银杏内酯A和银杏内酯B在健康人体内的药动学的实验研究

 目的 用本实验室建立的测定血液中内酯浓度的方法,对银杏内酯A(ginkgolide A,GA)和银杏内酯B(ginkgolide B,GB)在10例健康受试者体内的药动学进行了研究。方法 10例健康受试者,静脉滴注银杏叶提取物注射液（舒血宁注射液）,于给药后不同的时间取血,用气相-质谱联用法测定血药浓度,并计算GA和GB的药动学参数。结果 健康受试者静脉点滴GA和GB后的代谢均符合二房室模型,t_1/2分别为3.73,4.25 h。AUC值分别为68 305.10,19 714.69 ng·min·mL^-1。结论 GC-MS测定银杏内酯的血药浓度是测定银杏内酯的较好的方法。     

HPLC-ELSD在肝微粒体中银杏萜内酯的测定及其代谢研究中的应用

 目的为研究银杏萜内酯的代谢作用机制和进一步开发利用,建立其体外代谢的HPLC-ELSD测定法。方法以Dia-monsil^TMODS-C₁₈为色谱柱;甲醇-水(37:63)为流动相,流速1.0mL·min^-1;蒸发光散射检测器(ELSD)检测:漂移管温度60℃,雾化气(N₂)压力0.25MPa。鼠肝微粒体孵育液中银杏萜内酯用乙醚提取,空气流下挥干乙醚,残渣用适量流动相溶解,取40μL进样,测定剩余银杏内酯A,B,C和白果内酯的含量。对鼠肝微粒体孵育液中银杏萜内酯的HPLC-ELSD进行方法学研究,并应用于银杏萜内酯的体外代谢研究。结果白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C分别在3.30～133.60,6.8～136.0,5.40～109.0和3.6～72.0mg·L^-1内呈现良好的线性关系,相关系数r分别为0.9936,0.9964,0.9959和0.9930(n=5)。测得定量限分别为3.30,6.80,5.40和3.60mg·L^-1(RSD<15%,n=3);检测限分别为12,32,20和16ng(S/N=3);方法回收率分别为85.9%～102.9%,85.9%～98.3%,88.6%～98.9%和85.4%～101.8%(n=5),日内、日间精密度小于10.5%。孵育液中其他成分不干扰银杏萜内酯的测定。结论本法简便、准确,可用于银杏萜内酯的体外代谢研究。     

银杏内酯类化合物在大鼠体内的绝对生物利用度研究

研究银杏内酯A(GA)、银杏内酯B(GB)和白果内酯(BB)在大鼠体内的药动学特征及其绝对生物利用度。该实验建立了检测大鼠血浆中GA,GB,BB的LC-MS/MS分析方法,考察大鼠经口服(ig)和静脉注射(iv)给药后血浆中3种银杏内酯类化合物的血药浓度,采用DAS 2.0药动学处理软件,计算GA,GB,BB的药动学参数及其绝对生物利用度。结果显示,GA,GB,BB经大鼠注射给药后的C_max分别为(513.9±116.9),(701.3±76.0),(5 255.6±476.8) μg·L^-1,AUC_0-t分别为 (960.9±268.5),(779.5±140.6),(7 409.3±1 181.1) μg·h·L^-1;灌胃给药后的C_max分别为(522.9±39.9),(146.8±31.6), (2 711 .9±588.9) μg·L^-1,AUC_0-t分别为(1 760.4±300.7),(636.6±180.3),(16 651.4±1 306.5) μg·h·L^-1。GA,GB,BB在大鼠体内的的绝对生物利用度分别为(61.1±10.4)%,(27.2±7.7)%,(56.2±4.4)%。该实验所建立的方法专属性好,灵敏度高,可用于GA,GB,BB在大鼠体内的药代动力学和生物利用度研究。     

液相色谱-电喷雾质谱定量测定银杏内酯的研究

目的:研究了用液相色谱-电喷雾质谱联用技术定量测定4种银杏内酯的方法。方法:采用ZOR-BAXRX-C₁₈(2.1 mm×150 mm)色谱分析柱,梯度洗脱,0 min时,流动相甲醇-水(25∶75),25 min,甲醇-水(35∶65);柱温25℃;流速0.25 mL.min^-1,采用电喷雾负模式[ESI(Neg)]、选择离子采集方式[SIM]定量测定了银杏内酯A,B,C和白果内酯BB。结果:该方法测定银杏内酯的线性范围为4.04~1.01×10²ng,r为0.993 7~0.999 8,RSD为2.50%~4.73%。选择离子采集方式的检测限可达1.47×10^-3~0.320μg.mL^-1。结论:该方法稳定、可靠,能快速定量测定微量银杏内酯。     

川芎和黄芪合用在心肌缺血大鼠体内藁本内酯血药浓度测定及药代动力学研究

目的: 测定川芎和黄芪合用后川芎主要有效成分藁本内酯在心肌缺血大鼠体内的血药浓度及药代动力学参数。 方法: 舌下静脉给予3.5 mg ·kg^-1盐酸异丙肾上腺素诱发心肌缺血,于给药后不同时间点眼眶(眼球后静脉丛)采血1 mL,HPLC/MS法测定血浆藁本内酯含量,Win Nonlin计算药代动力学参数。 结果: 川芎-黄芪合用川芎的主要有效成分藁本内酯的药动学参数为:C_max(0.737±0.181)mg ·L^-1;AUC_(0-t)(75.20±10.35)mg ·L^-1 ·min^-1;AUC_(0-∞)(81.66±21.01)mg ·L^-1 ·min^-1;MRT_(0-t)(85.87±5.03)min;CL(0.0512±0.0118)L ·min^-1 ;t_1/2(77.97±5.75)min;Vz(5.808±1.641)L ·kg^-1。 结论: 与川芎单用相比,黄芪-川芎合用后藁本内酯的AUC_(0-t) 显著增加,MRT_(0-t)延长,说明两药配伍有利于提高藁本内酯的血药浓度及体内滞留,进而发挥其药理作用。     

银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸的LC-MS/MS含量测定研究

该实验建立了同时测定银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸含量的LC-MS/MS方法。采用Agilent Zorbax Eclipse plus C₁₈色谱柱(3.0 mm×50 mm,1.8 μm);流动相甲醇-0.2%甲酸水(95 : 5),等度洗脱;流速0.5 mL·min^-1;质谱条件:采用ESI^-多反应监测(MRM)模式扫描。结果显示,5种银杏酸在0.2~36.0 μg·L^-1线性关系均良好(r≥0.999 5);银杏酸C13 : 0(白果新酸),C15 : 1,C17 : 2,C15 : 0,C17 : 1的最低定量限(LOQ)分别为0.18,0.18,0.21,0.10,0.20 μg·L^-1;平均回收率在73.28%~87.56%;3批样品中所含总银杏酸的质量分数为0.023~0.028 μg·g^-1,均远低于药品注册标准规定的限度(含总银杏酸以白果新酸计,不得过百万分之二)。该方法简便、快捷,灵敏度高,可用于银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸的快速测定。     

LC-MS/MS快速测定不同采摘时间银杏叶中银杏内酯和白果内酯的含量

 目的建立银杏叶中银杏内酯和白果内酯的高效液相电喷雾二级质谱(LC-MS/MS)定量分析方法,并对不同采摘时间银杏叶中银杏内酯和白果内酯含量进行测定。方法银杏叶样品以甲醇-水(1:9)提取,并用乙酸乙酯萃取,采用Phenomenex ODS柱分离,流动相为甲醇-水(60:40),流速0.7 mL·min^-1。电离方式为电喷雾正离子,采用多反应检测模式(MRM),捡测离子分别为m/z 409.4→345.3(银杏内酯A)、m/z 425.3→361.3(银杏内酯B)、m/z 441.4→325.3(银杏内酯C)和m/z 327.4→309.3(白果内酯)。结果分析过程仅需8.5 min,且无杂质干扰,4种成分回收率为91.79%～101.48%银杏内酯A,B和白果内酯含量分别在7月18日、8月19日和7月5日采摘的样品达到最高。结论方法快速、准确、选择性好,适合银杏内酯和白果内酯的定量分析,七月份叶子中内酯含量最高,为最佳采摘时间。     

银杏内酯缓释片药代动力学研究

目的:研究银杏内酯缓释片与普通片在犬体内的药动学特征及生物利用度.方法:采用LC-MS测定比格犬体内的血药浓度,DAS 2.0药代动力学软件估算银杏内酯缓释片及普通片在体内的药代动力学参数.结果:银杏内酯缓释片和普通片银杏内酯A的Cmax分别为443.51,1 039.30μg·L-1;tmax分别为2.92,1.08 h;AUC0-12 h分别为1 808.21,2 041.37 h·μg-1.L-1;MRT分别为5.18,3.18 h;相对生物利用度为88.58%.银杏内酯缓释片和普通片银杏内酯B的Cmax分别为407.13,547.38μg·L-1;tmax分别为2.92,1.08 h,AUC0-12 h分别为1 987.31,1748.04 h·μg-1·L-1;MRT分别为6.05,4.98h;相对生物利用度为113.69%.结论:银杏内酯缓释片具有明显的缓释特征,与参比制剂生物等效.     

采用UPLC-TQ-MS同时测定银杏花粉24种资源性化学成分

分析评价银杏花粉中黄酮类、萜内酯类、银杏酸类以及原花青素类化学成分。采用UPLC-TQ-MS的方法对银杏花粉中24种资源性化学成分进行定性定量分析。结果显示芦丁和槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-(4→1)-β-L-吡喃鼠李糖苷达到120.9 μg·g^-1和114.0 μg·g^-1,山柰酚为222.1 μg·g^-1。该文采用UPLC-TQ-MS的方法首次同时测定银杏花粉中24种资源性化学成分,此方法快速、便利,质量准确,为银杏花粉的资源化利用提供了基础性工作。     

银杏内酯B柔性纳米脂质体的制备及体外透皮研究

目的：制备银杏内酯B(GB)柔性纳米脂质体,并对其体外透皮规律进行研究。方法：采用薄膜分散法制备银杏内酯B柔性纳米脂质体,并对其形态及粒径大小进行分析;采用改良的 Franz 扩散池进行体外透皮吸收试验,比较银杏内酯B醇溶液、银杏内酯B柔性纳米脂质体及普通银杏内酯B纳米脂质体的经皮累积渗透量及渗透速率。结果：此方法制得的脂质体平均包封率为(89.52±1.76)%,平均粒径为(208.3±25.49) nm,Zata电位为-49.2 mV。柔性纳米脂质体8 h的累积透过量为189.97 μg·cm^-2,8 h的渗透速率为23.75 μg·cm^-2·h^-1。结论：柔性纳米脂质体包封率较高,稳定性良好,可显著促进银杏内酯B的透皮吸收。     

银杏总内酯在脑缺血损伤模型大鼠体内的PK-PD研究

目的基于药效学-药动学(PK-PD)结合模型探索银杏总内酯在脑缺血损伤模型大鼠体内的代谢过程。方法通过线栓法建立大鼠大脑中动脉局灶性栓塞(MCAO)模型,再灌注后分别以鼻腔、ig和尾iv给予银杏总内酯溶液,于给药后0.25、0.33、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、2.0、4.0、6.0、9.0、12.0 h眼眶取血,利用LC-MS测定血浆中银杏内酯B的质量浓度,绘制药-时曲线;通过试剂盒测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的量,绘制时-效曲线;采用DAS2.0软件计算药动学参数并拟合PK-PD结合模型。结果给药组大鼠体内中银杏内酯B的消除半衰期(t_(1/2))均较小,鼻腔给药组大鼠的药时曲线下面积(AUC)明显高于ig组和尾iv组。结论银杏内酯B对缺血性脑卒中疾病有良好的保护和缓解作用,鼻腔给药方式较iv和ig方式更具有药动学优势,可以为研发银杏内酯B的鼻腔给药制剂提供参考。     

HPLC法测定银杏内酯滴丸中银杏内酯A及银杏内酯B总量

目的:建立银杏内酯滴丸中银杏内酯A、银杏内酯B含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,以正丙醇-四氢呋喃-水(1∶27∶72)为流动相,流速:1.0 mL.min-1,检测波长:220 nm。结果:建立了银杏内酯滴丸中银杏内酯A、银杏内酯B含量测定方法,且银杏内酯A、银杏内酯B的RSD分别为1.39%,2.16%。结论:本方法简便可靠,可用于银杏内酯滴丸的质量控制。     

银杏内酯滴丸在健康受试者体内的药动学研究

目的研究银杏内酯滴丸中的主要成分银杏内酯A、B在健康受试者体内的药动学特征,为制定合理的临床给药方案提供依据。方法采用随机、开放的试验设计,10例健康受试者单次口服银杏内酯滴丸后,按预定时间点采集血样,肝素锂抗凝,离心分离血浆。采用LC-MS/MS法测定血浆样品中银杏内酯A、B的开闭环总质量浓度,以及银杏内酯A、B闭环质量浓度,并应用WinNonlin 6.3软件非房室模型计算药动学参数。结果健康受试者单次口服银杏内酯滴丸后,银杏内酯A闭环及开闭环总量的t_(max)分别为(3.05±1.40)、(3.40±1.22)h,Cmax分别为(84.3±32.8)、(92.2±35.0)ng/mL,Cmax比值为91.4%,AUC0～t分别为(636±183)、(753±205)ng·h/mL,AUC0～t比值为84.5%,t1/2分别为(13.00±10.30)、(12.90±8.49)h;银杏内酯B闭环及开闭环总量的t_(max)分别为(3.15±1.42)、(3.35±1.25)h,C_(max)分别为(74.10±31.50)、(148.00±60.10)ng/m L,C_(max)比值为50.1%,AUC0～t分别为(627±202)、(1 410±431)ng·h/mL,AUC0～t比值为44.5%,t1/2分别为(13.20±5.83)、(13.7±5.83)h。结论健康受试者口服银杏内酯滴丸后,银杏内酯A、B吸收速率适中,消除速率适中,在人血浆中银杏内酯A主要以闭环形式存在,而银杏内酯B以开、闭环2种形式存在、暴露量相当。     

银杏二萜内酯葡胺注射液对脑缺血再灌注大鼠行为学和脑脊液成分的影响

目的:研究银杏二萜内酯葡胺注射液及其各主要成分对脑缺血再灌注大鼠的脑保护作用和对脑脊液中氨基酸类神经递质的影响。方法:SD大鼠随机分为6组,包括正常组,模型组,银杏二萜内酯葡胺注射液组(G,20 mg·kg-1),银杏内酯B组(GB,20 mg·kg-1),银杏内酯A组(GA,20 mg·kg-1)和银杏内酯K组(GK,20 mg·kg-1)。模型组和给药组分别尾静脉注射给予生理盐水或不同药物1次后,采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,将大鼠脑缺血再灌注后进行行为学评分并测定脑脊液中Ca2+,谷氨酸(Glu),天冬氨酸(Asp)以及磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)含量的变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠神经缺损症状严重,脑脊液中Ca2+降低,Glu和Asp的含量显著升高,CK和LDH含量升高。与模型组比较,G及其各主要成分对脑缺血引起的行为变化有显著改善作用(P0.05,P0.01),能显著提高模型大鼠脑脊液Ca2+含量,并降低神经递质Glu和Asp的含量(P0.05,P0.01);G和GA能降低大鼠脑脊液中CK含量(P0.05),GB能显著降低大鼠脑脊液中LDH含量(P0.05)。结论:G及其各成分能明显改善模型动物的神经功能缺损,减少细胞外游离钙内流,降低脑脊液中兴奋性氨基酸含量,改善脑脊液生化指标的水平,对脑缺血有一定的保护作用,提示银杏二萜内酯是有效的脑保护剂。     

Pharmacokinetics of bilobalide,ginkgolide A and B after administration of three different Ginkgo biloba L. preparations in humans

A sensitive LC‐ESI‐MS method with a solid‐phase extraction was established for the determination of bilobalide, ginkgolide A and ginkgolide B in human plasma; bioavailability and pharmacokinetics of three different Ginkgo biloba L. preparations have been investigated. The preparations used in the present single‐dose pharmacokinetic study were different formulations of Ginkgo biloba L. extracts (Geriaforce? tincture, new Ginkgo fresh plant extract tablets and EGb 761?) with various excipients. The analysis of Ginkgo terpene lactones was performed by LC‐MS on a Zorbax^® SB‐C18 column. The mobile phase consisted of water + 0.1% acetic acid and methanol 68/32 (v/v) to 49/51 (v/v) at a flow rate of 200 μL/min. Bilobalide, ginkgolide A and ginkgolide B were monitored using the selected‐ion monitoring (SIM) mode at m/z of 325, 453 and 423, respectively. The amounts of the active compounds (terpene lactones) in the administered products were in the low‐mg range per dose. The assay method was successfully applied to the study of the pharmacokinetics and bioavailability of bilobalide, gingkolide A and ginkgolide B in humans. The resulting maximum concentrations (median) of bilobalide, ginkgolide A and ginkgolide B in plasma after administration of the maximum daily dose of the different Ginkgo products were 3.53, 3.62, and 1.38 ng/mL respectively after administration of Geriaforce? tincture; 11.68, 7.36, and 4.18 ng/mL, respectively after taking Ginkgo fresh plant extract tablets; and 26.85, 16.44, 9.99 ng/mL, respectively after administration of EGb 761? tablets. These data are relevant to demonstrate relative bioavailabilities of different Ginkgo biloba L. preparations (Geriaforce? tincture, new Ginkgo fresh plant extract tablets and EGb 761?). Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

中药复方塞络通中银杏内酯类成分的药代动力学及脑分布研究

目的：塞络通（SLT）是由人参、银杏叶、西红花组方,主治血管性痴呆的现代复方中药。为探讨SLT 药效物质基础,并为给药方案提供依据,该文对治疗剂量SLT 给与大鼠后,银杏内酯成分的血药浓度、药代特征、以及脑分布进行了研究。方法：实验建立了同时检测生物样品中4 种银杏内酯的高灵敏度LCMS/MS 分析方法,经过对线性、专属性、回收率、准确度、精密度的考察,所建立的分析方法符合临床前药代动力学研究要求。结果：灌胃SLT 60 mg?kg-1 后,4 种目标成分均在大鼠血浆中检出,各成分曲线下面积（AUC0~t）从大到小顺序依次为白果内酯（BB）、银杏内酯A（GA）、银杏内酯B（GB）和银杏内酯（GC）。银杏内酯的血浆消除半衰期（t1/2）较短,在1.61~2.82 h 之间,其中BB 半衰期最短。所有银杏内酯成分均能够快速进入在脑组织,GA 和BB 仍是脑组织中的主要成分。各银杏内酯在0.25、2、7 h 的脑组织浓度均较同时间点血浆中药物成分低得多,且各成分在脑组织中浓度随时间下降较快。结论：研究结果表明,银杏内酯能够快速吸收进入体循环并进入脑组织,GA、BB 和GB 是其中主要的体内成分,它们能够共同作用于外周和脑组织,通过各自的药理活性机制达到塞络通对缺血性痴呆的疗效。     

银杏内酯A的BCS分类及吸收机制研究

目的:实验通过计算机模拟和体外快速实验研究银杏内酯A的生物药剂学分类(BCS)及其转运机制,分析其口服生物利用度不高的因素。方法:采用MOE、Discovery Studio、StarDrop软件对药物进行相关预测。采用2种不同的方法进行溶解度试验,以美国食品药品监督管理局(FDA)指导原则中的D0值和2015版《中华人民共和国药典》中的水中溶解度进行判断。渗透性采用体外细胞模型和人工渗透膜(PAMPA)模型,根据其表观渗透系数(Papp)和有效渗透率(Pe)的大小进行判断。结果:MOE预测结果显示银杏内酯A为难溶性药物;Discovery Studio预测结果表明银杏内酯A水溶性好,肠道吸收性质非常差;StarDrop预测银杏内酯A的溶解性为微溶,药物吸收率>30%,不受P-糖蛋白(P-gp)调控。选取pH 1.2、4.0、6.8磷酸缓冲液及水中银杏内酯A的D0值均大于1,可判断其为低渗透性药物。且其在水中的溶解度等于6×10^-3 g·mL^-1,为极微溶性药物。在Caco-2单层细胞模型中AP→BL转运实验中银杏内酯A的Papp为8.04×10^-6~13.99×10^-6 cm·s^-1,在BL→AP转运实验中银杏内酯A的Papp为11.79×10^-6~12.95×10^-6 cm·s^-1,因此可判断银杏内酯A为低渗透性药物。在PAMPA模型中,其Pe为0.089×10^-6~0.098×10^-6 cm·s^-1,可以判断其为低渗透性药物。在高、中、低3个不同浓度的转运中,银杏内酯A的外排系数(ER)为1.11、0.62、0.89,均小于等于1.5。随着P-gp抑制剂维拉帕米的加入,银杏内酯A的转运速率无显著变化,且差异无统计学意义,说明其的转运不受P-gp的调控,以被动转运为主。结论:银杏内酯A为BCSⅣ类药物,溶解性和渗透性均较差,导致其口服生物利用度较低。