鼻咽癌组织细胞死亡受体DR4和DR5 mRNA的表达

目的：分析鼻咽癌（NPC）组织细胞死亡受体（death receptor,DR)DR4和DR5 mRNA的表达。方法：从NPC癌组织提取的细胞总RNA逆转录生成第一条cDNA链后,再用DNA多聚酶链式反应扩增,经电泳,臭乙锭染色后,分析DR4和DR5受体mRNA的表达。结果：20例NPC癌组织有12例可检测到DR4 mRNA的表达,表达阳性率为60％,而所有20例NPC癌组织均可检测到DR5 mRNA的表达,8例非NPC鼻咽组织也都可检测到DR5 mRNA的表达,但未能检测到DR4 mRNA的表达。结论：DR4受体mRNA在NPC癌组织与非NPC鼻咽组织之间表达不同,而DR5受体mRNA在NPC癌组织与非NPC鼻咽组织之间的表达无差别,提示DR4和DR5死亡受体在NPC癌组织与非NPC鼻咽组织可能起着不同的作用。     

新型重组人肿瘤坏死因子抗荷鼻咽癌裸鼠的实验研究

目的 寻找理想的鼻咽癌生物治疗及联合治疗的新方法。方法 利用国内建株的鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ－２）制造了裸鼠鼻咽癌模型，用新型重组人肿瘤坏死因子（ＮｒｈＴＮＦ－α），通过不同的用药途径（局部、全身）和模式（单独、联合）观察治疗荷鼻咽癌裸鼠的疗效。并在光镜和透射电镜下观察ＮｒｈＴＮＦ－α作用后肿瘤组织细胞组织病理学及超微结构，探讨其作用机理。结果和结论 ①荷鼻咽癌裸鼠经ＮｒｈＴＮＦ－α作用后肿瘤组织细     

鼻咽癌组织细胞凋亡的检测

目的 :探讨鼻咽癌组织放疗后病理改变及其临床意义。方法 :采用TdT酶介导的生物素化dutp缺口末端标记技术和HE染色 ,检测 30例鼻咽癌组织放疗前后的细胞凋亡率 ,并比较放疗前后的组织病理改变。结果 :鼻咽癌组织放疗后的细胞凋亡率明显高于放疗前 ;放疗后的癌细胞分化趋好 ,但到放疗中期时凋亡率有所下降。结论 :鼻咽癌放疗一方面可加速癌细胞的凋亡 ,另一方面可能促使增殖的癌细胞朝分化好的方向发展 ,从而达到治疗目的     

人鼻咽癌组织定向cDNA文库的构建

目的快速构建成人鼻咽癌组织cDNA文库.方法从人鼻咽癌组织分离总RNA,以含有sfiIB酶切位点的oligo(dT)引物合成第一链cDNA,以含sfiIA酶切位点的SMART寡核苷酸为引物经LD-PCR扩增双链cDNA,双链cDNA经sfiI(IA & IB)酶切,以CHROMA SPIN-400柱分级分离cDNA,收集符合需要的cDNA片段并纯化,随后将之与λTriplEx2载体连接经体外包装成噬菌体cDNA文库.结果经检测共获得 3.64×106个重组子,重组率＞94%,文库经扩增后滴度为 3.8×109 pfu/ml.结论用SMART方法构建的鼻咽癌组织cDNA文库质量较高,这为以后筛选获取鼻咽癌特异抗原基因或其他相关基因奠定了基础.     

hTR反义寡核苷酸诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的：探讨人端粒酶反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞凋亡的作用。方法：脂质体介导反义寡核苷酸转染鼻咽癌ＨＮＥ１细胞株,采用吖啶橙荧光染色计数,透射电镜观察ＨＮＥ１细胞凋亡改变。结果：反义寡核苷酸转染ＨＮＥ１细胞４８小时后,ＨＮＥ１细胞形态出现改变,细胞娄减少。吖啶橙荧光染色计数及透射电镜分别发现,反义寡核苷酸组较对照组有更多的调亡细胞及更高的调亡指数。结论：针对端粒酶ＲＮＡ的反义寡核苷酸能有效地通过抑制端粒     

γ射线诱导人鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察γ射线诱导鼻咽癌细胞亡情况。方法：显微荧光染色法和原位未端标记法治 观察放射线对人鼻咽癌细胞株（ＨＮＥ１）凋亡情况进行研究。结果：γ射线０、３、６、９、１２、２５Ｇｙ照射后ＨＮＥ１细胞凋亡率荧光法分别为５．５％、９．５％、１２％、２５．５％、３５．５％、６５．５％;未端标记法分别为１．５％、１１％、１５．５％、２１．５％、２６．５％及５０．５％。结论：放射诱导凋在ＨＮＥ１放射效应中起重要     

效应蛋白酶受体-1在鼻咽癌组织中的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

目的：探讨凝血蛋白酶因子Xa（FXa）的效应蛋白酶受体-1（EPR-1）在鼻咽癌（NPC）组织中的表达及其与细胞增殖、凋亡之间的关系。方法：用免疫组织化学SP法检测NPC组织、癌旁交界组织各42例及鼻咽部黏膜慢性炎症组织30例中EPR-1、增殖细胞核抗原Ki-67的表达,以Ki-67代表细胞增殖指数（PI）;用TdT酶介导的生物素化dUTP缺口末端标记技术（TUNEL法）检测凋亡指数（AI）并进行统计学分析。结果：EPR-1在NPC的组织、癌旁交界组织、鼻咽部黏膜慢性炎症组织中的阳性表达率分别为76．1％、90．5％、100．0％,3组间差异有统计学意义（均P〈0．01）,与AI呈正相关（r=0．551,P〈0．01）,与PI呈负相关（r=-0．338,P〈0．05）。结论：EPR-1促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,为以Survivin为靶向的NPC治疗开创新的途径。     

细胞增殖和凋亡在鼻咽癌放疗中的预后价值

目的：研究增殖和凋亡在放射治疗鼻咽癌中的预后价值。方法：回顾性分析42例放疗未控和根据临床病理与之配对的42例放疗治愈鼻咽癌的细胞增殖和凋亡情况，应用胶质银，原位细胞凋亡试剂盒及有丝分裂细胞进行检测。结果：放疗治愈组与未控组之间AnNOR(NOR核仁组成区嗜银蛋白）颗粒计数，凋亡细胞数，凋亡细胞数与分裂细胞数之比值（A／M）有显著差异，结论：AgNOR颗粒计数，凋亡细胞数以及A／M可作为预测放射治疗鼻咽癌预后的参考指标。     

田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2生长和凋亡的影响

目的探讨田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2的抑制和凋亡作用,为其临床应用提供实验依据。方法SRB法检测田基黄对CNE-2细胞生长的抑制作用,PI分析细胞周期的变化、Annexin V检测细胞凋亡的发生。结果田基黄抑制CNE-2细胞的生长,引起细胞死亡;田基黄诱导CNE-2细胞发生凋亡和坏死;田基黄作用人鼻咽癌细胞后S期细胞的比例增加,G2/M期细胞的比例减少。结论一定浓度的田基黄可明显抑制人鼻咽癌细胞CNE-2生长,并诱导其凋亡,机制可能与阻滞细胞停留在S期有关。     

DcR3在喉癌组织中的表达及其与细胞凋亡相关性的研究

、吸烟量、年龄和性别无关(P>0.05).喉癌组织细胞凋亡率与临床分期、淋巴转移有关;与临床分型、病理分级、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关.喉癌组织中DcR3蛋白表达水平与喉癌组织细胞凋亡率呈负相关.结论 DcR3蛋白的高表达可促进喉癌的发生、发展,并通过抑制凋亡并促进细胞增殖参与喉癌发展.     

bcl—xs促进三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的 利用促进凋亡基因bcl-xs降低肿瘤细胞凋亡阈值,增强三氧化二砷诱导的鼻咽癌细胞凋亡,以探索提高鼻咽癌化疗敏感性的新途径。方法 将含有人bcl-xs基因的重组真核表达质粒导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株（CNE－2Z）,以不含有bcl-xs基因的质粒转染CNE－2Z作为对照细胞。用三氧化二砷处理两组细胞后,台盼蓝计数法求得各自的IC50,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。结果 导入bcl-xs的细胞与对照细胞相比,其对三氧化二砷的IC50值明显降低,流式细胞仪及荧光染色检测结果表明其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论 bcl-xs能显著提高鼻咽癌CNE－2Z细胞株对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性。     

细胞连接蛋白基因在鼻咽癌中的表达

目的：为了解细胞连接蛋白（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ,Ｃｘ）基因在鼻咽癌组织中的表达,探讨Ｃｘ基因表达与鼻咽癌组织的相关性。方法：采用定量逆转录－聚合酶链反应（ｑＲＴ－ＰＣＲ）及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹检测方法。系统研究了２８例鼻咽癌活检组织、６例慢性鼻咽炎组织中Ｃｘ２６、Ｃｘ３２、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４３、Ｃｘ４６６种Ｃｘ基因的表达情况,并进行了相对定量研究。结果：人类慢性鼻咽炎组织和鼻咽癌组织中均有Ｃｘ３７和Ｃｘ４３表达,且表达水平未见有明显差异,Ｃｘ２６、Ｃｘ３２、Ｃｘ４０和Ｃｘ４６未见可检出的表达。结论：鼻咽癌的发生和发展与Ｃｘ基因的表达水平可能无明显关系。说明细胞间隙连接通讯功能的缺陷并不一定是鼻咽癌形成及恶性转变的共同事件。     

程序性细胞死亡在鼻咽癌中的研究进展

无论是正常细胞还是癌细胞,在生长代谢过程中均可通过某种细胞死亡形式来维持机体的内环境平衡。许多癌症中已经明确了某些关键调节蛋白作为预后生物标志物的潜力,鼻咽癌占据我国头颈肿瘤发病率之首,近些年对它的治疗以及相关分子机制的研究获得了巨大发展。本文主要回顾近年来程序性细胞死亡形式在鼻咽癌中的生物学机制及潜在治疗研究进展,探究如何应用特定方法诱导恶性细胞死亡且不损伤或者少量损伤正常细胞,并对鼻咽癌与程序性细胞死亡研究进展做一综述。     

喜树碱诱导鼻咽癌细胞凋亡的线粒体机制探讨

目的 :了解喜树碱 (CPT)诱导鼻咽癌细胞凋亡是否与线粒体膜电位改变有关。方法 :用 2 μmol/ L 的CPT 处理 CNE- 2 Z细胞 ,经流式细胞仪、Hoechst332 5 8/ PI双重染色鉴定凋亡细胞 ,同时用罗丹明 12 3(Rhodamine12 3)染色后 ,经流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果 :CPT可明显降低线粒体膜电位 ,2 μm ol/ L 的CPT处理 CNE- 2 Z细胞 2 4h后 ,罗丹明 12 3摄取量低的细胞明显增加 ,达 (19.0± 3.0 ) % ,与 DMSO对照组的(7.0± 1.4) %相比 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :降低线粒体膜电位可能是 CPT诱导鼻咽癌细胞凋亡的机制之一。     

bcl-x_s促进三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的　利用促进凋亡基因bcl-xs 降低肿瘤细胞凋亡阈值 ,增强三氧化二砷诱导的鼻咽癌细胞凋亡 ,以探索提高鼻咽癌化疗敏感性的新途径。方法　将含有人bcl -xs 基因的重组真核表达质粒导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株 (CNE - 2Z) ,以不含有bcl-xs 基因的质粒转染CNE - 2Z作为对照细胞。用三氧化二砷处理两组细胞后 ,台盼蓝计数法求得各自的IC50 ,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。结果　导入bcl-xs 的细胞与对照细胞相比 ,其对三氧化二砷的IC50 值明显降低 ,流式细胞仪及荧光染色检测结果表明其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论　bcl-xs 能显著提高鼻咽癌CNE - 2Z细胞株对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性     

维甲酸抑制鼻咽癌端粒酶和hTR表达及诱导凋亡的研究

目的:探讨维甲酸(RA)诱导鼻咽癌端粒酶及hTR表达下降和凋亡改变。方法:10-5mol/L维甲酸处理HNE1细胞后,采用TRAP PCR ELISA、逆转录巢式PCR、凋亡指数及透射电镜检测端粒酶、hTR表达及凋亡改变。结果:加入维甲酸6 d后,HN E1细胞形态不规则,细胞悬浮,细胞数减少,端粒酶及hTR表达受抑制,间接定量显示端粒酶活性(0.68±0.14)U只及对照组(1.16±0.46)U的1/2,凋亡指数及细胞明显高于对照组(P<0.05)。结论:维甲酸能明显抑制鼻咽癌细胞中端粒酶及hTR表达,并诱导该类肿瘤细胞增殖受阻及发生凋亡改变。     

紫杉醇对鼻咽癌上皮细胞株HNE-1生长抑制和凋亡的影响

目的探讨紫杉醇对鼻咽癌上皮细胞株HNE1生长抑制和诱导凋亡作用。方法应用噻唑蓝(MTT)法、集落形成能力测定、细胞形态学观察及电镜等方法,对不同浓度紫杉醇作用不同时间后HNE1细胞进行检测和比较。结果紫杉醇浓度为1×10-8mol/L时,对HNE1细胞生长具有明显的抑制作用,并且存在时间和一定范围内的剂量依赖关系。光镜和电镜下观察,可见细胞逐渐变圆、皱缩。细胞表面微绒毛消失,核染色质致密、浓缩呈块,胞质中可见空泡形成,细胞表面脱落形成膜包裹的凋亡小体。结论鼻咽癌上皮细胞株HNE1对紫杉醇有高度的敏感,一定浓度的紫杉醇能使HNE1细胞生长受到明显抑制,并诱导其凋亡,这种诱导凋亡的能力是紫杉醇疗效的基础,本研究为紫杉醇治疗鼻咽癌提供可靠的实验依据。     

鼻咽癌患者鼻咽分泌物中肿瘤坏死因子α含量的临床观察

目的 :探讨鼻咽癌患者鼻咽分泌物中肿瘤坏死因子 α(TNF- α)含量变化的临床意义。方法 :用特制装置收集 2 0例健康者和 5 2例鼻咽癌患者的鼻咽分泌物 ,应用放射免疫技术进行 TNF- α含量测定。结果 :对照组鼻咽分泌物中 TNF- α含量为 (12 .95± 4.6 2 ) pmol/ L,肿瘤组为 (33.6 8± 15 .13) pm ol/ L,肿瘤坏死组为 (6 4.0 0±11.5 7) pm ol/ L。肿瘤组含量明显高于对照组 ,其差异有极显著性意义 (P <0 .0 1) ;肿瘤坏死组含量进一步升高 ,与肿瘤组比较 ,其差异亦有极显著性意义 (P<0 .0 1)。结论 :鼻咽癌患者鼻咽分泌物中 TNF- α含量高于正常人 ,测定鼻咽分泌物中 TNF- α含量有助于鼻咽癌的诊断。     

环氧化酶-2蛋白在鼻咽癌组织中的表达

目的 探讨环氧化酶-2（COX-2）蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学方法检测45例鼻咽癌组织及20例鼻咽黏膜不典型增生组织中COX-2的表达。结果 鼻咽癌组织中COX-2蛋白阳性表达率为71．1%（32／45），鼻咽黏膜不典型增生中COX-2蛋白阳性表达率为10．0%（2／20），两者比较差异具有统计学意义（P〈0．001）。结论 COX-2蛋白在鼻咽癌组织中表达增高，表明COX-2可能在鼻咽癌的发生发展中起重要的作用。     

连接蛋白43在鼻咽癌组织细胞中的表达

目的 :探讨连接蛋白 4 3(Connextion ,Cx4 3)的表达与鼻咽癌组织细胞的相关性。方法 :采用激光扫描共聚焦显微镜和荧光技术 ,对 18例鼻咽癌和 10例鼻咽慢性炎症组织细胞中 ,Cx4 3的表达进行形态观察和定量分析。结果 :Cx4 3在鼻咽癌组织细胞膜中的表达显著低于鼻咽慢性炎症组织 ,两组细胞膜的Cx4 3荧光值之间差异具有非常显著性意义 (P <0 .0 1)。结论 :Cx4 3的表达水平与鼻咽癌的发生和发展有关 ,细胞间隙连接通讯减弱或缺失是鼻咽癌形成及恶性转变的重要因素之一。