沉默信息调节因子1对高糖诱导的足细胞凋亡的影响及机制研究

目的研究沉默信息调节因子1(silence information regulator 1,SIRT1)对高糖诱导的足细胞凋亡的影响和机制。方法取足细胞分别给予不同处理,分为5组:Control组(5.6 mmol/L葡萄糖培养液培养)、Osmotic-NC组(葡萄糖5.6 mmol/L+甘露醇25 mmol/L培养液培养)、HG组(30 mmol/L葡萄糖培养液培养)、HG+SIRT1组[SIRT1过表达载体(pcDNA3.1-SIRT1)转染+30 mmol/L葡萄糖培养液培养]、HG+NC组[阴性对照载体(pcDNA3.1)转染+30 mmol/L葡萄糖培养液培养],采用qRT-PCR和Western blot技术检测各组SIRT1表达效果,以试剂盒分别检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)、活性氧簇(ROS)水平,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡,采用Western blot检测各组细胞中Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达变化。结果高糖培养后的足细胞中SIRT1 mRNA及蛋白水平均降低。转染SIRT1过表达载体后的足细胞经过高糖处理以后,细胞中的SIRT1 mRNA及蛋白水平升高。高糖处理后的足细胞中SOD、CAT、GSH-Px活性降低,MDA和ROS水平升高,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白水平升高。上调SIRT1可以提高高糖条件下足细胞SOD、CAT、GSH-Px活性,减少细胞中MDA和ROS水平,减少细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达。结论上调SIRT1可以降低高糖诱导的足细胞凋亡,其作用机制可能与降低氧化损伤有关。     

芸香苷通过抑制miR-377表达降低高糖诱导的小鼠足细胞损伤

目的:探讨芸香苷(Ru)对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及作用机制.方法:以小鼠足细胞MPC5为研究对象,分为正常对照组(NG组)、高糖组(HG组,30 mmol/L葡萄糖诱导MPC5细胞)、低剂量Ru干预组(HG+Ru-L组,25μmol/L Ru作用于高糖诱导的MPC5细胞)、中剂量Ru干预组(HG+Ru-M组,5...     

褪黑素抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡

目的探讨褪黑素（MT）对于高糖诱导的肾小球系膜细胞（MC）凋亡中的作用及机制。方法光学显微镜观察大鼠MC凋亡的形态学变化;流式AnnexinV／PI双染法检测不同浓度MT对大鼠MC细胞凋亡率的影响;免疫细胞化学检测细胞色素C的表达改变。结果MT对30mmol／L葡萄糖诱导的MC高凋亡率有明显的抑制作用,呈剂量依赖性关系;并能明显抑制细胞色素C的表达。结论MT可抑制高糖诱导的大鼠MC高凋亡率,这种作用部分通过调控细胞色素C来实现的。     

SIRT1/PGC-1α在高糖状态下线粒体氧化应激损伤致足细胞凋亡中的作用

目的:探讨SIRT1/PGC-1α通路在高糖状态下线粒体氧化应激损伤至足细胞凋亡中的作用。方法:采用高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型,将造模成功的大鼠分为糖尿病模型组和白藜芦醇治疗组。在给药10周末,测定各组大鼠肾质量指数、肾功能和24 h尿蛋白(UTP)变化,电镜及光镜下观察肾脏病理改变,硫代巴比妥酸法检测肾脏MDA含量,WST-1法检测SOD活性,大鼠肾组织SIRT1、PGC-1α、Caspase3及Synaptopodin蛋白表达水平用Western blot法和IHC法检测,大鼠肾组织ROS、Bcl-2、Caspase9、Desmin蛋白水平用IHC法检测。结果:与正常组比较,模型组大鼠UTP明显上升(P<0.05),SOD表达减少,MDA,ROS明显增多(P<0.05),SIRT1,PGC-1α的蛋白表达水平明显下降(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平下降,Caspase9、Caspase3表达升高(P<0.05),Desmin蛋白表达增多,Synaptopodin蛋白表达减少(P<0.05);与模型组比较,白藜...     

益肾胶囊含药血清对高糖条件下足细胞SIRT6及自噬相关蛋白表达的影响

目的:观察益肾胶囊含药血清对高糖培养条件下足细胞SIRT6及LC3B、Beclin-1、p62表达的影响.方法:体外培养小鼠肾小球足细胞,分为正常组(5.5 mmol/L葡萄糖+10％正常大鼠血清);高糖组(30 mmol/L葡萄糖+10％正常大鼠血清);益肾胶囊组(30 mmol/L葡萄糖+10％益肾胶囊含药血清);...     

雷帕霉素通过调节mTOR-ULK1信号通路减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的探讨雷帕霉素对高糖环境下足细胞自噬和损伤作用的机制。 方法体外培养永生化小鼠肾小球足细胞(mouse podocyte cell 5,MPC5)并进行分组：甘露醇等渗组(mannitol isotonic group,MG组)、高糖组( high glucose group,HG组)、雷帕霉素组(rapamycin group,RG组)以及自噬相关蛋白5-siRNA组(SiG组)。PCR和Western印迹检测足细胞标志Synaptopodin、自噬相关的ULK1以及mTOR通路相关蛋白p70S6K的表达。 结果与MG组相比,HG组的Synaptopodin表达降低,自噬活性降低,p-ULK1以及p70S6K表达明显升高。与HG组相比,RG组的Synaptopodin表达升高,自噬活性较高,p-ULK1以及p70S6K表达较低。SiG组表现出与HG组相似的变化趋势。 结论雷帕霉素可能通过mTOR-ULK1信号通路调节足细胞内自噬反应、减轻高糖环境引起的足细胞损伤。     

番茄红素对高糖诱导的足细胞自噬以及凋亡的影响

目的探讨番茄红素(Lyc)对高糖诱导的足细胞自噬及凋亡的影响,旨在为临床治疗糖尿病肾病提供可靠的理论依据。方法采用条件永生化小鼠足细胞系为研究对象,通过添加不同剂量的Lyc对高糖诱导的足细胞进行干预。实验细胞分6组,分别为正常对照组(5.5m m ol/L葡萄糖)、高渗对照组(5.5 m m ol/L葡萄糖+1 9.5 m m ol/L甘露醇)、高糖组(2 5 m m ol/L葡萄糖)、低剂量Lyc组(25 mmol/L葡萄糖+3.125μmol/L Lyc)、中剂量Lyc组(25 mmol/L葡萄糖+6.25μmol/L Lyc)和高剂量Lyc组(25 mmol/L葡萄糖+12.5μmol/L Lyc)。在细胞培养4 8 h后,用吖啶橙染色法观察各组细胞的自噬体变化情况;流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率变化;采用实时定量荧光PCR和蛋白质印迹法分别检测自噬相关基因LC3、beclin-1、p62/SQSTM I m RNA和蛋白的表达变化情况。结果与正常对照组、高渗对照组相比,高糖组细胞中的自噬体数目明显增多,细胞的凋亡率极显著增加(P0.01),自噬相关基因LC3-II、beclin-1的表达量显著增加(P0.05),而p62/SQSTMI基因的表达量则显著降低(P0.05)。与高糖组比较,不同剂量Lyc组中的足细胞自噬体数目更多;细胞的凋亡率显著降低(P0.05),且高剂量Lyc组细胞的凋亡率降低极显著(P0.01);自噬相关基因LC3-II、beclin-1表达量显著增加(P0.05);而p62/SQSTMI基因表达量则显著降低(P0.05);且高剂量Lyc组基因表达量变化极显著(P0.01);蛋白水平上的检测结果与mRNA水平基本一致。结论Lyc能进一步增强高糖诱导引起的足细胞的自噬,但对足细胞的凋亡却起到了一定的抑制作用,且高剂量的Lyc作用效果更加明显。     

醛固酮抑制Akt活性诱导大鼠足细胞凋亡

目的 探讨醛固酮(ALD)能否诱导培养大鼠足细胞凋亡及Akt信号通路是否参与ALD诱导的足细胞凋亡。方法 体外培养并鉴定大鼠足细胞。无血清同步化处理24 h，分别给予终浓度为0(对照组)、10-9~10-5 mol/L ALD，伴或不伴螺内酯(10-7 mol/L)共孵育。流式细胞仪检测凋亡指数，Hoechst-33342染色检测足细胞凋亡。多聚酶链反应(RT-PCR)检测足细胞盐皮质激素受体(MR)和11β-羟类固醇脱氢酶2 (11β-HSD2) mRNA表达。Akt活性检测试剂盒检测Akt活性表达。结果 ALD以时间和剂量依赖方式诱导足细胞凋亡。螺内酯可明显抑制ALD诱导的足细胞凋亡[ALD+螺内酯组(5.61%±0.72%)比ALD组(15.10%±1.46%)，P < 0.05]。RT-PCR结果证实足细胞表达MR和11β-HSD2 mRNA。螺内酯可部分阻断ALD对Akt活性的抑制作用。ALD诱导的足细胞凋亡率与Akt活性呈明显负相关(r=-0.77， P < 0.05)。结论 ALD可诱导大鼠足细胞凋亡，Akt活性下降可能参与ALD诱导的足细胞凋亡。     

金属蛋白酶组织抑制剂1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡

目的 探讨金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)在高糖诱导的肾小球系膜细胞(MC)凋亡中的作用及机制。方法 用流式AnnexinV/PI双染法及吖啶橙染色检测大鼠MC经不同浓度葡萄糖作用后的凋亡率。用脂质体法将正义、反义人TIMP(hTIMP)-1转染到MC中。采用PCR及RT-PCR检测hTIMP-1的整合及大鼠内源性TIMP-1(rTIMP-1)、bax和bcl-2表达。用CaspACETM Assay System检测半胱氨酸天胱氨酸蛋白酶(caspase-3)的蛋白活性。结果 高糖以剂量及时间依赖的方式诱导凋亡,相关系数r分别为0.925、0.9867, P均 < 0.01。在葡萄糖浓度为30 mmol/L培养条件下, hTIMP-1正义转染组的MC 24 h凋亡率为(4.30±1.11)%, 48 h为(7.78±0.92)%, 与正常对照组[24 h(14.95±1.60)%, 48 h(43.03±4.20)%]及空载体组[24 h(16.50±0.83)%,48 h(40.82±2.46)%]相比, 细胞凋亡显著减少(P < 0.01);hTIMP-1反义转染组MC 24 h凋亡率为(22.5±1.60)%, 48 h为(53.68±3.40)%,与正常对照组和空载体组相比,细胞凋亡显著增加(P < 0.01)。高糖作用后, 正义TIMP-1下调MC bax mRNA的表达, 反义hTIMP-1使之表达上调。与对照组(A值0.1407±0.007)相比, 正义hTIMP-1组caspse-3活性(A值0.086±0.009)显著降低,(P < 0.01),反义hTIMP-1组caspase-3活性(A值0.186±0.02)显著增高,(P < 0.01)。TIMP-1转染不影响bcl-2 mRNA水平的表达。结论 TIMP-1能够抑制高糖诱导的MC凋亡,这种作用部分是通过bax及caspase-3途径来实现的。     

益肾胶囊对高糖环境下小鼠足细胞nephrin、podocin表达的影响

目的:通过探讨益肾胶囊含药血清干预高糖环境下培养的小鼠足细胞nephrin、podocin的表达,以期为益肾胶囊防治糖尿病肾病提供理论依据。方法:将体外培养的小鼠足细胞随机分为7组:正常组、高糖组、等渗组、益肾低剂量组、益肾中剂量组、益肾高剂量组、贝那普利组;按照上述分组培养48 h后,用CCK-8法检测足细胞的增殖;免疫荧光方法检测足细胞nephrin、podocin的表达;用Western blot检测足细胞nephrin、podocin的表达。结果:与正常组相比,高糖组足细胞的增殖明显降低(P0.01),nephrin及podocin的蛋白表达明显下调(P0.01);与高糖组相比,益肾高剂量组与贝那普利组足细胞的增殖显著升高(P0.01),nephrin及podocin的蛋白表达明显上调(P0.01);与贝那普利组相比,益肾高剂量组足细胞的增殖、nephrin及podocin的蛋白表达无明显变化(P0.05)。结论:高糖环境下足细胞nephrin、podocin的表达明显减少;益肾胶囊含药血清可能是通过上调nephrin、podocin的表达,从而保护了肾小球足细胞,其具体机制有待进一步研究。     

哇巴因诱导人足细胞凋亡的作用机制

目的足细胞凋亡在狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)发病过程中有重要作用。内源性哇巴因为强心甾类固醇中的一种,在慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者体内表达上调,在5/6肾切除所模拟的慢性肾衰竭大鼠模型体内可诱导肾间质细胞转分化。本研究主要探讨哇巴因在LN中诱导人足细胞(human podocytecell,HPC)凋亡的作用机制。方法 (1)体内实验:选取肾脏肿瘤患者被切除的正常肾组织作为对照组,系统性红斑狼疮疾病活动指数(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)评分大于5分的活动性LN患者的肾组织作为研究组,通过免疫组织化学检测肾活检组织中nephrin的表达改变。(2)体外实验:培养HPC,以不同浓度哇巴因(0 nmol/L,0.1nmol/L,1 nmol/L,5 nmol/L,10 nmol/L,100 nmol/L)刺激HPC不同时间(24 h、48 h、72 h)后,用MTT法观察并测定哇巴因对HPC增殖凋亡的影响;以不同浓度哇巴因处理HPC 24 h后,采用Hoechst-33258染色检测细胞凋亡;收集各个浓度哇巴因处理的细胞,用蛋白免疫印迹法检测钠钾ATP酶α1(Na~+-K~+-ATPaseα1,NKAα1)、p-Src、nephrin的表达情况。(3)HPC用Src激酶抑制剂PP2(1μmol/L)提前1 h预处理,随后加入不同浓度哇巴因孵育24 h,收集蛋白,行蛋白免疫印迹,检测p-Src、nephrin的表达。结果 (1)哇巴因以剂量和时间依赖方式诱导HPC凋亡。(2)正常对照肾组织中nephrin的表达沿肾小球基底膜外侧呈均匀、线状分布,且表达强;LN组肾组织中nephrin在肾小球的分布不均,且表达较正常肾组织明显减弱。(3)随着哇巴因浓度增加,HPC细胞中NKAα1、p-Src的表达先上调再下降,同时可检测到nephrin蛋白表达逐渐减少。(4)PP2预处理HPC,阻断哇巴因对Src的活化,使得pSrc表达下调,逆转上述效应,逐渐恢复nephrin的表达,使nephrin表达增加。结论哇巴因通过NKAα1/Src下调nephrin蛋白的表达参与HPC凋亡。     

天麻素通过调控Klotho基因表达对高糖诱导的足细胞损伤的影响

目的:探讨天麻素对高糖诱导的足细胞损伤的影响及分子机制。方法:将小鼠肾脏足细胞MPC5分为对照组、高糖组、高糖+天麻素低、中、高剂量组、高糖+pcDNA组、高糖+pcDNA-Klotho组、高糖+天麻素+si-NC组、高糖+天麻素+si-Klotho组。蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Klotho mRNA表达水平。结果:天麻素低、中、高剂量处理后,高糖诱导的足细胞中nephrin和podocin蛋白表达水平升高,细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达水平升高,Bax蛋白表达水平降低,Klotho mRNA和蛋白表达水平升高,且呈剂量依赖性(P0.05)。过表达Klotho可抑制高糖诱导的足细胞凋亡,提高nephrin、podocin蛋白表达水平。抑制Klotho表达逆转了天麻素对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的保护作用。结论:天麻素通过上调Klotho表达抑制高糖诱导的足细胞损伤。     

益肾胶囊含药血清对高糖环境下肾小球足细胞自噬的影响

目的:观察益肾胶囊含药血清对高糖环境下小鼠肾小球足细胞自噬的影响。方法:制备不同浓度益肾胶囊含药血清,对体外培养的小鼠肾小球足细胞进行分组干预,细胞分为:正常组(NG)、高糖组(HG)、低浓度益肾胶囊含药血清组(LY)、中浓度益肾胶囊含药血清组(MY)、高浓度益肾胶囊含药血清组(HY)、贝那普利含药血清组(BP)。Western Blot检测自噬相关LC3蛋白及泛素结合蛋白p62(p62/SQSTMl)蛋白的表达变化。透射电镜下观察各组足细胞内自噬体的变化。结果:与NG组相比,HG组足细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达减少,泛素结合蛋白p62(p62/SQSTMl)表达增多(P0.05);与HG组相比,HY组足细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达增多,泛素结合蛋白p62(p62/SQSTMl)表达减少(P0.05)。透射电镜提示,与HG组相比,HY组足细胞自噬体增多(P0.05)。结论:高糖可导致足细胞自噬障碍,而益肾胶囊可通过改善其自噬障碍,进而发挥足细胞保护的作用。     

二氢欧山芹通过调节自噬保护高糖诱导的足细胞损伤

目的 探讨二氢欧山芹(columbianetin,CBT)对高糖诱导的足细胞损伤保护作用及其机制研究.方法 体外培养永生化小鼠足细胞系MPC-5,给予高浓度的葡萄糖刺激,观察CBT对高糖诱导的足细胞损伤及自噬的影响;采用蛋白质印迹法检测足细胞自噬相关蛋白;荧光显微镜观察GFP-LC3-Ⅱ转染后足细胞绿色荧光颗粒.结果 ...     

缬沙坦联合CXCL16对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的机制研究

目的:探讨缬沙坦(Valsartan, Val)联合CXCL16对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的机制研究。方法:将MPC-5细胞分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖+缬沙坦低、中、高剂量组(HG+Val-L、HG+Val-M、HG+Val-H)、高糖+缬沙坦+pcDNA组、高糖+缬沙坦+CXCL16组(HG+Val+pcDNA、HG+Val+CXCL16)。通过CCK8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、活化的Cleaved cas9和CXCL16蛋白表达;ELISA检测ROS、MDA、GSH-Px、SOD的表达。结果:HG组能够抑制细胞的活力、GSH-Px、SOD表达,促进细胞凋亡、ROS、MDA表达,上调Bax、Cleaved cas9、CXCL16蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达;HG+Val-L组、HG+Val-M组、HG+Val-H组可以促进细胞的活力、GSH-Px、SOD表达,抑制细胞凋亡、ROS、MDA表达,下调Bax、Cleaved cas9、CXCL16蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。过表达CXCL16可以部分回...     

前列腺素E1对高糖诱导足细胞肾素受体表达的影响

目的:观察前列腺素E1(prostaglandin E1,PGE1)对高糖培养小鼠肾脏足细胞肾素受体(renin receptor,RR)表达的影响。方法:体外培养和分化小鼠足细胞,随机分为4组分别以0 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml浓度的PGE1进行干预24 h,以Western印迹法、实时定量PCR(quantitative PCR,q-PCR)法检测RR表达的情况。结果:各组分别加不同浓度的PGE1后对照组、高渗组和高糖1组RR mRNA表达总的趋势先上升后下降,高糖2组RR mRNA表达随PGE1浓度升高逐渐下降,10 ng/ml、20 ng/ml组下降有显著意义(P=0.002,P=0.003)。结论:在不同葡萄糖浓度环境中足细胞RR表达不同,对PGE1的干预反应不同,总的趋势为在PGE1低浓度时表达上调,在PGE1高浓度时表达下调,且有显著意义。     

高糖诱导足细胞发生上皮-间叶细胞转分化

目的 通过观察高糖是否引起小鼠足细胞发生上皮-间叶细胞转分化现象,探讨糖尿病肾小球损伤的可能机制。 方法 以小鼠永生化足细胞株为研究对象,予不同浓度葡萄糖（12.5、25、50 mmol/L）处理该细胞36 h,并设低糖（5.6 mmol/L）和甘露醇（50 mmol/L）处理组为对照组。采用蛋白免疫印迹和间接免疫荧光染色方法检测α平滑肌肌动蛋白 （α-SMA）、迁连蛋白（FN）、CD2相关蛋白（CD2AP）和Wilms’肿瘤1基因（WT-1）蛋白的表达。 结果 低糖（5.6 mmol/L）和甘露醇（50 mmol/L）处理条件下小鼠足细胞表达WT-1、CD2AP,基本不表达α-SMA和FN;而予不同浓度葡萄糖处理36 h后,足细胞中α-SMA和FN表达水平呈剂量依赖性上调（P < 0.05）。间接免疫荧光染色结果也显示,与低糖组相比,高糖组中 α-SMA阳性的足细胞比例显著增加（P < 0.05）。同时,蛋白免疫印迹结果还表明高糖可呈剂量依赖性方式下调WT-1和CD2AP的表达（P < 0.05）。 结论 在高糖条件下,足细胞发生向间叶细胞表型的转分化可能是引起足细胞功能失调,进而引起糖尿病肾小球损伤发生的作用机制之一。     

nephrin通过PI3K-Akt途径抑制血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞凋亡

目的 研究nephrin在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导足细胞凋亡中的作用,以及可能的分子机制。 方法 体外培养永生化小鼠足细胞（MPC）,以不同浓度AngⅡ处理MPC和10-8 mol/L AngⅡ刺激不同时间,用流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时定量PCR、免疫荧光和Western印迹法检测nephrin的表达和分布;Western印迹法检测Akt磷酸化水平。脂质体法转染pcDNA3.1-mNPHS1质粒,G418筛选稳定转染细胞系。用Akt抑制剂LY294002或与AngⅡ共孵育刺激MPC和pcDNA3.1-mNPHS1转染细胞,检测Akt磷酸化水平和细胞凋亡率。 结果 （1）AngⅡ以剂量和时间依赖方式诱导MPC凋亡。AngⅡ受体拮抗药氯沙坦与AngⅡ共孵育18 h,显著降低AngⅡ单独刺激的足细胞凋亡率（P < 0.05）。（2）10-8 mol/L AngⅡ刺激12 h后,nephrin mRNA和蛋白较对照组显著降低,24 h nephrin mRNA约为正常对照的50%（P < 0.05）。正常足细胞nephrin主要分布于核膜周围的胞质和细胞膜,随刺激时间延长,胞膜和胞质nephrin表达逐渐降低。（3）10-8 mol/L AngⅡ刺激15 min后,Akt磷酸化显著降低,约为正常对照细胞的50%（P < 0.01）。（4）AngⅡ与LY294002共孵育12 h后,细胞凋亡率显著高于AngⅡ和LY294002单独刺激（均P < 0.05）。（5）pcDNA3.1-mNPHS1稳定转染显著上调足细胞Akt磷酸化水平（P < 0.05）,抑制 AngⅡ诱导的细胞凋亡（P < 0.05）。 结论 AngⅡ通过AngⅡ受体诱导小鼠足细胞凋亡,抑制足细胞nephrin表达。nephrin通过PI3K-Akt信号通路调节足细胞存活状态。     

通过抑制ERK1/2通路诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究

目的应用细胞外信号调节激酶(ERK)1/2抑制剂U0126研究ERK1/2在肝癌细胞增殖、凋亡中的作用。方法以肝癌SMMC-7721细胞株为材料,分为空白对照组及不同浓度的U0126处理组。以MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果不同浓度的U0126处理后均可明显抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),使处于G0/G1期的细胞明显增多(P<0.05)且呈剂量依赖性,并诱发细胞凋亡发生(P<0.05)。结论阻断ERK1/2通路有可能成为肝癌治疗的重要手段。     

PGC-1α在高糖诱导的HK-2细胞凋亡中的作用

目的:探讨PGC-1α在高葡萄糖诱导的HK-2细胞凋亡中的作用及机制。方法:根据对HK-2细胞所进行的处理不同设置分组:A、对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖处理24 h);B、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h);C、PGC-1α过表达组(PGC-1α过表达质粒转染后以30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h);D、空质粒对照组(空质粒转染后以30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h);采用Western Blot技术检测PGC-1α、cleaved caspase-3的表达,采用流式细胞分析技术检测线粒体膜电位(ΔΨm)的变化和细胞凋亡情况。统计分析采用SPSS20软件,P0.05为差异有统计学意义。结果:高糖组较对照组PGC-1α表达减少,线粒体膜电位降低,cleaved caspase-3的表达增加,细胞凋亡增加(P0.05);PGC-1α过表达组较高糖组PGC-1α表达增加,线粒体膜电位升高,cleaved caspase-3的表达减少,细胞凋亡减少(P0.05)。结论:PGC-1α可能通过维护线粒体的功能减少高糖所致的HK-2细胞凋亡,对HK-2细胞具有保护作用。