UVA防光剂的评价方法

UVA对人体的损伤已引起广泛关注 ,但UVA防光剂的评价方法至今尚无统一标准。本文综述了溶液法、关键波长法、立即黑化法、持续黑化法等UVA防光剂的体内、外评价方法以及最新动态。     

最小持续性黑化量用于长波紫外线防护效果评价的试验研究

目的：探讨在人体试验中以最小持续性黑化量(MPPD)作为判断长波紫外线(UVA)防护效果指标的可行性。方法：选择3种不同作用机制的防晒剂，按标准配方分别配制3个浓度系列的UVA防晒品，分别涂抹于受试者的背部皮肤．采用日光模拟器照射，测定每一个受试者的MPPD值并分别计算每一种测试样品的UVA防护系数，即PFA值。结果：与不具有防护效果的基质对照相比，每种防晒品的PFA值随浓度升高而升高，差异具有显著性。结论：在上述试验中，UVA防晒剂具有降低UVA辐射的作用，并且其浓度与防护效果呈线性关系。因此，用持续性黑化反应评价皮肤受到的UVA辐射是一种准确和重复性好的技术方法，以MPPD作为观察指标对防晒品的UVA防护效果进行人体试验评价是可靠和可行的。     

实验室检验体内持续皮肤黑化方法测定遮光剂UV防护指数的可重复性

目前有多种方法评价遮光剂的性能，日本化妆品工业协会（JcIA）采用持续皮肤黑化（persistant pigment darkening，PPD）方法，通过检测皮肤对所有波段UVA的反应，确定UVA防护指数（UVA protection factors，UVAPF），进而检测遮光剂作用。由于使用的检测仪器不同，受试人群不同，不同实验室即使按照PPD统一操作规程，可能也会造成UVAPF检测结果差异。最近，法国欧莱雅研究院的Dominique Moyal等对PPD方法检测结果的实验室室间差异、可重复性以及皮肤类型对结果的影响进行了研究。     

预防长波紫外线诱发的皮肤色素沉着

长波紫外线(ultraviolet A,UVA)和中波紫外线(ultraviolet B,UVB)都可以诱发皮肤色素沉着.UVA引起的色素沉着至少有三种不同的光生物学表现:即刻性黑化(immediate pigment darkening,IPD)、持续性黑化(persistent pigment darkening,PPD)和延迟性色素沉着(delayed pigmentation).     

免疫防护指数对防光剂评价的研究进展

紫外线可通过诱导免疫抑制细胞因子产生、减低抗原提呈细胞的功能等途径对皮肤产生免疫抑制作用,但防光剂作为一种有效而广泛的光损伤防护措施,目前对其的评价方法还主要以针对中波紫外线的急性损伤为主,尚不能准确的评价防光剂的免疫防护作用。     

免疫防护指数对防光剂评价的研究进展

紫外线可通过诱导免疫抑制细胞因子产生、减低抗原提呈细胞的功能等途径对皮肤产生免疫抑制作用,但防光剂作为一种有效而广泛的光损伤防护措施,目前对其的评价方法还主要以针对中波紫外线的急性损伤为主,尚不能准确的评价防光剂的免疫防护作用.     

慢性光线性皮炎患者光生物试验和Arg163Gln初步研究

目的：探讨慢性光线性皮炎（CAD）患者与健康志愿者光试验、光斑贴试验、皮肤颜色相关参数的差异以及与Arg163Gln基因型特征分布关系。方法用日光模拟仪SUN1000、瑞敏牌光斑贴抗原、紫外线光疗仪SS?03A和窄波反射分光光度仪对25例CAD患者和25例健康志愿者进行光试验、皮肤色素测定，同时用PCR法行Arg163Gln基因型检测。其中25例CAD患者和5例健康志愿者进行光斑贴试验。结果光试验：CAD患者UVA最小持续性黑化量和UVB最小红斑量均显著低于健康志愿者（P<0.05），其中UVB最小红斑量更明显（P<0.01）。光斑贴试验出现阳性反应16例（64%），其中光变态反应13例（52%）。对于4处不同皮肤颜色相关参数的检测，CAD患者面颊部、前额、上臂内侧、手背皮肤的血红蛋白含量均显著高于健康志愿者，而面颊、前额、上臂内侧皮肤的黑素含量差异无统计学意义，仅手背皮肤黑素含量显著高于健康志愿者（P<0.01），CAD患者曝光部位皮肤黑素和血红蛋白含量均显著高于上臂内侧（P<0.05）。CAD在Arg163Gln位点突变为CGA比例与健康志愿者相比，差异无统计学意义（P>0.05）；CAD在Arg163Gln位点突变为CAA比例与健康志愿者相比，差异有统计学意义（P<0.01）。比较Arg163Gln突变为CAA阳性者和CAA阴性者对UVA和UVB的反应性差异，发现Arg163Gln突变为CAA阳性者的UVA最小持续性黑化量（P=0.055）和UVB最小红斑量（P=0.325）均明显低于CAA阴性者。结论皮肤光生物学检查方法在CAD的诊断中具有一定价值。Arg163Gln突变为CAA基因型特征在CAD诊断和防治中有一定的提示作用。     

强脉冲光改善慢性长波紫外线所致鼠皮肤光老化的研究

目的:通过慢性长波紫外线(UVA)照射小鼠皮肤形成光老化损伤,探讨强脉冲光(IPL)改善皮肤光老化的可能作用机制.方法:将实验所用BALB/c小鼠按不同处理条件分为6组:空白组1、UVA组、8-甲氧补骨脂素(8-MOP)+UVA组、UVA+IPL组、8-MOP+UVA+IPL组和空白组2.UVA或8-MOP+UVA连续照射12周,继之IPL照光2次,间隔2周.取小鼠皮肤组织行组织病理检查及透射电镜检查.结果:与空白组比较,UVA组小鼠皮肤真皮层变厚,可见胶原组织变性.8-MOP+UVA组小鼠皮肤表皮层亦见增厚,真皮层厚度的增加和异常胶原纤维的堆积较UVA组更显著,电镜下可见线粒体空泡化变性,胶原纤维溶解.IPL处理后,小鼠皮肤表皮层未表现明显增厚,真皮层扭曲变性的胶原纤维结构得到改善,胶原纤维排列重新趋于整齐紧密,电镜下组织受损明显得到改善.结论:8-MOP可以加速促进光老化进程,慢性UVA照射+8-MOP可成功快速诱导小鼠皮肤的光老化损伤.IPL治疗能够有效改善小鼠皮肤光老化.     

UVA致人皮肤成纤维细胞急性和慢性光损伤模型的建立

目的:探讨人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)急性和慢性光损伤模型建立的方法。方法:体外培养原代人皮肤成纤维细胞,选取第4~8代的细胞进行实验。用长波紫外线(UVA)单次照射建立HDFs急性光损伤模型,荧光倒置显微镜观察不同剂量UVA照射后第1、2、3天HDFs的形态变化;CCK-8法检测照射后HDFs的增殖活性。慢性光损伤HDFs模型采用8-甲氧沙林(8-MOP)避光孵育细胞24h,随后以含8-MOP的磷酸盐缓冲液(PBS)置换培养基,行9J/cm~2 UVA照射,照射完成后换Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)(含10%胎牛血清)避光传代培养,21d后显微镜下观察HDFs形态;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法计算衰老细胞率。结果:单次UVA照射导致HDFs增殖率下降,与UVA剂量呈正相关。UVA在剂量为≤10J/cm~2时,细胞存活率保持在85%;而UVA剂量≥15J/cm~2时细胞存活率明显降低;≥20 J/cm~2时存活率为50%左右,至25 J/cm~2时仅为约25%。慢性光损伤HDFs诱导组(即UVA+MOP组)几乎所有细胞均出现体积变大、细胞颗粒增加等细胞老化的特征性改变;SA-β-Gal染色细胞的阳性率95%。结论:UVA单次照射可成功建立HDFs急性光损伤模型,UVA联合8-MOP构建HDFs慢性光损伤模型。     

长波紫外线诱导成纤维细胞急性光损伤模型的建立

目的建立长波紫外线(UVA)诱导的成纤维细胞急性光损伤模型。方法原代培养人皮肤成纤维细胞,采用形态学观察、免疫荧光细胞染色对皮肤成纤维细胞进行鉴定,分别用形态学观察、CCK-8法、细胞衰老β-半乳糖苷酶染色检测UVA对细胞形态、增生活性以及细胞衰老状态的影响。结果 UVA剂量≤4 J/cm2时对细胞形态无明显影响,而UVA剂量≥6 J/cm2时细胞出现变形;UVA剂量≤4 J/cm2时,细胞增生率均85%,而UVA剂量≥6 J/cm2时细胞增生率明显下降,与对照组相比差异有统计学意义(P0.01);4 J/cm2组的衰老阳性细胞明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.01)。结论 4 J/cm2 UVA可用于建立人皮肤成纤维细胞急性光损伤模型。     

皮肤光老化动物模型的建立和超微结构观察

目的:构建光敏剂结合UVA诱导的小鼠皮肤光老化模型。方法:ICR小鼠分为3组:模-型组外用1%甲氧沙林溶液(8-MOP)后进行UVA照射、单纯UVA照射组和空白对照组。照射后观察皮肤外观表现、病理学变化和超微结构特点,确定各组诱导皮肤光老化进程的累积照射剂量和时间。结果:单纯UVA照射组在第45天,UVA剂量约720 J/cm~2时,肉眼观察皮肤外观、组织病理方面和-超微结构都呈现比较典型的光老化表现;模型组(8 MOP/UVA)小鼠在第3天,UVA累积剂量约47 J/cm~2时,透射电镜下可见角质形成细胞和基底层黑素细胞的显著凋亡(核固缩);第5天,UVA累积剂量约78 J/cm2时,病理示:真皮层部分弹性纤维变性;随着照射剂量的增加,第6天UVA累积剂量达95 J/cm~2时,出现典型的光老化表现,透射电镜下可清晰观察到弹性纤维和胶原蛋白束的病理改变。结论:8-MOP/UVA可以快速诱导小鼠皮肤光老化模型的建立。     

广谱防晒剂可有效防止UVA在体外重建皮肤及人体皮肤中诱导的基因表达北大核心CSCD

UVA（320～400nm）照射与光老化、光线性皮肤病、皮肤光致癌的发生密切相关,因此应用具有UVA防护能力的广谱防晒剂非常重要。为了有效地评价防晒剂在分子水平上的生物学效应,该研究不仅将体外重建皮肤模型作为体外研究（in vitro）对象,同时又在志愿者皮肤上进行了体内研究（in vivo）。体外重建皮肤模型是由具有活性的真皮类似物和分化完全的表皮组成,可用在体外重现UVA诱导的组织特异性损伤,     

UVA1对人工皮肤成纤维细胞光损伤的影响

目的探讨不同UVA1照射剂量对人工皮肤真皮细胞形态及细胞活性的影响,为建立人工皮肤光损伤模型提供依据。方法以不同剂量UVA1（0J／cm^2-80J／cm^2）照射人工皮肤,通过HE染色,从形态学上观察经UVA1照射后真皮成纤维细胞数量的变化,通过MTT法检测真皮成纤维细胞的活性。结果HE染色示真皮成纤维细胞的数量随UVA1剂量的增大而减少,于真皮浅层较为明显;MTT法示与0J／cm^2组相比,20J／cm^2和30J／cm^2UVA1照射人工皮肤时成纤维细胞活性未受到明显的抑制（P〉0．05）．UVA1剂量大于40J／cm^2时细胞活性下降明显（P〈0．05,P〈0．001）,呈剂量依赖性。结论UVA1照射剂量大于40J／cm^2是造成人工皮肤真皮成纤维细胞光损伤的始剂量。     

不同紫外光源对光斑贴试验的光变应原检出率的影响

目的：研究不同紫外光源对光斑贴试验的光变应原检出率是否存在差异。方法：对35例有光敏反应疑为光变应性接触性皮炎且符合入选标准的患者,应用国际标准光斑贴系列SP．1000变应原进行光斑贴试验,采取自身对照方法在试验中分别采用UVA＋UVB和单纯UVA作为照射光源进行检测,比较其检测结果的差异。结果：接受光斑贴试验的35例患者中采用UVA＋UVB照射检出阳性光变应原19项次（2．71％）;采用单纯UVA照射检出阳性光变应原11项次（1．57％）;UVA＋UVB组变应原阳性检出率高于单纯UVA组,差异有统计学意义（χ^2=6．13,P〈0．05）。结论：光斑贴试验采用UVA＋UVB作为检测光源优于单纯UVA,可减少漏诊。     

防光的现状

长波紫外线较中波紫外线具有更大的危害性,有效的外用防光剂有N-乙酰半胱氨酸、绿茶多酚、二羟丙酮及硒有加强作用,维生素E和糠醛-葡糖醇可作为防光剂加放在化妆品内,正在研究的内用防光剂有鱼油、维生素E、微量元素硒和铜。     

防光的现状

长波紫外线较中波紫外线具有更大的危害性，有效的外用防光剂有Ｎ－乙酰半胱氨酸，绿茶多酚、二羟丙酮及硒有加强作用，维生素Ｅ和糠醛－葡糖醇可作为防光剂加放在化妆品内，正在研究的内用防光剂有鱼油，维生素Ｅ，微量元素硒和铜。     

茶多酚对长波紫外线诱导HaCaT细胞急性光损伤的防护作用

目的探讨茶多酚对长波紫外线(UVA)诱导HaCaT细胞急性光损伤的防护作用及其机制。方法用光学显微镜、MTT法检测UVA对细胞形态及增殖活性影响,构建UVA致HaCaT细胞急性光损伤模型;用MTT法检测茶多酚对细胞增殖活性影响,获得茶多酚对HaCaT细胞最适浓度;检测茶多酚处理前后细胞增殖活性(MTT法)、细胞膜损伤(LDH)情况;Western blot、RT-PCR检测茶多酚处理前后核因子NF-E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)蛋白胞内分布、Nrf2 mRNA及下游Ⅱ相解毒酶表达情况。结果 20 J/cm~2 UVA致HaCaT细胞形态学改变且抑制细胞增殖活性(0.11±0.50;P0.05),可用于构建UVA致HaCaT细胞急性光损伤模型;茶多酚剂量依赖性抑制细胞增殖活性,11μg/mL为本实验最适茶多酚浓度;相比对照组、UVA组的细胞增殖活性(1.043±0.203;0.113±0.050)和LDH(1.000±0.092;1.858±0.016),照射前加入茶多酚可显著提高细胞增殖活性(1.322±0.080;均P0.05)和减少LDH释放(0.500±0.079;均P0.05);Western blot、RT-PCR结果显示,茶多酚可显著增加核内Nrf2蛋白表达,上调Nrf2 mRNA(1.804±0.229)及下游Ⅱ相解毒酶SOD mRNA(1.172±0.148)、CAT mRNA(1.617±0.259)、GCLC mRNA(1.183±0.083)、GCLM mRNA(1.228±0.256)的表达。结论茶多酚可有效防护UVA诱导HaCaT细胞急性光损伤,且茶多酚可增加核内Nrf2蛋白及其mRNA和下游Ⅱ相解毒酶mRNA的表达,茶多酚的光防护作用可能与Nrf2信号通路有关。     

8-MOP/UVA诱导培养真皮成纤维细胞衰老的作用

目的　探讨以 8 MOP/UVA作用于培养真皮成纤维细胞建立皮肤光老化模型的可行性。方法　采用光镜、电镜、流式细胞仪、酶组织化学、免疫组织化学等方法检测 8 MOP/UVA对培养真皮成纤维细胞多项细胞衰老相关指标的影响。结果　 8 MOP/UVA作用后 ,培养真皮成纤维细胞迅速出现细胞衰老特征性的形态学及生物学特性改变 :细胞由分裂表型转化为无分裂活性表型 ,SA β Gal表达增加、p16蛋白表达增加。结论　 8 MOP/UVA可诱导培养真皮成纤维细胞迅速出现具有细胞衰老特征性的形态学及生物学特性改变 ,以 8 MOP/UVA作用于培养真皮成纤维细胞建立皮肤光老化模型是可行的     

8-甲氧补骨酯素对三种不同光源的光斑贴试验结果比较

目的通过借助经典光毒剂8-甲氧补骨酯素(8-MOP)研究UVA、UVB、UVA+UVB3种不同光源对光毒性斑贴试验结果的影响。方法豚鼠138只,健康受试者22名。光源为PhilipsUVA,PhilipsUVB,SUV1000日光模拟器。试验物为2%8-MOP。①豚鼠对8-MOP+UVA(PUVA)和8-MOP+UVB(PUVB)的反应。②豚鼠对8-MOP+UVA(PUVA)和8-MOP+UVA+UVB(PUVA+UVB)的反应。③人体对8-MOP+UVA(PUVA)和8-MOP+UVA+UVB(PUVA+UVB)的反应。结果PUVA组的反应率和单纯UVA照射组有显著差异(P<0.01),PUVB组的反应率和单纯UVB照射组的差异无显著性(P>0.05)。PUVA+UVB组试验区域3d皮肤反应评分变化趋势的斜率大于PUVA组。人体试验结果同动物试验结果相一致。结论在以8-MOP为受试物的光斑贴试验中,UVB检测效果较差,而UVA和PUVA+UVB均能检测出8-MOP的光毒性,但UVA+UVB要优于UVA。因而UVA+UVB是一种理想的光斑贴试验光源。     

姜黄素对紫外线诱导损伤的HaCaT细胞的保护作用

目的比较姜黄素对UVA、UVB急性损伤的HaCaT细胞的保护作用。方法体外培养人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞,UVA、UVB照射建立HaCaT细胞急性光损伤模型。姜黄素与HaCaT细胞共培养24 h后,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,确定无毒性姜黄素浓度。通过MTT法、流式细胞术分别检测添加姜黄素前后,UVA、UVB照射引起的HaCaT细胞损伤情况及胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平变化。结果姜黄素浓度在5μmol/L以下时,正常细胞的增殖和凋亡不受影响。添加姜黄素前,UVA照射引起细胞增殖抑制、凋亡增加(P0.05),ROS增高67.9%;UVB照射引起细胞增殖抑制、凋亡增加(P0.05),ROS增高67.2%。添加姜黄素后,UVA、UVB组细胞损伤均减轻(P0.05),ROS水平升幅均下降,呈浓度依赖型。结论对于不同波长的紫外线诱导损伤的HaCaT细胞,姜黄素均可降低急性光损伤引起ROS水平升幅,具有抗氧化保护作用,其保护强度无差异,并且呈浓度依耐性。