丹皮酚体内外抗人食管癌Eca-109细胞增殖及诱导凋亡的作用

目的研究丹皮酚(paeonol,Pae)在体内外对人食管癌细胞Eca-109的抑瘤作用及其对细胞凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)体外试验法和灌胃给药体内抗肿瘤试验。光镜及电镜观察各组的肿瘤组织的形态学变化。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法测定细胞凋亡指数。结果丹皮酚在体外对Eca-109细胞有明显的细胞毒作用,半数抑制浓度(IC50)为0.342mmol·L-1;体内灌胃给予丹皮酚25、50、100和200mg·kg-1对裸鼠移植人食管癌Eca-109的抑制率分别为10.67%、23.54%、27.91%和34.46%;顺铂5mg·kg-1组抑瘤率为58.71%;丹皮酚在100mg·kg-1剂量下与顺铂5mg·kg-1联合用药抑制率为77.91%。光镜下用药组可见较多凋亡的肿瘤细胞。透射电镜下可见肿瘤细胞核染色质浓缩边聚、胞质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等典型的凋亡表现。用药组凋亡指数较对照组明显增加。结论丹皮酚在体内外具有抑制人食管癌Eca-109细胞增殖及诱导其凋亡作用。     

丹皮酚诱导人食管癌Eca-109裸鼠移植瘤凋亡的机制探讨

目的通过观察用药后COX-2、Bcl-2和Survivin的变化,探讨丹皮酚(paeonol,Pae)诱导Eca-109食管癌裸鼠移植瘤凋亡的机制。方法体外培养食管癌Eca-109细胞,裸鼠皮下接种Eca-109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,36只荷瘤裸鼠随机分为6组,分别为模型对照组、Pae不同剂量组(25、50、100、200mg·kg-1)和阳性药对照组(cisplatin,CD-DP,5mg·kg-1)。治疗2wk后处死裸鼠,剥取瘤体称瘤重并计算抑瘤率。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞凋亡。免疫组化S-P法检测移植瘤组织COX-2、Bcl-2和Survivin的表达。结果Pae50、100和200mg·kg-1组和CDDP5mg·kg-1组均能明显抑制裸鼠皮下肿瘤的生长,抑瘤率分别为23·54%、27·91%、34·46%和58·71%,与模型组比较差异均有显著性(P<0·05orP<0·01)。TUNEL染色可发现棕褐色的凋亡细胞呈散在或片状分布,Pae各剂量组的凋亡指数(apoptosis index,AI)分别为(11·02±2·58)%、(19·80±2·77)%、(24·48±4·35)%和(27·13±4·39)%,与模型组(4·81±0·83)%比较,差异均有显著性(P<0·05orP<0·01)。免疫组化结果显示,Pae能明显抑制移植瘤组织COX-2、Bcl-2和Survivin的表达(P<0·05 or P<0·01)。结论Pae能抑制Eca-109食管癌裸鼠移植瘤生长、诱导凋亡而发挥抗肿瘤作用,其机制可能与下调COX-2的表达并抑制Bcl-2和Sur-vivin的表达有关。     

槲皮素对人食管癌Eca-109细胞的分化诱导作用

目的探讨槲皮素对人食管癌Eca-109细胞的分化诱导作用。方法将培养的Eca-109细胞分为两组:①加槲皮素组(Q组);②不加药物对照组(C组)。同时培养48h,收集各组细胞制备成细胞硝酸纤维素膜(NCM)标本及提取RNA制备RNA硝酸纤维素膜标本。分别对细胞硝酸纤维素膜(NCM)标本进行PCNA,VEGF的免疫斑点印迹阵列;对RNA硝酸纤维素膜标本EGFR,c-myc及wtp53的RNA斑点印迹阵列。印迹阵列皆用岛津薄层色谱扫描仪(TLC)进行波长523nm的扫描数值比较。结果①免疫斑点印迹显示:Q组的PCNA-IR,VEGF-IR的TLC扫描数值分别比C组低5.5倍,3.5倍;②RNA斑点印迹阵列显示,与C组相比:Q组的EGFR,c-myc的RNA斑点TLC扫描数值分别下调了7倍,2.2倍。而wtp53的RNA斑点TLC扫描数值则上调了2.2倍。结论槲皮素可下调作为肿瘤细胞恶性程度生物学指标的PCNA,EGFR,VEGF,c-myc等的表达,上调抑癌基因wtp53的表达,表明对人食管癌Eca-109细胞具有一定的诱导分化效应。     

白英水提物诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的:观察白英水提物诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并初步探讨其分子机制。方法:常规方法制备白英水提物,体外培养人宫颈癌HeLa细胞。实验组设白英水提物12.5、25.0、50.0mg/mL3种浓度,以顺铂(25.0mg/L)为阳性对照组。采用细胞毒试验(MTT法)检测HeLa细胞抑制率,荧光显微镜观察HeLa细胞形态变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯形泳带,半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因survivin mRNA和caspase-3mRNA表达的变化。结果:白英水提物对HeLa细胞增殖有抑制作用,且呈明显的时效和量效关系,并诱导其发生凋亡,表现为细胞核固缩、染色质凝集、边聚等。琼脂糖凝胶电泳显示DNA梯形泳带,半定量RT-PCR法检测显示survivin mRNA表达下调、caspase-3mRNA表达上调。结论:白英水提物对HeLa细胞有较强的增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导HeLa细胞凋亡的分子机制可能与上调caspase-3基因表达、下调survivin基因表达有关。     

腺苷诱导人食管癌EC109细胞凋亡及其内质网分子机制

目的探讨内质网应激途径在腺苷诱导食管癌EC109细胞凋亡中的作用。方法腺苷2 mmol.L-1作用于EC109细胞24～72 h或腺苷0.5～4 mmol.L-1作用于EC109细胞36 h,MTT法观察腺苷对EC109细胞存活率的时效和量效关系;免疫荧光法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3,转录因子CHOP和核因子κB(NF-κB)的表达及亚细胞定位;原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测内质网应激相关蛋白表达。结果腺苷对EC109细胞生长具有明显的抑制作用。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用24,36,48和72 h,细胞存活率分别为(57.7±15.0)%,(56.5±11.1)%,(43.8±5.7)%和(28.8±4.1)%,呈时间依赖性下降(r=0.9192,P<0.01);腺苷0.5,1,2和4 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,随药物浓度增加,细胞存活率依次为(83.1±11.2)%,(67.9±6.7)%,(55.3±5.0)%和(45.4±5.4)%,呈浓度依赖性降低(r=0.8252,P<0.01)。腺苷0.5～4mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,细胞凋亡率分别为(15.5±1.1)%,(28.2±0.8)%,(40.1±2.2)%和(50.6±1.3)%,与对照组(2.1±0.3)%相比均明显增加(P<0.05)。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,与正常对照组相比,GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3和CHOP表达明显增强(P<0.05,P<0.01),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3和CHOP发生核易位。GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3、CHOP和NF-κB表达呈浓度依赖性增加(rGRP78=0.9471,r胱天蛋白酶4=0.8977,r胱天蛋白酶3=0.968,rCHOP=0.9762,rNF-κB=0.9471,P<0.05)。结论腺苷可诱导人食管癌EC109细胞凋亡,其分子机制可能与内质网应激凋亡途径的启动有关。     

人参水提物对MPP^＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的研究人参水提物（WEG）对四氢吡啶离子（MPP^＋）诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP＋致SH-SY5Y细胞凋亡的模型,同时给予WEG干预。应用MTT比色法检测细胞活力;Hoechst33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果0.5mmol·L^-1MPP^＋作用于SH-SY5Y细胞60h,MTT值降低到（51.97%±2.46%）（P〈0.01）,Hoechst 33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,凋亡率增加到（40.52%±1.68%）（P〈0.01）,而WEG则能明显改善SH-SY5Y细胞的凋亡特性,显著升高其MTT值,降低凋亡率（P〈0.05）。结论人参水提物对MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的保护作用。     

靶向survivin基因的小干扰RNA对食管癌细胞Eca-109 化疗敏感性的影响

目的 利用RNAi (RNA interference, RNAi) 技术抑制食管癌Eca-109细胞survivin基因表达,观察survivin基因沉默后对Eca-109细胞化疗敏感性的影响。方法 构建靶向survivin基因特定序列的小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)真核表达载体并转染Eca-109细胞,筛选得到稳定转染的survivin干扰组细胞Eca-109 /si-survivin,同时设转染无关干扰质粒的Eca-109细胞为阴性对照组,未转染的Eca-109细胞为空白对照组;通过Western Blot法检测干扰前后survivin基因沉默抑制效果;随后将各组细胞与不同浓度的氟尿嘧啶(5-Fu)作用,MTT法检测各组细胞对5-Fu的半数抑制浓度(IC₅₀),流式细胞仪分析各组细胞的凋亡率。结果 干扰组Eca-109 /si-survivin细胞survivin蛋白表达水平(18.75±3.12)较阴性对照组Eca-109 /si-control(44.17±3.15)及空白对照组Eca-109 (46.20±2.62)明显下调(P<0.05);联合应用5-Fu的Eca-109 /si-survivin干扰组细胞IC₅₀为(18.75±1.53)mg·L-1,显著低于空白对照组(39.65±1.75)mg·L-1和阴性对照组(38.95±1.34)mg·L-1,差异具有统计学意义(P<0.05);联合应用5-Fu的Eca-109 /si-survivin干扰组细胞凋亡率为(37.35±1.52)%,明显高于空白对照组(11.26±1.21)%和阴性对照组(12.34±1.32)%,差异具有显著性(P<0. 05)。 结论 靶向survivin的siRNA能特异性沉默survivin基因表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,并增强人食管癌Eca-109细胞对5-Fu的化疗敏感性。     

丁香酚诱导癌细胞PC-12凋亡的研究

目的 研究丁香酚诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC-12的凋亡作用机制。方法 用不同浓度的丁香酚处理PC-12细胞,MTT法检测细胞相对存活率,荧光染色观察细胞凋亡情况;比色法检测Caspase-3酶活性;real-time PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA水平的变化,Western blot检测蛋白水平的变化。结果 丁香酚能显著降低PC-12细胞存活率,促进Bax mRNA及蛋白表达,抑制Bcl-2 mRNA及蛋白表达,进而提高Caspase-3酶活性。结论 丁香酚可能通过上调Bax、下调Bcl-2表达,激活Caspase-3酶活性,诱导PC-12细胞凋亡。     

芫花的化学成分及药理作用研究进展

目的对芫花的化学成分及其药理作用的研究进展作一综述,提供有关芫花研究的相对较为全面的借鉴资料。方法查阅国内外公开发表的文献28篇,对从芫花中得到的多种化学成分及其药理作用进行论述。结果芫花中主要含有黄酮、香豆素等酚苷类成分及二萜原酸酯类、绿原酸类成分。在镇痛抗炎、抗白血病、抗肿瘤、妊娠中期引产、杀虫等方面有较好疗效。结论为芜花的进一步研究提供了依据。     

芍药化学成分和药理作用研究进展

芍药是一种用于治疗多种疾病的传统中药。芍药除含有芍药苷和苯甲酰芍药苷等成分外,还包含异芍药苷和4-氧-甲基-芍药苷等多种新的化学成分。芍药具有抗炎、镇痛、抗菌、抗氧化、抗癌、抗抑郁和抗肝纤维化等作用;对自身免疫性疾病、心脑血管疾病和神经退行性疾病也能起到改善和治疗作用。上述研究进一步明确了芍药的药理作用机制,为其临床应用提供了理论依据,更有助于西方国家对中药的认可。本文综述了近年来国内外有关芍药化学成分和药理作用的研究进展。     

Chemical constituents from the tubers of Scirpus yagara and their anti-inflammatory activities

A new natural compound, dehydrophyllodulcin (1) was isolated from the tubers of Scirpus yagara, together with 11 known compounds. Among them, compounds 2, 5–8, and 10–12 were isolated from this plant for the first time. ¹H NMR, ¹³C NMR, and 2D NMR data of compound 1 are first reported in this article, though it was synthesized in 1996. The structures of all compounds were determined by comprehensive analyses of their spectroscopic data and compared with literature information. Moreover, the anti-inflammatory effects of compounds 1, 3, 4, 6, and 9 against inflammatory cytokines production in Lipopolysaccharide – or Pam3csk4-stimulated macrophage RAW264.7 cells were evaluated by Enzyme-linked immunosorbent assay. And these compounds significantly inhibited the tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-6 productions in RAW264.7 cells, with IC₅₀ values less than 20 μM.     

蓝刺头茎叶中化学成分的分离与鉴定

目的对蓝刺头茎叶进行化学成分研究。方法采用硅胶柱色谱、Sephadex LH 20柱色谱、制备薄层色谱等方法分离化学成分,1H NMR1、3C NMR等方法进行结构鉴定。结果从蓝刺头茎叶中分离并鉴定了8个化合物,分别为:β谷甾醇(βsitosterol,1)、蒲公英萜醇乙酸酯(taraxerol ac-etate,2)、木栓酮(friedelin,3)、胡萝卜苷(daucosterol,4)、5(丁烯3炔1)联噻吩[5(but 3 en 1ynyl)2,2′bithiophene,5]、α三联噻吩(αterthienyl,6)、卡多帕亭(cardopatine,7)、异卡多帕亭(iso-cardopatine,8)。结论化合物3为首次从该属植物中分离得到。     

夏枯草乙醇提取物体外诱导肺癌细胞A549凋亡的研究

目的探讨夏枯草乙醇提取物对人肺癌细胞系A549细胞的增殖、迁移、细胞周期及凋亡的影响。方法不同质量浓度夏枯草提取物作用于人肺癌A549细胞,采用MTT比色法、细胞划痕实验等检测其对肿瘤细胞的生长及迁移的抑制作用,应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化情况,并使用Annexin-V FITC和PI双染试剂盒进行凋亡分析。结果一定质量浓度的夏枯草提取物可明显抑制肺癌细胞的增殖和迁移,并呈量效和时效关系,可诱导细胞发生G0/G1期或G2/M期细胞周期阻滞,且Sub G1峰比例明显上升,在低、中质量浓度(1.0和2.0mg·L-1)时以晚期凋亡为主,在高质量浓度(4.0mg·L-1)时主要发生早期凋亡。结论夏枯草提取物可抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移,改变细胞周期,诱导肿瘤细胞凋亡。     

金鸡菊属植物化学成分和药理活性研究进展

金鸡菊属植物原产北美、非洲南部及夏威夷群岛等地,后被引入我国,该属植物含有挥发油类、黄酮类、炔类、苯丙素类、萜类、甾类等化学成分。该属植物具有调血脂、降血压、降血糖、抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶及抗菌等活性,还具有很高的观赏价值。综述了金鸡菊属植物化学成分和药理活性的研究进展,为进一步开发利用金鸡菊属植物提供参考。     

藤黄属植物的化学成分和药理作用研究进展

藤黄属植物在东南亚地区广泛分布,其中一些植物作为民间药物有着悠久的用药历史。该属植物普遍具有抗肿瘤、抗炎、抗菌等药理作用,而且已有呫吨酮、双黄酮、苯甲酮、萜类等多种结构类型的化学成分从该属植物中分离得到.概述了近十年来从藤黄属植物中分离得到的新化合物和首次发现的天然产物及其化学成分的药理活性研究进展,为该属植物的深入研究提供依据。     

云实属植物化学成分、药理作用及质量控制研究进展

云实属Caesalpinia L.植物资源丰富,主要分布在热带和亚热带地区,具有很高的药用价值。目前,已经从云实属植物中分离出的化学成分主要包括黄酮类和萜类两大类,药理研究表明其具有抗炎、抗氧化、抗疟等药理作用。近年来,关于云实属植物的质量控制研究比较单薄,不能全面反映药材质量标准。因此,系统综述了该属植物化学成分、药理作用和质量控制研究进展,以期为云实属植物药用活性成分及其作用机制的研究、资源的充分利用、新药开发提供依据。     

蔷薇红景天的化学成分及对紫外线诱导的A375-S2细胞死亡的抑制作用

目的对蔷薇红景天(Rhodiola roseaL.)干燥根茎的体积分数为30%乙醇提取物化学成分进行研究,并探讨其中部分单体化合物对紫外线诱导的A375-S2细胞死亡的抑制作用。方法利用硅胶柱色谱等多种方法进行分离纯化,根据理化性质和NMR、MS等波谱数据进行结构鉴定;采用MTT法检测细胞的存活率来评价化合物对紫外线照射诱导的细胞死亡的保护作用。结果分离得到7个化合物,经鉴定分别为:迷迭香酸(rosmarinci acid,1)、山柰酚(kaempferol,2)、山柰酚-7-O-鼠李糖苷(kaempferol 7-O-rhamnopyranoside,3)、草质素-7-O-α-L-鼠李糖苷(herbacetin 7-O-α-L-rhamnopyranoside,4)、草质素-7-O-(3″-O-β-D-葡萄糖)-α-L-鼠李糖苷(herbacetin 7-O-6-(3″-O-β-D-glucopyranosyl)-α-L-rhamnopyranoside,5)、槲皮素(quercetin,6)和芦丁(rutin,7)。结论化合物1为首次从红景天属植物中分离得到,化合物7为首次从该种植物中分离得到;化合物5对紫外线诱导的A375-S2细胞死亡具有明显的抑制作用,且对该细胞没有显示出细胞毒活性。