肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体受体-4在人胰腺癌组织中的表达

目的：通过检测肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体受体-4(TRAIL-R4)在胰腺癌组织中的表达，探讨胰腺癌细胞抵抗细胞凋亡的机理。方法：应用mRNA印迹法(Northern blotting)、蛋白质印迹法(Western blotting)和免疫组织化学技术，定性、定位分析TRAIL-R4在正常胰腺组织和胰腺癌组织中的表达。结果：TRAIL-R4 mRNA和蛋白在正常胰腺组织中呈弱表达或不表达，而在胰腺癌组织中呈高表达；免疫组织化学检测显示，在胰腺癌细胞中TRAIL-R4蛋白呈强染色。结论：TRAIL-R4表达水平在正常胰腺组织与胰腺癌组织中存在显著差异，提示胰腺癌细胞中可能存在对TRAIL介导的细胞凋亡抵抗新机理。     

胰腺癌细胞中抗凋亡蛋白BAG-3的过度表达

目的 本文通过检测和比较人胰腺癌组织、正常胰腺组织和胰腺癌细胞株中BAG-3基因的mRNA转录和蛋白表达水平，揭示抗凋亡蛋白BAG-3与胰腺癌的关系。方法 采用Northern blot和Western blot的方法定性检测BAG-3在胰腺癌中的表达，采用原位杂交和免疫组织化学的方法定位检测BAG-3在胰腺癌中的表达。结果 在mRNA和蛋白水平BAG-3在所有的胰腺癌标本和胰腺癌细胞株中存在中度到高度表达，而在正常胰腺组织中呈低水平表达。原位杂交和免疫组织化学分析发现，BAG-3主要在胰腺癌组织中的肿瘤细胞表达。结论 胰腺癌细胞中抗凋亡蛋白BAG-3表达水平增高，可能与胰腺癌浸润性生长的生物学行为及体内治疗反应性差有关。     

环氧合酶2在胰腺癌中表达及其抑制剂对肿瘤生长的抑制作用

目的　研究胰腺癌组织中环氧合酶 2 (COX 2 )的表达及其与临床分期的关系 ;探讨选择性COX 2抑制剂对胰腺癌生长的体内外抑制作用。方法　分别应用免疫组织 (细胞 )化学染色、逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和Westernblot等研究胰腺癌组织和细胞株PC 3及PANC 1中COX 2表达。分析胰腺癌组织COX 2表达与临床TNM分期的关系。应用四唑氮蓝还原法 (MTT)研究选择性COX 2抑制剂Celebrex和NS 3 98对胰腺癌细胞生长的体外抑制作用。观察Celebrex对裸鼠移植瘤 (接种PC 3细胞 )生长的体内抑制作用。结果　COX 2免疫组织 (细胞 )化学染色结果显示 :2 4例胰腺癌组织阴性 3例 ,弱阳性 10例 ,强阳性 11例 ,阳性率 87 5% ;3例慢性胰腺炎组织 1例弱阳性 ,2例阴性 ;胰腺癌细胞株PC 3和PANC 1均为阳性。RT PCR结果显示两株胰腺癌细胞株和胰腺癌组织COX 2mRNA的表达较正常胰腺组织明显上调。Westernblot显示胰腺癌细胞株PC 3、PANC 1中COX 2蛋白表达阳性。胰腺癌组织COX 2表达程度与临床TNM分期呈正相关 (P <0 0 5)。NS3 98和Celebrex体外均呈剂量依赖性地抑制胰腺癌细胞株PC 3的增殖 ,以Celebrex的抑制作用较为显著。而Celebrex体内抑瘤率达 51 6%。结论　COX 2在胰腺癌中表达显著上调 ,其表达程度与胰腺癌临床TNM分期有关。     

胰腺癌组织中神经激肽3受体的表达及组织学定位

目的研究神经激肽3受体(NK3R)在胰腺癌组织中mRNA和蛋白水平的表达,以及该受体在胰腺癌中的组织学定位。方法应用逆转录聚合酶链反应技术检测正常胰腺和胰腺癌组织中NK3R的mRNA水平,应用Westernblot检测其蛋白的表达水平,应用免疫组织化学技术进行组织学定位。结果与正常胰腺相比,胰腺癌组织中NK3RmRNA过度表达,胰腺癌组织中NK3R蛋白也过度表达,正常胰腺组织NK3R蛋白表达为11±05,胰腺癌组织为146±36,P<001。免疫组织化学检查结果显示正常胰腺中有较弱的NK3R表达,胰腺癌的导管细胞、神经纤维、炎性细胞中均有较强的NK3R表达。结论胰腺癌组织中NK3R的表达水平明显上升。     

过氧化物酶体增殖激活物受体-γ在肾细胞癌中的表达及其意义

目的观察过氧化物酶体增殖激活物受体(PPAR)-γ在肾细胞癌中的表达,探讨其意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学和Western blot从RNA及蛋白水平检测正常肾组织、肾癌组织和肾细胞株HK-2、HMCC;肾癌细胞株786-O、A498中PPAR-γ表达。结果肾癌组织、肾组织及细胞株中PPAR-γ mRNA普遍表达,肾癌中PPAR-γ蛋白表达量为正常肾的7.0~10.7倍;肾癌组织PPAR-γ阳性率为98.3％,肾组织中为60.0％,其表达强度差异有显著性(t=7.888,P<0.01)。PPAR-γ在肾癌的细胞核和细胞质中均表达;PPAR-γ表达和肾癌的分级、分期明显相关。结论核内受体PPAR-γ在人肾癌组织及肾癌细胞株中呈上调表达,提示PPAR-γ基因的激活可能是肾细胞癌治疗的一种新的方法。     

PPARγ参与调节胃癌MKN45细胞株VEGF mRNA的表达及临床意义

目的研究过氧化物酶体增殖激活受体(PPARγ)是否体外参与调节胃癌MKN45细胞VEGF mRNA的表达及临床意义。方法体外培养人胃癌细胞系MKN45,不同浓度的PPARγ激动剂(曲格列酮),PPARγ特异性抑制物体外作用细胞,EMSA测定细胞PPARγ的活性,RT-PCR检测细胞VEGF mRNA的表达。结果相对于对照组,随曲格列酮浓度的增加,胃癌MKN45细胞株PPARγ活性显著性升高(P<0.01),VEGF mRNA的表达显著性降低(P<0.01),且呈剂量依赖关系;PPARγ特异性抑制物能显著性抑制曲格列酮诱导的胃癌MKN45细胞株PPARγ的活化和VEGF mRNA的表达的下调(P<0.01)。结论PPARγ可能参与调节胃癌MKN45细胞株VEGF mRNA的表达,曲格列酮通过激活PPARγ,抑制胃癌MKN45细胞株VEGF mRNA的表达,可能为胃癌的治疗提供新的靶点。     

质粒介导LAPTM4B过表达胰腺癌细胞株PANC-1的构建及鉴定

目的筛选低表达LAPTM4B-35细胞株并构建质粒介导的LAPTM4B过表达胰腺癌细胞株并进行鉴定。方法通过RT-PCR及Western-Blot方法检测3种胰腺癌细胞LAPTM4B的表达,筛选出现低表达LAPTM4B细胞株。通过质粒稳定转染胰腺癌细胞PANC-1,pcDNA3.0-AE过表达LAPTM4B基因,应用RT-PCR,Western-blot进行鉴定。结果成功扩增提取pcDNA3.0-AE质粒,转染并筛选稳定细胞株。RT-PCR及Western-Blot显示相对空白对照,稳定株的过表达LAPTM4B-35明显。结论成功构建筛选低表达细胞株,并建立稳定过表达LAPTM4B的胰腺癌细胞株。     

胰腺癌组织SOX9的表达水平与肿瘤进展及预后的关系

目的 探究胰腺导管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC）中SOX9的表达水平及临床病理学意义.方法对 正常胰腺、胰腺导管内乳头状黏液瘤（IPMN）、胰腺上皮内瘤样病变（PanIN）及PDAC标本进行免疫组织化学染色,观察SOX9在不同胰腺组织中的表达情况,并将62例手术切除的PDAC组织标本的染色结果同临床病理及预后资料进行对比分析.最后对三种不同分化水平的胰腺癌细胞株做免疫荧光染色及qRT-PCR,检测其SOX9阳性细胞表达比率及SOX9mRNA表达水平.结果 免疫组织化学结果显示：SOX9蛋白在正常胰腺、IPMN、PanIN及PDAC组织中均呈阳性表达.SOX9蛋白表达水平与PDAC肿瘤浸润深度、淋巴结转移呈正相关.SOX9蛋白高表达PDAC病人较低表达者预后差.体外实验免疫荧光染色及qRT-PCR结果显示,在低分化胰腺癌细胞株PANC-1,SOX9阳性细胞比率及SOX9 mRNA表达水平明显高于高分化细胞株CA-PAN-2及中分化细胞株BxPC-3.结论 在PDAC中SOX9表达上调,与肿瘤进展及不良的预后相关,SOX9可能作为评估PDAC病人预后的指标.     

人硫酸酯酶1转染对胰腺癌细胞膜结构及对细胞生物学行为的影响

目的检测人硫酸酯酶1在胰腺癌细胞株中的表达水平,及转染后对胰腺癌细胞膜的结构及生长增殖能力的影响。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测7株胰腺株硫酸酯酶1mRNA的表达水平。采用脂质体Lipofectamine方法对Panc-1细胞进行硫酸酯酶1基因转染。Western blot检测转染前后Panc-1细胞硫酸酯酶1蛋白表达。共聚焦显微镜检测细胞膜表面硫酸肝素蛋白多糖（HSPG）结构的变化,应用噻唑蓝（MTT）比色分析法测定胰腺癌细胞的生长增殖能力,并检测转染前后的胰腺癌细胞对3种化疗药物（5-氟尿嘧啶、吉西他滨及放线菌素D）敏感性的影响。结果7株人胰腺癌细胞株中3株硫酸酯酶1mRNA呈高表达,其余4株低表达或无表达。硫酸酯酶1稳定转染后,Panc-1细胞稳定表达硫酸酯酶1蛋白成分。转染后细胞膜表面HSPG结构明显改变,并且硫酸酯酶1表达细胞增殖速度减慢,转染组细胞倍增时间为（68．2±4．3）h,明显慢于对照组（50．3±3．2）h,P〈0．05。转染后的胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性并无明显改变。结论人硫酸酯酶1的表达通过影响细胞膜表面HSPG的结构,影响胰腺癌细胞的生长增殖能力,可能作为胰腺癌基因治疗的靶点。     

PPARγ激动剂对成人正常皮肤成纤维细胞转分化的作用

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导成纤维细胞转分化的影响,探讨其抗瘢痕纤维化的潜在作用。方法：体外培养成人正常皮肤成纤维细胞,利用免疫荧光细胞化学法观察、分析PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2（15d-PGJ2）及其激动剂曲格列酮对TGF-β1诱导的α平滑肌动蛋白（α-SMA）表达的影响,利用Western blot、实时荧光RT-PCR技术检测PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的α-SMA蛋白及mRNA水平的影响。结果：TGF-β1能显著增加成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞;与TGF-β1诱导组相比,10μM曲格列酮、15d-PGJ2预处理组的α-SMA表达量显著减少（P〈0.01）,抑制效应分别为31%、57%;预处理组的α-SMA mRNA水平显著下降（P〈0.01）。结论：PPARγ激动剂能抑制TGF-β1诱导的成人正常皮肤成纤维细胞的转分化的效应,具有抗皮肤瘢痕化、挛缩的潜在作用。     

TRAIL受体在胰腺癌中的表达及意义

目的:研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体在胰腺癌中的表达及意义。方法:应用半定量RT-PCR,检测TRAILR mRNA在胰腺癌组织,正常胰腺组织及胰腺癌细胞系ASPC-1、Can-pan-2中的表达。结果:死亡受体DR4、DR5在所有胰腺癌组织、正常胰腺组织及胰腺癌细胞系中均有表达,诱骗受体DcR1、DcR2在所有正常胰腺组织及细胞系中均有表达。死亡受体DR4、DR5在胰腺癌组织中有较高的表达,而在正常胰腺组织中呈中低水平表达(P<0.01)。胰腺癌细胞系中死亡受体DR4、DR5呈高水平表达,而诱骗受体DcR1、DcR2仅呈中低水平表达。结论:TRAIL受体在胰腺癌普遍表达,并存在受体类型的表达差异;死亡受体在胰腺癌中高表达,可能在TRAIL诱导胰腺癌细胞凋亡的机制中发挥重要的作用。     

PTEN基因在过氧化物酶体增殖物激活受体γ调节肝癌细胞生长中的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）在肝癌细胞生长中的调节作用,以及PTEN和磷酸化蛋白激酶B（pAkt）在该过程中的变化,进一步揭示PPARγ调节肝癌细胞生长的机理。方法培养SMMC-7721肝癌细胞,经不同浓度的PPARγ配体15-脱氧-前列腺素J2（15-d-PGJ2）或匹格列酮（pioglitazone）作用不同时间后,用MTT法测定细胞活力,用流式细胞仪进行细胞周期分析,用RT-PCR检测细胞PTEN mRNA的表达,用Western blot检测细胞PTEN和pAkt蛋白的表达。结果15-d-PGJ2和pioglitazone对肝癌细胞的增殖均具有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,均能增加G0/G1期细胞的比例,减少S期细胞的比例,增加SMMC-7721细胞PTEN mRNA和蛋白的表达,减少pAkt蛋白的表达。结论PPARγ的配体能够呈时间和剂量依赖性地抑制肝癌细胞的增殖,其机理可能是部分通过上调PTEN的表达而实现的。     

三苯氧胺对人胰腺癌细胞抑制作用机制的研究

目的探讨三苯氧胺（TAM）对人胰腺癌细胞的抑制作用机制。方法分别采用MTT比色分析法、流式细胞仪及RT-PCR技术检测TAM对人胰腺癌细胞株（Capan-Ⅱ，SW14990）和乳腺癌细胞株（T47D）中的细胞增殖、p53蛋白表达及p53mRNA的影响。结果高剂量的TAM对胁阳性的Capan-Ⅱ细胞有抑制作用，引起Capan-Ⅱ细胞p53蛋白表达降低。结论高剂量的TAM对ERa阳性的Capan-Ⅱ细胞有抑制作用，可能与降低p53表达有关。     

TRAIL受体在胰腺癌中的表达

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）受体在胰腺癌中的表达及意义。方法 应用半定量RT～PCR法检测TRAIL受体（死亡受体DR4、DR5和诱骗受体DcR1、DcR2）mRNA在胰腺癌组织及正常胰腺组织中的表达。结果 死亡受体DR4和DR5在所有胰腺癌组织和正常胰腺组织中均有表达，且在胰腺癌组织中的表达明显强于在正常胰腺组织中的表达（P〈0．01）。诱骗受体DcR1和DcR2在所有正常胰腺组织中均有表达，而在胰腺癌组织中仅有18例表达DcR1，有20例表达DcR2；诱骗受体DcR1和DcR2的表达水平在胰腺癌和正常胰腺组织中差异无统计学意义（P〉0．05）。胰腺癌组织中DR5的表达与肿瘤的分化程度和临床分期有关，分化程度越低，DR5的表达量越低，Ⅲ、Ⅳ期肿瘤DR5的表达显著低于Ⅰ、Ⅱ期（P〈0．05）。DR4、DcR1及DcR2在胰腺癌组织中的表达与肿瘤的分化程度和临床分期无关（P〉0．05）。结论 ①胰腺癌组织中普遍存在TRAIL受体的表达，并存在受体类型的表达差异，TRAIL基因受体在胰腺癌凋亡的调控机理中可能发挥重要作用。②胰腺癌组织中DR5的表达与肿瘤的分化程度及恶性程度相关；死亡受体DR4及诱骗受体DcR1和DcR2不能作为判断胰腺癌分化程度及恶性程度的指标。     

生长激素受体在胰腺癌-慢性胰腺炎导管细胞的表达及生长激素对移植瘤PCNA的影响

目的观察生长激素受体（GHR）在胰腺癌一慢性胰腺炎导管细胞的表达及生长激素（GH）对移植瘤增殖细胞核抗原（PCNA）的影响。方法免疫组化法检测GHR在胰腺癌细胞（Cap-l、Pane-l、Mia、Colo、SW-1990、Aspc、P3）、移植瘤及人胰腺癌切除标本的表达，并以人混合淋巴细胞、人正常胰腺及慢性胰腺炎导管细胞作对照；裸鼠成瘤后随机分为注射GH的实验组（GH组，按剂量及时间分为4mg2周、2mg2周、2mg3周3个亚组）及对照组（NS组），于最后一次注药后切除肿瘤，用免疫组化法观察GH对肿瘤细胞中PCNA表达的影响。结果GHR在各胰腺癌细胞株上有不同程度的表达；在人胰腺癌及慢性胰腺炎切除标本，GHR在导管细胞虽呈阳性表达，但与人正常胰腺的强表达形成对照，阳性率低于后者（P〈0.05）；胰腺癌细胞PCNA阳性率在组间无差别。结论GHR在胰腺癌、慢性胰腺炎导管细胞有一定程度的表达，但表达强度弱于正常胰腺，GH不改变肿瘤细胞中PCNA的表达。     

选择性激活PPARγ可抑制胰腺癌浸润和减少组织纤维蛋白溶酶原激活剂的表达

癌细胞的浸润过程需经过几个步骤,首先肿瘤细胞必须降解基底膜,而后穿越以至侵犯局部结构和转移。胰腺癌细胞分泌许多可以降解基底膜成分的蛋白酶,包括尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂、基质金属蛋白酶(MMP) 9和组织纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)。过氧化物酶增生剂活化受体(PPAR)是配基活化转录因子的核激素受体超家族,有α、β、γ三种同源体。PPARγ配基引发脂肪肉瘤细胞分化,且有各种抗肿瘤作用。在胰腺癌细胞已发现PPARγ配基1 5去氧前列腺素J2 ,( 1 5d PGJ2 )能引起细胞凋亡。实验研究目的在于确定PPARγ配基对胰腺癌浸润的抑制作…     

胰腺癌中雌激素受体和雌激素诱导基因的表达

有关胰腺癌表达雌激素受体的问题迄未阐明，作者采用RNA印迹法、原位杂交和免疫组织化学观察正常人体和胰腺癌组织的雌激素受体表达．同时也测定了雌激素诱导蛋白、孕激素受体、pS_2和ERD_5，结果如下：1二雌激素受体RNA印迹分析测定胰腺癌、胰腺炎和正常胰腺标本，可见6．2kb转录物，其大小与MCF7乳腺癌细胞所表达的相同。经激光密度计读数校正后在癌肿和正常组织中的雌激素受体mRNA表达无数量上差异。雌激素受体的原位杂交和免疫组化技术均未能定位雌激素受体表达。胰腺癌的平均雌激素受体值为0．5fmol／mg，而正常胰腺组织则为1．…     

PPARα激动剂非诺贝特在高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖中的作用

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）激动剂非诺贝特在高糖诱导的肾小球系膜细胞中的作用,探讨其对糖尿病肾脏疾病的可能保护作用。方法将。肾小球系膜细胞分为6组：正常对照组（5mmol／L葡萄糖）、高糖组（40mmol／L葡萄糖）和高糖＋不同浓度PPARα激动剂组（FN,40mmol／L葡萄糖加1、10、50、100μmol／L非诺贝特）。应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot检测各组肾小球系膜细胞PPARα的表达;通过转染含PPAR反应元件的p4XPPRE-luc重组质粒,双荧光素酶分析法检测体外不同组细胞PPARα活性的改变;MTT法检测细胞增殖;Westernblot检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅳ型胶原蛋白的表达情况。结果高糖刺激组系膜细胞PPARα mRNA及蛋白表达均上调;非诺贝特组上述表达水平则显著升高,且呈浓度依耐性;正常。肾小球系膜细胞弱表达PPARα受体,高糖组PPARα活性无显著升高,而合适浓度的非诺贝特干预后PPARα受体活性明显增加;高糖组Q-SMA及Ⅳ型胶原蛋白表达明显上调,非诺贝特干预后上述指标明显下调。结论非诺贝特可通过抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质蛋白的表达而对糖尿病肾脏疾病起保护作用     

胃癌组织中过氧化物酶增殖因子活化受体与VEGF mRNA表达的相关性和意义

目的研究过氧化物酶增殖因子活化受体γ（PPARγ）和血管内皮生长因子（VEGF）在胃癌组织中表达的相关性及其意义。方法采用RT-PCR方法检测36例胃癌手术标本中PPARγ和VEGF mRNA的表达,同时选取相应的肿瘤以远正常胃黏膜作为对照。结果PPARγ mRNA在胃癌中的表达阳性率和量均高于正常胃黏膜（χ^2=8.574,P=0.002;t=46.54,P=0.000）;VEGF mRNA在胃癌中的表达阳性率和量也均高于正常胃黏膜（χ^2=8.229,P=0.004;t=45.32,P=0.000）。PPARγmRNA表达与VEGFmRNA表达呈正相关关系（r=0.429,P=0.009）;PPARγ mRNA表达与胃癌淋巴结转移有关（P=0.002）,与临床病理TNM分期有关（P=0.042）;VEGF mRNA表达也与胃癌淋巴结转移有关（P=0.037）,与临床病理TNM分期有关（P=0.045）。结论PPARγ和VEGF在胃癌进展和转移过程中可能发挥重要作用,联合检测PPARγ和VEGF表达对胃癌患者病情判断和预后评价有一定的临床意义。     

人垂体瘤转化基因在非小细胞肺癌组织中的表达

目的 从mRNA和蛋白质水平探讨人垂体瘤转化基因（hPTTG）表达和非小细胞肺癌（NSCLC）的关系，为肺癌基因诊断和基因治疗的研究提供理论依据。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测38例肺癌组织和癌旁正常肺组织中hPTTG mRNA的表达，再应用免疫组织化学方法和Western blot检测肺癌组织中hPTTG蛋白的表达，同时对实验对象进行随访资料生存分析，绘制生存率曲线，探讨与肺癌患者生存时间的关系。结果 RT-PCR显示肺癌组织中hPTTG mRNA表达明显高于癌旁正常肺组织（P〈0．05），不同类型和不同分化程度肺癌组织中hPTTG mRNA水平差异有统计学意义（P〈0．05），Ⅲ期肺癌组织中hPTTG mRNA表达明显高于Ⅰ期＋Ⅱ期（P〈0．05）；免疫组织化学显示肺癌组织中hPTTG蛋白表达明显高于癌旁正常肺组织（P〈0．05）；腺癌组织中hPTTG蛋白表达高于鳞癌组织；Western blot显示肺癌组织中hPTTG蛋白表达明显高于癌旁正常肺组织；生存分析方法显示hPTTG mRNA高表达者生存时间短于低／无表达者（P〈0．05，n=36）；用噻唑蓝（MTT）比色法观察生长曲线检测数据表明hPTTG的反义RNA表达载体转染组细胞的增殖明显比对照组细胞和空载体转染组细胞缓慢。结论 hPTTG表达增加与NSCLC发生、发展、浸润及转移有关，可作为判断NSCLC生物学行为的参考指标；hPTTG的反义RNA表达载体对SPC-A1肺癌细胞株的生长具有一定的抑制作用。