再增加?流式细胞仪检测生长激素对结肠癌细胞的影响显示:浓度为200 ng/ml的生长激素作用Lovo细胞24 h后,G0/G1细胞比例下降,S期细胞比例明显上升,G2/M期细胞比例稍上升,凋亡指数无明显变化(P=0.187);72 h时, G0/G1期细胞下降更为明显,S期细胞比例上升亦更为明显,G2/M期细胞上升明显,凋亡细胞比例明显增高(P < 0.01)?结论:生长激素对Lovo细胞有明显的促增殖作用,并有受体饱和效应?该作用是通过改变细胞周期分布,促进G0/G1期细胞向S期?G2/M期细胞转变实现的?     

苦参碱对大肠癌细胞凋亡发生及Bad蛋白表达的影响

目的 观察苦参碱(matrine)对体外大肠癌细胞凋亡发生及Bad蛋白表达的影响.方法 大肠癌LOVO细胞株分为对照组和苦参碱不同浓度作用组,将终浓度分别为0.1、0.5、2.5g/L的苦参碱加入培养液中,观察大肠癌细胞形态学变化,测定各组苦参碱作用1、4、16h后的细胞活力(MTT法)、细胞凋亡率(流式细胞术)、Bad蛋白含量(免疫组化法和western blot法).结果 与对照组比较,苦参碱组出现细胞皱缩、脱壁、细胞漂浮及细胞破碎现象,细胞活力显著降低,细胞凋亡率增加,Bad蛋白表达增加,有明显的时间和浓度依赖关系.结论 苦参碱能提高大肠癌细胞凋亡发生率和Bad蛋白的表达.     

ATR抑制剂VX-970对CPT诱导的结肠癌细胞生长的影响

目的:探讨ATR特异抑制剂VX-970对喜树碱抑制的结肠癌细胞HCT-116生长,促进结肠癌细胞HCT-116凋亡的影响。方法:采用克隆形成、MTS、流式细胞术等实验分别检测单独使用VX-970,CPT以及联合VX-970和CPT用药处理对细胞生长、细胞周期及凋亡等影响,蛋白免疫印迹检测DNA损伤关键蛋白p-ATR,p-Chk1,γH2AX等的表达。结果:VX-970增强CPT对HCT-116细胞生长和增殖的抑制作用,促进细胞凋亡和减弱细胞周期G2/M期的阻滞。结论:VX-970能显著增强CPT抑制HCT-116细胞生长,诱导细胞凋亡和提高细胞对CPT药物的敏感性。     

水通道蛋白1和血管内皮生长因子在宫颈癌组织中的表达及相关性

目的:探讨水通道蛋白1(AQP1)和血管内皮生长因子(VEGF)在宫颈癌组织中的表达及其相关性。方法:采用免疫组织化学方法对30例宫颈癌、20例宫颈上皮内瘤变及10例正常宫颈组织中AQP1和VEGF的表达进行检测。结果:AQP1和VEGF在宫颈癌组的表达高于宫颈上皮内瘤变组及对照组,3组之间差异有统计学意义;AQP1和VEGF的表达与宫颈癌病理分级及淋巴结转移相关,组织分化程度越差,二者的表达越高;在有淋巴结转移组中二者的表达高于无淋巴结转移组;不同临床分期、组织分型以及肿瘤大小宫颈癌组中AQP1和VEGF的表达均无显著统计学差异;二者的表达存在正相关。结论:宫颈癌组织中AQP1和VEGF呈高表达,提示2个因子在宫颈癌的发生、发展过程中起促进癌细胞生长、转移和血管生成的作用。     

金雀异黄素增加5-氟尿嘧啶对胃癌SGC-7901细胞疗效的体外研究

目的:研究金雀异黄素(genistein,Gen)是否影响5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对胃癌细胞SGC-7901的抗癌活性.方法:Gen、5-FU单独及两者联合处理胃癌SGC-7901细胞24、48及72 h后,采用MTT法测定癌细胞的活性;Gen、5-FU单独、联合处理胃癌SGC-7901细胞72 h后,透射电镜观察细胞超微结构改变,免疫细胞化学法研究凋亡相关基因的蛋白mt P53、Bcl-2和Bax的表达变化.结果:6 μmol/L Gen和10 μmol/L 5-FU联合应用比20 μmol/L Gen、10μmol/L 5-FU单独应用时对胃癌细胞的生长抑制更为显著(P＜0.01);Gen、5-FU单独及联合应用均可诱导SGC-7901细胞凋亡;Gen、5-FU联合时对SGC-7901细胞的凋亡相关蛋白Bax表达上调和mt P53、Bcl-2表达下调的作用较单独时明显(P＜0.05～0.01).结论:金雀异黄素能够增强5-FU对SGC-7901细胞的抗癌活性,可能与其调节细胞生存和凋亡的关键蛋白mt P53、Bcl-2和Bax的表达有关.金雀异黄素与5-FU联合应用可能改善胃癌化疗的结局,但这一方案的效果需要适当的临床试验来验证.     

冬凌草甲素诱导结直肠癌细胞SW-1116凋亡与衰老的体内外实验研究

目的探讨冬凌草甲素（Ori）在体内外抑制结直肠癌细胞的作用及机制。方法应用不同浓度Ori（0、6.25、12.5、25、50和100μmol/L）处理结直肠癌细胞SW-1116及其建立的裸鼠移植瘤模型,CCK-8法检测Ori对SW-1116细胞的抗增殖效应;流式细胞仪检测Ori处理SW-1116后细胞周期的改变及细胞的凋亡;β-半乳糖苷酶染色检测Ori诱导SW-1116细胞衰老;软琼脂细胞克隆形成实验检测Ori对SW-1116细胞克隆形成的影响;观察Ori对SW-1116细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。结果 Ori可诱导结直肠癌细胞SW-1116生长抑制、细胞周期阻滞、凋亡、衰老和克隆形成能力。Ori还显著抑制SW-1116裸鼠移植瘤的生长,随着Ori剂量的增加裸鼠移植瘤中的细胞凋亡与衰老增加。结论体内外实验研究表明,Ori具有抗结直肠癌的活性,可能成为治疗结直肠癌的一个新的候选化合物。