核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的研究核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响,并分析其潜在凋亡机制。方法不同浓度RPL41(0μM、20μM、50μM、100μM)处理A2780细胞,分为对照组和RPL41低、中、高剂量组。采用MTT法检测人卵巢癌A2780细胞活力变化;采用Hoechst染色法检测A2780细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测A2780细胞周期;采用蛋白印记(Western Blot)法检测A2780细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;采用RNA干扰技术沉默RPL41,分为NC组和si RPL41组,Western Blot检测沉默RPL41后A2780细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果与对照组相比,糖体蛋白RPL41可以抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖,具有剂量依赖性(P 0. 05);RPL41剂量依赖性引起A2780细胞凋亡(P 0. 05); RPL41可以显著上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达,呈浓度依赖性(P 0. 05);沉默RPL41表达后,A2780细胞中Bcl-2的表达较NC组显著上升,Bax的表达较NC组显著下降(P 0. 05)。结论 RPL41可呈剂量依赖性抑制卵巢癌A2780细胞的增殖,并可能通过上调Bax表达、下调Bcl-2表达,参与细胞程序化死亡机制,导致A2780细胞凋亡。     

沉默ATF5对卵巢癌裸鼠成瘤的影响

目的研究沉默人转录激活因子5（ATF5）后对卵巢癌SKOV-3细胞体外增殖、凋亡及体内成瘤的影响,探讨人类卵巢癌基因治疗的新途径。方法将慢病毒携带的小干扰RNA感染卵巢癌SKOV-3细胞（实验组）,空载体转染的卵巢癌SKOV-3细胞（空载体对照组）和卵巢癌SKOV-3细胞（空白对照组）进行对照,对比观察细胞的生长状态;MTT法检测细胞的增殖生长情况;罗氏凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况;分别于裸鼠皮下接种3组卵巢癌SKOV-3细胞,观察各组裸鼠的存活状态、种植瘤生长情况;RT-PCR检测瘤组织中ATF5mRNA的表达;Western-Blot方法检测瘤组织中ATF5蛋白的表达;苏木素-伊红染色（HE染色）观察瘤组织生物学形态变化。结果经转染ATF5基因的小干扰RNA后,在相同培养时间内3组细胞的增殖和生物学形态没有明显差异,但实验组细胞凋亡数量较其他两组明显增多。皮下接种成瘤后,3组裸鼠的成瘤率没有明显区别,实验组与空载体对照组和空白对照组相比,肿瘤成瘤时间晚,生长缓慢;移植瘤ATF5mRNA表达及蛋白表达降低;细胞分裂象明显减少,凋亡现象明显。结论沉默ATF5对人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生长有抑制作用,这可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。     

ORP-150基因沉默对SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默ORP-150基因对体外培养卵巢癌细胞SKOV-3的增殖、转移及侵袭的影响并初步探讨其可能作用机制。方法:运用慢病毒包装sh RNA方法沉默SKOV-3细胞的ORP-150基因;研究分为3组:实验组(ORP-150 sh RNA)、阴性对照组(NC sh RNA)和空白对照组(CON);采用q RT-PCR和Wester n印迹法检测基因敲减效率,CCK8法、克隆形成试验检测OR P-150沉默对细胞增殖能力的影响,划痕试验、Transwell试验检测SKOV-3细胞侵袭迁移能力的变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western印迹法探讨ORP-150基因敲减后影响细胞表型改变的作用机制。结果:沉默ORP-1 5 0基因可以抑制卵巢癌细胞的增殖能力、克隆形成能力以及跨膜转移扩散能力(P0.0 5),但对细胞的侵袭能力无明显影响(P0.05);敲减ORP-150基因后卵巢癌细胞凋亡明显增加(P0.05);敲减ORP-150基因后的卵巢癌细胞可能通过Wnt信号通路及Caspase级联反应影响细胞的修复,最终抑制细胞增殖,促进凋亡发生。结论:沉默ORP-150基因可以抑制卵巢癌细胞SKOV-3的增殖和转移,同时促进凋亡发生。这种细胞表型的改变可能是通过下调Wnt信号通路中β-catenin,同时的表达,以及抑制Caspase级联反应从而下调c-myc,cyclin D1和caspase-3蛋白的表达来实现,ORP-150基因沉默可能是卵巢癌治疗的新靶点。     

沉默Caveolin-1基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨沉默 Caveolin-1（Cav-1）基因对人膀胱癌细胞株5637增殖和凋亡的影响。方法通过siRNA转染人膀胱癌细胞株5637（沉默组）,以转染 FAM-siRNA为阴性对照组,未转染细胞为正常对照组。Re-al-time PCR法检测Cav-1基因沉默的效率,CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各种细胞的凋亡情况。结果 siRNA转染可显著降低人膀胱癌细胞株5637中 Cav-1 mRNA 的表达水平。沉默组细胞的增强能力明显减低,而细胞凋亡率明显升高（均P＜ 0.05）。结论沉默Cav-1基因可抑制人膀胱癌细胞株5637的细胞增殖并促进细胞凋亡。     

沉默环磷腺苷效应元件结合蛋白1对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的：探究环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein, CREB1）基因沉默对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法：针对人CREB1的基因序列设计并构建2条短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA），采用慢病毒转染shRNA至人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞系抑制其CREB1的表达。将实验组分为shCREB1#1组和shCREB1#2组，同时将shSCR空载质粒转染至上述细胞系作为阴性对照组。采用实时定量PCR和Western-blot法检测转染效率；CCK-8法检测细胞的增殖能力；集落形成实验检测细胞的集落形成能力；流式细胞术检测细胞周期和凋亡率；细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力；Western-blot法检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达。结果： 在MCF-7和MDA-MB-231细胞中，相较于shSCR组，shCREB1#1和shCREB1#2组中CREB1基因的mRNA和蛋白表达水平均下降（P＜0.001）。沉默CREB1后，MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力减弱且细胞的凋亡率升高（P＜0.05）。此外，沉默CREB1可使细胞周期蛋白CDK2、CDK4、CDK6、Cyclin D1以及抗凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达水平下调而促凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达水平上调。 结论：沉默CREB1可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并诱导细胞凋亡。     

沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的探讨沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法将卵巢癌细胞分为Blank组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(siRNA-NC)组和携带wee1基因片段(siRNA-wee1)组,利用siRNA技术在卵巢癌细胞中沉默wee1基因,采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法(WB)检测3组卵巢癌细胞wee1 RNA及蛋白表达水平,采用细胞划痕试验、Transwell试验观察卵巢癌细胞平板集落形成数及卵巢癌细胞迁移、侵袭能力,采用WB观察卵巢癌细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)的表达情况。结果siRNA-wee1组卵巢癌细胞wee1 RNA和蛋白表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05),卵巢癌细胞集落形成数少于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),卵巢癌细胞迁移、侵袭能力低于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-catenin、Cyclin-D1和MMP-7表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05)。结论沉默wee1基因可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,进而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

沉默缺氧诱导因子-1α对卵巢癌化疗敏感性的影响

目的观察沉默缺氧诱导因子HIF-1α对卵巢癌细胞化疗敏感性的相关影响并探讨其机理。方法构建HIF-1α基因短发夹RNA真核表达质粒,并转染卵巢癌细胞SKOV3（人卵巢浆液性囊腺癌细胞株）。实验可分为空白组,非特异对照组（转染pNonspecific-siRNA,即SKOV3NS）,目的siRNA组（转染pHIF-siRNA,即SKOV3siRNA）3组,用RT-PCR及Western Blot法分别检测各组HIF-1α基因的mRNA和蛋白的表达水平。细胞经过20μmol/L顺铂作用后,用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术（FCS）检测细胞凋亡率。结果 SKOV3siRNA转染组HIF-1α基因在mRNA水平和蛋白水平表达均明显降低,SKOV3siRNA组肿瘤细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均明显增高（P〈0.05）。结论 RNA干扰技术沉默HIF-1α能够有效地抑制卵巢癌SKOV3细胞HIF-1α基因表达,增强其对化疗药物顺铂的敏感性。     

Evn一50增强人卵巢癌顺铂耐药株COCl／DDP对顺铂敏感性的研究

目的 观察黄荆子乙酸乙酯提取物（Evn-50）和顺铂（DDP）在体外对人卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP凋亡的影响,探讨Evn-50提高人卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP对DDP敏感性的机制.方法 运用MTT、FCM、Hoechst33258染色法、Western blot等方法,观察Evn-50增强DDP抑制COC1/DDP细胞增殖作用和此过程中COC1/DDP细胞凋亡,caspase-3蛋白、增殖细胞核抗原（PCNA）及其泛素化修饰蛋白（Ubi-PCNA）表达的改变.结果 Evn-50不仅增强DDP对COC1/DDP细胞的抑制增殖作用,也增强DDP对COC1/DDP细胞的凋亡作用,同时caspase-3蛋白表达增加（P〈0.05）;而Evn-50（20 μg/ml）组与空白对照组相比PCNA蛋白表达下调（P〈0.05）,Evn-50与DDP合用组与DDP单药组均出现了Ubi-PCNA蛋白表达,Evn-50与DDP合用组与DDP组比较,Ubi-PCNA蛋白表达下调（P〈0.05）.结论 Evn-50可能通过减少PCNA表达,使DDP诱导的PCNA泛素化水平下降,从而逆转DDP耐药,最终通过激活caspase-3蛋白高表达,启动caspase级联反应,增强DDP对人卵巢癌DDP耐药细胞株COC1/DDP的凋亡作用.     

Livin基因对口腔鳞癌细胞TCA8113增殖及凋亡调控作用的研究

目的研究Livin基因在口腔鳞癌细胞TCA8113凋亡和增殖中的作用。方法通过建立高表达的Livin基因、RNA的干扰载体和脂质体转染的TCA8113细胞,采用Western blot和荧光定量PCR进行转染mRNA及蛋白表达变化的验证。细胞经Annexin V/PI染色,流式细胞仪检测其凋亡;四甲基偶氮唑蓝(MTT)分析转染后细胞增殖。结果细胞转染pcDNA3.1-Livin后高表达,而pSuper-shLivin转染后Livin基因被有效沉默。MTT增殖检测结果表明,高表达的Livin基因能促进TCA8113细胞增殖,而沉默的Livin基因能抑制细胞的增殖。细胞凋亡检测结果表明,高表达的Livin基因能抑制细胞凋亡,而沉默的Livin基因促进细胞凋亡。转染细胞时与顺铂同时使用后发现沉默的Livin基因能增强顺铂诱导细胞凋亡的能力。结论本研究证实,Livin基因的高表达和沉默能有效调控口腔鳞癌细胞TCA8113系的凋亡和增殖。顺铂与沉默的LIVIN基因联合使用后,诱导细胞凋亡的能力显著增强。     

茶多酚联合顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3生长的影响及机制

目的观察茶多酚(TP)、顺铂(DDP)及二者联合对人卵巢癌细胞SKOV3增殖及凋亡的影响,初步探讨二者联合对SKOV3细胞生长影响的机制。方法人卵巢癌细胞SKOV3经低毒剂量TP、DDP单独或联合作用后,MTT法检测细胞增殖情况,DAPI核染色法荧光显微镜观察细胞凋亡形态变化,AnnexinV-FITC双染流式细胞术分析细胞凋亡,Westernblot方法检测细胞中Akt及p-Akt的表达。结果低毒剂量TP单药组、DDP单药组与联合用药组对细胞的增殖抑制率分别为(11.47±2.07)%、(32.26±4.85)%、(52.62±3.23)%,联合用药组的细胞增殖抑制率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义(P=0.000);荧光显微镜下可见低毒剂量TP单药组的细胞核形态及染色与阴性对照组无明显差异,联合用药组细胞核比DDP单药组着色更重,核浓缩、核碎裂现象更加明显,呈现典型的细胞凋亡征象;低毒剂量的TP对细胞的凋亡无明显影响,联合用药组的凋亡率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义(P=0.000);各用药组细胞中总的Akt蛋白表达无明显变化,p-Akt蛋白表达降低,其中联合用药组细胞中p-Akt蛋白表达降低最明显,与对照组及单药组比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 TP与DDP联合后可显著增强DDP的抑制细胞增殖、促细胞凋亡效应,可能是通过抑制Akt蛋白的磷酸化来实现的。     

DOCK1通过AMPK/mTOR通路对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的调控机制研究

目的 探讨胞质分裂作用因子1(dedicator of cytokinesis 1,DOCK1)在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响及相关机制。方法 选取MM患者骨髓组织及人MM细胞株U266和RPMI 8266进行研究,采用实时荧光定量PCR(real time-quantitative PCR,RT-qPCR)法检测MM骨髓组织及细胞中DOCK1相对表达;构建敲低DOCK1表达细胞系,采用CCK-8法和流式细胞术检测DOCK1对MM细胞增殖与凋亡的影响;Western blot实验检测细胞增殖相关蛋白（c-Myc,cyclin D1）、凋亡相关蛋白（Bax,Bcl-2）、自噬相关蛋白（LC3-II/LC3-I,P62）及AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果 LV-DOCK1-shRNA2组的U266和RPMI8266细胞增殖率在24,48和72h均显著低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义（FU266=21.130～100.108,FRPMI8266=35.067～95.677,均P<0.001）...     

4种烤瓷冠基底合金浸提液影响人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax的表达

背景:研究显示,纯钛材料对人牙龈成纤维细胞的影响不明显,而镍铬合金、含钛镍铬合金明显影响了细胞的炎性表达。目的:比较4种烤瓷冠基底合金对人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax表达的影响。方法:用组织块法分离培养人牙龈成纤维细胞,实验组分别用4种烤瓷冠基底合金浸提液加入人牙龈成纤维细胞培养液中,空白对照组用含体积分数10%小牛血清的DMEM培养液,Western-blot法检测人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax表达的改变。结果与结论:金合金组对Bcl-2和Bax表达的影响接近空白对照组,纯钛组和钴铬合金组对Bcl-2和Bax表达的影响较小,镍铬合金组对Bcl-2和Bax表达的影响最大,与其他各组相比差异有显著性意义(P<0.05)。提示镍铬合金可通过影响Bcl-2与Bax的表达水平,抑制人牙龈成纤维细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

Bcl-2和Bax的表达与乳腺癌转移及预后的关系

目的　探讨Bcl 2和Bax基因在乳腺癌中的表达及与乳腺癌淋巴结转移、预后的关系。方法　应用SP免疫组化染色方法 ,检测 4 0例乳腺癌组织中Bcl 2、Bax的表达情况。结果　无淋巴结转移组Bcl 2阳性表达率与淋巴结转移组有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,10年以上存活组Bcl 2阳性表达率与 10年以下存活组有显著差异 (P <0 .0 1)。无淋巴结转移组Bax阳性表达率与淋巴结转移组有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,10年以上存活组Bax阳性表达率与 10年以下存活组有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　Bcl 2和Bax表达与乳腺癌淋巴结转移、预后关系密切 ,Bcl 2提示高表达、Bax低表达的乳腺癌患者有低的转移率及好的预后。     

CXCL12/CXCR4轴通过诱导miR-125b促进肝癌细胞肿瘤干性和5-氟尿嘧啶抵抗的机制

目的探究趋化因子CXCL12/趋化因子受体CXCR4轴通过诱导miR-125b促进肝癌细胞肿瘤干性和5-氟尿嘧啶(5-FU)抵抗的机制。方法选择人肝细胞癌细胞系Huh7,分为7组:对照组(正常培养的肝细胞癌系),CXCR4转染组(CXCR4模拟转染超表达),CXCR4沉默组(CXCR4低表达或者不表达),miR-125b转染组(miR-125b超表达),CXCL12+125b抑制剂组(CXCL12超表达的+抑制miR-125b的表达),5-FU处理组(10μg/L的5-FU处理细胞),5-FU+miR-125b转染组(10μg/L的5-FU处理+miR-125b超表达的细胞)。聚合酶链式反应分析miR-125b mRNA表达;蛋白质印迹法检测E-钙粘蛋白、波形蛋白、CXCR4蛋白、Caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白表达;Transwell分析各组细胞中的细胞迁移、侵袭测定;MTT检测细胞存活力;细胞计数试剂盒8(CCK-8)评估细胞增殖。结果与对照组相比,CXCR4转染组miR-125b mRNA、波形蛋白、CXCR4的蛋白表达显著升高,E黏着蛋白表达显著降低(P<0.05);与CXCR4转染组相比,CXCR4沉默组miR-125b mRNA、波形蛋白、CXCR4的蛋白表达显著降低,E黏着蛋白表达显著升高(P<0.05)。与对照组相比,miR-125b转染组细胞迁移、侵袭数量、细胞活力均显著增加,细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与miR-125b转染组相比,CXCL12+125b抑制剂组,细胞迁移、侵袭数量、细胞活均显著减少,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与对照组相比,5-FU处理组细胞增殖率、Bcl-2表达显著降低,caspase-3、Bax的蛋白表达显著升高(P<0.05),与5-FU处理组相比,5-FU+miR-125b转染组细胞增殖率、Bcl-2表达显著升高,caspase-3、Bax的蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论MiR-125b通过激活CXCL12/CXCR4轴而被上调,miR-125b增强CXCR4的表达,这在触发肿瘤侵袭和进展中形成了正反馈回路。这些结果为miR-125b在肝癌进程和化学抗性的发展中的作用提供了新的线索,为肝癌的治疗提供了潜在的治疗靶点。     

冠心病猝死者心肌细胞凋亡与Bcl-2和Bax 基因蛋白表达及其临床意义

目的：探讨Bcl-2和Bax基因蛋白在冠心病心脏性猝死者心肌细胞凋亡中的作用，为冠心病生物治疗提供理论依据。方法；用凋亡原位末端标记检测（TUNEL）法检测16例冠心病心性猝死者和10例心脏正常其他原因死亡者心肌细胞凋亡，用免疫组化法检测Bcl-2和Bax基因蛋白在心肌细胞中表达水平，并探讨其相互关系。结果：（1）冠心病心性猝死者梗死区心肌细胞凋亡数与Bax蛋白表达阳性细胞数均明显高于正常对照组（P〈0．05）；且于梗死区心肌细胞凋亡数及冠状动脉病变支数成明显正相关性。Bcl-2基因蛋白表达则与之相反，梗死区心肌细胞Bcl-2基因蛋白表达明显低于对照组（P〈0．05），且与梗死心区肌细胞凋亡数、冠状动脉病变支数成明显的负相关性。结论：冠心病心性猝死者梗死心肌细胞存在明显的凋亡现象，且受Bax蛋白与Bcl-2基因蛋白下调影响，Bax蛋白与Bcl-2蛋白共同调节心肌细胞凋亡，诱导心肌细胞表达Bcl-2将可能成为探索心肌生物治疗措施的新途径。     

RNA干扰核糖核苷酸还原酶M2对耐药卵巢癌细胞凋亡及侵袭性的影响

目的探讨RNA干扰核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)对耐药卵巢癌细胞凋亡及侵袭性的影响。方法将RRM2基因的特异性小干扰(siRNA)转染SKOV3/DDP设为干扰组,SKOV3/DDP细胞、SKOV3/DDP-RRM2非特异性阴性细胞设为空白组、阴性组。检测细胞增殖抑制率,计算RI、耐药转染率,荧光PCR技术检测RRM2基因mRNA表达,并分析siRNA转染对SKOV3/DDP耐药指数、RRM2蛋白的影响,采用Transwell观察SKOV3/DDP细胞侵袭能力。结果空白组、阴性组及干扰组转染率均90%。DDP对SKOV3/DDP细胞属低度耐药,吉西他滨对SKOV3/DDP细胞仍较为敏感。DDP、吉西他滨对干扰组、阴性组、空白组的DDP对细胞的半数抑制浓度(IC50)值比较,差异有统计学意义(P0.05),DDP、吉西他滨对干扰组细胞的IC50值显著低于阴性组、空白组(P0.05)。SKOV3/DDP细胞、SKOV3细胞RRM2蛋白的相对表达量比较,差异有统计学意义(P0.05),且转染Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组相对表达量均显著低于阴性组、空白组,其中以转染Ⅰ组细胞的RRM2蛋白相对表达量下降最显著(P0.05)。干扰组细胞凋亡率显著高于空白组、阴性组,穿膜细胞数显著低于空白组、阴性组(P0.05)。结论 siRNA可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的增殖与侵袭性,增加耐药细胞的药物敏感性,尤其是促进DDP诱导的耐药细胞凋亡。     

MiRNA-326抑制人椎间盘退变髓核细胞活力和凋亡的机制

目的:探讨过表达miRNA-326对椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)髓核(nucleus pulposus,NP)细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:构建miRNA-326慢病毒表达载体,在293T细胞中获得重组慢病毒,经感染NP细胞得到稳定过表达细胞系GV369-miRNA-326-NP,同时设置空载体GV369-NP组与空白组。荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白[绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)]的表达,实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法检测miRNA-326的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光素酶报告基因分析验证miRNA-326与FasL的靶向关系,蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白FADD,caspase-3,Bcl-2及Bax的表达,使用试剂盒检测细胞线粒体膜电势的变化情况。结果:荧光显微镜下示,经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白组未见绿色荧光。与空白组相比,GV369-miRNA-326-NP组中miRNA-326的表达水平、Bcl-2表达水平和线粒体膜电位明显升高,而细胞凋亡率,FADD,caspase-3和Bax的表达水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);GV369-NP组与空白组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。荧光素酶报告基因分析证实miRNA-326与FasL存在靶向关系。结论:MiRNA-326可抑制IDD NP细胞发生凋亡,既可通过靶向性调控外源性FasL/Fas通路参与caspase-3和FADD介导的细胞凋亡,也可通过线粒体途径对细胞凋亡发挥作用。     

基于 GEO数据筛选卵巢癌细胞对紫杉醇耐药基因及相关分子机制与治疗药物实验探讨

目的　基于 GEO数据筛选卵巢癌患者对紫杉醇耐药的基因分子机制和治疗药物并进行实验验证。方法　利用 GEO数据库下载卵巢癌紫杉醇耐药基因芯片 GSE28784和 GSE15372,通过 R和 Bioconductor筛选共同差异表达基因并进行 GO和 KEGG分析。分析卵巢癌紫杉醇耐药的基因分子机制,采用 ConnectivityMap筛选紫杉醇耐药卵巢癌患者的治疗药物并进行验证。结果　GSE15372和 GSE28784数据集筛选共同差异表达基因,其中上调 143个,下调 83个。 GO分析显示,共同差异表达基因参与 DNA复制和代谢过程、胆固醇代谢、染色体细胞组分、辅酶结合及腺嘌呤核苷酸结合等分子功能。 KEGG结果显示,共同差异表达基因参与细胞周期、蛋白酶体及萜类化合物骨架生物合成等肿瘤信号通路。与紫杉醇耐药卵巢癌相关的关键基因有 CDK2,MCM4,hMSH2,JUN及 AREG。根据 ConnectivityMap模块分析结果,确定潜在候选药物为血根碱。 1.0,3.0及 5.0 μmol/L血根碱组、紫杉醇组及空白对照组的卵巢癌细胞增殖率和侵袭数目比较,差异具有统计学意义 (F=189.265,95.127,均 P<0.001)。不同浓度血根碱组的卵巢癌细胞增殖率和侵袭数目显著低于紫杉醇组和空白对照组,差异均有统计学意义 (t=2.341~8.720,均 P<0.05)。紫杉醇组与空白对照组的卵巢癌细胞增殖率和侵袭数目比较差异均无统计学意义 (t=0.543,0.389,均 P>0.05)。不同浓度血根碱组组间卵巢癌细胞增殖率和侵袭数目比较,差异具有统计学意义 (t=2.380~5.677,均 P<0.05)。结论　卵巢癌紫杉醇耐药与 CDK2, MCM4,hMSH2,JUN及 AREG关键基因有关,血根碱能有效抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭,有望成为紫杉醇耐药卵巢癌患者的治疗新药。     

间充质干细胞条件培养基对HPV18型阳性人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的观察人脐带间充质干细胞条件培养基(MSC-CM)对HPV18型阳性人子宫颈癌HeLa细胞(HPV18 HeLa细胞)凋亡相关基因的调控作用,以及对HPV18 HeLa细胞凋亡的影响。方法制备MSC-CM,设置空白组、低剂量组和高剂量组,配制相应浓度分别为0%、20%和60%的MSC-CM处理HPV18 HeLa细胞,使用CCK-8法、克隆形成实验检测细胞活力和克隆形成能力;磷脂结合蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法凋亡染色和流式细胞术检测细胞凋亡的变化;实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因mRNA表达量。结果与空白组相比,在低剂量组或高剂量组的MSC-CM作用下,HPV18 HeLa细胞的生长活性和克隆形成能力均降低,细胞凋亡率升高(P均<0.05),且高剂量组作用效果均比低剂量组明显(P均<0.05)。与空白组相比,HPV18 HeLa细胞在低剂量或高剂量组MSC-CM的作用下,HPV18 HeLa细胞中p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、Bax的mRNA表达量升高,而B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的mRNA表达量降低(P均<0....     

Bcl-2和Bax在胆管癌中的表达及意义

【目的】检测胆管癌中Bcl 2和Bax的表达,以探讨胆管癌的发生、发展规律。【方法】免疫组化ABC 法检测49例肝外胆管癌和10例正常胆管Bcl 2和Bax的表达。【结果】Bcl 2在胆管癌中阳性表达(48.98%)显 著高于正常胆管(10.00%)(P<0.05);高、中分化胆管癌Bcl 2阳性表达显著高于低分化癌(P<0.05);胆管癌 Bax阳性表达(53.06%)与正常胆管(80.00%)相比无统计学意义(P>0.05),正常胆管Bax阳性表达显著高于 Bcl 2阳性表达(P<0.01),而胆管癌中Bcl 2与Bax阳性表达无显著性差异(P>0.05)。【结论】Bcl 2过度表 达对胆管癌的发生可能起促进作用;胆管癌中Bcl 2低表达可能是预后不良的预测指标之一。