瘦素与肝纤维化

瘦素是肥胖基因的编码产物,主要由脂肪组织分泌,与摄食行为和能量代谢的调节密切相关。近来发现瘦素不单纯是抗肥胖激素,而是涉及多系统的多功能细胞因子,它对肝病的作用愈来愈受到关注。肝纤维化是肝脏对各种慢性损伤的一种修复应答反应,其持续发展将演变为肝硬化,有关肝纤维化的研究对预防肝硬化、控制慢性肝病有重要意义。本文就瘦素对肝纤维化作用的最新研究进展进行综述。     

姜黄素对肝纤维化大鼠瘦素及瘦素受体表达的影响

目的：探讨姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝脏组织中瘦素（leptin）以及瘦素受体（leptin receptor）表达的影响。方法：将22只雄性SD大鼠随机分为3组：正常对照组、模型组、姜黄素治疗组。采用四氯化碳（CCl4）皮下注射制作大鼠肝纤维化模型。制备肝组织切片，行常规HE染色、Masson染色，观察各组大鼠肝脏病理学变化，采用肝纤维化病理分期进行病理学疗效评估；应用免疫组织化学法检测肝组织中瘦素以及瘦素受体的表达。结果：姜黄素对肝纤维化大鼠的肝脏病理分期具有明显的改善作用。并且免疫组织化学检测显示姜黄素能显著减少瘦素与瘦素受体的阳性表达。结论：姜黄素能明显改善实验性大鼠肝纤维化，同时下调肝纤维化大鼠肝脏中瘦素以及瘦素受体的水平，这可能是姜黄素抗肝纤维化作用的机制之一。     

血清瘦素在实验性脂肪性肝纤维化过程中的变化

目的:观察大鼠脂肪性肝纤维化过程中的血清瘦素水平变化特点及其与脂肪性肝纤维化的关系.方法:大鼠脂肪性肝纤维化模型采用CCl4中毒与高脂低蛋白饮食复合因素复制.首次100% CCl4溶液0.5ml/100g、其后40% CCl4橄榄油溶液0.3 ml/100g皮下注射,每周两次,共6周.第1~2周给予高脂低蛋白饲料(79.5%玉米粉、20%猪油、0.5%胆固醇),而后给予纯玉米饲料.对照组给予等量橄榄油,普通饮食.正常对照组设两天、3周、6周3个观察点,共15只.模型组设两天、1周、两周、3周、4周、5周、6周7个动态观察组,共75只大鼠.生化法检测肝功能和脂肪含量,Jamall氏法测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,天狼猩红染色观察肝组织纤维化程度,ELISA法检测血清瘦素水平.结果:与正常组比较,脂肪性肝纤维化大鼠造模两天时血清瘦素水平明显下降,以后逐渐回升,3周时则达到最高,随后又逐渐下降,6周时大鼠血清瘦素水平仍然保持在较低水平.血清ALT和AST活性4周时基本达到峰值,随后进入一个平台期,6周时仍然保持在高水平,血清TC(总胆固醇)含量无明显变化,血清TG(甘油三酯)含量在造模第2天时明显低于正常大鼠,第2周时降至最低值,而后开始逐渐增加,但始终低于正常大鼠血清TG水平.模型早期肝组织Hyp变化不明显,随着造模持续,Hyp含量逐渐升高,6周时最为明显,达到1.4倍;与肝纤维化病理变化趋势基本相同.模型大鼠血清瘦素水平与肝组织Hyp含量增加趋势相反,但是二者无明显相关性;而与模型大鼠体重和TG含量呈明显正相关.结论:血清瘦素水平主要反映脂肪性肝纤维化大鼠的体重和血清TG含量变化,而与肝纤维化发展的病理过程无明显关系.     

瘦素与肝纤维化关系的研究进展

瘦素 (leptin)是由ob基因 (位于人类染色体 7q3 2 )编码的一种 167个氨基酸组成的分泌型蛋白质 ,相对分子质量约为 14～16× 10 3 ,它主要由白色脂肪组织产生 ,进入血循环后 ,游离或与瘦素结合蛋白结合 ,通过多种组织及多种形式的瘦素受体 ,作用于包括中枢和外周的多个位点 ,影响机体许多生理系统及代谢通路 ,具有广泛的生物学效应。最新的一些临床与研究显示 ,瘦素与肝纤维化具有密切的关系。作为新的肝纤维化形成因子 ,其机制研究已越来越引起人们的关注[1,2 ] 。但是瘦素在肝纤维化中到底起到什么样的作用 ,学术界还是有较大的争论。一、…     

实验性肝硬化大鼠肝组织和血浆中瘦素水平的变化

目的 探讨实验性大鼠肝硬化形成过程中,肝组织和血浆中瘦素水平的动态变化及意义.方法 以SD大鼠为实验对象,于实验开始时处死一批大鼠作为0期正常对照组,剩余大鼠皮下注射60%四氯化碳(0.3 mL/100 g体重,每周2次)复制肝硬化动物模型.于第3、6、9、12周各处死一批大鼠.用RT-PCR检测各期动物肝组织中瘦素的mRNA表达水平.用免疫组织化学方法检测各期动物肝组织中瘦素的表达和定位,用放免法检测各期动物血浆瘦素和透明质酸水平.MPIAS-500多媒体真彩色图像分析系统作肝内胶原定量分析.结果 RT-PCR检测显示正常肝组织中有少量瘦素mRNA表达(0.43±0.45),随着肝硬化的形成,其3、6、9、12周表达量逐渐递增(分别为:0.91±0.07、1.17±0.11、1.26±0.14、1.27±0.19)(与0周比,P<0.01).免疫组织化学方法检测显示正常肝组织可见瘦素在血管周围、汇管区及肝素间质细胞的细胞质和细胞膜有少量表达.随着肝硬化的形成,瘦素表达增多、增强(P<0.01).模型组各期(3、6、9、12周)随着造模时间的增加,血浆中瘦素(ng/mL)(10.665±1.827、11.536±2.739、13.2±1.904、11.207±2.293)均逐渐增加,各期模型组均高于正常组8.005±1.028,比较差异显著(P<0.05).在肝硬化形成过程中.肝脏瘦素mRNA水平与血浆中HA及肝内胶原含量呈正相关.结论 在四氯化碳诱导的大鼠肝硬化形成过程中,肝组织和血浆中瘦素水平增加,并随肝纤维化/肝硬化的形成逐步升高,从而参与肝硬化病理过程的发生.     

瘦素及其信号通路促肝纤维化机制研究进展

多种慢性肝病能导致肝纤维化,肝纤维化是发展为肝硬化的中间阶段。肝星状细胞的激活在肝纤维化的发生发展中起关键作用。在各种炎症刺激下,体内促肝纤维化因子激活其信号转导通路,使肝星状细胞的形态和功能发生变化,引起胶原沉积。瘦素作为一种促肝纤维化因子,通过其信号转导机制在肝纤维化发生发展中发挥重要作用。     

瘦素与肝纤维化

瘦素（leptin）是1994年首次通过定向克隆技术成功克隆的一种代谢性激素,由肥胖（OB）基因编码,人OB基因位于7号染色体的长臂（7q31．3）,由3个外显子和2个内含子构成。瘦素是一种分泌蛋白,由167个氨基酸组成,相对分子质量为16000。瘦素必须与相应受体（ob—R）结合才能发挥作用。目前发现ob-R有a、b、c、d、e和f6种亚型,其中ob-Rb为长型受体,也是功能性受体,ob—Re是可溶性受体,与循环中的瘦素形成复合物,通过调节游离与结合的瘦素比例可改变其生物学活性,其余为短型受体叫。     

血清纤维化指标与肝组织病理和肝组织纤维定量关系的实验研究

目的　本研究观察实验大鼠血清纤维化三项指标与肝组织病理和纤维定量之间的确切关系,探讨其临床应用价值．方法　利用人血清蛋白免疫损伤Ｗｉｓｔａｒ 大鼠造成肝纤维化模型,综合分析模型组、促肝细胞生长因子治疗组和正常对照组之间血清肝纤维化指标、肝组织病理改变、肝组织胶原纤维和网状纤维病理图象定量分析等变化．结果　模型组血清肝纤维化指标（ＰＣⅢ,ＨＡ,ＬＮ） 均高于对照组,差异有显著意义（ Ｐ＜ ０－０５ 或Ｐ＜ ０－０１） ． 光镜下肝组织病理变化,肝组织胶原纤维和网状纤维病理图象定量分析模型组结果均高于对照组（ Ｐ＜ ０－０５） ．结论　血清三项指标与肝组织病理和纤维定量呈现一致性改变,显示良好的正相关．     

亲环素B、D在肝纤维化模型中的变化及其意义

亲环素B在体内分布广泛,与多种疾病相关,特别是与自身免疫性疾病关系密切.亲环素B的下降与HCV抑制程度相关,提示抑制亲环素B表达可能会影响HCV引起的肝病的结局如肝纤维化与肝硬化等[1].亲环素D是另外一个重要的结合蛋白,其被结合后能够抑制线粒体通透性转换功能.Rehman等[2]发现,胆管结扎小鼠模型可以通过线粒体通透性转换抑制肝脏坏死,这可能也与亲环素D的结合有关.而对于亲环素B和D在肝硬化以及肝纤维化中的作用报道较少.在本研究中,我们观察了亲环素B与D在肝纤维化肝脏中的表达,并验证了干扰其表达后肝纤维化指标的变化.     

免疫性和酒精性肝纤维化大鼠肝脏细胞质膜的蛋白质组学研究

目的 研究肝纤维化的发生机制,寻找新的与肝纤维化相关的生物学标志物. 方法将48只大鼠分为乙醇组、免疫组和对照组,分别进行乙醇灌胃、猪血清注射与等渗盐水注射处理.采用James's网状染色法染色并检测处理后第2、4、6、8周大鼠肝脏的病理学变化.将处理后第2、4、6、8周的各组大鼠分别处死4只后取肝,并将肝脏组织作匀浆处理,通过2次蔗糖密度梯度离心获得细胞质膜组分,用Western blot法检测细胞质膜的纯度.提取肝脏细胞质膜蛋白质,通过双向凝胶电泳分析各个时期的大鼠肝脏细胞质膜蛋白质,差异蛋白质点在酶解后经戴安纳升级液相色谱Ultimate 3000串联布鲁克高容量离子阱质谱HCT进行鉴定.并对被鉴定的差异蛋白质进行功能和定位的分类分析. 结果大鼠肝脏细胞质膜得到了有效富集.双向凝胶电泳分析第2周和第8周的大鼠肝细胞质膜蛋白质,共找到87个差异蛋白质点,这些蛋白质点经过质谱鉴定后对应于30个非冗余蛋白质,包括膜联蛋白A2,细胞支架角蛋白8和18. 结论膜联蛋白A2、细胞支架角蛋白8和18等蛋白质可成为肝纤维化诊断的新标志物.     

血浆蛋白质组模式预测鼠不同时期肝纤维化

蛋白质组模式在肿瘤性疾病的诊断方面应用已经较多，显示了良好的应用前景，但关于蛋白质组模式在肝纤维化时的改变较少有文献报道。为寻找一种新的、理想的诊断肝纤维化的方法，我们制备了不同时期肝纤维化鼠模型，用蛋白芯片技术检测鼠血浆标本，根据血浆蛋白模式建立不同时期肝纤维化判别函数，并用鼠肝纤维化模型验证该判别函数的准确性。     

瘦素在肝纤维化中的作用及机制研究进展

瘦素(leptin)是由肥胖基因编码的、具有多种功能的多肽类激素,目前关于瘦素在慢性肝病中的作用研究较多,此文就瘦素与肝非实质细胞、细胞因子的关系及在肝纤维化发展机制中的作用研究进展作一综述。     

骨形成蛋白7干预肝纤维化小鼠肝组织E3泛素连接酶Arkadia表达的实验研究

目的 探索E3泛素连接酶Arkadia在CCl4所致肝纤维化小鼠肝组织中的动态表达,以及骨形成蛋白7 (BMP-7)对其的阻断作用. 方法 30只健康雄性ICR小鼠,随机分为正常对照组(6只)、模型组(18只)和BMP-7干预组(6只);模型组再按不同的时间点分为4周、8周和12周3个亚组.在小鼠双后肢皮下交替注射60％ CCl4/花生油溶液(5ml/kg),每周2次,共持续12周,制备肝纤维化模型;BMP-7干预组在皮下注射CCl4的同时,从第9周开始腹腔注射BMP-7 (300Pg/g)溶液,隔天1次,共4周.苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察肝组织病理变化;RT-PCR、免疫组织化学和Western blot法检测肝组织中Arkadia的mRNA和蛋白质表达量.样本均数比较用单因素方差分析和(或)配对t检验,方差齐时采用LSD -t检验;相关性分析用Pearson直线相关分析法. 结果 成功建立了肝纤维化小鼠模型.模型组Arkadia、Smad7和TGFβ 1的mRNA表达量在纤维化过程中逐渐升高,12周时达高峰(相对表达量分别为1.3434±0.0149、1.2200±0.0093和1.1258±0.0065),BMP-7干预组表达量降低(相对表达量分别为0.9867±0.0169、0.9517±0.0120和0.9029±0.0085),与对照组(相对表达量分别为0.5398±0.0025、0.7467±0.0072和0.6318±0.0041)相比,差异有统计学意义(F值分别为812.801、451.462和998.957,P值均＜0.01);BMP-7干预组Arkadia、Smad7和TGF β1的mRNA表达明显低于12周模型组(t值分别为12.108、18.737和16.364,P值均＜0.01).正常肝组织中Arkadia、Smad7、TGF β1蛋白仅在汇管区少量表达(相对表达量分别为2.1702±0.0518、2.0798±0.0547和2.4515±0.0487),模型组中其表达量逐渐增加(12周的相对表达量分别为3.4198±0.0279、5.4480±0.0565和5.2619±0.0530),主要在汇管区和肝细胞胞质内表达,BMP-7干预后表达量降低(分别为3.1457±0.0424、3.5616±0.0491和3.5282±0.0195),与对照组相比,差异有统计学意义(F值分别为8.399、609.690和900.561,P值均＜0.01);与12周模型组相比,BMP-7干预组Arkadia、Smad7、TGF β1的蛋白质表达量明显降低(t值分别为23.438、11.667和42.889,P值均＜0.01).结论 Arkadia在肝纤维化进展过程中呈上升趋势,BMP-7具有抗肝纤维化作用并可以抑制纤维化过程中Arkadia的表达.     

蛋白酶活化受体2在大鼠胆汁淤积性肝纤维化肝组织中的表达及其意义

目的 观察胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织中蛋白酶活化受体2(PAR2)的动态变化,探讨其在肝纤维化形成中的意义. 方法 建立大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,同时设立假手术组和正常对照组,Western blot及RT-PCR检测术后2、4、6、8周肝组织中PAR2蛋白及mRNA的表达水平,并分析其与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平的关系.对数据进行重复测量资料的方差分析.结果 肝纤维化组大鼠2周时即可见PAR2 mRNA及蛋白水平升高,随着肝纤维化时间的延长,4～6周时其表达水平进一步升高(P＜ 0.05),8周时达高峰(相对表达量分别为1.62±0.11、47.6±2.8,P＜ 0.01).Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平也随着肝纤维化程度的加重而升高,6～8周时达高峰(相对表达量均为65.6±2.7),且与PAR2的表达水平呈一致性.结论 PAR2在胆汁淤积性肝纤维化中的动态表达可能参与并促进肝纤维化的形成和发展.     

人血白蛋白及D-氨基半乳糖、脂多糖联合诱导建立大鼠慢加急性肝衰竭模型

目的建立与人慢加急性肝衰竭病理过程、生化改变相似,实用性、重复性好的动物模型,为研究慢加急性肝衰竭发生的病理生理机制、药物筛选及疗效评价提供适宜的模型。方法用人血清白蛋白免疫诱导建立肝纤维化大鼠模型,至肝纤维化达S4时予以D-氨基半乳糖与脂多糖联合攻击,计算动物病死率及生存时间,动态观察给药后4、8、12h肝功能、血浆细胞因子水平及病理变化,并以TUNEL法检测原位细胞凋亡,计算凋亡指数。结果人血白蛋白攻击6周时绝大多数大鼠形成经典肝硬化或重度肝纤维化。D-氨基半乳糖与脂多糖联合同时腹腔注射后90%大鼠死于肝衰竭,平均生存时间（16.1±3.7）h,病理表现为肝硬化再生结节内发生大块或亚大块坏死,纤维间隔保留。转氨酶及胆红素的变化符合肝细胞大片坏死时的功能改变,血清TNFα明显增高并与凋亡程度相一致。IL-10随给药时间延长而增高,与临床慢加急性肝衰竭患者变化相似。结论对人血白蛋白免疫诱导型肝硬化及肝纤维化大鼠给予D-氨基半乳糖/脂多糖联合急性攻击可建立慢加急性肝衰竭模型,本实验模拟了临床经常遇到的慢性肝病基础之上发生急性肝衰竭的部分病理生理过程。TNFα介导的肝细胞凋亡可能是该慢加急性肝衰竭重要病理机制之一。     

中药复方对猪血清免疫性肝纤维化肝中氧化及抗氧化的影响

在各种诱因引起的肝纤维化中，氧自由基是促使肝纤维化形成的主要原因之一，脂质过氧化反应的醛类产物不仅引起肝星状细胞（HSC）的增殖与活化，而且激活库普弗细胞释放导致肝纤维化形成的细胞因子。中药复方汉丹肝乐具有良好的抗肝纤维化作用，但其药理作用可能是多方面的。本实验旨在通过观察不同干预措施下肝内氧化及抗氧化体系的变化情况，了解汉丹肝乐是否可通过改善体内氧化及抗氧化体系发挥作用，为临床用药提供依据。     

自身免疫性肝病动物模型

自身免疫性肝病主要包括自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)、原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis,PSC)及重叠综合征.     

Correlation between TIMP-1 expression and liver fibrosis in two rat liver fibrosis models

AIM: To evaluate serum TIMP-1 level and the correlation between TIMP-1 expression and liver fibrosis in immune-induced and CCL4-induced liver fibrosis models in rats. METHODS: Immune-induced and CCL4-induced liver fibrosis models were established by dexamethasone (0.01 mg) and CCL4 respectively. Serum TIMP-1 level was detected with ELISA, while histopathological grade of liver biopsy was evaluated. Spearman rank-correlation test was used to analyse the difference of the correlation between the TIMP-1 expression and hepatic fibrosis in the two fibrosis models. Furthermore, in situ hybridization was used to determine the expression difference of TIMP-1 mRNA in the two models. RESULTS: Positive correlation existed between serum TIMP-1 level of immune induced group and the histopathological stages of fibrosis liver of corresponding rats (Spearman rank-correlation test, rs= 0.812, P < 0.05), and the positive in situ hybridization signal of TIMP-1 mRNA was strong. In CCL4-induced liver fibrosis model, the correlation between the serum TIMP-1 level and the severity of hepatic fibrosis was not statistically significant(Spearman rank-correlation test, rs = 0.229, P > 0.05). And compared with immune-induced model, the positive in situ hybridization signal of TIMP-1 mRNA was weaker, while the expression variation was higher in hepatic fibrosis of the same severity. CONCLUSION: The correlations between TIMP-1 expression and liver fibrosis in two rat liver fibrosis models are different. In immune-induced model, serum TIMP-1 level could reflect the severity of liver fibrosis, while in CCL4-induced model, the correlation between the serum TIMP-1 level and the severity of hepatic fibrosis was not statistically significant.