益肾胶囊通过上调SIRT1抑制高糖诱导足细胞凋亡的机制研究

目的:探讨益肾胶囊通过调控SIRT1表达,抑制炎症反应,减轻高糖诱导的足细胞凋亡。方法:体外培养小鼠足细胞,(1)给予SIRT1及SIRT1siRNA质粒转染分为:(1)NC组(空白质粒组);(2)过表达组(SIRT1质粒);(3)si组(SIRT1siRNA质粒);(2)给予益肾胶囊干预,实验分为:(1)NG组(5.5 mmol/L葡萄糖);(2)HG组(30 mmol/L葡萄糖);(3)YS组(30 mmol/L葡萄糖+10%益肾胶囊含药血清);(4)R组(30 mmol/L葡萄糖+10 mmol/L白藜芦醇),western blot及RTPCR检测SIRT1、NF-κBp65、BCL-2、MCP-1的蛋白和mRNA表达,流式细胞检测细胞凋亡。结果:(1) SIRT1过表达组的SIRT1、Bcl-2的蛋白和mRNA表达升高(P 0.05),乙酰化NF-κBp65、MCP-1的蛋白和mRNA表达下降(P 0.05);SIRT1siRNA组的SIRT1、Bcl-2的蛋白和mRNA表达下降(P 0.05),乙酰化NF-κBp65、MCP-1的蛋白和mRNA表达升高(P 0.05)。(2)高糖组的SIRT1、Bcl-2的蛋白和mRNA表达较正常组下降(P 0.05),乙酰化NF-κBp65、MCP-1蛋白和mRNA表达升高(P 0.05)。益肾胶囊含药血清组和白藜芦醇组的SIRT1、Bcl-2的蛋白和mRNA表达升高(P 0.05),乙酰化NF-κBp65、MCP-1蛋白和mRNA表达下降(P 0.05)。(3)高糖组足细胞凋亡率较正常组高(P 0.05),益肾胶囊含药血清组和白藜芦醇组的足细胞凋亡率低于高糖组(P 0.05)。结论:益肾胶囊可能通过上调足细胞SIRT1表达,抑制足细胞炎症及凋亡,修复足细胞损伤。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织炎症因子NF-κB的影响

目的：观察益肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织核转录因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）表达的影响。方法：将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为：正常对照组（对照组）、DN模型组（模型组）、氯沙坦组、益肾胶囊组,每组10只。利用链脲佐菌素（STZ）诱导右肾切除的大鼠制备DN模型。氯沙坦组灌胃氯沙坦钾20mg·kg-1.d-1,益肾胶囊组灌胃益肾胶囊625mg·kg-1.d-1,对照组及模型组每日给予等量的蒸镏水灌胃,实验周期为12周。实验过程中观察大鼠24h尿蛋白定量、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）变化,光镜下观察肾脏病理变化,采用免疫荧光法检测各组大鼠肾组织NF-κB的表达。结果：12周末,DN模型组大鼠的24h尿蛋白定量、Scr、BUN均高于正常对照组（P〈0.05）,肾组织中NF-κB表达水平明显高于正常对照组（P〈0.05）;益肾胶囊治疗组大鼠24h尿蛋白定量、Scr、BUN均低于模型组（P〈0.05）,肾组织NF-κB表达水平明显低于DN模型组（P〈0.05）。结论：益肾胶囊可能通过下调DN大鼠肾脏组织NF-κB的表达,延缓DN的进展。     

Vaspin对糖尿病肾病大鼠肾组织NF-κB和TGF-β_1表达的影响

目的:观察vaspin对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织核因子-κB(NF-κB)和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)表达的影响。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为对照组(10只)和造模组(30只),再将30只造模成功的DN大鼠随机分为3组:DN组、vaspin组、氯沙坦组,每组10只。干预12周后检测大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白定量。应用RT-PCR和Western blot分别检测大鼠肾组织NF-κB和TGF-β_1的基因和蛋白表达。结果:DN组大鼠的Scr、BUN和24 h尿蛋白定量均高于对照组(P0.05),肾组织中NF-κB和TGF-β_1表达水平明显高于对照组(P0.05);vaspin组大鼠的Scr、BUN和24 h尿蛋白定量均低于DN组(P0.05),肾组织中NF-κB和TGF-β_1的表达水平明显低于DN组(P0.05)。结论:Vaspin可能通过下调DN大鼠肾组织NF-κB和TGF-β_1的表达,延缓DN的进展。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾间质Wnt与NF-κB影响的研究

目的:观察益肾胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾间质Wnt4、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(PGSK-3β)及核因子-κB(NF-κB)表达水平的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠32只,体重(200±20g),随机选取8只作为正常组,其余予腹腔注射链脲佐菌素,制备糖尿病肾病动物模型,造模成功后随机分成4组:模型组(n=8),益肾胶囊组(n=8)和氯沙坦组(n=8)。连续给药12周。12周末,检测各组大鼠24h尿蛋白定量,血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),取肾组织行HE染色、免疫组化。光镜下观察肾间质病理变化情况,用免疫组化法检测Wnt4、PGSK-3β与NF-κB表达水平,行实时荧光定量(FQ-PCR)法测定肾组织中Wnt4、NF-κBmRNA的表达。结果:12周末,与正常组比较,模型组大鼠24h尿蛋白定量、血Scr、BUN明显增加,肾间质Wnt4、PGSK-3β与NF-κB表达水平明显升高,肾组织Wnt4、NF-κBmRNA表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,益肾胶囊治疗组大鼠24h尿蛋白定量、血Scr、BUN明显减少,肾间质Wnt4、PGSK-3β与NF-κB表达水平明显降低,肾组织Wnt4、NF-κBmRNA表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。氯沙坦治疗组与益肾胶囊治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益肾胶囊可能通过调节DN肾间质Wnt4、PGSK-3β、NF-κB的表达,影响了NF-κB和Wnt通道的信号转导,延缓了DN的进展。     

沉默信息调节因子1在缺血预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)在缺血预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠48只,体重200 ～ 250 g,12周龄,采用随机数字表法,将其分为4组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血预处理组(IPC组)和缺血预处理+SIRT1抑制剂组(IPC+ ex527组).采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型,IPC组和IPC+ ex527组进行缺血预处理(缺血5 min,再灌注5 min,重复3个循环,共30 min),IPC+ ex527组分别于缺血前15 min及再灌注前1 min静脉注射ex527 1 μg/kg.分别于缺血前和再灌注120 min时采集股动脉血样,测定血清TNF-α和IL-6的浓度,处死大鼠,取心肌组织,测定乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、SIRT1表达和NF-κB p65乙酰化水平.结果 与S组比较,I/R组和IPC+ ex527组再灌注120 min时血清TNF-α、IL-6浓度、心肌组织LDH、CK-MB活性和NF-κB p65乙酰化水平升高,心肌组织SIRT1表达下调(P＜0.05);与I/R组比较,IPC组血清TNF-α、IL-6浓度、心肌组织LDH、CK-MB活性、NF-κB p65乙酰化水平降低,心肌组织SIRT1表达上调(P＜0.05),IPC+ ex527组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与IPC组比较,IPC+ ex527组血清TNF-α、IL-6浓度、心肌组织LDH、CK-MB活性、NF-κB p65乙酰化水平升高,心肌组织SIRT1表达下调(P＜0.05).结论 SIRT1参与了缺血预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

鞘内注射乙酰化酶p300抑制剂Garcinol对大鼠神经病理性痛的影响

目的观察鞘内注射乙酰化酶抑制剂Garcinol对L5脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)大鼠痛觉高敏行为的影响,探讨其相关机制。方法雄性SD大鼠90只,日龄40~50d,体重180~220g。随机分为六组,每组15只。N组不做任何处理,S组仅暴露L5脊神经。C、H、M、L组大鼠行SNL手术。H、M、L组分别将Garcinol按500、100、20μg/kg溶于10μl的100%二甲基亚砜溶剂中,SNL术后第3天经鞘内导管给药,每天1次,连续给药4d。C组在相同时间鞘内注入10μl二甲基亚砜溶剂。于SNL术前1d(T0)、术后1d(T_1)、3d(T_2)、5d(T_3)、7d(T_4)、9d(T_5)、11d(T_6)、14d(T_7)测定各组大鼠热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。T_4时取腰段脊髓,Western blot检测p300和乙酰化p65蛋白的表达水平,采用免疫荧光法测定脊髓背角核因子κB(NF-κB)的表达。结果 T_1~T_7时C、L、M、H组大鼠TWL明显短于N组,p300和乙酰化p65蛋白含量明显高于N组,脊髓背角NF-κB表达明显多于N组(P0.05)。T_3~T_7时M、H组大鼠TWL明显长于C组,p300和乙酰化p65蛋白含量明显低于C组,H组脊髓背角NF-κB表达明显少于C组(P0.05)。结论 p65乙酰化水平的增高参与了神经病理性痛的形成,鞘内注射乙酰化酶p300抑制剂Garcinol可以发挥镇痛作用,其机制可能与抑制p300介导的p65乙酰化,降低NF-κB表达水平有关。     

肺组织NF-κB和PUMA与SAP-ALI的关系及PDTC的干扰作用

目的探讨NF-κB(核因子-κB)和PUMA(p53正向凋亡调节因子)在大鼠重症急性胰腺炎致急性肺损伤(SAP-ALI)发病中的作用及脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对此过程的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组(A组),SAP-ALI组(B组),SAP+PDTC干预组(C组),每组24只。各组再按6,12,24 h时点分为3个亚组,每亚组8只。A组开腹后翻动胰腺数次;B组采用胰胆管逆行注入5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)诱导SAP-ALI模型;C组在B组的基础上于术前1 h给予PDTC(15 mg/kg),各组按各时点处死大鼠。观察胰腺和肺脏病理变化。检测不同组肺脏组织中NF-κBp65,PUMA和Caspase-3的表达及Caspase-3活性;检测组织TNF-α,MIP-2和ICAM-1 mRNA的表达、髓过氧化物酶(MPO)的活性和肺泡上皮细胞凋亡指数。结果成功建立大鼠SAP-ALI模型。Western-blotting和RT-PCR结果显示,B组肺上皮细胞NF-κB p65,PUMA和Caspase-3蛋白表达在12 h后显著增加(P0.05),NF-κB p65与PUMA呈高度正相关(r=0.987,P0.01)。TNF-α,MIP-2,ICAM-1mRNA表达及MPO和Caspase-3活性明显增加(P0.01)。C组肺损伤病理组织学评分在术后各时点较B组显著下降(P0.05),C组12 h后的肺组织NF-κB p65,PUMA和Caspase-3蛋白表达及MPO和Caspase-3活性明显降低(P0.05);TNF-α,MIP-2,ICAM-1 mRNA表达明显下降(P0.05),C组细胞凋亡指数较B组明显降低(P0.01)。结论大鼠SAP-ALI既与NF-κB活化引起的炎症因子释放有关又与NF-κB活化引起的PUMA上调促进细胞凋亡有关。PDTC通过抑制NF-κB活化,下调炎症因子释放及NF-κB活化引起的PUMA表达可抑制肺组织的细胞凋亡,从而减轻SAP-ALI的程度。     

核因子κB p65在肌肉萎缩中的表达与被动运动对其影响

目的 研究核因子κB(nuclearfactor kappa B,NF-κB)p65在失神经骨骼肌中的表达及被动运动对其影响作用,探讨失神经骨骼肌萎缩的分子机制及防治方法.方法 选Wistar大鼠42只,随机分成健康对照组(6只)、失神经对照组(18只)和被动运动组(18只).失神经对照组和被动运动组建立右下肢失神经腓肠肌动物模型.被动运动组大鼠采用右下肢被动运动300次/d.分别在术后2 d、14 d及28d取其双侧腓肠肌称重,计算肌湿重比,采用RT-PCR和Western Blot检测大鼠右侧失神经腓肠肌NF-κB p65的mRNA和蛋白表达水平,根据实验结果做统计处理数据得出结论.结果 大鼠腓肠肌失神经支配后肌肉湿重比持续下降,NF-κB p65的mRNA和蛋白表达在2 d、14 d、28d持续增加(P＜0.05),术后14 d、28d被动运动组腓肠肌湿重比高于同期失神经对照组(P＜0.05),被动运动组mRNA和蛋白的表达在各个时间点低于失神经对照组(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 在失神经骨骼肌萎缩中,NF-κB p65的表达持续增高.被动运动可以通过干扰NF-κB p65的mRNA和蛋白质的表达来延缓失神经骨骼肌萎缩.     

肾炎防衰液通过SPHK1/S1P信号通路对糖尿病肾病大鼠肾脏炎症的干预作用

目的:探讨肾炎防衰液通过鞘氨醇激酶1-1磷酸鞘氨醇(SPHK1/S1P)信号通路对糖尿病肾病大鼠肾脏炎症的干预作用。方法:采用单侧肾切除+高脂饲养喂养+链脲佐菌素(STZ)"三联"造模方法构建糖尿病肾病大鼠模型,模型组分别予肾炎防衰液和厄贝沙坦治疗8周,测定24 h尿蛋白定量及血生化指标,检测肾脏Sph K1、S1p2、TNF-α、NF-κBp65表达水平的变化。结果:肾炎防衰液可以降低DKD大鼠24 h尿蛋白定量(P0.01),减少DKD肾组织Sph K1、S1p2、TNF-α、NF-κBp65mRNA表达(P0.05),降低Sph K1、p NF-κBp65的蛋白表达。结论:肾炎防衰液可通过抑制Sph K1/S1P信号通路的表达,减轻肾脏炎症反应,对糖尿病肾病大鼠肾脏起到一定的保护作用。     

糖尿病肾病患者肾小管上皮细胞NF-κB及炎性介质表达的临床病理意义

目的 观察糖尿病肾病（DN）患者肾小管上皮细胞NF-κB及炎性介质表达的临床病理意义。 方法 选择经肾活检确诊的23例糖尿病肾病患者肾组织为DN组,以免疫组化法检测肾组织NF-κB p50、p65、单核细胞趋化蛋白（MCP）1、骨调素（OPN）等炎性介质及纤连蛋白（FN）、?琢平滑肌肌动蛋白（?琢-SMA）表达;原位杂交法检测NF-κB p65 mRNA表达,并进行半定量评分;选择10例肾癌切除术患者为对照组,取离癌组织大于5 cm处肾皮质,检测指标同DN组。采用Spearman等级相关法分析炎性介质表达与小管间质病理改变、尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶（NAG）、尿蛋白量（24 h）、肾小球滤过率（eGFR）之间的相关性。 结果 组织学检查显示,各期DN组患者多存在明显的肾小管上皮细胞变性、灶状萎缩、间质炎性细胞浸润及纤维化。免疫组化与原位杂交结果显示,对照组患者NF-κB、OPN和MCP-1在肾组织无明显表达,FN主要表达于肾小球,?琢-SMA主要表达于肾血管;DN组患者随着尿白蛋白水平的增加,NF-κB、OPN和MCP-1在肾小管表达显著增加,主要表达于结构相对正常的小管上皮细胞,在炎性细胞大量聚集及明显纤维化处表达较少;同时,肾间质?琢-SMA、FN表达也有明显增加,但主要表达于炎性介质阳性表达的小管周围及炎性细胞浸润与纤维化较明显的肾间质,二者均不表达于肾小管上皮细胞。相关分析显示,DN组患者肾小管NF-κB p65蛋白的表达与NF-κB p50蛋白、p65 mRNA表达呈正相关,r分别为0.792和0.763,均P < 0.01;与肾小管MCP-1、OPN表达呈正相关,r分别为0.825和0.869,均P < 0.01;与间质?琢-SMA、FN表达呈正相关,r分别为0.327和0.432,均P < 0.01;与尿蛋白量（24 h）、eGFR、尿NAG水平均相关,r分别为 0.710、-0.728、0.930,均P < 0.01。 结论 DN患者肾小管NF-κB及多种炎性介质表达明显上调,多分布于结构相对正常的肾小管上皮细胞。NF-κB及炎性介质的表达与蛋白尿、肾功能下降及肾间质纤维化等临床及病理表现密切相关,提示它们可能参与了人类DN的发生和发展。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织JAK/STAT信号通路及α-SMA、FN的影响

目的:探讨益肾胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠24h尿蛋白定量、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、JAK/STAT及α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)的影响及其机制。方法:SD大鼠55只,随机留取10只为正常对照组(N)。利用一次性腹腔注射链脲佐菌素的方法建立DN大鼠模型。造模成功大鼠按随机数字表法分为糖尿病肾病模型组(DN)、益肾胶囊治疗组(DN+Y)、氯沙坦钾治疗组(DN+L)、氯沙坦钾+益肾胶囊治疗组(DN+L+Y),每组10只,连续灌胃12周。于实验的12周检测24h尿蛋白定量;12周末处死大鼠,检测血糖、BUN、Scr;取大鼠肾组织做组织病理学观察;免疫组化法检测肾组织磷酸化JAK2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、α-SMA、FN的表达。结果:实验12周末,与DN组比较,益肾胶囊治疗组24h尿蛋白定量、BUN、Scr明显降低(P<0.05),肾组织形态学改变较轻,p-JAK2、p-STAT3、α-SMA、FN的表达显著降低(P<0.05)。氯沙坦钾联合益肾胶囊治疗组与氯沙坦钾治疗组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:益肾胶囊可能通过抑制糖尿病肾病大鼠肾组织JAK/STAT信号通路的活化,下调α-SMA、FN的表达,延缓了糖尿病肾病的进展;益肾胶囊联合氯沙坦钾可更好地保护肾脏功能,提示二者联合使用有协同作用。     

强直性脊柱炎活动期患者血瘀状态相关细胞因子/NF-κB信号通路情况及新风胶囊干预机制

目的探讨新风胶囊对强直性脊柱炎(AS)患者由免疫炎症介导的血瘀证的影响及干预机制。方法将42例AS患者作为观察组,选取同期40名健康志愿者作为对照组。观察组服用新风胶囊,每次1.5 g,每日3次,连续服药3个月。采用ELISA法检测两组外周血免疫和血瘀状态相关细胞因子含量,并采用RT-PCR及Western blot法检测NF-κB信号通路相关指标基因、蛋白表达变化。结果与对照组比较,观察组治疗前外周血PAI-2、TNF-α、TXA2、PGI2、GMP140、IL-1β、IL-6等细胞因子含量均显著升高(P0.05),而IL-4和IL-10含量均显著降低(P0.05)。观察组采用新风胶囊治疗3个月后,PAI-2、TNF-α、TXA2、PGI2、GMP140、IL-1β、IL-6均较治疗前显著降低(P0.05),IL-4和IL-10含量均显著提高(P0.05)。观察组治疗前外周血的IκBα、IKKβ、p65、p50 mRNA基因表达和p65、p50蛋白表达均显著高于对照组(P0.05)。观察组治疗3个月后IκBα、IKKβ、p65、p50 mRNA基因表达和p65、p50蛋白表达均较治疗前显著降低(P0.05)。结论新风胶囊能有效改善AS患者由免疫炎症介导的血瘀证,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路活化、维持机体Th1/Th2动态平衡状态有关。     

盐酸戊乙奎醚预先给药对失血性休克大鼠急性肺损伤时TLR4 mRNA表达的影响

目的 探讨盐酸戊乙奎醚预先给药对失血性休克大鼠急性肺损伤时Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响.方法 健康SD大鼠40只,体重200～250 g,随机分为5组(n=8):假手术组(S组)、失血性休克致急性肺损伤组(ALI组)和低、中、高剂量盐酸戊乙奎醚预先给药组(P1～3组).S组仅行动静脉穿刺,不放血,ALI组股动脉放血至35～45 mm Hg制备急性肺损伤模型,P1～3组分别于放血前30 min股静脉注射盐酸戊乙奎醚0.3、1.0、3.0 mg/kg,随后制备急性肺损伤模型.各组复苏后4 h时处死大鼠取肺,称重后计算肺湿干重比,检测TLR4 mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平,观察病理学结果.结果 与S组比较,ALI组和P1组TLR4 mRNA、NF-κB p65蛋白表达水平及肺湿干重比升高(P＜0.05或0.01),P2.3组差异无统计学意义(P＞0.05);与ALI组比较,P2,3组TLR4 mRNA、NF-κB p65蛋白表达水平及肺湿干重比降低(P＜0.05或0.01);P2组和P3组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).P2,3组肺组织病理学损伤程度较ALI组明显减轻.结论 盐酸戊乙奎醚预先给药可通过抑制肺组织TLR4 mRNA表达上调,进而降低NF-κB活性,从而减轻失血性休克诱发大鼠的急性肺损伤.     

N-乙酰半胱氨酸对AGEs诱导的HK-2细胞IL-1β、IL-6的抑制作用

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(Nac)对终末糖基化产物(AGEs)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)IL-1β(白介素-1β)、IL-6(白介素-6)的抑制作用。方法:将体外培养的HK-2细胞分成正常对照组(NG组)、AGEs组、药物干预组1(N1组)、药物干预组2(N2组),培养72 h,应用反转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qP CR)方法检测IL-1β和IL-6 mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清中细胞因子的蛋白浓度。蛋白质印迹法(Western blot)检测NF-κB/p65的含量。结果:NG组、AGEs组、N1组和N2组细胞内IL-1β和IL-6 mRNA和蛋白表达,以及NF-κB/p65含量差异均有统计学意义;与NG组比较,AGEs组细胞内IL-1β和IL-6mRNA和蛋白表达明显增加。N1、N2组较AGEs组表达水平下降,AGEs组NF-κB/p65含量高于其他组,差异均具有统计学意义(均P 0. 05)。结论:AGEs可诱导HK-2细胞表达IL-1β和IL-6,NF-κB信号通路可能参与了此过程。     

骨癌痛大鼠脊髓NF-κB、IL-6和TNF-α表达的变化

目的 评价骨癌痛大鼠脊髓NF-κB、IL-6和TNF-α表达的变化.方法 雌性健康SD大鼠72只,体重150～180 g,随机分为3组(n=24):对照组(C组)、假手术组(S组)和骨癌痛组(BP组).BP组于大鼠左侧胫骨干骺端骨髓腔内注射5μl Walker 256(1×105)乳腺癌细胞制备骨癌痛模型,S组左胫骨上端注射Hank液5μl.分别于肿瘤细胞接种前、接种后2、4、6、9、12、14、16、18和21 d时测定机械阈值.分别于肿瘤细胞接种后6、12和18 d时,处死3只大鼠,取L4-6脊髓组织,采用RT-PCR法测定NF-κB p65 mRNA、IL-6 mRNA和TNF-α mRNA的表达;另处死3只大鼠,取L4-6脊髓组织,计数NF-κBp65阳性细胞,采用免疫组化法测定NF-κB p65表达.结果 与C组和S组比较,BP组机械痛阈降低,脊髓NF-κB p65及其mRNA、IL-6 mRNA和TNF-αmRNA的表达上调,NF-κB p65阳性细胞计数增加(P＜0.05或0.01);C组和S组间上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大鼠胫骨骨髓腔内注射肿瘤细胞通过激活脊髓NF-κB,导致炎性细胞因子IL-6和TNF-α大量释放,从而诱发骨癌痛.     

As2O3对人乳腺癌中NF-κB p65、survivin和caspase-3的作用及相关性研究

目的探讨As2O3对人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤组织中NF-κB p65、survivin及caspase-3表达的影响.方法复制人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤模型,共22只,随机分为3组:对照组、顺铂组及不同浓度(1.5、3.0 mg/kg)的As2O3组(简称As2O3组).用原位杂交法检测survivin mRNA的表达;用免疫组化法检测肿瘤组织NF-κB p65、survivin及caspase-3蛋白的表达.结果人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤中NF-κB p65蛋白及survivin mRNA和蛋白表达的阳性细胞密度As2O3组明显低于顺铂组和对照组(P＜0.01),顺铂组也低于对照组(P＜0.01);而caspase-3蛋白表达结果则相反(P＜0.01).NF-κB p65蛋白、survivin蛋白及survivin mRNA阳性表达间相互呈正相关,而三者的表达均与caspase-3蛋白表达呈负相关.结论 As2O3可能通过抑制NF-κB p65的活性抑制survivin,从而激活caspase-3,诱导人乳腺浸润性导管癌细胞的凋亡,且呈剂量依赖性.     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织JAK/STAT信号通路的影响

目的：观察益肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织JAK/STAT信号通路影响,探讨益肾胶囊对DN大鼠肾脏保护作用的可能机制。方法：将Wistar大鼠制备成DN模型。随机分为4组,即正常对照组（N组）、DN模型组（DN组）、益肾胶囊治疗组（625mg·kg-1.d-1）、氯沙坦钾治疗组（30mg·kg-1.d-1）。实验周期12周。期间检测大鼠血糖和24h尿蛋白定量,通过光镜及电镜观察肾脏组织病理形态学的变化;采用免疫组化方法检测肾组织磷酸化JAK2（p-JAK2）、磷酸化STAT3（p-STAT3）表达及转化生长因子β1（TGF-β1）表达变化。结果：12周末,DN组大鼠肾组织中p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1表达显著高于同期正常对照组（P〈0.05）。益肾胶囊治疗组和氯沙坦钾治疗组肾组织中p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1表达显著低于同期DN组（P〈0.05）;24h尿蛋白定量显著低于同期DN组（P〈0.05）;病理损伤较同期DN组改善。结论：益肾胶囊可能部分通过抑制DN大鼠肾组织JAK/STAT通路调节肾组织TGF-β1表达,发挥对DN大鼠肾脏的保护作用。     

黄芪对糖尿病肾病大鼠肾组织COX-2和NF-κB表达的影响

目的：探讨环氧合酶-2（COX-2）和核转录因子κB（NF-κB）在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达及黄芪对其的影响。方法：将大鼠分成正常对照组、糖尿病肾病组、黄芪干预组。12周周末检测血肌酐、尿素氮、尿蛋白定量;应用免疫组化、Western印迹和聚合酶链式反应方法分别检测大鼠肾组织COX-2和NF-κB的表达。结果：与正常对照组相比,糖尿病肾病组大鼠COX-2和NF-κB的基因及蛋白表达升高（均P〈0.01）。黄芪干预组大鼠肾组织COX-2和NF-κB的基因及蛋白表达较糖尿病肾病组下调（均P〈0.01）。结论：COX-2参与了糖尿病肾病发生发展的病理过程,黄芪治疗糖尿病肾病的作用机制之一是通过下调COX-2的表达从而发挥肾脏保护作用。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾小管间质sFRP-1表达的影响

目的:观察益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾小管间质Wnt通路抑制因子-分泌型卷曲相关蛋白-1(sFRP-1)表达的影响。方法:采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法诱导建立糖尿病肾病(DN)模型,实验分组为:正常对照组(对照组)、DN模型对照组(模型组)、益肾胶囊组、氯沙坦组,每组8只。益肾胶囊组每只大鼠灌胃益肾胶囊625 mg.kg-1.d-1,氯沙坦组每只灌胃氯沙坦20 mg.kg-1.d-1,正常组和模型组每日给予等量生理盐水灌胃,于2、4、8、12周末测定24 h尿蛋白定量,于治疗12周后测定各组血糖、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),同时观察肾小管病理损伤,并采用免疫组化和实时荧光定量PCR方法观察大鼠肾小管间质中sFRP-1、Wnt通路关键调节因子β-catenin表达情况及肾组织中sFRP-1、β-catenin mRNA的表达。结果:12周末,与对照组相比,模型组大鼠血糖、24 h尿蛋白定量、肾小管损伤指数均显著上升,免疫组化示:肾小管间质中sFRP-1表达增加,β-catenin出现胞浆或(和)核表达,实时荧光定量PCR结果显示二者mRNA表达上调(P<0.05);益肾胶囊治疗后,与模型组相比,肾小管间质中sFRP-1表达进一步增加,肾组织中sFRP-1 mRNA进一步上调,β-catenin胞浆或(和)核表达减少,β-catenin mRNA表达下调(P<0.05)。结论:益肾胶囊可能通过上调sFRP-1在DN大鼠肾小管间质的表达,发挥对DN大鼠肾脏的保护作用。     

血必净对尿源性SIRS猪肾组织细胞因子的影响

目的 观察血必净注射液对尿源性SIRS猪肾组织细胞因子表达的影响,探讨血必净治疗尿源性SIRS的作用机制. 方法 健康实验猪45头按随机数字表法分为假手术对照组、模型组和血必净治疗组3组,每组15只,每组所有动物按时间点又分为术后0、4、6、12和24 h5个时间点亚组.建立尿源性SIRS猪模型.应用RT-PCR法检测肾组织中TNF-α、IL-6、IL-10、NF-κB p65mRNA的表达;采用Western blot法检测肾组织中NF-κB的活性. 结果 模型组猪的SIRS表现最为明显,血必净治疗组SIRS表现明显较轻.模型组猪肾组织TNF-α、IL-6、NF-κB p65mRNA的表达以及NF-κB的蛋白表达显著高于假手术组(P＜0.05);血必净治疗组较模型组的TNF-α、IL-6、NF-κB p65mRNA的表达以及NF-κB的蛋白表达显著降低(P＜0.01);IL-10 mRNA的表达情况则与之相反. 结论 血必净通过抑制NF-κB活性、上调IL-10、下调TNF-α,IL-6及NF-κB的表达而达到治疗尿源性SIRS的作用.