肾组织肌纤维、胶原纤维、肾小球基膜和细胞的组合染色法研究

目的:探讨显示人体和实验动物肾组织中的肌纤维、胶原纤维、肾小球基膜和红细胞等成分的复合染色法.方法:选用Periodic acid-Schiff-Orange G-Iodine green(高碘酸、雪夫、橙黄G和碘绿,简称PA-S-O-IG)组合染色法,Sirius red-Picricacid-Iodine green(天狼星红、苦味酸和碘绿,简称SR-PA-IG)组合染色法和改进的Masson组合染色法对肾组织中的多种成分进行染色.结果:PAS-O-IG法显示肾小球基膜黏多糖呈紫红色,细胞核呈绿色,红细胞呈黄色.SR-PA-IG法显示肾小球基膜和囊壁纤维组织增生的胶原纤维呈红色,细胞核呈淡绿色,背景呈黄色.Masson法显示肾小球和小管等胶原纤维呈绿色或蓝色,红细胞呈橙红色,血管和间质的平滑肌纤维呈红色.结论:3种组合染色方法,克服了原法染色单一、对比效果差的缺点,能够更好地显示肾组织中的血管和间质平滑肌纤维、肾小球基膜和囊的黏多糖,细胞核和红细胞、肾小球和肾小管的胶原纤维和细胞核等成分,为肾脏疾病形态学诊断和研究,提供了较为理想的组合染色法.     

软组织Rosai-Dorfman病1例及文献复习

目的:探讨软组织罗-道病(RDD)的病理诊断和免疫组化特点以及鉴别诊断. 方法:通过HE、免疫组化及特殊染色观察1例下肢软组织RDD并复习文献. 结果: 镜下可见丰富的胶原纤维和组织细胞增生以及大量浆细胞、淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润,组织细胞呈梭形、多边形,胞质嗜酸性颗粒状、放射条纹状或泡沫状,一些大组织细胞质内有多量小淋巴细胞. 增生的胶原和梭形组织细胞构成不典型Storiform结构;组织细胞表达S-100,KP-1,MAC387,VIM,Masson三色及网状纤维染色显示大量胶原纤维增生,组织细胞PAS-AB染色阴性. 结论: 软组织RDD是临床罕见的疾病,在病理诊断方面,易误诊为其他疾病,明确病理组织学特点在鉴别诊断中有重要意义.     

皮肤组织黑素细胞与胶原和弹力纤维的组合染色法研究

目的:寻找能显示皮肤组织黑素细胞与胶原纤维和弹力纤维的染色法.方法:选用Masson Fontana silver nitrate-Ponceau S-Picric acid-Victoria blue(Masson Fontana硝酸银、丽春红S、苦味酸和维多利亚蓝,简称MFSN-P-PA-VB)对实验动物皮肤组织进行组合染色.结果:皮肤黑素细胞颗粒呈黑色;胶原纤维呈红色,出血的红细胞呈黄色;弹力纤维呈绿色.结论:本组合染色方法克服了原法染色单一、对比效果较差的弱点.能够较好的显示皮肤组织中含有黑素细胞颗粒、胶原纤维及出血部位的红细胞和弹力纤维组织成分.     

基质金属蛋白酶-3、层粘连蛋白及Ⅲ型胶原在人眼翼状胬肉组织中的表达及意义

目的检测人眼翼状胬肉组织中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型胶原(col Ⅲ)及胶原纤维和弹力纤维的表达。方法应用S-P免疫组织化学染色方法检测15例翼状胬肉组织及8例正常球结膜组织中MMP-3、LN、col Ⅲ的免疫学定位及表达情况，用Masson及VG染色法检测各标本中胶原纤维及弹力纤维的分布情况。结果HE染色：翼状胬肉组织上皮下基质中存在结缔组织的增生和血管形成；基质浅层存在一无定形物质透明区及粗糙的颗粒样嗜酸性物质，在翼状胬肉体部深层基质中存在粗糙的纤维组织；正常球结膜组织细胞排列整齐；基质为疏松结缔组织，胶原纤维平行排列，其间可见成纤维细胞，散在少量中性粒细胞、毛细血管；Masson染色：翼状胬肉浅层基质中存在致密的胶原纤维染色，深层基质中的胶原纤维存在变性样改变；VG染色：翼状胬肉组织深层基质中存在大量变性的胶原纤维，其间夹杂黑色的弹性纤维；免疫组化染色法：MMP-3在翼状胬肉上皮细胞中呈强表达，成纤维细胞中呈中等强度表达，血管内皮细胞中未见表达；LN在血管壁中呈强表达，在上皮细胞基底膜中呈中等强度表达，在整个基质中未见明显表达；col Ⅲ在整个翼状胬肉基质中呈强表达。结论翼状胬肉组织中ECM的成分较正常球结膜发生改变，有大量的弹性纤维变性、胶原纤维增生及新生血管形成；col Ⅲ在翼状胬肉组织中表达增加，LN及胶原纤维可能对翼状胬肉中血管形成、细胞粘附和迁移及ECM重建起作用；MMP-3在翼状胬肉组织中表达增加，其对ECM成分的降解作用可能有助于翼状胬肉的形成和向角膜中央侵袭。     

补肾益精法对系统性硬皮病血管内皮间质转化的影响

目的:探讨补肾益精法中药复方对系统性硬皮病血管内皮细胞内皮间质转化(endothelial to mesenchymal transition,End MT)的影响及机制。方法:采用博莱霉素建立硬皮病小鼠模型,造模同时补肾益精方软皮汤2号方(中药复方)进行干预,4周后HE染色观察小鼠皮肤组织病理、免疫组化法检测α-SMA表达水平;体外构建TGF-β1诱导的血管内皮细胞End MT模型,用补肾益精法含药血清处理48 h后,采用细胞免疫荧光方法检测血管内皮细胞α-SMA表达,Western Blot方法检测血管内皮细胞CD31、FSP1、Snail-1表达水平。结果:HE染色结果显示,模型组小鼠皮肤纤维化区域中,胶原纤维明显增多、胶原间隙变窄、毛细血管明显少于正常皮肤组织;与模型组比较,中药复方组小鼠皮肤胶原纤维较少、间隙较宽、血管数量较多;免疫组化染色检测结果显示,模型组小鼠皮肤组织中血管内皮细胞α-SMA表达高于正常对照组,中药复方组α-SMA阳性表达明显减少。免疫荧光检测结果显示,经TGF-β1诱导成功建立End MT模型,End MT模型组细胞α-SMA高表达,内皮细胞发生间质转化,经含药血清处理后,α-SMA表达明显减少。Western Blot检测结果显示,End MT模型组中Snail-1、FSP1均明显高于对照血清组,CD31明显低于对照血清组;含药血清处理组Snail-1、FSP1表达明显低于End MT模型组,CD31表达高于End MT模型组(P0.05)。结论:补肾益精法对系统性硬皮病血管的保护作用,可能与通过某些途径拮抗Snail介导的End MT所参与的纤维增生性闭塞性血管损伤有关。     

生物反应器构建组织工程化血管的初步研究

目的探讨生物反应器内构建具有一定力学强度的组织工程化血管的可行性.方法从6月龄毕格犬的颈总动脉、颈外静脉分别获取平滑肌细胞和内皮细胞,体外培养扩增后,将平滑肌细胞接种于聚羟基乙酸(PGA)上形成细胞-材料复合物,置于生物反应器内(搏动频率75次/min;扩张量＜5%)培养3周,接种内皮细胞继续培养1周后取新生血管,进行大体观察、组织学和免疫组化检测.结果生物反应器内培养的组织工程化血管大体观察具有良好的弹性,管腔圆;平滑肌纤维成分排列规则且有层次感;免疫组化染色显示,平滑肌细胞呈棕黄色层状排列,内皮细胞于血管内侧呈单层排列.结论应用生物反应器可构建具有良好弹性的组织工程化血管.     

手术治疗外伤性前房出血患者的临床体会

挫伤引起的前房出血是由于角膜缘组织的伸展;赤道部巩膜扩张;晶状体虹膜隔后移;以及急性眼压升高,结果撕裂近前房角的血管组织所致.大多数前房出血来自于虹膜动脉大环以及分布在睫状体的睫状后长动脉和睫状前动脉分支所组成的睫状肌动脉环及其毛细血管网.只有15%的前房出血是由于虹膜血管破裂、睫状体分离或虹膜根部离断所致.     

生物反应器构建组织工程化血管的初步研究

目的探讨生物反应器内构建具有一定力学强度的组织工程化血管的可行性。方法从6月龄毕格犬的颈总动脉、颈外静脉分别获取平滑肌细胞和内皮细胞,体外培养扩增后,将平滑肌细胞接种于聚羟基乙酸（PGA）上形成细胞-材料复合物,置于生物反应器内（搏动频率75次／min;扩张量〈5％）培养3周,接种内皮细胞继续培养1周后取新生血管,进行大体观察、组织学和免疫组化检测。结果生物反应器内培养的组织工程化血管大体观察具有良好的弹性,管腔圆;平滑肌纤维成分排列规则且有层次感;免疫组化染色显示,平滑肌细胞呈棕黄色层状排列,内皮细胞于血管内侧呈单层排列。结论应用生物反应器可构建具有良好弹性的组织工程化血管。     

老年人睫状体胶原纤维三维立体结构的实验研究

目的 探讨老年人睫状体胶原纤维三维立体结构,明确其解剖特点.方法 采取2例老年男性供体眼睫状体,以氢氧化钠细胞浸解法处理7 d,制备光学显微镜及扫描电子显微镜标本并观察.结果 老年人睫状体大体形态与正常年轻人群相似.睫状体基质部胶原纤维排列不规则,放射状与环形睫状肌内大量胶原纤维呈束状环形排列,平坦部呈蜂窝状结构,胶原纤维交错排列.结论 老年人老视的发生可能与其特殊的睫状体胶原纤维三维立体结构有关.     

颈部淋巴结梭形-上皮样血管内皮瘤报告

目的:探讨淋巴结梭形-上皮样血管瘤(SEHE)的本质、诊断与鉴别诊断。方法:通过HE、免疫组化及组织化学观察1例原发性颈部淋巴结梭形-上皮样血管瘤,并复习文献。结果:肿瘤主要位于淋巴结门区-髓质内呈结节状,见呈巢状、条索状排列的上皮样细胞区;梭形细胞束状、平行排列区及位于结节外周的具有管腔的索状细胞和血管区。肿瘤细胞胞浆丰富,嗜酸性,可见空炮;胞核圆、空泡状、核仁明显。间质见少量玻璃样、粘液样基质。组织化学染色,网状纤维染色显示无数血管腔隙结构。淋巴结副皮质区滤泡间、滤泡内均可见条索状上皮样细胞,部分见明显的血管腔。免疫组化染色显示肿瘤细胞vimentin阳性,部分CD31、FⅧ相关抗原阳性和少数细胞CD68阳性;而CK阴性。结论:SEHE应是一种少见的生物学行为,介于良、恶性之间的交界性血管肿瘤,更倾向于良性过程;其发生在淋巴结内者罕见。组织形态需与血管平滑肌脂肪瘤、淋巴管平滑肌瘤病、血管平滑肌错构瘤、转移癌等鉴别。     

大鼠宫颈MMP-2、MMP-8动态表达的研究

目的 通过检测大鼠宫颈基质金属蛋白2(MMP-2)、基质金属蛋白8(MMP-8)的动态表达,探讨胶原降解与宫颈成熟的关系.方法 清洁级大鼠分为未孕动情间期、妊娠10d、妊娠16d、妊娠19d和分娩后即刻组,每组各6只.宫颈称湿重.HE 常规染色显示宫颈大体结构,VG染色进行胶原纤维和肌纤维显色,免疫组织化学染色显示MMP-2、MMP-8.结果 (1)HE染色显示大鼠宫颈主要由大量纤维(胶原纤维和肌纤维)组成,分娩后即刻组宫颈间质见少量中性粒细胞.其余组未见中性粒细胞.(2)临产前宫颈湿重已有增加,至分娩后即刻增加更明显.(3)宫颈纤维组织由胶原纤维和平滑肌纤维组成,所占比例无明显差别.分娩后即刻组胶原纤维和肌纤维排列较非分娩时松散.(4)MMP-2(棕染)在所有组别间质均有表达,鳞状上皮无表达,胶原纤维、平滑肌纤维、上皮及少量血管壁呈阳性表达;妊娠19d和分娩后即刻组阳性表达的密度较其他组增强.(5)分娩后即刻组MMP-8染色见间质散在中性粒细胞棕染.其他组的组织或细胞均未见阳性表达.结论 宫颈成熟后,官颈纤维组织松散、断裂,中性粒细胞由外源性血管浸润到宫颈间质,这一变化在分娩时尤其明显;MMP-2、MMP-8这两种不同来源的基质金属蛋白酶共同降解了宫颈纤维,导致宫颈软化、扩张.

Abstract：

Objective To elucidate the relationship between collagen degradation and cervical ripening by detecting dynamic expressions of matrix metalloproteinases 2 (MMP-2) and 8 (MMP-8) in rat cervix. Method SPF rats were divided into 5 groups (n=6), namely non-pregnancy estrus interval group, gestational days 10, 16, and 19 groups, and immediately postpartum group. The wet weight of the cervix was measured and HE staining was used to display the general structure of the cervix. VG staining was applied to visualize the collagen fibers and muscular fibers. Immunohistochemistry was performed to observe the expressions of MMP-2 and MMP-8 in the cervix. Results HE staining showed that the rat uterine cervix consisted mainly of ?broblasts and ?brous connective tissues. A small quantity of neutrophils could be seen in the cervix stroma of the rats immediately after immediately parturition, but not at the other time points. The wet weight of the antepartum cervix had increased, and a more obvious increase was seen in the wet weight of the cervix immediately after parturition. The collagen fibers of the cervix consisted of collagen fibers and smooth muscle fibers, and their proportions showed no significant variation at the time points around the parturition. Immediately after parturition, the collagen fibers and muscular fibers in the cervix became loosened as compared with that before parturition. MMP-2 expression was found in the cervical stroma but not in the squamous epithelium in nonpregnancy, term pregnancy, and immediately after parturition; the smooth muscle cells, vascular wall, and stromal ?broblasts showed positive expression of MMP-2. Enhanced intensity of MMP-2 staining was seen in term pregnancy and postpartum group in comparison with that in the other groups. MMP-8 expression was observed in the cervix of rats immediately after parturition, with scattered neutrophils positive for MMP-8 spotted in the stroma of the ripened cervix. MMP-8 expression was not detected in the other groups. Conclusion Ripened cervical fibrous tissue becomes loose and broken, and cervical ripening is accompanied by infiltration of neutrophils from exogenous vessels. These changes are particularly evident after parturition. MMP-2 and MMP-8 cooperate to degrade the cervical fibers, leading to cervical softening and expansion.     

门脉高压症患者内脏血管壁的组织病理学改变

５０例门脉高压症患者在行脾切除贲门周围血管离断术时取脾动脉、脾静脉和胃冠状静脉行光镜和电镜观察,用免疫组织化学法分析脾动脉壁诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的表达,以研究门脉高压症和门脉高压性血管病变之间的因果关系。结果表明：①脾动脉壁的内弹性膜和弹力纤维断裂和变性,平滑肌细胞萎缩、凋亡和表型改变,平滑肌细胞ｉＮＯＳ呈阳性表达,其活性较非肝硬变患者明显提高（Ｐ＜０．０１）。②胃冠状静脉和脾静脉壁内膜增生,形成新内膜,广泛的附壁血栓形成,有类粥样硬化样斑块,伴有平滑肌细胞肥大。静脉的中膜平滑肌纤维明显增粗、变厚,伴细胞外基质聚积。提示：门脉高压症时合并有内脏动脉和静脉的血管病变。门脉高压症、内脏高动力循环和内脏血管病变在门脉高压症的发病机制中具有互为因果的关系。     

Pathological morphology alteration of the splanchnic vascular wall in portal h ypertensive patients

目的：研究门静脉高压症患内脏血管壁的病理形态学改变。方法：50例门静脉高压症患在行脾切除和贲门周围血管离断术时,取脾动脉、静脉和胃冠状静脉,行光镜和电镜观察。免疫组化法分析脾动脉壁诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）的表达。结果：脾动脉的内弹力膜和中膜内弹力纤维断裂和变性。脾动脉平滑肌细胞可见萎缩、凋亡和表型改变。平滑肌细胞的胞浆内可见iNOS阳性表达。肝硬化患可见内脏静脉内膜增生,静脉壁有广泛的附壁血栓,类粥样硬化斑块形成,平滑肌细胞肥大,静脉肌纤维明显增粗和增厚,管壁细胞外基质增加。结论：门静脉高压症可合并内脏动脉和静脉的血管病变,在门静脉高压症的发病机制中,门静脉高压、内脏高动力循环和内脏血管病变之间具有相互影响的关系。     

血小板衍生生长因子-BB对血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞胶原蛋白合成的影响

目的:观察血小板衍生生长因子-BB对培养的人血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞胶原蛋白合成的影响.方法:采用培养的人血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞,应用3H-脯氨酸掺入方法,观察血小板衍生生长因子-BB对3种细胞胶原蛋白合成的影响.结果:血小板衍生生长因子-BB可促进处于静止状态的成纤维细胞和平滑肌细胞胶原蛋白合成,并呈现出明显的浓度依赖关系,成纤维细胞和平滑肌细胞胶原蛋白合成分别在30 ng/ml和40 ng/ml时达到高峰,血小板衍生生长因子-BB对血管内皮细胞胶原蛋白合成总量无明显促进作用.在30 ng/ml的血小板衍生生长因子-BB作用下,成纤维细胞和平滑肌细胞分别在36 h和48 h时胶原蛋白合成达到高峰.结论:血小板衍生生长因子-BB可明显促进培养的人血管平滑肌细胞和成纤维细胞的胶原蛋白的合成,对血管内皮细胞胶原蛋白合成总量无明显促进作用.     

PMF三色法显示软骨胶原类型的探讨

采用改良的Herovici’sPMF三色染色法显示软骨胶原类型 (包括网状纤维、基底膜等 ) ,使胶原纤维呈红色 ,幼稚胶原纤维、网状纤维及基底膜呈蓝色 ,肌纤维、红细胞等呈黄色 ,用此种染色法能收到与VG、PAS和镀银法三法合并使用同样的效果。本改良染色法 ,方法简单 ,成本低 ,便于操作和推广。     

去细胞尿道修复大鼠尿道缺损

目的 探讨化学去细胞尿道修复尿道缺损的效果.方法 取SD大鼠尿道20根,每段长1cm,采用化学去细胞法处理大鼠尿道的细胞成分,保留细胞外基质,制备去细胞尿道.将10只Wistar大鼠尿道制成1cm整段缺损模型,用SD大鼠去细胞同种异体尿道移植修复大鼠尿道的整段缺损.术后3周进行大鼠尿动力学检测及VG染色.另取10只Wistar大鼠异体移植及10只Wistar大鼠自体移植作对照.结果 与对照组相比,处理组术后尿道压力、膀胱最大容积和残余尿量差异无统计学意义(P＞0.05).VG染色结果显示,去细胞处理组吻合口断端被染成红色,肌纤维排列整齐分布均一,再生肌纤维长入远端尿道.异体移植对照组肌纤维形态均一,肌纤维排列整齐分布均一未见肌纤维长入远端尿道.结论 化学去细胞同种异体尿道,可修复大鼠尿道损伤.     

慢性间歇性低氧对大鼠胸主动脉内皮细胞的影响

目的 探讨慢性间歇性低氧对大鼠胸主动脉内皮细胞的损伤变化。方法 将12只10～12周龄的雄性SD大鼠采用抽签法分为对照组和实验组,每组各6只。实验组大鼠每天10点至18点置于间歇性低氧环境中暴露,对照组大鼠不做低氧处理,共4周。饲养时间结束后取大鼠胸主动脉标本行苏木精-伊红染色（hematoxylin and eosin staining,HE染色）及原位末端转移酶标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL）染色观察细胞病变情况,并计算病变细胞、凋亡细胞在视野中所占比例。结果 HE染色光镜下实验组可见血管内皮细胞肥大,排列不规则,细胞核、胞质着色淡,平滑肌细胞核肿胀;对照组见血管内皮细胞和平滑肌细胞排列规则、细胞核形态及染色正常。TUNEL染色光镜下实验组可见多个凋亡细胞,对照组偶见凋亡细胞。实验组大鼠主动脉组织的细胞病变率及凋亡率均显著高于对照组（P<0.01）。结论 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征所产生的慢性间歇性低氧可损伤大鼠胸主动脉...     

组织工程心脏瓣叶皮下包埋实验

目的 探讨体外生成的组织工程心脏瓣叶在体内可能存在的组织活性。方法 裸小鼠12只,将体外培养的种植有平滑肌／成纤维及内皮细胞的瓣叶（实验组）和未种植细胞的支架片（对照组）包埋于裸小鼠背部皮下,观察支架片局部皮肤变化。分12、14、21、28d4个时间段各处死3只小鼠,大体观察、组织学检查。结果 包埋12、14d,活体显示实验组局部皮肤色泽红润,大体标本呈自体组织色泽。对照组活体局部皮肤及大体标本均苍白。HE染色结果显示,包埋12d。实验组细胞数量比对照组多,材料中部有肌纤维形成。对照组细胞数少,无肌纤维形成。至第28天．两组细胞数量均明显增加,对照组细胞仍较少。实验组显示纤维包膜内有肌纤维形成,对照组无。VG染色结果显示,种植后第12天．实验组有红染胶原纤维形成。对照组无明显的阳性染色胶原纤维。结论 组织工程心脏瓣叶在体内具有组织活性,如进行自体瓣叶原位移植可能具备生长能力。     

C5b-9在坏死性肌病肌肉组织血管中的表达及意义

目的研究C5b-9在坏死性肌病肌肉小血管中的表达以探讨其发病机制。方法采用酶组织化学和免疫组织化学方法检测坏死性肌病患者肌肉组织肌纤维和血管的MHC-1和C5b-9表达。结果本组患者肌肉组织出现灶性或散在分布的肌纤维坏死,间有吞噬现象,肌内、外衣和血管周围未见炎性细胞浸润,局部小血管数量减少,个别小血管管壁增厚。MHC-I免疫组化染色显示坏死的肌纤维、肌纤维间隙及血管均呈阴性。C5b-9免疫组化染色显示肌肉组织的小动脉与小静脉的血管壁,内皮细胞及平滑肌均出现明显的强阳性表达,同时相关的坏变和萎缩肌纤维也出现明显的表达。结论 C5b-9可能参与血管启动的坏死性肌病的发病机制。