脱氢表雄酮在体外对成骨细胞代谢和IL-1β的影响

目的探讨脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone，DHEA）对离体大鼠成骨细胞和IL-1β的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞，取传一代细胞，分别给予10^-5mmoL／L、10^-7mmoL／L、10^-9mmol／LDHEA培养72h，以10^-8mmoL／L雌二醇（estradiol，E2）为阳性对照，另设空白对照组。碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）染色鉴定成骨细胞，MTT法检测成骨细胞的增殖能力，PNPP法测定ALP活性。ELISA法测定不同浓度DHEA培养液中IL-1β的水平。结果不同浓度DHEA组成骨细胞增殖能力和ALP的活性均有上升，其中以10^-7mmoL／LDHEA组最显著（P〈0．01），其作用和E2相似（P〉0．05）；10^-9mmoL／LDHEA组单位细胞数的ALP活性高于空白对照组（P〈0．05）。不同浓度的DHEA组IL-1β呈下降趋势，成骨细胞增殖能力及ALP活性和IL-1β成负相关。结论DHEA在体外促进大鼠成骨细胞生长和增殖，提高ALP活性，其作用可能和抑制IL-1β有关。     

尼莫地平对体外培养成骨细胞的影响

目的 观察尼莫地平对体外培养成骨细胞的作用.方法 在新生SD大鼠头颅骨第2继代成骨细胞(OB2)培养液中分别加入不同浓度(10-1～10 9g/L)尼莫地平,分别观察OB2的增殖功能(用波长570nm处OD值表示),分化功能(用碱性磷酸酶ALP活性表示)和矿化功能(用矿化结节数量/视野表示).结果 增殖功能OD值为0.12±0.01～0.41±0.04;ALP活性为0.09±0.01U/mg蛋白质;矿化结节数量/视野为1.3±0.9个.结论 与对照组比较,尼莫地平各浓度对OB2的增殖、分化和矿化功能作用各异.当尼莫地平浓度为10 6g/L时,对OB2的增殖和分化功能具有刺激作用,对OB2的矿化功能具有显著的抑制作用;当浓度升高(10-2g/L)时,对OB2的增殖功能具有明显的抑制作用;当浓度降低(10 8g/L)时,对OB2的增殖功能失去作用.     

降钙素对体外培养成骨细胞的影响

目的观察破骨细胞抑制剂--降钙素(密钙息)对体外培养成骨细胞的作用.方法在新生SD大鼠头颅骨第二继代成骨细胞(OB\-2)培养液中分别加入不同浓度(10-4～10-12g/ml)的密钙息,分别观察OB\-2的增殖功能(用波长570nm处OD值表示),分化功能[用碱性磷酸酶(ALP)活性表示]和矿化功能(用矿化结节数量/视野表示).结果OD值(均值+标准差)为0.323±0.101～0.523±0.158;ALP活性(均数±标准差)为(0.104±0.012)U/mg蛋白质;矿化结节数量/视野(均数±标准差)为5.75±0.957个.结论与对照组比较,适当浓度(10-8～10-12)的密钙息对OB\-2的增殖,分化和矿化功能均具有促进作用,10-10g/ml浓度密钙息作用尤其显著,它们的作用显著性差异为促进OB2增殖功能P＜0.05;促进OB2分化功能P＜0.01和促进OB2矿化功能P＜0.001.     

锶盐对高浓度地塞米松作用下大鼠成骨细胞的影响

目的 探讨雷奈酸锶(Sr)对高浓度地塞米松(Dex)作用下大鼠成骨细胞（OB)的影响。方法 采用大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)来源的成骨细胞,运用MTT试剂盒和AKP试剂盒分别测定Sr对细胞增殖和分化的影响,定量PCR方法测定Sr对高浓度地塞米松作用下成骨钙素（OC)和转化生长因子-β(TGF-β)表达的影响。结果 Sr浓度在10-5、10-4 mol/L时,能够促进OB增殖和分化(P < 0. 01); Sr浓度为10-4mmol/L能够有效拮抗高浓度Dex( 10-5 mol/L)对成骨细胞分化抑制作用（P <0.01),并能逆转Dex对成骨相关基因OC和TGF-β的抑制作用(P <0. 05,P <0. 01)。结论 Sr能够对大鼠BMSCs来源的成骨细胞的增殖、分化有促进作用,同时10-4 mol/L Sr可以拮抗Dex( 10-5 mol/L)对ALP和成骨相关基因的抑制作用。为Sr防治糖皮质激素性骨质疏松提供了细胞学依据。     

Genistein对乳腺癌细胞致成骨细胞生物学功能改变的影响

目的 探讨Genistein对乳腺癌细胞致成骨细胞(osteoblast, OB)增殖、分化和矿化功能的影响,观察Genistein在乳腺癌骨转移的病理条件下是否能调节OB生物学功能.方法 源于大鼠颅盖骨的原代OB与50%来自人源性乳腺癌细胞系MDA-MB-231或MCF-7的条件培养基(conditioned medium,CM)共同培养,并加入5×10-7 mol/L (G7)、5×10-8 mol/L (G8)或5×10-9mol/L (G9) 的Genistein进行干预.MTT法观察其对OB增殖的影响;PNPP偶氮法观察其对OB碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性的影响;茜素红S(ARS)进行矿化结节染色并计算面积以观察其对OB矿化能力的影响.结果 MDA-MB-231和MCF-7细胞条件培养基可显著抑制OB的增殖.用Genistein干预1 d、3 d和5 d后,OB增值率可有不同程度的提高,差异有统计学意义(P<0.05).此外,乳腺癌细胞条件培养基可明显下调OB的ALP活性,而用不同浓度的Genistein干预后,OB的ALP活性分别较MDA-MB-231和MCF-7细胞条件培养基组增加22.7%、32.4%、63.5%和27.7%、32.0%、58.3%(P<0.05).Genistein还可改善乳腺癌细胞条件培养基对OB矿化能力的抑制,增加OB形成的矿化结节面积.结论 在乳腺癌骨转移的病理条件下,Genistein可促进OB的增殖、分化和矿化能力,改善乳腺癌细胞对OB生物学功能的抑制作用.     

蛇床子素骨靶向药物对体外培养大鼠成骨 细胞增殖功能的影响

目的观察以壳聚糖衍生物（NSC)为载体,与蛇床子素（OST)共价结合后形成的具有亲骨性 和亲水性的新型化合物一蛇床子素骨靶向药物（NSC-OST)对体外培养大鼠成骨细胞（Osteoblast ,OB) 增殖功能的影响,探讨其防治骨质疏松的作用机制。方法取新生大鼠颅盖骨进行OB分离、培养, 采用碱性磷酸酶（ALP)染色及茜素红染色法鉴定OB;随机将OB分为5组,即空白对照组及终浓度 为 10—7mmol/L、10 ―6 mmol/L、10-5 mmol/L、10 ―4 mmol/L NSC-OST 实验组,分别加人不同浓度的 NSC-OST作用不同时间,用MTT法检测成骨细胞增殖情况。结果体外分离培养的细胞具有典型成 骨细胞形态学及生物学活性,碱性磷酸酶、茜素红染色均呈阳性结果;作用M h、48 h时,终浓度为 10—5 mmolL NSC-OST 可显著促进 OB 增殖（P <0. 05 ),作用 72 h,终浓度为 10-6mmol/L 和 10-5 mmolLNSC-OST可显著促进OB增殖（尸<0. 05 );终浓度为10—4mmol/L NSC-OST具有明显抑制OB 增殖的作用（P<0.01 )。结论 NSC-OST的水溶性良好,理化性质稳定,适当浓度的NSC-OST可促进 成骨细胞增殖,有望成为有效抗骨质疏松作用的新型药物。     

尼莫地平(nimodipine)对体外培养成骨细胞的影响

目的观察钙通道阻断剂--尼莫地平(nimodipine)对体外培养成骨细胞的作用.方法在新生SD大鼠头颅骨第二继代成骨细胞(OB2)培养液中分别加入不同浓度(10-4～10-12g/ml)尼莫地平,分别观察OB2的增殖功能(用波长570nm处OD值表示),分化功能[用碱性磷酸酶(ALP)活性表示]和矿化功能(用矿化结节数量/视野表示).结果OD值(均值±sf标准差)为0.121±0.009～0.411±0.035;ALP活性(均数±标准差)为0.092±0.008U/mg蛋白质;矿化结节数量/视野(均数±标准差)为1.250±0.893个.结论与对照组比较,尼莫地平各浓度对OB2的增殖、分化和矿化功能作用各异.当尼莫地平浓度为10-9g/ml时,对OB2的增殖和分化功能具有刺激作用(p＜0.05),对OB2的增殖功能具有明显的抑制作用(p＜0.01);当浓度降低(10-11g/mi)时,对OB2的增殖功能失去作用(p＞0.05).     

雌激素对人皮肤成纤维细胞增殖与迁移的影响

目的 探讨雌激素(17β-estrogen,17β-E2)对人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSFB)增殖与迁移的影响.方法 分离培养HSFB,传至第4代;(1)四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度17β-E2和17β-E2+雌激素β受体(estrogen β receptor,ER-β)拮抗剂ICI-182780干预24、48、72、96h后HSFB增殖活力;(2)流式细胞仪检测17β-E2和ICI-182780对HSFB周期分布的影响;(3)建立细胞划痕(Scratch-Wound)模型,24、48、72 h后观察HSFB在不同浓度17β-E2和17β-E2+ ICI-182780干预下的迁移情况.结果 (1)MTT显示,48、72、96 h时,10-8、10-9、10-10、10-11、10-12mol/L浓度范围内,均以10-10 mol/L 17β-E2促增殖效应最强;并且10-10mol/L 17β-E2组(A组)细胞增殖效应强于ICI-182780+ 10-10 mol/L 17β-E2组(B组)与空白组(C组,P＜0.01);(2)A组处于S期的细胞比例多于B、C组(P＜0.01),处于G0/G1期的细胞比例则少于B、C组(P＜0.01);(3)48 h时,10-6、10-7、10-8、10-9、10-10 mol/L浓度范围内,10-8 mol/L 17β-E2促细胞迁移效应最强(P＜0.01);24、48、72 h时,10-8 mol/L 17β-E2组(D组)细胞迁移距离均大于10-8 mol/L 17β-E2+ ICI-182780组(E组)及空白组(F组)(P＜0.01).结论 10-10 mol/L浓度雌激素促HSFB增殖效应最强;10-8 mol/L浓度促HSFB迁移效应最强;ICI-182780有效减弱上述2种效应.     

高糖通过转化生长因子β信号诱导肾小球内皮细胞向肌成纤维细胞转分化

目的 探讨高糖(HG)能否通过转化生长因子β(TGF-β)途径诱导大鼠肾小球内皮细胞向肌成纤维细胞转分化(EndMT).方法 体外培养大鼠肾小球内皮细胞(GEnC),分为正常对照组(NG,5.5 mmol/L)、高糖组(HG,15、30 mmol/L)、TGF-β抑制剂组(HG+LY36,30 mmol/L葡萄糖+10 μmol/L LY364947)以及高渗对照组(M,5.5 mmol/L葡萄糖+25.5 mmol/L甘露醇)和溶剂对照组(D,5.5 mmol/L葡萄糖+1 ml/LDMSO).采用Western印迹法检测各组细胞内皮细胞标志物claudin5和肌成纤维细胞标志物α-SMA表达变化;实时定量PCR法检测细胞TGF-β1和TGF-β2 mRNA表达改变;免疫荧光法观察细胞形态学变化以及血管内皮细胞标志物VE-cadherin和肌成纤维细胞标志物α-SMA的表达.结果 与NG组比较,HG组claudin5蛋白的表达量随葡萄糖浓度增加而降低(P＜0.05),α-SMA蛋白表达量随葡萄糖浓度增加而升高(P＜0.05),TGF-β1和TGF-β2 mRNA表达均升高(P＜0.05).与HG组比较,TGF-β抑制剂组claudin5蛋白表达量升高(P＜0.05),α-SMA蛋白表达降低(P＜0.05).高渗对照组和溶剂对照组改变差异无统计学意义.激光共聚焦免疫荧光结果显示,高糖处理可引起细胞形态由卵圆形向梭形改变,VE-cadherin表达减少,α-SMA表达增加;TGF-β抑制剂组细胞形态无明显改变.与HG组比较,TGF-β抑制剂组VE-cadherin表达增加,α-SMA表达降低(P＜0.05).结论 高糖诱导大鼠肾小球内皮细胞TGF-β表达增加及内皮细胞-肌成纤维细胞转分化.抑制TGF-β可抑制高糖引起的转分化,提示TGF-β参与了高糖引起的肾小球内皮细胞转分化过程.     

梯度糖溶液对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的：探讨梯度高糖对体外培养成骨细胞（osteoblast，OB）的影响。方法：采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原酶消化法从1～2日龄SD大鼠颅盖骨中分离出OB，倒置显微镜下及HE染色观察其形态，碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALPase）染色法、钙化结节染色、Vam—Gieson染色鉴定细胞后用不同浓度的糖溶液加入到成骨细胞培养体系中，作用不同时间，应用MTT比色法、ALPase含量测定、矿化结节形成量等来检测其对成骨细胞增殖和成骨能力的影响。结果：不同浓度的糖溶液在OB培养48h时具有明显的促进增殖作用，但〉15mmol／L的溶液在72h时则呈抑制效应，其中以≤15mmol／L的糖溶液在培养早期有显著促进作用（P〈0．05或P〈0．01），而在培养较长时也无明显抑制效应；≥30mmol／L的糖溶液在OB培养7d时显著抑制ALPase的分泌（P〈0．05）；≥10mmol／L的糖溶液在培养18d时对矿化结节的形成也具有明显的延迟效应；〈10mmol／L的糖溶液对OB分泌ALPase及矿化结节形成无抑制作用。结论：高糖可影响OB增殖、分化与矿化能力，OB增殖耐受的糖浓度为≤15mmol／L，OB分化与矿化过程耐受的糖浓度为〈10mmol／L。     

膝关节后交叉韧带断裂治疗临床分析

目的 对35例膝关节后交叉韧带断裂治疗进行临床分析,重点探讨了有关交叉韧带断裂的治疗问题。方法 经明确诊断后,分析采用胫骨附着处撕脱骨折复位固定手术治疗26例、早期髌韧带中1／3移植重建3例、单纯长腿石膏固定6例。结果 本组病例全部进行随访,随访时间13个月－5年,胫骨附着处撕脱骨折复位固定及髋韧带中1／3移植重建29例为优良、单纯长腿石膏固定6例为差。结论 后交叉韧带断裂后应该及时给予手术修复;膝后外侧手术入路,操作简单,暴露充分;少于3个月的陈旧性病例仍适应手术治疗。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。