嗅鞘细胞移植后脊髓半横断大鼠睫状神经营养因子和FGF-2表达的变化

目的:研究嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植到损伤的脊髓后,能否分泌睫状神经营养因子(CNTF)和碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2),以及能否引起脊髓组织内CNTF和FGF-2表达的变化及脊髓的细胞有何数量改变.方法:体外分离培养大鼠嗅球嗅鞘细胞,通过免疫荧光细胞化学染色检测其CNTF和FGF.2的表达.将嗅鞘细胞移植入脊髓半横断SD大鼠,观察术后7天和21天嗅鞘细胞在脊髓内的存活情况,并对脊髓组织切片进行CNTF和FGF-2免疫荧光组织化学染色,计数阳性细胞并计算阳性面积百分比.结果:嗅鞘细胞在体外培养和移植后都能表达CNTF和FGF-2.同未移植组对比,移植组脊髓CNTF和FGF-2表达明显增强(P<0.05),神经元和少突胶质细胞数量增加(P<0.05),星型胶质细胞数量无明显改变.结论:嗅鞘细胞移植入损伤的脊髓后能分泌CNTF和FGF-2,并使脊髓组织内CNTF和FGF-2的表达增加,引起神经元和少突胶质细胞数量增加.     

痉证方与痿证方对大鼠脊髓持续性压迫损伤局部细胞凋亡的影响

目的研究大鼠脊髓持续性压迫后细胞凋亡的变化,探讨痉、痿证方对大鼠脊髓持续性慢性损伤局部细胞凋亡的影响。方法大鼠颈椎前路螺钉压迫颈脊髓,螺钉留置持续压迫30d以产生慢性损伤,用原位末端标记技术的TUNEL法对模型组及用药组的细胞凋亡进行检测。结果脊髓受压后,灰、白质均有明显的神经细胞和胶质细胞凋亡,并以白质为明显,经药物干预后,阳性染色的神经细胞和胶质细胞减少,染色变浅。与假手术组相比,各模型组细胞凋亡数明显增高,不同压迫程度组之间有显著性差异。治疗组与模型组以及治疗组之间相比,具有非常显著性差异;痿证方组作用强于痉证方组。结论脊髓持续性压迫损伤后,受压区神经细胞和胶质细胞都有明显的凋亡;痉证方、痿证方对脊髓慢性损伤后脊髓组织神经细胞和胶质细胞的凋亡有抑制作用,痿证方强于痉证方。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

目的帮助广大神经外科医生系统地了解嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)和OECs移植治疗脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)的实验性研究和临床应用的最新进展,以提高对SCI治疗策略和技术的全新认识。方法结合近年来OECs的研究、OECs移植治疗SCI的相关文献资料,分别介绍了嗅鞘细胞的生物学特性、OECs移植治疗SCI的可能机制、嗅黏膜嗅鞘细胞的研究、OECs联合移植的研究、脊髓损伤OECs移植时机的选择和OECs移植治疗SCI的临床研究。结果 OECs能促进轴突再生、营养受损神经和血管并且使轴突再髓鞘化,OECs移植到损伤的脊髓会改善其功能。结论 OECs移植治疗SCI的实验研究和早期临床应用均已证实OECs移植治疗SCI的有效性,但临床应用长期随访机制尚不够健全,缺乏系统的、客观的远期疗效评价体系,其作用的具体机制有待进一步明了。     

嗅鞘细胞移植对脊髓损伤大鼠Wnt/β-catenin信号分子影响

目的 探讨嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植后大鼠脊髓组织不同时期Wnt信号分子Wnt-1、β-catenin、GSK-3β、c-myc在损伤部位脊髓的表达变化.方法 乳鼠嗅球制备OECs,90只成年雄性SD大鼠随机分为3组,以脊髓T10节段为中心,大鼠脊髓损伤模型制备采用...     

嗅鞘细胞联合神经干细胞对大鼠急性脊髓损伤及脑源性神经营养因子表达的影响

目的:探讨嗅鞘细胞(OECs)联合神经干细胞(NSCs)对大鼠急性脊髓损伤及脑源性神经营养因子(Brain Derived Neurotrophic Factor,BDNF)表达的影响。方法:取新生3 d SD大鼠的海马和嗅球制备神经干细胞和嗅鞘细胞,对80只SD大鼠做急性脊髓损伤造模,随机分为对照组(假手术组)、NSCs移植组、OECs移植组、NSCs+OECs联合移植组(记为实验A、B、C组),细胞移植。于术前,术后1、3、7、14、21 d行BBB评分、斜板实验和运动诱发电位(MEP N1波)潜伏期检测,在各组随机抽一只SD大鼠做免疫组化,观察比较受损脊髓中BDNF的表达情况。结果:(1)BBB评分变化:除第1天外,各实验组恢复程度均明显大于对照组(P0.05),第7天开始各实验组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。(2)斜板试验角度变化:第1周开始,四组中任意两组比较差异均有统计学意义(P0.05)。(3)MEP(N1波)潜伏期变化:自第3天,四组中任意两组比较差异均有统计学意义(P0.05)。(4)BDNF染色阳性细胞数变化:细胞移植后,各组大鼠受损脊髓中BDNF开始升高,第3天到高峰后减少。术后第3天开始,四组中任意两组比较均有统计学意义(P0.05)。结论:采用细胞移植治疗大鼠急性脊髓损伤,OECs与NSCs联合移植治疗效果最佳;单细胞移植时,OECs比NSCs移植治疗效果更强。联合移植组中BDNF表达最高。     

嗅鞘细胞复合细胞外基质凝胶移植对损伤脊髓细胞的保护作用

目的:探讨嗅鞘细胞(OECs)和细胞外基质(ECM)凝胶复合移植对损伤脊髓细胞的保护作用。方法:将脊髓半横断伤SD大鼠模型,随机分为嗅鞘细胞移植组(A组)、损伤对照组(B组)和正常组(C组),24h每组8只动物取伤段标本测水离子含量。其余动物第6周、第12周每组8只动物爬坡试验,评价下肢运动功能及运动诱发电位(MEP)检测。结果:脊髓损伤(SCI)后组织水肿,Na+、Ca2+离子浓度升高,K+、Mg2+离子浓度降低。嗅鞘细胞复合细胞外基质凝胶脊髓内移植后显著改善这些变化,使损伤细胞功能有显著恢复。结论:嗅鞘细胞复合细胞外基质凝胶脊髓内移植对SCI有保护作用,其机制可能与改善细胞内环境有关。     

年龄对嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤疗效的影响

为探讨年龄因素对嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤临床疗效的影响 ,用嗅鞘细胞 (OECs)移植到脊髓损伤部位上下处的方法 ,共治疗 1 71例脊髓损伤 0 .5～ 1 8年的患者。患者年龄 2 .5～ 64岁 (平均 3 4.9岁 ) ,按年龄分为 5组 :≤ 2 0岁 9例 ,2 1～ 3 0岁 5 4例 ,3 1～ 40岁 60例 ,41～ 5 0岁 3 4例 ,≥ 5 1岁 1 4例。嗅鞘细胞移植后 2～ 8周随访 ,根据美国脊髓损伤学会 (ASIA)脊髓损伤神经功能分类国际标准评价。结果 :1 71例患者的脊髓功能均有部分恢复 ,除 5 1岁以上组的痛觉恢复与其他年龄组 (除 2 1～ 3 0岁组 )比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )外 ,各年龄组的运动和触觉改善比较均无显著性差异。结果提示 :嗅鞘细胞移植能改善所有年龄段脊髓晚期损伤患者的神经功能 ,除老年组痛觉恢复较好外 ,年龄因素对运动和触觉的近期效果无明显影响 ,长期结果有待进一步研究     

嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤后水通道蛋白-4的影响

目的：探索大鼠嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）移植对大鼠脊髓损伤（spinal cord injurySCI）后水通道蛋白-4（AQP-4）和后肢功能的影响。方法：取Wistar大鼠150只,随机分为正常组（50只）、模型组（50只）、OECs移植组（50只）,模型组和OECs移植组用改良的Allen法制成脊髓损伤模型,造模成功后,其中OECs移植组在损伤处移植嗅鞘细胞,模型组移植DF-12培养液。于术后1、3、7、14、21、28 d进行BBB（Basso-Beattle-Bresnahan）运动功能评分,应用免疫组织化学技术检测脊髓组织AQP-4的表达,并用图像分析仪进行定量分析。结果：术后3~28 d,OECs移植组的BBB评分较模型对照组明显提高,术后第1天,模型组和OECs移植组受损脊髓灰质、白质中AQP-4的表达明显增加;第3天时均达到高峰,但OECs移植组低于模型组（P〈0.05）。第7、14、21、28天,与模型组比较,OECs移植组AQP-4表达也较低（P〈0.01）。结论：OECs移植使脊髓损伤后AQPa表达减少,这可能有利于抑制脊髓水肿、消除脊髓继发性损伤,保存残存正常脊髓组织并促进神经轴突再生,改善其肢体运动功能。     

嗅鞘细胞抑制脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白聚糖表达的实验研究

目的:探讨嗅鞘细胞(OECs)移植的治疗作用及其对影响硫酸软骨素蛋白聚糖类分子(CSPGs)表达的影响。方法:将培养的OECs移植于脊髓半横断的Wistar大鼠,移植术后对模型进行数个时间点的BBB运动功能评分,损伤即移植术后4周,对实验组和对照组动物取材,进行免疫组织化学和Western blotting检测。结果:移植后4周,实验组动物的BBB评分高于对照组动物。免疫组织化学和Western blotting检测发现,实验组动物损伤处CSPGs物质表达低于对照组动物。结论:OECs促进脊髓损伤动物运动功能恢复的作用可能与抑制CSPGs分子表达有关。     

嗅粘膜源性嗅鞘细胞移植联合NGF对脊髓损伤的修复

目的：探讨大鼠嗅粘膜嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells, OECs）移植联合神经生长因子(nerve growth factor, NGF)修复脊髓急性损伤的可行性和疗效,并观察二者的协同作用。方法：自成年Wistar大鼠嗅粘膜取材,采用差速贴壁和阿糖胞苷抑制纯化相结合的方法培养纯化嗅鞘细胞。建立大鼠脊髓半切模型,并随机分成对照组（A组）,OECs组（B组）和OECs＋NGF组（C组）,在不同时段进行肢体活动的BBB评分。8周后取脊髓标本进行组织学检查,评价对脊髓损伤的修复作用。结果：B组和C组2周后BBB评分高于A组（P＜0.05）,C组自4周后明显优于A组和B组（P＜0.01）。组织学检查表明,C组可明显促进轴突再生。结论:OECs联合NGF具有良好的脊髓损伤修复作用,且二者具有明显的协同作用。     

嗅鞘细胞移植部位与剂量的选择对陈旧性脊髓损伤患者60例神经恢复的影响

目的:探讨嗅鞘细胞(Olfactory esheating cells OECs)移植部位与剂量治疗陈旧性脊髓损伤疗效的影响。方法:应用我院实验室由人胚胎的颅脑嗅球提取、纯化,培养1~2周的OECs,常规脊椎后入路切开硬脊膜借助手术显微镜将50 ul OECs悬液单点移植于受损脊髓上段与正常脊髓交界处(共30例A组)。用同样方法将50 ul×2(最多可达50 ul×4)OECs分多点移植于损伤脊髓上下端,即损伤脊髓与正常脊髓的交界靠近正常一侧(共30例B组)。结果:在我院自愿接受OECs移植的106例陈旧性脊髓损伤患者在术后2~4周内均应用美国脊柱脊髓损伤学会(ASIA)标准进行评价。患者在感觉、运动、大小便及植物神经功能方面均有不同程度的改善。其中B组病人较A组病人恢复更为明显。结论:手术将50 ul×2(最多可达50 ul×4)OECs分多点移植于损伤脊髓上下端优于将50 ul OECs单点移植于损伤脊髓上端的治疗方法。     

嗅鞘细胞移植到大鼠损伤脊髓前后的形态学研究

目的:观察体外培养和植入损伤脊髓的自发绿色荧光嗅鞘细胞(Green fluorescent protein-olfactory ensheathing cells,GFP-OECs)的形态结构特征,研究绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)及脊髓损伤的病理环境对其形态的影响.方法:用酶消化法分离培养来自2.5月龄的绿色荧光蛋白转基因大鼠嗅球最外层的嗅鞘细胞,对培养细胞定期进行光镜、电镜及激光共聚焦显微镜观察并摄片,观察其在体外培养的形态特征.培养第10d,用显微外科技术将嗅鞘细胞移植到脊髓挫伤后的T10节段,分别在移植术后7、15 d取材,观察细胞植入损伤脊髓后光电镜下形态.结果:GFP-OECs在荧光显微镜下呈绿色强荧光,培养第7 d,为双极样(梭形或纺锤形)、三极样和扁圆形3种典型的细胞形态,以双极梭形为主;培养第10d,细胞形态为梭形,植入损伤脊髓后,移植细胞胞体呈长梭形,一端突起细长,与另一嗅鞘细胞接触,呈条索状生长.电镜下嗅鞘细胞核不规则,胞质内有丰富的粗面内质网、游离核糖体及线粒体.结论:GFP不影响嗅鞘细胞(Olfactory ensheathing cells,OECs)形态.在脊髓损伤处,OECs胞体呈长梭形,突起细长,与培养10d移植时比较,形态无显著改变,早期脊髓损伤病理环境不影响GFP-OECs形态.     

NTFs基因修饰的人胚OECs植入促进大鼠SCI神经再生及功能恢复的研究

目的探讨神经营养因子（NTF）基因修饰嗅鞘细胞（OECs）移植促进大鼠脊髓损伤后神经再生及功能恢复。方法SD大鼠制备成脊髓损伤动物模型。随机分为损伤对照组（A组）、OECs移植组（B组）和OECs神经营养因子基因修饰后移植组（C组）。治疗后2、4、6周,每组动物分别进行联合行为评分（GBS）、运动诱发电位（MEP）、感觉诱发电位（SEP）检查、双下肢功能测定（爬坡试验）,评价脊髓损伤功能恢复情况。结果随时间的延长,B组GBS、MEP、SEP及下肢功能明显改善。与其它组相比较,差异有显著性,P〈0.05。结论NTF基因修饰后移植在脊髓损伤区,能促进神经再生及功能恢复。     

嗅鞘细胞移植对脊髓前角神经元保护作用的实验研究

目的 观察嗅鞘细胞(OECs)脊髓内移植对坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元的作用.方法 将培养、纯化OECs采用倒置相差显微镜、细胞免疫组织化学染色观察并计算纯度.48只大鼠坐骨神经夹伤后随机分为OECs实验组与生理盐水组.通过尼氏染色计数并计算运动神经元的存活百分率,观察神经元的超微结构.结果 神经生长因子受体p75...     

嗅鞘细胞移植后脊髓挫伤大鼠几种神经营养因子的表达变化

目的探讨嗅鞘细胞移植脊髓挫伤大鼠后,在其神经损伤及修复过程中三种神经营养因子（脑源性神经营养因子、神经生长因子、睫状神经营养因子）的表达变化及意义。方法体外分离培养大鼠嗅球嗅鞘细胞。40只健康SD大鼠,雌雄不拘,在移植前一星期使用NYU-撞击机,利用10g-25mm的致伤力,制作T10脊髓挫伤模型。40只脊髓挫伤大鼠随机分为OECs移植组和对照组（注射无血清培养液组）,又根据取材时间不同分为术后1天、7天、14天、21天组。动物处死前进行BBB评分评估后肢运动功能的变化。取手术部位头端和尾端0.5cm脊髓,采用免疫组织细胞化学染色检测技术检测三种神经营养因子（BDNF、CNTF、NGF）在各组脊髓中的表达变化。结果行为学评分随着损伤时间的推移呈小幅度增加,但后肢无运动功能恢复;免疫组织化学检测显示,嗅鞘细胞移植能部分改善大鼠脊髓灰质神经细胞的凋亡程度,延缓白质神经纤维的减少,促进髓鞘的修复与再生。与对照组比较,嗅鞘细胞移植治疗后脊髓组织中三种神经营养因子表达明显增加（P〈0.05）。结论嗅鞘移植能够部分改善脊髓损伤后脊髓组织的病理形态,促进脊髓组织中多种神经营养因子的表达。     

嗅鞘细胞与脊髓损伤再生修复

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后再生修复困难,而嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植被认为是治疗SCI最有潜力、最希望的方法.本文就近年来关于OECs的生物学特性、在SCI中的应用及其机制研究方面作一简要介绍.     

嗅鞘细胞移植在修复脊髓损伤中的实验研究及临床应用

脊髓损伤(spinal cord injuries,SCI)是一种严重威胁人类健康的疾病,可致损伤平面以下的运动、感觉及植物神经功能障碍,其修复一直是神经科学研究领域的一大难题.关于细胞移植治疗脊髓损伤的研究近年来开展得尤有成效,进行细胞移植的候选胶质细胞包括嗅鞘细胞(Olfactory Ensheathing Cell,OECs)、少突胶质前体细胞和许旺细胞.     

嗅成鞘细胞提取液对胆碱能神经元移植治疗大鼠阿尔茨海默病的影响

目的探讨嗅成鞘细胞(OECs)提取液对胆碱能神经元移植治疗阿尔茨海默病(AD)大鼠的影响。方法SD大鼠双侧海马注射Aβ1-40,建立AD大鼠模型。实验动物32只分为4组:正常对照组、空白对照组、人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组,每组8只。运用行为学测试、NADPH-d组化、刚果红组织学染色结合积分吸光度测定等技术,观察、比较各组AD模型大鼠移植2个月后学习记忆能力、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元数以及老年斑的变化。结果①行为学测试:人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组大鼠达到学会标准所需训练次数(TN),错误反应次数(EN),全天总反应时间(TRT)少和潜伏期(D),短于空白对照组(P<0.05);以OECs提取液移植组更为显著(P<0.05)。②NADPH-d组化反应:人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组NOS阳性神经元数较空白对照组明显增多(P<0.05),且前两组之间差异有显著性(P<0.05)。③刚果红染色:移植组及空白对照组三组间差异均有显著性(P<0.05),以OECs提取液移植组SP-IA值最小。结论嗅成鞘细胞提取液能明显提高胆碱能神经元移植治疗阿尔茨海默病大鼠的效果。     

联合应用指数曲线电刺激和嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的基础研究

目的观察联合应用硬膜外指数曲线电刺激和嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的疗效。方法制备脊髓损伤模型,随机分成4组,A组:嗅鞘细胞移植组;B组:硬膜外电刺激组;C组:联合电刺激和嗅鞘细胞移植组;D组:对照组。评定功能恢复情况,采用荧光技术对标记后的脊髓进行示踪。结果各治疗组大鼠脊髓功能均有改善。其中A、B组较D组优,且差异具有统计学意义(P<0.05),A组与B组间差异无统计学意义(P>0.05)。C组较A、B两组优,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论硬膜外电刺激可以提高嗅鞘细胞移植后的生存率;联合应用指数曲线电刺激和嗅鞘细胞移植,可以相互促进,更有利于脊髓功能的恢复。     

大鼠脊髓渐进性压迫减压后神经细胞黏附分子的表达

目的:研究大鼠脊髓渐进性压迫减压后修复过程中神经细胞黏附分子(NCAM)的表达情况. 方法: Wistar大鼠51只,分为空白对照组(n=3)和损伤组(n=48). 空白对照组不做任何处理,常规饲养;损伤组用螺钉压迫法造成脊髓渐进性压迫模型,压迫至中度开始减压. 按减压后不同时间点又分为1,3,5,7,14和28 d 6个组,每组动物8只. 用免疫组织化学SABC法测定NCAM在脊髓灰质神经元中的表达,并采用计算机Mias软件进行图像分析. 结果:各组灰度值:空白对照组:245.53±3.47;损伤组减压后1 d组:235.33±6.48;3 d组:218.86±2.67;5 d组:198.39±3.24;7 d组:173.15±5.98;14 d组:190.45±4.93;28 d组:227.68±2.85. 与空白对照组相比脊髓渐进性损伤组各不同时间点组均有NCAM的表达,差异具有统计学意义(P＜0.01),其中以减压后7 d NCAM的表达量最高. 结论: 在脊髓渐进性压迫减压后的修复过程中NCAM均有表达,NCAM表达量的变化可能与脊髓损伤后的修复有关.