lncRNA MEG3对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的探讨lncRNA MEG3对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 RT-PCR检测人肝癌HepG2细胞转染48 h后MEG3的mRNA表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、PCNA、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果与pc DNA3.1组比较,pc DNA3.1-MEG3组MEG3的mRNA表达显著上升,pcDNA3.1-MEG3组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白表达显著上调,ki67、PCNA、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著下调(P0.01)。结论 lncRNA MEG3高表达可抑制肝癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关。     

大鼠缺氧复氧损伤神经元钙敏感受体表达水平及其与神经元凋亡的相关性分析

目的分析缺氧复氧损伤神经元钙敏感受体表达水平及其与神经元凋亡的相关性。方法取新生SD大鼠(出生1 d)脊髓神经元,随机分为A组(正常对照,未进行任何处理)、B组(建立缺氧复氧损伤模型)、C组(缺氧复氧损伤+激动剂GdCl_3)、D组(缺氧复氧损伤+抑制剂NPS-2390)。通过免疫荧光技术对各组大鼠脊髓神经元中钙敏感受体的表达定位进行检测,并用Western blotting法对各组钙敏感受体及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平进行检测,通过激光共聚焦显微镜对细胞内游离钙的变化进行检测,同时用TUNEL法对各组细胞凋亡情况进行检测。结果 B组钙敏感受体和细胞内游离钙的表达水平较A组显著升高(P 0. 01),C组钙敏感受体和细胞内游离钙表达水平较B组显著升高(P 0. 01),D组钙敏感受体和细胞内游离钙表达水平较B组显著下降(P 0. 01)。B组细胞凋亡比率较A组显著升高,C组细胞凋亡比率较B组显著升高,D组细胞凋亡比率较B组显著下降(P 0. 05)。B组凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平较A组显著下降,Bax和Caspase-3的表达水平较A组显著升高(P 0. 05); C组Bcl-2的表达水平较B组显著下降,Bax和Caspase-3的表达水平较B组显著升高(P 0. 05); D组Bcl-2的表达水平较B组显著升高,Bax和Caspase-3的表达水平较B组显著下降(P 0. 05)。结论在大鼠缺氧复氧损伤模型中,钙敏感受体在脊髓神经元中的表达水平升高,细胞内游离钙增多,脊髓神经元细胞凋亡比率升高,凋亡相关蛋白的表达水平升高。     

miR-204-3p靶向CYP2E1介导脂多糖诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的探讨miR-204-3p靶向细胞色素P450家族2亚家族E成员1(CYP2E1)介导脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞炎症反应及细胞凋亡的分子机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,qRT-PCR与Western blot分别检测miR-204-3p、CYP2E1的表达量;实验分组:Con组、LPS组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-204-3p组、LPS+si-NC组、LPS+si-CYP2E1组、LPS+miR-204-3p+pcDNA组、LPS+miR-204-3p+pcDNA-CYP2E1组;ELISA检测IL-6、TNF-α的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-204-3p与CYP2E1的靶向结合关系;Western blot检测Bcl-2、Bax的表达量。结果与Con组比较,LPS组细胞中miR-204-3p的表达水平降低,CYP2E1的表达量升高,IL-6、TNF-α的水平升高,凋亡率和Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-204-3p组IL-6、TNF-α水平降低,凋亡率和Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS+si-NC组比较,LPS+si-CYP2E1组IL-6、TNF-α的水平降低,凋亡率和Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-204-3p能够靶向结合CYP2E1;与LPS+miR-204-3p+pcDNA组比较,LPS+miR-204-3p+pcDNA-CYP2E1组IL-6、TNF-α的水平升高,凋亡率和Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-204-3p过表达可靶向调控CYP2E1的表达从而抑制LPS诱导的肾小管上皮细胞炎症反应及细胞凋亡。     

银杏叶提取物制剂对脑梗死缺血再灌注大鼠氧化应激反应及凋亡因子调节作用

目的探究银杏叶提取物(EGb)制剂对脑梗死缺血再灌注大鼠氧化应激反应及凋亡因子调节作用。方法选取40只6周龄SPF级SD大鼠,采用改良线栓法制作脑缺血再灌注模型(MCAO),分为4组,空白对照(假手术)组、模型组、低浓度银杏叶提取物制剂组(50 mg/kg EGb组)、高浓度银杏叶提取物制剂组(100 mg/kg EGb组)。空白对照组和模型组注射等量的生理盐水,术后1 d静脉注射上述浓度的EGb后连续3 d腹腔注射上述浓度的EGb,1次/d。使用序贯法治疗后,使用mNSS神经功能缺损评分评价大鼠神经功能;取脑组织测定脑梗死面积,计算脑梗死率;检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)含量;使用Westen Bolt检测大鼠Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达水平。结果 mNSS神经功能缺损评分结果显示,模型组评分显著高于空白对照组、低浓度银杏叶提取物制剂组和高浓度银杏叶提取物制剂组,高浓度银杏叶提取物制剂组显著低于低浓度银杏叶提取物制剂组,差异有统计学意义(P 0. 05);相比空白对照组,模型组大鼠脑梗死面积百分比、ROS水平、MAD水平、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高,GPX水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P 0. 05);相比模型组,银杏叶提取物制剂组大鼠脑梗死面积百分比、ROS水平、MAD水平、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著降低且高浓度银杏叶提取物制剂组显著低于低浓度银杏叶提取物制剂组,GPX水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,且高浓度银杏叶提取物制剂组显著高于低浓度银杏叶提取物制剂组,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论银杏叶提取物制剂序贯治疗可显著降低脑梗死缺血再灌注损伤大鼠体内氧化应激反应和凋亡因子,缓解脑梗死损伤,且在一定浓度范围内呈浓度依赖性。     

褐藻多糖硫酸酯通过调控PCNA-AS1表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨褐藻多糖硫酸酯对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法体外培养宫颈癌Hela细胞,褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞后,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测Hela细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白印迹(Western Blot)法检测细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中PCNA-AS1基因表达水平。转染PCNA-AS1小干扰RNA或PCNA-AS1过表达载体至Hela细胞后,上述相同方法观察干扰PCNA-AS1表达或过表达PCNA-AS1的同时使用褐藻多糖硫酸酯处理对Hela细胞抑制率、凋亡率及CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2的蛋白表达的影响。结果褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞后,细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白及PCNA-AS1表达水平显著降低(P0.05)。干扰PCNA-AS1表达后,Hela细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。过表达PCNA-AS1的同时使用褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞,细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯可抑制宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调PCNA-AS1表达有关。     

生长激素释放肽对高糖诱导下胰岛β细胞凋亡的影响

目的 探讨生长激素释放肽(Ghrelin)对高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的影响.方法 根据不同的培养基将胰岛β细胞株NIT-1细胞划分为四组:A组(5.6 mmol/L葡萄糖全程),B组(5.6 mmol/L葡萄糖+10-7 mol/L Ghrelin 24 h,5.6 mmol/L葡萄糖72 h),C组(5.6 mmol/L葡萄糖24 h,33.3 mmol/L葡萄糖72 h),D组(5.6 mmol/L葡萄糖+10-7 mol/L Ghrelin 24 h,33.3 mmol/L葡萄糖培养72 h).流式细胞仪Annexin V/PI双染色法测定四组NIT-1细胞早期凋亡率;Hoechst 33258标记细胞核并在荧光显微镜下测各组细胞总凋亡率;RT-PCR法测定Bcl-2、Bax mRNA水平.结果 (1)与A组比较,B组NIT-1细胞早期凋亡率及总凋亡率均无统计学意义(P均>0.05),而C组NIT-1细胞早期凋亡率及总凋亡率均显著增加(P均<0.01);与C组比较,D组NIT-1细胞早期凋亡率及总凋亡率均降低(分别P<0.01,P<0.05).D组较A组细胞早期凋亡率有增加(P<0.05),而总凋亡率无统计学意义(P>0.05).(2)与A组比较,B组NIT-1细胞Bax、Bcl-2、Bcl-2/Bax表达水平无变化,而C组Bcl-2、Bcl-2/Bax水平显著下降(P<0.05);与C组比较,D组Bcl-2、Bcl-2/Bax表达有升高趋势,但无统计学意义;各组Bax表达水平无差别.结论 Ghrelin对葡萄糖生理浓度下的胰岛β细胞凋亡无影响,但可抑制高浓度葡萄糖诱导的β细胞凋亡.Ghrelin可能不通过Bcl-2、Bax抑制高糖诱导的β细胞凋亡.     

银杏叶提取物对电离辐射下大鼠骨髓间充质干细胞的保护作用机制研究

目的探讨银杏叶提取物(EGB)对辐射引起大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)损伤的保护作用及机制研究。方法利用全骨髓细胞贴壁法分离纯化BMSCs,取第3代细胞为实验研究对象,并将其随机分为5组,分别为正常对照组(Control)、辐射对照组(IR)、辐射加EGB低剂量组(IR+EGBL)、辐射加EGB中剂量组(IR+EGBM)和辐射加EGB高剂量组(IR+EGBH);分别给予不同的处理因素。采用CCK-8法检测各组细胞存活率,Hoechst荧光染色法检测各组细胞凋亡率,利用荧光定量PCR法定量检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2mRNA表达量,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测凋亡蛋白caspase3的活性。结果与正常对照组相比,辐射组和辐射加EGB低、中、高剂量组细胞存活率均显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),抗凋亡基因Bcl-2mRNA表达量显著下降(P0.05),促凋亡基因Bax mRNA表达量显著升高(P0.05),Caspase3活性显著升高(P0.05);与辐射对照组相比,辐射加EGB低、中、高剂量组细胞存活率均显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.05),Bcl-2mRNA表达量显著升高(P0.05),Bax mRNA表达量显著降低(P0.05),Caspase3活性显著降低(P0.05),均以辐射加EGB中剂量组最显著。结论 EGB可以拮抗辐射导致的BMSCs细胞存活率降低,通过caspase3通路减少辐射后BMSCs细胞凋亡,进而减轻BMSCs细胞的辐射损伤。     

姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法将人类绒毛膜癌细胞JEG-3细胞株随机分为对照组和姜黄素干预组。姜黄素干预组加入100μl不同浓度的姜黄素与细胞孵育24 h;对照组只加入PRMI 1640培养液与等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT检测检测细胞抑制率。姜黄素干预组加入100μl姜黄素(终浓度为40μmol/L)与细胞孵育24 h后,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot检测增殖相关蛋白Ki-67和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达,以及凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(Bax)的表达。结果与对照组相比,姜黄素干预组JEG-3细胞培养24 h后吸光度显著下降(P 0. 05);姜黄素对JEG-3细胞抑制作用呈药物浓度依赖性,半抑制浓度(IC50)为(39. 33±1. 02)μmol/L;与对照组相比,JEG-3细胞的凋亡率明显升高,增殖相关蛋白Ki-67和Cyclin D1的表达显著降低(P 0. 05),凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的蛋白表达量显著升高(P 0. 05),Bcl-2的表达量显著降低(P 0. 05)。结论姜黄素可以下调人类绒毛膜癌细胞增殖相关蛋白的表达,上调凋亡相关蛋白的表达,调控其增殖和凋亡。     

硼替佐米联合维生素C对淋巴瘤细胞株Jurkat凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的分析硼替佐米联合维生素C(VitC)对淋巴瘤细胞株Jurkat凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法收集淋巴瘤细胞株Jurkat细胞并分成30 nmol/L硼替佐米组、100μg/ml VitC组及联合组(30 nmol/L硼替佐米联合100μg/ml VitC治疗)。用流式细胞仪和CCK-8检测Jurkat细胞凋亡率和周期及采用免疫组织化学法检测Bcl-2和Bax的表达情况。结果 VitC组使Jurkat细胞的生长方式从局部聚集变化成平均分布;硼替佐米组于1～2 d期间Bcl-2的表达水平较VitC组及联合组降低得更慢,其Bax的表达水平较VitC组及联合组升高得更慢,且VitC组的Bax的表达水平显著高于硼替佐米组。硼替佐米组Jurkat细胞抑制率较VitC组显著升高(P 0. 01),联合组Jurkat细胞抑制率较VitC组和硼替佐米组均显著升高(P 0. 01)。相比对照组,硼替佐米组、VitC组及联合组Jurkat细胞凋亡率均显著升高(P 0. 01),且VitC组和联合组Jurkat细胞凋亡率较硼替佐米组均显著升高(P 0. 01)。结论 VitC有利于抑制早期淋巴瘤细胞株Jurkat的增殖,同时细胞凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax的表达情况与VitC诱导Jurkat细胞凋亡关系密切。     

阿卡波糖对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡与细胞周期的影响

目的 探讨阿卡波糖对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡与细胞周期的影响。方法 将处于生长对数期的人脐静脉内皮细胞分为正常组(给予不含任何药物的培养基),模型组(给予33.3 mmol/L葡萄糖),阿卡波糖组(给予33.3 mmol/L葡萄糖+1μg/L,3μg/L,10μg/L阿卡波糖)。MTT法及流式双染检测细胞活力及细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p21及细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达量。结果 与正常组比较,模型组中细胞活力降低,细胞凋亡率提高,细胞周期阻滞在G1期,Bax及p21表达量上调,Bcl-2及Cyclin D1表达量下调;与模型组比较,阿卡波糖组中细胞活力提高,细胞凋亡率降低,G1期延长,Bax及p21表达量下调,Bcl-2及Cyclin D1表达量上调,且呈剂量依赖性。结论 阿卡波糖能抑制高糖诱导的HUVEC凋亡,并缩短G1期,与调节细胞凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白表达有关。     

碱性成纤维细胞生长因子荧光真核表达载体构建及对过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡的影响

背景:已证实外源性碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)可抑制血管内皮细胞凋亡。目的:构建表达bFGF的荧光真核表达载体,探讨其对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法:通过基因亚克隆构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,利用脂质体介导将bFGF基因导入人脐静脉内皮细胞内,通过荧光观察和RT-PCR检测基因的表达。实验分为3组,对照组(转染pcDNA3.1)、过氧化氢组(转染pcDNA3.1+H2O2)和bFGF转染+过氧化氢组(转染pcDNA3.1-bFGF-GFP+H2O2),流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3 P17活性亚单位和Bax蛋白表达。结果与结论:成功构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,该载体转染人脐静脉内皮细胞后,bFGF mRNA显著增加,并可观察到绿色荧光。与对照组相比,过氧化氢组细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量都明显增加(P<0.01),而bFGF转染+过氧化氢组的细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量则比过氧化氢组显著降低(P<0.01)。证实bFGF基因转染能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调控Bax蛋白表达和caspase-3活性有关。     

RPB5介导蛋白与HBx蛋白共表达对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的通过乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与RPB5介导蛋白(RMP)在肝癌Hep G2细胞中的共表达,探索RMP与HBx对肝癌细胞凋亡的影响。方法脂质体介导瞬时转染细胞;实时荧光定量RT-PCR和western blot分别检测RMP与HBx在肝癌Hep G2细胞中的表达量;流式细胞仪检测细胞凋亡率;逆转录PCR检测细胞凋亡相关基因Bax、Caspase3、P53、Bcl-2 mRNA相对表达水平,western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与未经任何处理的Hep G2细胞比较,转染RMP质粒的稳定表达HBx的Hep G2细胞中RMP、HBx在基因及蛋白质水平表达均显著升高(P0.01);细胞凋亡率显著降低;促凋亡基因Bax、Caspase3和P53 mRNA相对表达水平均显著下调(P0.01),凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA相对表达水平显著上调(P0.01);促凋亡蛋白Bax表达量明显降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显升高。结论 RMP与HBx共表达可降低肝癌Hep G2细胞凋亡率,提示RMP和HBx可能在肝癌发生和发展过程中起着重要的作用。     

RhoE在诱导人脑胶质细胞瘤凋亡中的作用

目的:研究和探讨RhoE在诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用,为胶质瘤分子靶向治疗寻找新的靶点.方法:采用western blotting检测RhoE在人脑胶质瘤细胞系中的表达水平;构建重组pcDNA3.1-RhoE真核表达载体,将质粒快速转染U87细胞,采用四唑盐法检测细胞增殖能力的变化;Hoechst染色法观察细胞核的形态改变;流式细胞术检测细胞凋亡的情况;western blotting分析细胞Bcl-2、Bax表达变化,以及capase-3和NF-kB的活化水平.结果:RhoE蛋白在T98、A172和U87细胞系中表达明显低于正常人脑胶质细胞(P＜0.05);上调RhoE表达后,U87细胞增殖能力明显下降(P＜0.05),并且发生了显著的细胞凋亡改变(P＜ 0.05);western bolt检测显示裂解的caspase-3水平增加,Bcl-2表达水平下降,Bax的表达水平升高,另外,p65在细胞核中的表达降低.结论:RhoE可能通过抑制NF-kB的活性,下调Bcl-2/Bax的比例,从而促进caspase-3的活化,最后诱导U87细胞发生凋亡.     

Shh在糖尿病肾病患者肾组织中的表达及对肾小管上皮细胞凋亡的影响研究

目的探讨音猥因子(Shh)在糖尿病肾病患者肾组织中的表达水平及对肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法Western blot检测糖尿病肾病患者肾组织和肾癌患者正常肾组织中Shh的水平。实验分为5组,依次为低糖组、对照组、PCDNA3.1组、PCDNA3.1-Shh组、抑制剂组。低糖组用葡萄糖浓度为5.8 mmol/L的细胞培养液培养细胞,PCDNA3.1组、PCDNA3.1-Shh组、抑制剂组、对照组均用葡萄糖浓度为30 mmol/L的细胞培养液培养细胞,PCDNA3.1-Shh组细胞转染Shh过表达载体PCDNA3.1-Shh,PCDNA3.1-Shh组细胞转染空载体PCDNA3.1,抑制剂组细胞与JNK信号通路抑制剂作用。Western blot检测对照组、PCDNA3.1组、PCDNA3.1-Shh组细胞中Shh水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。Western blot检测各组细胞中Bcl-2、Bax、JNK、p-JNK表达水平。结果 Shh在糖尿病肾病患者肾组织中的表达水平明显低于正常肾组织(P0.05)。PCDNA3.1-Shh组细胞中Shh表达水平明显高于对照组和PCDNA3.1组(P0.05)。对照组细胞凋亡率明显高于低糖组(P0.05)。PCDNA3.1-Shh组细胞凋亡率明显低于对照组和PCDNA3.1组(P0.05)。对照组Bax和p-JNK水平明显高于低糖组,而Bcl-2水平明显低于低糖组(P0.05)。PCDNA3.1-Shh组细胞Bax和p-JNK水平明显低于对照组,而Bcl-2水平明显高于对照组(P0.05)。抑制剂组细胞凋亡趋势与PCDNA3.1-Shh组细胞相一致。结论 Shh在糖尿病肾病患者肾组织中表达下调。Shh能够明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡,作用机制与JNK信号通路有关。     

右美托咪定对心肌缺血再灌注大鼠模型心肌梗死面积、心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的分析右美托咪定对心肌缺血再灌注(MIR)大鼠模型心肌梗死面积、心肌细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响。方法取30只SD大鼠,随机分为对照组(仅穿线而不结扎)、MIR组(建立MIR模型)、干预组(建立MIR模型前给予右美托咪定预处理),三组各10只。比较干预组与MIR组大鼠心肌梗死面积、危险区面积和心肌细胞凋亡率的差异,并比较三组大鼠心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及补体3蛋白表达水平的差异。结果相比MIR组,干预组大鼠心肌梗死面积和危险区面积明显缩小,心肌细胞凋亡率显著降低(P 0. 01)。相比对照组,MIR组和干预组大鼠Bcl-2和Bax蛋白表达水平均显著升高(P 0. 01);相比MIR组,干预组大鼠Bcl-2蛋白表达水平显著升高,而Bax蛋白表达水平显著降低(P 0. 01)。相比对照组,MIR组和干预组大鼠补体3蛋白表达水平均显著升高(P 0. 01);相比MIR组,干预组大鼠补体3蛋白表达水平显著降低(P 0. 01)。结论通过右美托咪定预处理可提高MIR大鼠模型心肌Bcl-2蛋白表达,降低Bax和补体3蛋白表达,减少心肌梗死面积,缓解大鼠心肌损伤,减少心肌细胞凋亡。     

研究Cyp2j3基因对H9C2大鼠心肌细胞保护作用以及相关机制

目的探讨Cyp2j3基因通过STAT3信号通路对H9C2心肌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 H9C2大鼠心肌细胞分为正常对照组(对照组,常氧条件下培养)、pc DNA3.1组(转染空载体pcDNA3.1)、单纯缺氧复氧组(I/R+pcDNA3.1组,转染pc DNA3.1后,缺氧10 h后复氧2 h)和单纯缺氧复氧+pc DNA3.1-Cyp2j3组转染Cyp2j3的过表达载体后,缺氧10 h后复氧2 h)。Western bloting检测过表达Cyp2j3的效果;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞的LDH活性;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;Western bloting检测增殖相关蛋白Ki67、凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路STAT3和磷酸化的STAT3的蛋白表达。结果转染pc DNA3.1-Cyp2j3后的H9C2细胞Cyp2j3的蛋白表达显著升高;I/R+pc DNA3.1组和I/R+pcDNA3.1-Cyp2j3组细胞的OD值及Ki67、Bcl-2和pSTAT3的蛋白表达均显著低于pcDNA3.1组,LDH活性、细胞凋亡率及Caspase3蛋白表达均显著高于pcDNA3.1组(P0.05),而I/R+pc DNA3.1-Cyp2j3组细胞的OD值及Ki67、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达均显著高于I/R+pc DNA3.1组,LDH活性、细胞凋亡率及Caspase3蛋白表达均显著低于I/R+pcDNA3.1组(P0.05)。结论过表达Cyp2j3基因可通过激活STAT3信号减弱缺氧复氧引起的H9C2细胞增殖降低、LDH活性和凋亡增加,从而对心肌细胞起保护作用。     

肝癌细胞HepG2外泌体对其自身生长行为的影响及其机制研究

目的探讨肝癌细胞HepG2外泌体对细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响及其机制。方法培养肝癌细胞HepG2并用差速离心法提取其外泌体,采用粒径分析、透射电镜、蛋白质印迹法(Western blot)等方法对其进行鉴定。将外泌体与肝癌细胞HepG2共培养,采用细胞划痕实验比较其对细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验比较其对细胞迁移能力的影响;采用流式细胞仪分析其细胞周期变化;采用实时荧光定量PCR检测实验组和对照组的细胞周期蛋白(Cyclin D)、细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1(CKS1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)的相对表达水平。结果提取后的外泌体经过Western blot实验,CD63和CD9均有条带出现,颗粒大小在30～100nm,电镜形态正常。与对照组比较,实验组的细胞增殖率较高,肿瘤迁移能力提升;细胞G1期缩短,G2期延长;Cyclin D、CKS1和Bax相对表达水平均上升,Bcl-2相对表达水平降低。结论肝癌细胞HepG2外泌体通过调控Cyclin D、CKS1基因缩短其细胞周期,调控Bax、Bcl-2基因抑制细胞凋亡,从而对其增殖和迁移能力起促进作用。     

SATB2基因增强槲皮素抑制肾癌细胞生长的机制

目的:探讨核基质蛋白特异AT序列结合蛋白2(special AT-rich sequence-binding protein 2,SATB2)基因及槲皮素对肾癌细胞活力、侵袭能力和凋亡的影响及机制。方法:人肾癌786-O细胞分为空白组、重组体pcDNA3.1-SATB2组、槲皮素组和pcDNA3.1-SATB2+槲皮素组,其中pcDNA3.1-SATB2转染参照Lipofectamine 2000说明。各组细胞处理48 h后,通过CCK-8,Transwell小室及流式细胞术分别检测细胞活力、侵袭能力和凋亡。Western印迹法检测SATB2,STAT3,p-STAT3,MMP-2和Bcl-2蛋白表达。结果:转染pcDNA3.1-SATB2的786-O细胞SATB2蛋白表达明显升高(P0.05)。pcDNA3.1-SATB2及不同浓度槲皮素均可抑制786-O细胞活力,且槲皮素可呈现浓度和时间依赖性抑制细胞活力(P0.05)。pcDNA3.1-SATB2及槲皮素均可抑制786-O细胞侵袭能力,诱导凋亡,下调p-STAT3,MMP-2和Bcl-2表达,而联合使用pcDNA3.1-SATB2和槲皮素对786-O细胞侵袭能力、凋亡及p-STAT3,MMP-2和Bcl-2表达影响更明显(P0.05)。结论:过表达SATB2可增强槲皮素对肾癌细胞活力和侵袭能力抑制及凋亡促进作用,机制与抑制STAT3信号通路有关。     

EPO对心肺复苏后大鼠海马神经元的细胞凋亡、Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察促红细胞生成素(EPO)在心肺复苏后对大鼠脑海马神经元细胞凋亡、Bcl-2和Bax表达的影响。方法雄性Wistar大鼠32只,随机分4组:正常对照组(A组)、假手术组(B组)、心肺复苏模型组(C组)、EPO干预组(D组)。C组、D组采用窒息的方法制作大鼠呼吸心跳骤停模型,后行心肺复苏治疗(CPR),D组CRP同时静脉给予EPO 3000U/kg;B组仅静脉给予等剂量生理盐水,4小时的脑海马组织,采用免疫组化法观察各组神经元细胞凋亡、Bcl-2及Bax的表达情况。结果光镜下A、B组未见凋亡细胞,C组可见较多凋亡细胞,D组凋亡细胞数少于C组(P0.01)。A、B组少量Bcl-2、Bax阳性细胞,C、D组Bcl-2、Bax阳性细胞数均高于A、B组(P0.01),D组Bcl-2阳性细胞数高于C组(P0.01),D组Bax阳性细胞数低于C组。结论心肺复苏后大鼠海马神经元的细胞凋亡明显增加,Bcl-2、Bax表达上调。EPO可抑制心肺复苏后海马神经元的细胞凋亡、上调Bcl-2表达同时下调Bax表达。     

西妥昔单抗体外增强人鼻咽癌细胞对紫杉醇化疗敏感性的实验研究

目的 观察西妥昔单抗(C225)体外增强人鼻咽癌CNE-1细胞对紫杉醇(PTX)化疗敏感性作用,并探讨可能的作用机制。方法 将人鼻咽癌CNE-1细胞株随机分为对照组、PTX组、联合用药组,PTX组采用30μg/ml PTX处理,联合用药组采用30μg/ml PTX+250μg/ml C225处理,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO)。MTT法检测细胞的PTX耐药性,取对数期的CNE-1细胞分为9组,4组分别加入浓度为0. 01μmol/L、0. 1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L的PTX;另有4组也加入PTX,同时加入C225,使C225最终浓度为250μg/ml,空白对照组中加入等体积的DMSO,培养48 h。MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布,Western blotting、RT-PCR分别检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、BCL2-相关X蛋白(Bax)蛋白水平及其基因相对表达量。结果 PTX组CNE-1细胞抑制率为(15.99±2. 13)%,联合用药组CNE-1细胞抑制率为37. 10%(37. 10±2. 48)%,差异有统计学意义(t=11.184,P=0.000)。与对照组相比,PTX组、联合用药组的细胞凋亡率、G0～G1期细胞比率均升高(P 0. 05),而S期细胞比率降低(P 0. 05)。与PTX相比,联合用药组的细胞凋亡率、G0～G1期细胞比率升高(P0. 05),S期细胞比率与M期细胞比率均明显降低(P 0. 05)。MTT检测PTX耐药性结果显示,空白对照组、C225组细胞的细胞活性随着PTX浓度增加而降低,空白对照组、C225组CNE-1细胞的PTX IC50分别为4. 179μmol/L、0. 25μmol/L。与对照组相比,PTX组、联合用药组Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平与基因相对表达量均明显降低(P 0. 05),而Bax蛋白水平与基因相对表达量均明显升高(P 0. 05)。与PTX相比,联合用药组Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平与基因相对表达量均明显降低(P 0. 05),而Bax蛋白水平与基因相对表达量均明显升高(P 0. 05)。结论 在PTX化疗的基础上增加C225处理,可以促进PTX对人鼻咽癌CNE-1细胞的增殖抑制作用以及促凋亡作用,降低细胞的CNE-1细胞的PTX IC50,增强CNE-1细胞对PTX敏感性。