下咽癌相关血浆肿瘤标志物的蛋白质组学筛选

目的分析下咽癌患者与健康人血浆中差异表达的蛋白质组,筛选潜在的与下咽癌诊断密切相关的血浆肿瘤标志物。方法取下咽癌患者与健康人空腹血浆标本各6例分别等量混合成2组样本,去除血浆高丰度蛋白后,利用双向电泳(2-DE)进行分离,经软件分析后找出表达量变化2倍以上的差异蛋白点,接着利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)进行差异蛋白质鉴定,然后利用Western blotting对α2-HS-糖蛋白的表达量进行验证。结果下咽癌患者与健康人血浆相比较,筛选出表达量差异2倍以上的差异蛋白点共11个,其中表达上调的有5个,表达下调的有6个,进行质谱分析后,表达上调的蛋白有α2-HS-糖蛋白、结合珠蛋白;表达下调的蛋白有免疫球蛋白κ链C结构域、载脂蛋白A1。Western blotting结果表明,α-2-HS-糖蛋白的表达上调,与双向电泳结果一致。结论下咽癌患者与健康人血浆的蛋白质表达谱表现出一定差异,这些差异蛋白有可能成为下咽癌患者早期诊断的特异性血浆肿瘤标志物。     

燃煤污染型砷中毒患者血清差异蛋白的筛选

目的 应用血清蛋白组学技术,对比分析燃煤污染型砷中毒患者与正常人血清中差异蛋白的表达,筛选与燃煤污染型砷中毒发生发展密切相关的蛋白质.方法 2008年收集经临床诊断的贵州燃煤污染型砷中毒患者和健康人空腹血清标本各6例,用双向凝胶电泳(2-DE)分离砷中毒患者血清和健康人血清的总蛋白质,银染显色后经图像分析识别差异表达的蛋白质,再应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质点.结果 两组血清2-DE图谱平均点数分别为779±35和865±30,匹配率为90.1%.筛选出两组间的差异蛋白点60个,砷中毒组表达上调25个,表达下调35个.对其中表达量差异3倍以上的35个蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析,鉴定出包括角蛋白10、载脂蛋白A-V、转铁蛋白、α1抗胰蛋白酶、锌α2糖蛋白、细胞外信号调节激酶3、空泡分选蛋白33、O-GlcNAc糖基转移酶等13个蛋白质,其中5个蛋白质在砷中毒组表达上调,8个蛋白质在砷中毒组表达下调.结论 本研究建立了分辨率高、重复性较好的燃煤污染型砷中毒患者血清双向凝胶电泳图谱,识别并鉴定了一些与健康人血清差异表达的蛋白质,为进一步探讨地方性砷中毒发病机制,筛选燃煤污染型砷中毒早期特异性血清分子标志物奠定了初步基础.     

不稳定型心绞痛患者血浆H-FABP、cTnI及差异蛋白表达及其意义

目的观察不稳定型心绞痛(UAP)患者血浆心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、心肌钙蛋白I(cTnI)及差异蛋白的表达并分析其意义。方法选取郑州市第七人民医院收治的UAP患者与稳定型心绞痛(SAP)患者各90例,分为UAP组与SAP组,并取同期90例健康体检者作为对照组,比较3组的一般临床资料与相关危险因素、血浆H-FABP、cTnI及差异蛋白-免疫球蛋白κ链C结构域(IGKC)水平,并比较UAP患者不同冠脉狭窄程度亚组、预后良好组与不良组血浆H-FABP、cTnI、IGKC水平。结果血浆H-FABP、cTnI水平:UAP组>SAP组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05);血浆IGKC蛋白水平:UAP组>对照组>SAP组,差异有统计学意义(P<0.05);轻度组与中度组血浆H-FABP、cTnI、IGKC蛋白水平明显低于重度组与完全闭塞组(P<0.05);预后良好组血浆H-FABP、cTnI、IGKC水平低于不良组(P<0.05)。结论UAP患者存在血浆H-FABP、cTnI、IGKC表达异常升高现象,其水平检测对UAP患者病情判定、预后评估具有重要指导意义。     

荧光差异双向凝胶电泳筛选肾透明细胞癌及癌旁组织中的差异表达蛋白

目的 寻找肾癌相关肿瘤标记物,用于肾癌临床诊断、药物治疗靶点的选择及预后监测.方法 采用荧光差异双向凝胶电泳技术筛选15例肾透明细胞癌及癌旁正常肾组织差异表达蛋白质点.统计学采用t检验进行定量比较,以两组蛋白含量比值在1.5倍及以上,P<0.05,被认为是差异表达蛋白质点.用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或串联质谱技术进行差异表达蛋白质点鉴定.结果 共筛选分离出27个差异表达蛋白质点,经质谱技术共成功鉴定了26种蛋白质,11种蛋白质在肾癌组织中上调,15种蛋白质下调.其功能覆盖细胞活动的多个方面,其中线粒体短/支链特异性酰基辅酶A脱氢酶、醛糖1-表异构酶、PRDX4、CAPG、β-防御素107、微纤丝相关糖蛋白4等6种蛋白是我们首次采用蛋白质组学技术成功筛选的肾癌差异表达蛋白质,并发现了1个预测蛋白(UCRIL).结论 荧光差异双向凝胶电泳在肾癌组织中获得较好的筛选效果,新筛选的差异表达蛋白有望成为肾癌分子生物学标记物,为后续研究提供了实验依据.     

重症急性胰腺炎患者血清差异蛋白质的表达

目的：用蛋白质组学技术比较重症急性胰腺炎（SAP）与轻症急性胰腺炎（MAP）患者血清的差异蛋白,探讨SAP特异蛋白的表达。方法：血清标本取自10例急性胰腺炎（AP）患者,其中5例SAP,5例MAP,用双向凝胶电泳检测两类患者的蛋白表达,并将这些差异表达蛋白点进行质谱鉴定,Mascot数据库检索。结果：比较双向电泳图谱发现15个差异表达蛋白点,经质谱分析,成功鉴定出10种蛋白质,在SAP患者其中4种表达上调,6种表达下调。数据库查询结果,4个表达上调蛋白分别为补体4A、结合珠蛋白亚型2、结合珠蛋白和载脂蛋白L1;6个表达下调蛋白分别为四连接素、谷胱甘肽过氧化物酶3、丝氨酸蛋白酶抑制剂亚型F1、丛生蛋白亚型-1、转甲状腺素蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制剂A1亚型2。结论：SAP患者血清有差异蛋白质表达,这可能和SAP发病机制相关。     

下咽癌相关血浆肿瘤标志物的蛋白质组学筛选

目的分析下咽癌患者与健康人血浆中差异表达的蛋白质组,筛选潜在的与下咽癌诊断密切相关的血浆肿瘤标志物。方
法取下咽癌患者与健康人空腹血浆标本各6 例分别等量混合成2 组样本,去除血浆高丰度蛋白后,利用双向电泳（2-DE）进行分
离,经软件分析后找出表达量变化2倍以上的差异蛋白点,接着利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF）
进行差异蛋白质鉴定,然后利用Western blotting 对α2-HS-糖蛋白的表达量进行验证。结果下咽癌患者与健康人血浆相比较,
筛选出表达量差异2倍以上的差异蛋白点共11 个,其中表达上调的有5个,表达下调的有6个,进行质谱分析后,表达上调的蛋
白有α2-HS-糖蛋白、结合珠蛋白;表达下调的蛋白有免疫球蛋白κ链C结构域、载脂蛋白A1。Western blotting结果表明,α-2-HS-
糖蛋白的表达上调,与双向电泳结果一致。结论下咽癌患者与健康人血浆的蛋白质表达谱表现出一定差异,这些差异蛋白有可
能成为下咽癌患者早期诊断的特异性血浆肿瘤标志物。
     

不稳定型心绞痛患者C反应蛋白与D-二聚体测定的临床意义

目的:探讨不稳定型心绞痛患者C反应蛋白(CRP)和D-二聚体(DD) 测定的临床意义.方法:不稳定型心绞痛(UAP)组46例,稳定型心绞痛(SAP)组38例,对照组40例,用免疫比浊法测定C反应蛋白和D-二聚体的浓度.结果:UAP组CRP、DD含量均明显高于SAP组和对照组,并有显著性差异(P＜0.05).SAP组与对...     

应用差异凝胶电泳及质谱技术筛选肺癌患者血浆差异蛋白

目的 建立健康者、肺部炎症患者和肺癌患者的血浆蛋白表达谱,寻找与肺癌早期发生相关的差异蛋白.方法 应用差异凝胶电泳(DIGE)和基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对健康者、肺部炎症患者和I期肺癌患者血浆进行蛋白质组学比较研究,寻找肺癌相关差异蛋白.结果 应用DIGE进行分离后,成功获得了蛋白质组分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱;Decyder 6.5软件分析获得差异大于2倍的蛋白质点共有72个;质谱鉴定去冗余后确定了12种蛋白质,其中7种与肿瘤相关,分别为酰基辅酶A合成酶家族成员3、抗血小板膜糖蛋白I b特异性抗体、γ-纤维蛋白原、4型血清淀粉样蛋白A、补体因子H、钙结合微丝蛋白、载脂蛋白I.结论 应用DIGE及MALDI-TOF-MS分离并初步鉴定了12种蛋白质,筛选出7种在肺癌患者血浆中高表达的肿瘤相关蛋白.     

应用差异凝胶电泳及质谱技术筛选肺癌患者血浆差异蛋白

目的 建立健康者、肺部炎症患者和肺癌患者的血浆蛋白表达谱,寻找与肺癌早期发生相关的差异蛋白.方法 应用差异凝胶电泳（DIGE）和基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）对健康者、肺部炎症患者和I期肺癌患者血浆进行蛋白质组学比较研究,寻找肺癌相关差异蛋白.结果 应用DIGE进行分离后,成功获得了蛋白质组分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱;Decyder 6.5软件分析获得差异大于2倍的蛋白质点共有72个;质谱鉴定去冗余后确定了12种蛋白质,其中7种与肿瘤相关,分别为酰基辅酶A合成酶家族成员3、抗血小板膜糖蛋白I b特异性抗体、γ-纤维蛋白原、4型血清淀粉样蛋白A、补体因子H、钙结合微丝蛋白、载脂蛋白I.结论 应用DIGE及MALDI-TOF-MS分离并初步鉴定了12种蛋白质,筛选出7种在肺癌患者血浆中高表达的肿瘤相关蛋白.     

血清IL-6、CRP检测在急性冠状动脉综合征中的意义

目的探讨急性冠状动脉综合征（ACS）患者血浆白细胞介素-6（IL-6）、C反应蛋白（CRP）水平的变化。方法测定50例ACS患者、20例稳定型心绞痛（SAP）患者及25名健康的体检者（正常对照组）血浆IL-6、CRP含量,比较ACS组、SAP组和正常对照组之间各项指标的差异。结果（1）ACS组血浆IL-6、CRP水平显著高于SAP组和正常对照组（均P〈0.01）。（2）SAP组和正常对照组之间血浆IL-6、CRP水平无明显性差异（P〉0.05）。（3）急性心肌梗死（AMI）组血浆IL-6、CRP水平显著高于不稳定型心绞痛（USAP）组（P〈0.01）。结论ACS患者血浆IL-6和CRP水平明显增多,可能与炎症反应有关。     

Characterization of acute renal allograft rejection by human serum proteomic analysis

To identify acute renal allograft rejection biomarkers in human serum, two-dimensional differential in-gel electrophoresis （2-D DIGE） and reversed phase high-performance liquid chromatography （RP-HPLC） followed by electrospray ionization mass spectrometry （ESI-MS） were used. Serum samples from renal allograft patients and normal volunteers were divided into three groups： acute rejec- tion （AR）, stable renal function （SRF） and normal volunteer （N）. Serum samples were firstly processed using Multiple Affinity Removal Column to selectively remove the highest abundance proteins. Differentially expressed proteins were analyzed using 2-D DIGE. These differential protein spots were excised, digested by trypsin, and identified by RP-HPLC-ESI/MS. Twenty-two differentially expressed proteins were identified in serum from AR group. These proteins included complement C9 precursor, apolipoprotein A-IV precursor, vitamin D-binding protein precursor, beta-2-glycoprotein 1 precursor, etc. Vitamin D-binding protein, one of these proteins, was confirmed by ELISA in the independent set of serum samples. In conclusion, the differentially expressed proteins as serum biomarker candidates may provide the basis of acute rejection noninvasive diagnosis. Confirmed vitamin D-binding protein may be one of serum biomarkers of acute rejection. Furthermore, it may provide great insights into understanding the mechanisms and potential treatment strategy of acute rejection.     

血清蛋白双向凝胶电泳-质谱分析诊断早期肺腺癌的临床研究

目的分析肺腺癌患者与正常人血清双向凝胶电泳的差异蛋白质,从而寻找肺腺癌早期特异性的诊断指标。方法用固相IPG梯度双向凝胶电泳分离肺腺癌患者及正常人血清总蛋白,用PDQuest凝胶图像软件分析,以识别差异蛋白质点。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI—TOF—MS）分析获得肽质量指纹图,然后利用Mascot查询软件搜寻数据库鉴定蛋白质。结果①获得了重复性较好的双向电泳银染图谱。②经PDQuest7．1软件匹配分析,共筛选出22个差异的蛋白点,对7个差异蛋白点进行胶内原位酶解-质谱指纹图分析,获得了7张肽质量指纹图谱,查询数据库鉴定出1个蛋白质-血清淀粉样蛋白A（SAA）。结论①固相pH梯度双向凝胶电泳分离血清总蛋白获得了重复性较好的双向电泳凝胶图谱。②肺腺癌患者血清和正常人血清的蛋白质组表达存在明显差异,这些差异蛋白点为进一步建立人肺癌的2-DE数据库奠定了基础。③SAA蛋白很可能是肺癌的一个潜在标志物。     

Proteomic Analysis for Finding Serum Pathogenic Factors and Potential Biomarkers in Multiple Myeloma

Background:

Multiple myeloma (MM) is a malignant tumor, which takes the second place in malignant blood disease. The clinical symptoms are complicated that make more difficult to diagnose and therapy. Lots of researches focus on the proteins about MM in order to solve those problems. We used proteomic methods to find potential biomarkers in MM patients.

Methods:

We applied the peptide ligand library beads (PLLBs) to deplete high abundance proteins in serum for finding potential pathogenic factors and biomarkers of MM. Using 1D-Gel-liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS), we identified 789 and 849 unique serum proteins in MM patients and in healthy controls, respectively.

Results:

Twenty-two proteins were found differentially expressed between the two groups including serum amyloid A protein, vitamin D-binding protein isoform-1 precursor, plasma kallikrein, and apolipoprotein A-I. Changes of integrin alpha-11 and isoform-1 of multimerin-1 were validated with Western blotting. The linkage of the differentially expressed proteins and the pathogenesis pathways of MM were discussed.

Conclusions:

PLLB combined with 1D-gel-LC-MS/MS analysis is an efficient method to identify differentially expressed proteins in serum from patients with MM.     

急性痛风性关节炎致炎蛋白的蛋白质组学研究

目的: 基于血清的蛋白质组学识别有炎症功能的蛋白质信号,为临床诊断急性痛风性关节炎（AGA）寻找生物标志物。方法: 运用RayBiotech细胞因子抗体芯片检测并筛选10例AGA患者和10名健康志愿者血清标本的差异表达蛋白质。进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析,确定差异表达蛋白质的生物学功能注释及信号通路的富集。ELISA法检测差异蛋白质在60例AGA患者和60名健康志愿者中的表达。构建ROC曲线以评估差异表达蛋白质对AGA的诊断价值。结果: 确定了AGA患者4种表达差异最显著的蛋白质,包括肿瘤坏死因子受体Ⅱ（TNF RⅡ）、巨噬细胞炎性蛋白1β（MIP-1β）、IL-8、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）。富集分析结果表明,差异表达蛋白质与炎症、代谢及细胞因子通路等相关。AGA患者和健康者血清中差异表达蛋白质的表达水平差异均有统计学意义（均P < 0.01）。ROC曲线分析结果显示,GM-CSF预测AGA的AUC为0.657（95% CI：0.560~0.760）,敏感度为68.33%,特异度为50.00%;IL-8预测AGA的AUC为0.994（95% CI：0.980~1.000）,敏感度为100.00%,特异度为61.67%;MIP-1β预测AGA的AUC为0.980（95% CI：0.712~0.985）,敏感度为95.00%,特异度为98.33%;TNF RⅡ预测AGA的AUC为0.965（95% CI：0.928~1.000）,敏感度为100.00%,特异度为10.00%。结论: 采用蛋白质组学的方法可以识别AGA的生物标志物,有助于AGA的风险预测和诊断。     

Screening disease-associated proteins from sera of patients with rheumatoid arthritis: a comparative proteomic study

Background Rheumatoid arthritis （RA） is an autoimmune disease characterized by chronic inflammation at the synovial membrane. Although great progress has been made recently in exploring the etiology and pathogenesis of RA, its molecular pathological mechanism remains to be further defined and it is still a great challenge in determining the diagnosis and in choosing the appropriate therapy in early patients. This study was performed to screen candidate RA-associated serum proteins by comparative proteomics to provide research clues to early diagnosis and treatment of RA. Methods Sera isolated from 6 RA patients and 6 healthy volunteers were pooled respectively and high-abundance proteins were depleted by Plasma 7 Multiple Affinity Removal System. The protein expression profiles between the two groups were then compared by two-dimensional gel electrophoresis （2-DE） and the proteins over/under-expressed by more than 3-fold were identified by mass spectrometry analysis. To validate the differential expression levels of the identified proteins between the two groups, ELISA was performed in two of the identified proteins in individual sera from 32 RA patients and 32 volunteers. Results Eight proteins which over/under-expressed in sera of RA patients were identified. Among them, chain A of transthyretin （TTR） was under-expressed, while serum amyloid A protein, apolipoprotein A （ApoA）-IV, ApoA-IV precursor, haptoglobin 2, ceruloplasmin （Cp）, immunoglobulin superfamily 22 and HT016 were over-expressed. ELISA test confirmed that Cp expressed remarkably higher while TTR obviously lower in RA group compared with volunteer group. Conclusion There were 8 identified proteins differentially expressed between RA group and volunteer group, which might be candidate RA-associated proteins and might be promising diagnostic indicators or therapeutic targets for RA.     

肾母细胞瘤患儿血清蛋白质标记物的筛选及鉴定

目的 筛选肾母细胞瘤患儿特异性血清蛋白质标记物并对其进行鉴定,以确定其作为肾母细胞瘤血清学诊断和预后监测的特异标志物.方法 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测肾母细胞瘤患儿手术前后及正常小儿的血清蛋白质组,筛选差异蛋白质峰,并对目标蛋白质进行分离纯化、酶解,采用液质联用串联质谱(LC-MS/MS)分析,用SEQUST检索程序查询美国Bioworks公司提供的蛋白质序列数据库.结果 经SELDI-TOF-MS技术筛选出m/z位于6455.5和6984.4的蛋白质标志物在肾母细胞瘤组低表达(表达强度为1029±364、297±126),正常小儿组高表达(2108 ±837、753±226),差异均有统计学意义(均P＜0.01);m/z位于9190.8的蛋白质标志物在肾母细胞瘤术前组低表达(283±154),术后组和正常小儿组高表达(5974 ±657、6231±519)差异均有统计学意义(均P＜0.01).对m/z位于6455.5和9190.8的标志物进行鉴定,结果分别为载脂蛋白CⅢ和触珠蛋白.结论 检测血清中载脂蛋白CⅢ和触珠蛋白含量可能成为肾母细胞瘤的血清学诊断、恶性度分级和预后监测指标,值得进一步研究与应用.     

应用基因芯片技术筛选生长激素腺瘤相关基因

目的应用基因芯片技术筛选人生长激素腺瘤发生、发展相关基因,为后续研究奠定基础。方法应用人全基因组寡核苷酸芯片HG-U133 Plus2.0检测8例生长激素腺瘤组织、2例混合正常垂体组织的基因表达谱,差异表达基因进行筛选和生物信息学分析。Real-time qPCR验证芯片结果。结果筛选出与生长激素腺瘤相关的上调基因187条,下调基因899条;差异表达基因功能主要涉及分子结合、凋亡或肿瘤相关、代谢、信号转导、细胞周期、物质运输等多个生物过程。结论基因芯片技术可初步筛选出人生长激素腺瘤相关基因;生长激素腺瘤的发生、发展是多基因、多分子、多通路的网络调控过程。