铜绿假单胞菌亚胺培南及消毒剂耐药相关基因研究

目的了解临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中金属β内酰胺酶基因(blaIMP和blaVIM)、外膜孔蛋白D2(OprD2)基因(oprD)、消毒剂-磺胺耐药相关基因(qacE△1-sulⅠ)存在状况.方法采用ATB′PSE 5药敏试验条板微量肉汤法测定28株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)技术及序列分析的方法检测耐药基因.结果该28株铜绿假单胞菌对亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、妥布霉素和复方新诺明均完全耐药,对哌拉西林/他唑巴坦的敏感率最高为64.3%,其余的耐药率在57.1%～92.9%之间.28株Pa中blaIMP和blaVIM基因均阴性,25株(89.3%)oprD基因缺失,24株(85.7%)qacE△1-sulI基因阳性.结论浙江湖州解放军第98医院临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌多重耐药严重,oprD基因缺失是其对亚胺培南耐药的重要原因,qacE△1-sulI基因携带率很高.     

淮北地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制

目的探讨淮北地区铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,Pa）对亚胺培南的耐药机制。方法采用K-B法和MIC法检测25株临床分离亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对12种临床常用抗生素的敏感性;采用PCR法检测外膜蛋白OprD2和金属β-内酰胺酶（MBLs）耐药相关基因（IMP、VIM、SPM、GIM）。结果 25株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中15株外膜通道蛋白OprD2基因缺失,缺失率60%;5株产金属酶,检出率20%（4株产VIM-2,1株产IMP-1）;未检出SPM-2、GIM基因。结论淮北地区铜绿假单胞菌亚胺培南耐药,外膜通道蛋白OprD2缺失与产金属酶均起重要作用。     

亚胺培南诱导铜绿假单胞菌耐药的研究

目的：探讨铜绿假单胞菌经亚胺培南诱导后对β－内酰胺类及其它抗生素的耐药性。方法：用亚胺培南的亚抑菌浓度（1／2MIC）诱导铜绿假单胞菌5步（10天）后,测定其对各抗生素的敏感性。结果：诱导后,铜绿假单胞菌对亚胺培南的最低抑菌浓度（MIC）比诱导前增长了8．67倍,其抑菌环直径缩小了7．95mm;对其它抗生素无明显改变。结论：亚胺培南诱导后获得的耐药不是由于诱导型β－内酰胺酶的产生,而可能是其它耐药机制所致,且与其它抗生素无交叉耐药。     

铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制分析

目的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制分析研究。方法采用K-B法检测100株耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA),并用聚合酶链式反应(PCR)法检测分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌相关金属酶IMP、VIM基因以及外膜通道蛋白OprD2基因。结果 70株耐亚胺培南铜绿假单胞菌为多重耐药菌,对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦的敏感性较高。金属酶IMP基因阳性率为24.29%(17/70),vIM型金属酶基因阳性率为7.14%(5/70),外膜蛋白通道OprD2基因阳性率为68.57%(48/70),其中外膜蛋白通道OprD2基因缺失率为58.33%。结论 IRPA耐药情况严重。外膜蛋白通道OprD2基因缺失突变是本组铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制之一。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药特征及其耐药机制研究

目的分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药特征,并研究对亚胺培南的耐药机制。方法采用Micro-Walkaway-40进行细菌鉴定和药物敏感试验,应用PCR法对铜绿假单胞菌亚胺培南耐药相关基因（IMP、VIM、GIM、OXA）和膜微孔蛋白基因oprD2进行检测,琼脂稀释法检测氰氯苯腙（cccp）对耐亚胺培南铜绿假单胞菌MIC的影响。结果 65株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对舒普深、特治星、阿米卡星的耐药率分别为38.5%、43.1%和44.6%,对头孢他啶、马斯平和环丙沙星的耐药率分别为50.8%、53.8%和55.4%;65株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中,IMP阳性11株（16.9%）、VIM 4株（6.2%）,oprD2基因缺失5株（7.7%）,其余耐药基因未检出;CCCP检测阳性时,亚胺培南的MIC值下降,提示存在主动外排机制的菌株7株（10.8%）。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌多重耐药现象较为严重,其耐药机制主要与细菌产IMP型金属β-内酰胺酶、细胞主动外排机制以及膜微孔蛋白基因oprD2缺失有关。     

80株铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究

目的检测和研究耐亚胺培南铜绿假单胞菌的临床特征及耐药机制。方法对2016年1月至2017年9月该院临床分离的80株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的科室分布、标本类型及耐药性进行回顾性分析;运用PCR检测耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药基因blaIMP、blaVIM、blaNDM-1、blaSIM、blaSPM、blaGIM、blaOXA-10及膜孔蛋白OprD2基因。结果该院以神经外科送检标本的耐亚胺培南铜绿假单胞菌检出(28.0%)最多,主要分离自呼吸道标本(86.0%)。80株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对阿米卡星的耐药率最低(7.5%),对复方磺胺甲噁唑的耐药率最高(97.5%)。耐药基因检测结果显示:blaVIM基因阳性1株(1.2%),blaOXA-10基因阳性4株(5.0%),其他耐药基因均未检出;膜孔蛋白OprD2基因缺失67株(83.8%)。结论本研究中铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要机制是膜孔蛋白OprD2基因的缺失。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制研究

目的了解我院分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌(PA)耐药机制及同源性分型情况。方法收集临床分离耐亚胺培南PA,用K-B法检测28株耐亚胺培南PA对12种抗菌药的敏感性,用肠杆菌科细菌基因间重复序列(ERIC)进行同源性分析,并用PCR法检测外膜孔蛋白OprD2和金属β内酰胺酶(IMP、VIM)基因。结果28株耐亚胺培南PA对其他12种抗菌药的耐药率在14.8%~42.3%。经ERIC-PCR分析后共有11个基因型。其中A型为11株:A1型9株,A2型2株;B型为5株:B1型2株,B2型2株,B3型1株;C型3株;D型2株;E~K型各1株。PCR检测到OprD2基因仅4株,其缺失率为85.7%,28株PA中检测到1株VIM基因,经测序证实为VIM-2型。结论本院耐亚胺培南PA的主要耐药机制为外膜孔蛋白缺失。在外科和高干病房中出现多种基因型的耐亚胺培南PA传播。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌医院感染现状及耐药性分析

目的 探讨耐亚胺培南铜绿假单胞菌（imipenem resistant Pseudomonas aerugirtM，IRPA）医院感染现状及其对临床常用抗苗药物的耐药情况．以指导临床更有效地使用抗生索。方法 按常规方法对163株铜绿假单胞苗进行分离培养。VITEK-Ⅱ全自动细菌鉴定仪进行鉴定，按2005年NCCLS的标准用纸片扩散（K-B）法对临床常用的抗苗药物进行药物敏感性试验。采用whonet5．3及SPSS11．0软件对数据进行统计处理。结果 共分离出IRPA60株，占36．8％（60／163）；主要来源于痰标本占66．7％（40／60），IR-PA在病区的分布中居前3位依次为ICU、呼吸内科和神经内科，IRPA对12种常用抗生索的耐药率除阿米卡星35．0％．庆大霉素45．0％外。对头孢吡肟、哌拉西林等10种抗苗药的耐药率均高于50．0％；除环丙沙星、庆大霉素．IRPA组的耐药率明显高于亚胺培南敏感铜绿假单胞苗（imipenem susceptible Pseu-domonasaeruginosa，ISPA）组，差异有显著性（P〈0．05）。结论 IRPA对大多数临床常用抗生索呈现出多重耐药．且IRPA比ISPA具有更强的耐药性。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性

目的：研究铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药率及对其他抗菌药物的耐药率。方法：收集2000年1月—2002年12月我院细菌室分离的铜绿假单胞菌，采用琼脂扩散法作敏感试验。结果：2000年分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药率为20．6％(32／155)，2001年为39．0％(48／123)，2002年为41．3％(95／230)。痰标本分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌最多见，占69．1％(121／175)，其次为尿液、伤口分泌物等。耐亚胺培南铜绿假单胞菌主要分布在外科监护病房，占35．6％(51／143)，其次为呼吸监护病房(33．5％)、外科(12．5％)和呼吸科(6．25％)等。耐亚胺培南铜绿假单胞菌对多种抗菌药物耐药，对氨曲南、头孢他啶、头孢吡肟、庆大霉素和环丙沙星的耐药率逐年升高。外科监护病房和呼吸监护病房分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌对其他抗菌药物的耐药率均较高。结论：铜绿假单胞菌对碳青霉烯类的耐药率逐年增加，并对多种抗菌药耐药，应引起高度重视。     

西安地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药现状及碳青霉烯酶基因研究

目的：调查西安地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药现状及碳青霉烯酶耐药基因携带情况,指导临床合理使用抗菌药。方法连续收集2012年8月至2013年7月西安地区四所医院临床标本中分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌共151株,通过药物敏感试验了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征,并采用聚合酶链反应技术（PCR）检测碳青霉烯酶耐药基因在耐亚胺培南铜绿假单胞菌中的携带情况。结果151株耐亚胺培南铜绿假单胞菌主要分布在神经外科 ICU （37．1％）、神经内科 ICU （27．1％）及烧伤科（19．9％）;所检菌株对多黏菌素 B 敏感,对其余9种抗菌药物均不同程度耐药;94株携带 VIM 基因,32株携带IMP 基因,5株携带 SPM 基因,3株携带 SIM 基因。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌多药耐药及泛耐药现象严重,其原因可能与产碳青霉烯酶耐药基因表达有关,耐药基因以 VIM、IMP 为主,临床应加强细菌耐药性监测,合理有效使用抗菌药物,防止耐亚胺培南铜绿假单胞菌的蔓延。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌oprD2基因与金属酶的检测

目的研究oprD2基因与金属酶（MBL）在亚胺培南耐药机制中的作用。方法对天津地区3所综合医院临床分离60株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌，以2-巯基乙醇（2-MPA）为酶抑制剂，在MH平皿上用纸片扩散法进行抗生素协同敏感性检测，并用PCR检测MBL基因和oprD2基因。结果60株临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌（imipenem—resistant Pseudomonas aeruginosa，IRPA）中，2-MPA方法筛选出15株（25％）MBL阳性；以PCR方法检测，22株（36．4％）oprD2基因阳性，19株（31．7％）产生IMP-1型MBL，未发现VIM-2与IMP-2酶，7株IRPA同时含有IMP-1和oprD2基因。结论IMP-1为天津地区IRPA产MBL的主要类型，也是临床分离铜绿假单胞菌亚胺培南耐药的重要原因之一。     

铜绿假单胞菌外膜蛋白D2与亚胺培南耐药的关系

目的制备铜绿假单胞菌(PA)的外膜蛋白(Opr)D_2多克隆抗体,探讨OprD_2缺失与亚胺培南耐药的关系。方法常规酚-氯仿法提取PA的基因组DNA,PCR扩增OprD_2基因,构建原核表达质粒pRSET-OprD_2,在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达目的蛋白,胶回收后制备兔多克隆抗体,应用该抗体检测临床分离的32株PA OprD_2的表达情况。结果成功构建了OprD_2原核表达载体,制备了特异性好的OprD_2多克隆抗体。蛋白印迹法检测27株临床分离的耐亚胺培南PA,20株(74.1%)OprD_2表达缺失,5株(18.5%)OprD_2表达明显减少,2株(7.4%)OprD_2表达正常。结论临床分离的PA OprD_2表达的缺失或减少是PA对亚胺培南耐药的主要机制之一。     

耐亚安培南的铜绿假单胞菌OprD2的缺失与金属β-内酰胺酶编码基因的研究

目的了解临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌中外膜蛋白OprD2的缺失和金属β-内酰胺酶(MBLs)的基因型,为临床治疗和医院感染提供依据。方法用亚胺培南—EDTA纸片增效法筛选出产MBLs的菌株,并用PCR检测MBLs的基因和OprD2基因。结果 76株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌中有16株产MBLs(检出率21.1%),其中VIM-2型13株(检出率17.1%),IMP-1型3株(检出率3.9%),孔蛋白OprD2缺失51株﹙检出率75%﹚。结论临床分离的耐亚胺培南的铜绿假单胞菌大多存在外膜蛋白OprD2的缺失,产生VIM-2型和IMP-1型MBLs菌株在本院有一定的流行,应密切监测其耐药变化。     

铜绿假单胞菌外膜蛋白D2与亚胺培南耐药关系的研究

目的研究广西地区铜绿假单胞菌外膜蛋白D2（OprD2）的表达与亚胺培南耐药之间的关系。方法采用SDS-PAGE电泳法对提取出的106株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的外膜蛋白进行电泳,并利用水杨酸盐抑制实验确定OprD2的位置,通过凝胶成像系统成像并将其与敏感株比较进行分析。结果 106株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌中有99株细菌缺失OprD2。结论 OprD2缺失是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因之一。     

铜绿假单胞菌氨基糖苷类药物修饰酶基因研究

目的调查铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特性及氨基糖苷类药物修饰酶基因表达。方法用Phoen ixTM-100系统鉴定细菌和药敏试验。用琼脂扩散法检测20株多重耐药铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星4种药物的敏感性。采用聚合酶链反应(PCR)扩增4种氨基糖苷类药物修饰酶基因,并使用DNA测序加以证实。结果190株铜绿假单胞菌对氯霉素、四环素、复方磺胺耐药率最高,均为98.9%;对亚胺培南、美洛培南的耐药率分别为15.3%和6.8%。从20株菌中检出aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和ant(2″)-Ⅰ3种修饰酶基因,阳性率分别为10%、60%和65%,未发现ant(3″)-Ⅰ基因。20株菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星的耐药率分别为35.0%、90.0%、70.0%、60.0%。结论本地区铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药与修饰酶基因的传播表达有关。     

铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药机制的研究

目的研究30株铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法用PCR及测序法研究拓扑异构酶Ⅱ和Ⅳ的gyrA、gyrB、parC和parE基因;同时用琼脂稀释法测定环丙沙星、左氧氟沙星的MIC和加入羰基氢氯苯腙(CCCP)后的MIC,以确定存在外排机制。结果菌株中23株(76.7%)有gyrA突变,主要为Thr-83→Ile,第87位突变3株;10株(33.3%)parC基因突变,其中5株为Ser-87→Leu,3株第91位突变;gyrB和parE突变较少见。CCCP能显著降低环丙沙星和左氧氟沙星的MIC。结论铜绿假单胞菌的耐药性日趋严重,两类拓扑异构酶基因突变和外排泵机制是铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物的主要机制。     

多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物耐药研究

目的探讨宜兴市第二人民医院临床分离多重耐药铜绿假单胞菌与氨基糖苷类抗菌药物的表型与基因型的关系,为临床抗感染治疗提供依据。方法采用琼脂纸片扩散(K-B)法对临床分离的铜绿假单胞菌进行药敏试验,选出34株多重耐药菌株,用聚合酶链反应(PCR)法检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ、ant(2′)-Ⅰ、ant(3′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ检出阳性率分别为85.3%、44.1%、17.6%、11.8%、5.9%。对庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星的耐药率分别为91.18%、44.12%、88.24%、85.29%。结论多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗菌药物的耐药程度不同,临床应根据药敏结果选择用药,以减少耐药菌株的产生,控制院内感染。     

碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2的研究

目的 研究铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2与碳青霉烯类抗生素耐药的关系.方法 琼脂稀释法测定14种抗菌药物对铜绿假单胞菌的MIC.PCR扩增oprD2编码基因并进行序列分析.十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2的变化,比较敏感株和耐药株外膜蛋白的差异,统计分析采用均数t检验.结果 141株耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南药敏试验结果显示具3种模式,以亚胺培南和美罗培南同时耐药(IMPRMEMR)为主,占66.7%;亚胺培南耐药和美罗培南敏感(IMPRMEMS)占32.6%;亚胺培南敏感和美罗培南耐药(IMPSMEMR)仅占0.7%.PCR扩增141株耐药株oprD2编码基因结果136株耐药株oprD2编码基因发生显著变异,变异位点呈现多样性.其中34株细菌的oprD2编码基因存在大片段缺失,6株的oprD2编码基因中有插入片段,96株有小片段缺失或不同位置的多个点突变.另4株产金属酶菌株及1株亚胺培南敏感(美罗培南耐药)株的oprD2编码基因未发现异常.对其中16株碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌进行SDS-PAGE分析,结果显示10株IPMRMEMR和5株IPMRMEMS铜绿假单胞菌外膜蛋白均存在分子量46 000 u处的OprD2蛋白减少,而1株IMPSMEMR株OprD2蛋白带未见异常.结论 oprD2编码基因的缺失或突变可能是导致外膜蛋白OprD2缺失或减少的分子基础,并是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素尤其是亚胺培南耐药的主要机制之一.