诱生型一氧化氮合酶在代谢型谷氨酸受体参与老年性痴呆发病中的作用

目的观察诱生型一氧化氮合酶（inducible nitric—oxide synthase,iNOS）在Ⅱ组代谢型谷氨酸受体（metabotropic glutamate receptor2／3,mGluR2／3）参与老年性痴呆（AD）发病过程中的可能作用。方法将48只SD大鼠随机分为假手术组、AD组和AD＋α-甲基-（4-四唑基-苯）甘氨酸（α—methyl-4-tetrazolyl—phenyl,MTPG）组3组,每组16只。AD组与AD＋MTPG组经SD大鼠左侧脑室注入凝聚态Aβ25—35制做AD大鼠模型,假手术组以相同操作注射等量蒸馏水。1周后,AD＋MTPG组于右侧脑室注射MTPG,AD组和假手术组注射等体积人工脑脊液。5周后取脑组织,应用硫堇染色、免疫组化和原位杂交方法,观察大鼠海马CA1区锥体神经元损伤情况,以及iNOS和iNOS mRNA表达。结果（1）硫堇染色结果显示：假手术组海马CA1区锥体神经元轮廓清楚,排列整齐;AD组与假手术组相比,锥体神经元数目较少,轮廓欠清,形态不规则;AD＋MTPG与AD组相比,神经元形态明显恢复,排列较规则。（2）免疫组化结果显示：假手术组神经元胞质有较弱的iNOS表达;AD组iNOS表达较假手术组明显增强;AD＋MTPGiNOS表达较AD组减弱。（3）原位杂交结果显示：3组iNOSmRNA与iNOS表达呈相似的变化趋势。结论iNOS在mGluR2／3参与AD发病过程中具重要作用。     

葛根素对AD大鼠脑内Aβ1-40和Bax表达的影响

目的研究杏仁核注射β-淀粉样肽(Aβ25-35)所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑内Aβ1-40、Bax的表达变化,以及葛根素(Pue)的影响。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、AD模型组和Pue治疗组,以Aβ25-35右侧杏仁核注射制备大鼠AD模型,用Y-型迷宫检测大鼠学习记忆能力,用免疫组织化学方法检测大脑皮层与海马组织Aβ1-40和Bax的表达。结果假手术组脑内有Aβ1-40、Bax的少量表达,两者均以皮层内为多,海马组织内少;AD模型组大鼠皮层和海马组织Aβ1-40与Bax的表达增加,较假手术组大鼠有显著性差异,P<0.01;Pue能改善AD模型组大鼠的学习记忆能力,Pue治疗组大鼠皮层和海马组织Aβ1-40、Bax表达减少,与AD模型组比较有显著性差异,P<0.05。结论Pue可能通过下调脑组织Aβ1-40和Bax表达,抑制β-淀粉样肽的神经毒性,减轻脑皮层和海马神经元凋亡,具有神经保护及抗痴呆作用。     

海马注射β-淀粉样蛋白建立阿尔茨海默病大鼠模型的实验研究

目的：海马注射β-淀粉样蛋白（Aβ）建立阿尔茨海默病（AD）大鼠模型，并进行初步评价。方法：应用凝聚态Aβ1-40进行大鼠右侧海马齿状回（DG）背侧细胞带微量注射，2周后从学州记忆、海马组织病理和异常磷酸化tau蛋白表达的变化3个方面评价大鼠模型。结果：Aβ1-40注射后大鼠Morris水迷宫学习记忆能力明显受损（P〈0．01）；注射区内DG背侧细胞带神经元丢失（P〈0．01）；注射侧海乌内Aβ沉积；海马神经元内异常磷酸化tau蛋白的表达显著增加（P〈0．01）。结论：凝聚态Aβ1-40海马注射具有明确的在体神经毒性作用，可导致大鼠认知功能下降以及海马内Aβ沉积、神经元丢失和神经元内异常磷酸化tau蛋白的表达，可成功建立AD大鼠模型。     

脑缺血对阿尔茨海默病大鼠认知功能的影响及炎性机制探讨

目的：探讨脑缺血对阿尔茨海默病（AD）大鼠认知功能的影响及可能机制。方法：大鼠海马注射Aβ1-40成功建立AD大鼠模型后，于AD大鼠右侧纹状体注射内皮素-1建立脑缺血模型，Morris水迷宫检测脑缺血后AD大鼠认知功能的变化，免疫组化、原位杂交和RT-PCR检测海马内星形胶质细胞和IL-1、TNF—α的变化。结果；脑缺血后AD大鼠认知功能明显下降（P〈0．01），海马内星形胶质细胞和炎性细胞因子IL-1、TNF—α的表达都较单纯AD显著增加（P〈0．01）。结论：脑缺血加重了AD大鼠的认知功能障碍，炎性机制参与了脑缺血促进AD进展的过程。     

灵芝多糖对模拟AD学习记忆障碍大鼠海马白细胞介素-6表达的影响

目的 研究灵芝多糖对模拟AD学习记忆障碍大鼠脑组织白细胞介素-6表达（IL-6）的影响。方法 采用双侧海马内一次性注射β-淀粉样多肽25～35片段（Aβ25～35）制作模拟AD学习记忆障碍大鼠模型，造模24h后治疗组腹腔注射灵芝多糖注射液，其余各组分别注射等量的生理盐水，1次/d，疗程7d，并于第8d开始进行Morris水迷宫实验观察其学习记忆能力，行为学检测后再通过免疫组化SABC法检测各组大鼠海马IL-6表达水平。结果 模型组大鼠较对照组学习记忆能力降低，海马IL-6表达明显增强；治疗组大鼠较模型组学习记忆能力显著提高，海马IL-6表达显著下调。结论 灵芝多糖可提高Aβ25-35诱导的模拟AD学习记忆障碍大鼠的学习记忆能力，抑制海马IL-6表达。     

冈田酸对拟AD模型大鼠海马CA1区Aβ1-40和nNOS表达的影响

目的观察冈田酸(OA)对大鼠海马CA1区Aβ1-40和nNOS表达的影响,建立更接近临床表现的拟AD大鼠模型。方法在大鼠海马CA1区多次微量注射OA,水迷宫实验观测大鼠行为学改变;Bielschowsky染色观察海马CA1区神经原纤维缠结(NFT)和老年斑(SP)等特征性病理变化;免疫组化方法观察海马CA1区Aβ1-40和nNOS的表达。结果模型组学习记忆减退;海马CA1区出现NFT(P<0.05)和SP特征性病理变化,及Aβ1-40的高表达(P<0.05)和nNOS的低表达(P<0.05)。结论冈田酸海马CA1区微量多次注射,可建立更接近AD临床表现和病理特征的大鼠模型,大鼠海马CA1区SP和NFT的形成,以及Aβ1-40表达增加、nNOS表达减少,是该模型大鼠学习记忆能力减退的可能机制。     

AGTR1、AGTR2在阿尔茨海默病模型大鼠海马中的变化

目的探讨AGTR1和AGTR2在阿尔茨海默病（alzheimer disease,AD）模型大鼠海马中的变化及缬沙坦的作用。方法用β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）1-42海马注射建立AD大鼠模型,通过Y-形电迷宫进行学习记忆能力测定,HE染色、刚果红染色进行形态学观察,免疫组化（immunohistochemistry,I H）检测AGTR1、AGTR2的表达水平。结果模型组较对照组正确逃避电刺激所需要的次数多（P〈0.001）、海马CA1区神经元密度较对照组减少（P〈0.001）、AGTR1及AGTR2光密度值增加（P〈0.05）;缬沙坦组较模型组正确逃避电刺激所需要的次数少（P〈0.001）,海马CA1区神经元密度较模型组增加（P〈0.001）、AGTR1及AGTR2光密度值减少（P〈0.05）。结论缬沙坦可改善AD模型大鼠学习记忆能力,抑制AGTR1的表达而延缓AD进展;AGTR2可能延缓AD的进展。     

姜黄素对Aβ诱导的AD大鼠海马CRMP-2表达的影响

目的探讨姜黄素对Aβ诱导的老年痴呆大鼠认知功能和海马CRMP-2的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、AD对照组和姜黄素给药组。Aβ1-40微量注射至大鼠右侧海马制作AD大鼠模型。Morris水迷宫试验测定大鼠学习记忆能力。RT-PCR检测海马内CRMP-2mRNA的表达,Western blotting方法检测海马内CRMP-2和p-CRMP-2蛋白表达,免疫组织化学方法检测海马内轴突蛋白表达。结果姜黄素干预后AD大鼠空间学习记忆能力明显改善(P<0.05)。与空白对照组相比,AD对照组大鼠海马区CRMP-2表达显著降低(P<0.05),轴突蛋白NFP-200阳性纤维排列紊乱,不规则,纤维数目显著减少(P<0.05);而在姜黄素组大鼠海马区可见CRMP-2表达升高,p-CRMP-2表达降低,而轴突蛋白表达明显增加(P<0.01)。结论姜黄素能够改善Aβ1-40诱导的AD模型大鼠空间学习记忆障碍,其机制可能与姜黄素提高CRMP-2的表达并抑制CRMP-2的磷酸化从而促进轴突再生有关。     

骨形态发生蛋白4在Aβ诱导的神经毒性病变中的表达变化

目的探讨骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)在β淀粉蛋白(amyloidβ,Aβ)诱导的神经毒性病变中的变化。方法 SD大鼠海马神经元原代培养,经过不同浓度(10、15、20μmol/L)Aβ25-35毒性片段处理后,通过定量PCR技术检测BMP4mRNA表达水平。SD大鼠双侧基底前脑注射Aβ1-40建立大鼠痴呆模型,通过免疫组化及免疫印迹检测基底前脑及海马区BMP4蛋白表达水平。结果 Aβ25-35处理组海马神经元内BMP4mRNA表达较空白对照组明显减少(P0.05)。免疫组化和免疫印迹实验结果显示,与对照组比较,Aβ1-40注射组大鼠基底前脑区BMP4蛋白表达减少,海马区其表达升高(P0.05)。结论 Aβ直接下调神经元内BMP4转录及表达,不同脑区内BMP4蛋白可能存在负反馈调节作用。     

熟地黄抑制阿尔茨海默病样大鼠海马神经元凋亡的作用

目的探讨凋亡机制在β-淀粉样肽致阿尔茨海默病(AD)作用中的意义及熟地黄对Aβ神经毒的干预效果。方法用β-淀粉样肽1￣40片段(Aβ1-40)行大鼠侧脑室注射以建立AD样病变动物模型;用Morris水迷宫测试系统检测大鼠学习记忆功能;蛋白印记法及激酶活性测定法检测海马内半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达和活性,琼脂糖凝胶电泳观察海马神经元凋亡;以熟地黄(大、小剂量)对Aβ1-40处理的大鼠连续灌胃21d,观察其干预效果。结果大鼠脑内注射Aβ1-40后,经行为学检测发现其学习记忆功能明显减退;海马内caspase-3含量和活性明显增高,细胞核DNA降解;经熟地黄灌胃处理后,对上述变化有不同程度的改善作用。结论Aβ1-40能诱导海马神经元凋亡,熟地黄对Aβ1-40诱导的大鼠海马神经元凋亡有保护作用,这可能是其改善AD样大鼠学习记忆功能作用机制之一。     

有氧训练对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经细胞凋亡及再生的影响

目的:观察有氧训练对Aβ_25-35诱导的阿尔茨海默病（AD）大鼠海马神经细胞凋亡及再生的影响。方法:SD大鼠48只,随机分为3组（均n=16）:①假手术组（于大鼠侧脑室注射等量生理盐水+4周有氧训练）;②AD+有氧训练组(于大鼠侧脑室注射Aβ_25-35制作AD大鼠模型+4周有氧训练);③AD组(仅于大鼠侧脑室注射Aβ_25-35制作AD模型)。AD造模后第3天开始进行连续4周的无负重游泳训练,训练结束后各组大鼠分别行Morris水迷宫行为学检测认知行为能力、Hoechst染色观察海马神经细胞凋亡、BrdU/NeuN荧光双染观察齿状回（DG）区新生神经细胞分化及成熟。结果:①Morris水迷宫实验显示,与对照组相比,AD组逃避潜伏期显著延长（P<0.05）;AD+有氧训练组逃避潜伏期较AD组显著缩短（P<0.05）。②与对照组比,AD组齿状回区Hoechst阳性细胞显著增多（P<0.05）;AD+有氧训练组Hoechst阳性细胞较AD组显著减少（P<0.05）。③与对照组比,AD组齿状回Brdu、Brdu/NeuN双染阳性细胞明显减少（P<0.05）;AD+有氧训练组较AD组相比齿状回Brdu、Brdu/NeuN双染阳性细胞明显增多（P<0.05）。结论:有氧训练后,AD大鼠海马亚颗粒细胞区神经细胞的凋亡减少,齿状回神经再生增加,上述改变可能为有氧训练改善AD大鼠认知行为能力的机制之一。     

脑源性神经营养因子修饰的神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠的学习及p75表达的影响

目的研究脑源性神经营养因子(BDNF)修饰的神经干细胞(NSC)移植对阿尔茨海默病大鼠的学习及p75表达的影响。方法 36只SD成年大鼠被选为受试对象。采用Aβ1-40立体定向注射法制作阿尔茨海默病模型(AD),并将AD模型大鼠随机分为3组:BDNF修饰的神经干细胞(BDNF-NSC)移植组、神经干细胞移(NSC)植组和溶剂(Vehicle)对照组(n=6),然后分别向这3组大鼠的海马区注入500μl的BDNF-NSC悬液(5×105)、NSC悬液(5×105)和相同剂量的不含细胞的培养基。注射4w后,采用Y迷宫方法检测AD大鼠的空间学习和记忆能力,随之用过量麻醉的方法处死受试大鼠,立即取脑并分别采用免疫组织化学方法检测BDNF-NSC在海马区的表达和Western blot法检测p75蛋白在海马区的表达。结果 BDNF-NSC组大鼠的行为学能力较NSC组和Vehi-cle组明显提高(P<0.05),同时免疫组化检测显示在海马区的BDNF-NSC阳性细胞数明显增多而Western blot检测显示p75蛋白在该区的表达显著降低(P<0.05)。结论 BDNF修饰的神经干细胞能够通过抑制海马区p75表达来防止由Aβ1-40造成的神经损害。     

脑缺血对阿尔茨海默病模型大鼠认知功能的影响及其机制探讨

目的 探讨脑缺血对阿尔茨海默病(AD)病程进展的影响及其机制.方法 采用大鼠海马注射凝聚态β-淀粉样蛋白(Aβ)1-40建立AD模型,再于海马内注射ET-1建立脑缺血条件,观察脑缺血后AD样大鼠认知功能以及海马内Aβ沉积、神经元丢失和异常磷酸化tau表达的变化;采用免疫组化、原位杂交和RT-PCR法检测海马内星形胶质细胞数量和IL-1、TNF-α表达的变化.结果 脑缺血后AD样大鼠的认知功能明显下降,海马内Aβ沉积增加,神经元丢失增加,异常磷酸化tau表达增加.星形胶质细胞的数量以及IL-1和TNF-α的表达显著增加(均P＜0.01).结论 脑缺血加重了AD样大鼠的认知功能障碍和海马病理损伤,显著增加的星形胶质细胞及IL-1和TNF-α的表达参与了这一过程.防治脑缺血和抗炎治疗可能成为减缓AD进展的新途径.     

Aβ25-35杏仁核注射对大鼠海马tau蛋白磷酸化和AchE的影响

目的探讨杏仁核注射Aβ25-35对大鼠脑内异常磷酸化tau蛋白(Pser404-tau)及乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响。方法右侧杏仁核注射β-淀粉样肽(Aβ25-35)制备阿尔茨海默病(AD)大鼠模型;用Y-迷宫检测大鼠学习记忆能力;应用免疫组化方法测定Aβ对大鼠海马Pser404-tau的影响;应用分光光度计测定大鼠海马区AchE活性变化。结果Aβ25-35杏仁核注射可导致大鼠学习记忆功能障碍;AD模型组的Pser404-tau阳性细胞数较假手术组显著增高,而海马AchE活性较假手术组明显降低。结论杏仁核注射Aβ25-35可导致Ser404位点的tau蛋白过度磷酸化和海马胆碱能系统功能损害。     

阿托伐他汀对Aβ1-40诱导AD模型的氧化应激及凋亡的影响

目的观察阿托伐他汀对Aβ1-40诱导AD大鼠模型的氧化应激和凋亡的影响。方法雄性SD大鼠40只,体质量250～300g,随机分为空白对照组、假手术组、Aβ组、Aβ+生理盐水组、Aβ+阿托伐他汀组,每组8只。后3组在大鼠双侧海马CA1区立体定向注射Aβ造AD模型,假手术组注射生理盐水,正常对照组不做任何处理。Aβ+阿托伐他汀组在造模1周前开始给予阿托伐他汀20mg/(kg.d)灌胃,Aβ+生理盐水组给予等量生理盐水灌胃。造模4周后,测定大鼠脑皮质、海马组织MDA、SOD及GSH活性的变化;蛋白印迹技术检测大鼠海马区Bcl-2及Caspase-3的表达。结果与空白对照组相比,Aβ组大鼠脑皮质、海马组织内MDA活性明显升高(P<0.05),SOD、GSH活性明显降低(P<0.05),Caspase-3的表达升高(P<0.05),Bcl-2的表达降低(P<0.05),与Aβ组相比,Aβ+阿托伐他汀组大鼠的大脑皮质、海马组织内MDA明显减低(P<0.05),SOD、GSH活性明显升高(P<0.05),Caspase-3的表达下降(P<0.05),Bcl-2的表达升高(P<0.05)。结论阿托伐他汀对Aβ1-40诱导AD大鼠模型有一定的脑保护作用,其机制与抑制氧化应激及抗凋亡有关。     

替普瑞酮诱导AD模型大鼠海马HSP70表达及其神经保护作用的研究

目的 研究替普瑞酮（Geranylgeranylacetone，GGA）诱导阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）模型大鼠海马热休克蛋白70（heat shock protein70，HSP70）表达及其对AD大鼠的神经保护作用。方法 90只SD大鼠随机分为替普瑞酮组、模型组与生理盐水组，双侧海马注射Aβ1-42。建立阿尔茨海默病大鼠模型，替普瑞酮组给予替普瑞酮800mg·kg^-1·d^-1灌胃，余两组给予等量生理盐水灌胃；术后1d、7d、14d、21d并于Y迷宫行为学测试后处死大鼠；采用western-blot方法检测各组大鼠海马HSP70表达的变化，HE染色观察海马神经元形态学改变，TUNEL法检测海马神经元凋亡。结果术后14d、21d模型组大鼠学习记忆能力较生理盐水组明显减退（P〈0．05），替普瑞酮组较模型组明显改善（P〈0．05）；术后7d、14d、21d模型组大鼠海马HSP70表达较生理盐水组逐渐减少（P〈0．05），替普瑞酮组HSP70表达明显增加（P〈0．05）；术后21d模型组大鼠海马CA1区神经元结构紊乱，细胞减少，凋亡细胞较生理盐水组明显增加（P〈0．01），替普瑞酮组凋亡细胞较模型组显著减少（P〈0．05），细胞形态学改变减轻。结论替普瑞酮能够诱导AD模型大鼠海马HSP70表达，减少大鼠海马神经元凋亡而产生神经保护作用，改善大鼠的学习记忆能力。     

阿托伐他汀对Aβ1-40诱导AD大鼠的影响

目的观察阿托伐他汀对Aβ1-40诱导AD大鼠模型的保护作用,探讨其可能机制。方法雄性SD大鼠40只,体质量250～300g,随机分为空白对照组、假手术组、Aβ组、Aβ+生理盐水组、Aβ+阿托伐他汀组,每组8只。后3组在大鼠双侧海马CA1区立体定向注射Aβ造AD模型,假手术组注射生理盐水,正常对照组不作任何处理。Aβ+阿托伐他汀组在造模1周前开始给予阿托伐他汀20mg.kg-1.d-1灌胃,Aβ+生理盐水组给予等量生理盐水灌胃。造模4周后,采用Morris水迷宫衡量大鼠学习记忆水平;测定大鼠脑皮质、海马组织AchE、ChAT活性的变化;蛋白印迹技术检测大鼠海马区GFAP的表达。结果与空白对照组相比,Aβ组大鼠的学习记忆能力明显下降(P<0.05);脑皮质、海马组织内AchE活性明显升高(P<0.05),ChAT活性明显降低(P<0.05),GFAP的表达升高(P<0.05),与Aβ组相比,Aβ+阿托伐他汀组大鼠的学习记忆能力明显提高(P<0.05);大脑皮质、海马组织内AchE明显减低(P<0.05),ChAT活性明显升高(P<0.05),GFAP的表达下降(P<0.05)。结论阿托伐他汀Aβ1-40诱导AD大鼠模型的学习记忆能力有明显提高,其作用机制与抑制AchE和GFAP活性、提高ChAT活性有关。     

Humanin对Aβ_(1-42)所致阿尔茨海默病大鼠空间记忆的影响及其作用机制

目的 探讨Humanin(HN)对Aβ_(1-42)所致阿尔茨海默病(AD)大鼠空间记忆的影响及其作用机制.方法 36只Wistar大鼠按照随机数字表法分为生理盐水组(海马注射生理盐水)、AD模型组(海马注射Aβ_(1-42))和HN治疗组(海马注射Aβ_(1-42)制成AD模型后在同一部位注入2 μL HN),每组各12只.对各组大鼠进行Morris水迷宫空间记忆能力测试.免疫组织化学方法检测各组大鼠微管相关蛋白2(MAP2)的表达.利用Western blot方法检测各组大鼠synapsin 1蛋白水平.结果 与生理盐水组相比,AD模型组Morris水迷宫测试的潜伏期明显延长,MAP2表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05),HN组则无统计学意义(P>0.05).Synapsin 1蛋白在HN治疗组中表达明显高于生理盐水组和AD模型组,差异均有统计学意义(P<0.05),而生理盐水组和AD模型组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 HN可以显著改善由Aβ_(1-42)所致AD大鼠的空间记忆能力,推测与HN提高MAP2与synapsin 1蛋白表达有关.     

Aβ25-35杏仁核注射对大鼠海马tau蛋白磷酸化和AchE的影响

目的 探讨杏仁核注射Aβ25-35对大鼠脑内异常磷酸化tau蛋白(Pser404-tau)及乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响。方法 右侧杏仁核注射β-淀粉样肽(Aβ25-35)制备阿尔茨海默病(AD)大鼠模型；用Y-迷宫检测大鼠学习记忆能力；应用免疫组化方法测定Aβ对大鼠海马Pser404-tau的影响；应用分光光度计测定大鼠海马区AchE活性变化。结果 Aβ25-35杏仁核注射可导致大鼠学习记忆功能障碍；AD模型组的Pser404-tau阳性细胞数较假手术组显著增高，而海马AchE活性较假手术组明显降低。结论杏仁核注射Aβ25-35可导致Ser404位点的tau蛋白过度磷酸化和海马胆碱能系统功能损害。     

何首乌对Alzheimer病大鼠学习记忆及乙酰胆碱酯酶的作用

目的探讨右侧海马注射β-淀粉样蛋白(Aβ)对大鼠学习记忆能力和乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响及何首乌的作用。方法将Aβ1-40 10μg／μl注入右侧海马建立大鼠AD模型，测定其学习记忆能力和脑AchE活性及何首乌的影响作用。结果Aβ注射后出现较持久的学习记忆障碍．Aβ组呈渐进性加重，治疗组有一定的改善。Aβ组海马区、额叶皮质和基底前脑区的AchE的活性较对照组明显减少；治疗组较对照组减少，但较Aβ组有明显提高。结论何首乌能改善AD模型大鼠学习记忆获得能力，提高AchE活性。