脂质体介导转染的绿色荧光蛋白基因在骨髓基质细胞内的表达

目的研究脂质体转染法对骨髓基质细胞进行基因修饰的可行性。方法在体外分离和扩增大鼠骨髓基质细胞,用脂质体转染法介导绿色荧光蛋白基因进入到骨髓基质细胞内,荧光显微镜下检测荧光蛋白的表达,台盼兰排斥试验检测转染细胞的活力。结果绿色荧光蛋白可以在大鼠骨髓基质细胞内表达,转染效率为(28.9±3.6)%;脂质体法转染后的细胞活力为(93.6±4.8)%。结论脂质体转染法可以介导外源基因进入到骨髓基质细胞内表达。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因转染人肺腺癌细胞A549的体内外实验研究

单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶（ＨＳＶ１－ＴＫ）基因是一个药敏基因,转导该基因的细胞对非毒性抗病毒药更昔洛韦（ＧＣＶ）或阿昔洛韦（ＡＣＶ）敏感,能被其杀灭。通过探讨该基因转染肺癌细胞后对ＧＣＶ或ＡＣＶ的敏感性,为其进入临床治疗肺癌积累实验资料。本文用电穿孔法将含胸苷激酶（ＴＫ）基因的逆转录病毒载体导入人肺腺癌细胞Ａ５４９,在体内外观察转基因细胞对ＧＣＶ的敏感性。材料与方法合ＴＫ基因的逆转录病毒表达载体ＰＬＸＳＮ－ＴＫ参照文献［１］构建,Ａ５４９细胞购自上海细胞所。新霉素（Ｇ４１８）、四甲基偶氮唑盐（Ｍ…     

转染甲状腺hNIS和hTPO基因的神经胶质瘤细胞摄碘功能的研究

目的 在细胞水平研究转染人钠/碘转运体(hNIS)后的神经胶质瘤细胞的摄碘功能,为最终实现1311Ⅰ治疗非甲状腺肿瘤提供理论依据.方法 应用基因转染技术获得稳定表达hNIS的TJ-905转以及hNIS和人甲状腺过氧化物酶(hTPO)瞬时共转染的TJ-905共,然后研究两种细胞的摄碘功能以及131Ⅰ的细胞毒作用.结果 TJ-905转摄125Ⅰ活性增高(45.99±0.19)倍,其有效T1/2约为5 min;TJ-905共的125Ⅰ有机化程度增高,有效T1/2延长至10 min.同时TJ-905转的细胞增殖率降低,第7天降至(40.28±0.37)%,其细胞克隆存活率亦降至(31.83±0.52)%.结论 转染hNIS基因的神经胶质瘤细胞具有较强的摄碘功能,并且131Ⅰ对其具有较强的抑制增殖作用.     

脂质体介导干扰素γ基因转染及其抗成纤维细胞增殖作用

干扰素γ(ＩＦＮ γ)不仅作为强有力的免疫调节剂被广泛地用于肿瘤、病毒性肝炎、类风湿关节炎等疾病的治疗 ,且在治疗特发性肺纤维化 (ＩＰＦ)的初步研究中也显示了一定的潜在价值。既往研究中多采用重组的ＩＦＮ γ ,其和天然的ＩＦＮ γ在活性方面仍有一定的差距 ,且半衰期短 ,需反复应用 ,有一定的毒副作用。研究发现[1] ,人肺组织对重组的ＩＦＮ γ具有较好的耐受性 ,且呼吸道应用ＩＦＮ γ十分方便。但重组ＩＦＮ γ经呼吸道直接雾化吸入活性明显下降 ,很难发挥其生物效应 ,因此ＩＦＮ γ的基因治疗肯定具有重大的价值。本研究中我们…     

阳离子脂质体联合转铁蛋白对人肿瘤细胞的靶向基因转染

目的研究阳离子脂质体联合转铁蛋白(transferrin ,Tf)介导报告基因虫荧光素酶基因对人肿瘤细胞的靶向转染。方法比较阳离子脂质体Lipofectin、Lipofectin联合含双铁的人转铁蛋白[HTf(Fe) 2 ]介导质粒pDR2 luc转染人肝癌细胞株HepG2 、SMMC772 1、人肾癌细胞株GRC及非洲绿猴肾细胞COS7的转染效率,转染效率通过以液体闪烁计数仪单光子计数法测定荧光素酶活性估计。结果除COS7外,其余3株细胞以Lipofectin联合HTf(Fe) 2 介导pDR2 luc的转染效率均比单用Lipofectin的转染效率高(P <0 0 1) ,其中HepG2 与SMMC772 1中的转染效率增高8倍多,GRC中的转染效率增高4倍多。结论Lipofectin联合HTf(Fe) 2 介导质粒pDR2 luc转染细胞时对人肿瘤细胸株有一定的靶向作用。     

人钠/碘转运体基因G395R与先天性甲状腺功能减退症相关

先天性甲状腺功能减退症 5 2例和 10 6例健康婴幼儿 ,采用PCR RFLP技术对钠 /碘同向转运体 (hNIS)基因 3 95位点进行基因突变筛查。研究表明hNIS基因G3 95R突变可能不是青岛地区先天性甲状腺功能减退症发病的主要原因。     

姜黄素对人肺癌细胞凋亡相关蛋白Survivin表达的影响

目的研究姜黄素对人肺癌细胞诱导凋亡的作用机制。方法用10、20μM两种浓度姜黄素分别作用于SPC-A1细胞12h和24h,用末端标记法检测细胞凋亡率,原位杂交检测姜黄素作用24h后SPC-A1细胞凋亡相关蛋白Survivin表达。结果20μM姜黄素作用24h组凋亡率达43.7％,明显高于其他组;20μM姜黄素作用24h组凋亡相关蛋白Survivin mRNA表达明显降低。结论姜黄素可诱导人肺癌细胞SPC-A1凋亡,其作用机制可能与凋亡相关蛋白Survivin mRNA表达降低有关。     

pEGFP-C3-hNIS重组质粒的构建及其在人胃癌BGC-823细胞的表达

目的构建人钠碘转运体（hNIS）基因真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3-hNIS,并研究重组hNIS基因在人胃癌BGC-823细胞中的表达情况。方法采用Trizol一步法从甲状腺手术患者的甲状腺组织中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到T载体上,测序后亚克隆到真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3的多克隆位点,获得重组真核表达载体pEGFP-C3-hNIS。分别将pEGFP-C3-hNIS重组质粒（实验组）和pEGFP-C3（对照组）瞬时转染至人胃癌BGC-823细胞中,转染48 h后,于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达情况,并通过Western blot方法检测hNIS基因的蛋白表达水平。结果序列分析证实克隆片段与GenBank公布的hNIS基因序列（序列号：NM-000453）相似性达99.90%。转染48 h后,实验组与对照组细胞均可观察到较强绿色荧光信号,用hNIS基因特异性抗体检测表明实验组hNIS表达水平明显高于对照组。结论成功构建hNIS真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3-hNIS,并能在人胃癌BGC-823细胞中高表达。     

转染野生型p53基因对苯并芘诱导的肺癌细胞生物学特性及其原发性耐药的作用

目的　探讨苯并芘的代谢产物反式二羟环氧苯并芘 (BPDE)诱发的p53基因突变,在肺癌发生发展中的作用,及外源性转染野生型p53基因对肺癌细胞原发性耐药的影响。方法　以携带野生型p53基因的缺陷型腺病毒穿梭载体(pshuttle-cmv-p53cDNA),感染由BPDE诱发p53基因突变的成瘤支气管上皮细胞株,用空载体pshuttle cmv为对照组。通过软琼脂集落形成试验、细胞生长曲线实验、细胞凋亡和体外化疗药物敏感性分析等探讨野生型p53基因的生物学效应。结果　外源野生型p53基因转染的肺癌细胞的集落数为(5.4±0.8)个、转染空载体组为 (22.5±2.5)个、未转染组为(24 5±3 5)个;p53基因转染组细胞克隆形成率为 0.5%、未转染组为 2.5%、转染空载体组为2.3%。p53基因转染组的集落形成率与未转染组和转染空载体组比较差异均具有统计学意义 (U值分别为 3.651和 3.642,P均 <0.01 );而未转染组与转染空载体组比较差异无统计学意义 (U=1.414, P>0.05)。外源野生型p53基因转染肺癌细胞可诱导其凋亡;同时逆转细胞对表柔比星的耐药。结论　p53基因突变在肺癌的发生、发展及耐药性方面可能具有重要的作用。野生型p53基因替代结合抗肿瘤药物对于提高肿瘤细胞的药物敏感性,克服耐药方面可能有一定的帮助。     

P16真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用

目的构建pcDNA3/p16真核表达质粒并了解其对肝癌细胞BEL-7404生长的抑制作用.方法将p16 cDNA亚克隆至pcDNA3真核表达载体上,并经脂质体介导转染至BEL-7404细胞中.应用MTT法和流式细胞仪分析转染细胞生长情况和细胞周期.结果重组pcDNA3/p16表达质粒构建成功.经pcDNA3/p16转染的BEL-7404细胞生长速度受到明显抑制,且细胞多停滞于G0/G1期.结论重组pcDNA3/p16质粒能在BEL-7404细胞内表达,且能抑制BEL-7404细胞的生长.     

N-[4-(N,N,N-Trimethylammonium)Benzyl]Chitosan Chloride as a Gene Carrier: The Influence of Polyplex Composition and Cell Type

Polyplex-based gene delivery systems are promising substitutes for viral vectors because of their high versatility and lack of disadvantages commonly encountered with viruses. In this work, we studied the DNA polyplexes with N-[4-(N,N,N-trimethylammonium)benzyl]chitosan chloride (TMAB-CS) of various compositions in different cell types. Investigations of the interaction of TMAB-CS with DNA by different physical methods revealed that the molecular weight and the degree of substitution do not dramatically influence the hydrodynamic properties of polyplexes. Highly substituted TMAB-CS samples had a high affinity for DNA. The transfection protocol was optimized in HEK293T cells and achieved the highest efficiency of 30–35%. TMAB-CS was dramatically less effective in nonadherent K562 cells (around 1% transfected cells), but it was more effective and less toxic than polyarginine.     

The Retrovirus-mediated Antisense Human Telomerase RNA (hTR) Gene Limits the Growth of Hepatocellular Carcinoma Growth in Cell Culture and Animals

Aim To investigate the inhibitory effect of retrovirus-mediated antisense human telomerase RNA (hTR) gene therapy on hepatocelluar carcinoma. Methods We first constructed the sense and antisense hTR vectors and then transfected these into HepG2 cells. Telomerase activity, cell growth curves, proliferating cell nuclear antigen expression (PCNA), cell cycle distribution, and cell apoptosis were detected by the means of telemere repeat amplification protocol (TRAP), MTT assay, immunofluorescence, flow cytometric analysis, and transferase-mediated nick end labeling (TUNEL), respectively. In order to further confirm the therapeutic effect of this gene therapy, we developed an experimental line of HepG2 tumor-bearing nude mice by and directly injected these with retrovirus expressing the antisense hTR gene. Tumor growth was determined by tumor volume, and cell apoptosis was analyzed by TUNEL. Results The antisense hTR gene was shown to be successfully integrated into the target cells’ genome. HepG2 cells transfected with the antisense hTR gene showed down-regulated telomerase activity, inhibited cell growth, decreased PCNA expression, and increased apoptotic rate. Moreover, flow cytometry revealed a decrease of cells in the S phase with cell cycle arrest at the G2/M phase. In the antisense hTR-treated group, tumor growth was significantly reduced and showed an increase of apoptotic cells. Conclusion The results indicate that the specific inhibitor of the hTR template is likely to be a very efficient tool for hepatocellular carcinoma research and may possess potential therapeutic significance in the future clinical practice.     

尿多酸肽联合NP与NP方案化疗在晚期非小细胞肺癌的随机对照临床研究

背景与目的尿多酸肽足从健康人尿中分离提取、纯化的一组细胞分化诱导剂。临床前试验表明。尿多酸肽对多种肿瘤具有抑制生长、诱导分化凋亡的作用。本研究拟比较尿多酸肽联合长春瑞滨、顺铂（NP）化疗与NP方案治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效、生存期及毒性。方法42例晚期NSCLC病例被随机分人尿多酸肽联合NP化疗组与NP化疗组。NP方案：NVB25mg／m^2，静脉滴注第1、第8天，DDP75mg／m^2静脉滴注第1天，21天为1周期，化疗2周期。尿多酸肽联合NP化疗：尿多酸肽注射液300ml锁骨下静脉置管给药。每天一次，于化疗前7天开始用药，再与NP方案联合治疗2周期，化疗药使用当日停用尿多酸肽。结果尿多酸肽联合NP化疗组有效率为44．4％，NP化疗组有效率为20％。二组疗效无显著性差异（P〉0．05）；尿多酸肽联合NP化疗组中位生存期9个月，单纯NP方案化疗组为6个月（P=0．0287）。毒副反应主要为骨髓抑制、胃肠道反应和脱发，二组无明显差别。结论尿多酸肽联合NP化疗治疗晚期复治NSCLC疗效肯定，毒性可耐受．尤其在延长患者中位生存期方面具有一定优势。     

hnRNP A2/B1、LN-R在非小细胞肺癌的表达及临床意义

目的　探讨异质性细胞核核糖蛋白 A2 / B1 ( hn RNP A2 / B1 )、层粘连蛋白受体 ( L N- R)表达对非小细胞肺癌 ( NSCL C)的诊断价值及与 NSCL C临床病期、淋巴结转移的关系。方法　采用免疫组织化学方法检测 83例原发性 NSCL C、 32例肺良性肿瘤及 2 0例正常肺组织的 hn RNP A2 / B1 、 L N- R表达。结果　 NSCL C组 hn-RNP A2 / B1 、L N- R表达阳性率分别为 79.5 % ( 6 6 / 83)和 6 7.5 % ( 5 6 / 83) ,明显高于肺良性肿瘤组及正常肺组 (P <0 .0 5 ) ,肺良性肿瘤组阳性率与正常肺组无差异 ( P >0 .0 5 )。有淋巴结转移者 hn RNP A2 / B1 、 L N- R阳性率分别为 88.0 %和 76 .0 % ,明显高于无淋巴结转移者 ( 6 6 .7%、 5 4 .5 % ) ( P <0 .0 5 ) ; ～ 期 hn RNP A2 / B1 、 L N-R阳性率 ( 89.1%、 80 .4 % )明显高于 ～ 期患者阳性率 ( 6 7.6 %、 5 1.4 % ) ,P <0 .0 5。结论　hn RNP A2 / B1 、L N- R表达对 NSCL C诊断、预测病情及判断淋巴结转移均具有重要的临床价值。     

重组人血管内皮抑素联合GP方案治疗非小细胞肺癌的疗效观察

目的 观察重组人血管内皮抑素联合吉西他滨+顺铂方案(GP方案)治疗非小细胞肺癌的临床疗效.方法 53例非小细胞肺癌患者随机分为对照组(26例)和治疗组(27例).对照组采用GP方案治疗;治疗组采用重组人血管内皮抑素联合GP方案治疗.治疗结束后观察两组治疗总有效率及不良反应.结果 治疗组临床总有效率为66.7%,对照组临床总有效率为46.2%,差异有显著性(P<0.05);两组毒副反应比较差异无显著性差异(P>0.05).结论 重组人血管内皮抑素联合GP方案治疗非小细胞肺癌疗效显著,能明显改善患者的生活质量,值得临床推广应用.     

着丝粒蛋白F在非小细胞肺癌组织中的表达及其对A549细胞生物学行为的影响研究

背景 非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的85％左右,由于易错失最佳手术切除时机,且放化疗效果不佳,导致生存率偏低.而着丝粒蛋白F(CENPF)是在多种癌症中高表达的分子,探讨其对肺癌细胞生物学行为的影响,将有助于NSCLC的靶向治疗.目的 探讨CENPF在NSCLC组织中的表达及其对A549细胞生物学行为的影响.方法 ...     

Comparing the Relationship of Taxol-Based Chemotherapy Response with P-glycoprotein and Lung Resistance-Related Protein Expression in Non-Small Cell Lung Cancer

Our aim was to compare Taxol-based chemotherapy response of non-small cell lung cancer (NSCLC) with P-glycoprotein (Pgp) or lung resistance protein expression (LRP). Immunohistochemical analyses were performed on multiple nonconsecutive sections of the biopsy specimens to detect Pgp and LPR expressions in 40 patients with advanced NSCLC before Taxol-based chemotherapy. The chemotherapy response was evaluated by clinical and radiological methods in the third month after completion of treatment. No significant differences of prognostic factors (age, sex, body weight loss, performance status, tumor size, tumor stage, and tumor cell type) were found between the 20 patients with good and the 20 patients with poor responses. The incidence difference of positive Pgp expressions between good and poor responses was significant, however, the difference of LRP expression was not. We concluded that Taxol-based chemotherapy response of patients with NSCLC was related to Pgp but not LPR expression.     

HER2和p300/CBP在非小细胞肺癌中表达及意义

目的检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织中HER2和p300／CBP蛋白的表达,并探讨其临床意义。方法应用免疫组织化学Evision二步法,检测71例NSCLC患者肿瘤组织和20例正常肺组织标本中HER2和p300／CBP蛋白表达水平。结果正常肺组织未见HER2和p300／CBP蛋白过表达,NSCLC中存在HER2和p300／CBP蛋白过表达,过表达率分别为34％和76％（24／71,54／71）。肿瘤组织中HER2蛋白表达情况与肿瘤组织学类型、TNM分期、淋巴结转移情况有相关性（P=0．039、0．003、0．033）,与肿瘤细胞分化程度、性别、年龄未见相关性。p300／CBP与肿瘤各临床病理参数无相关性。结论NSCLC患者肿瘤组织中HER2、p300／CBP蛋白过表达。HER2过表达程度与NSCLC淋巴结转移、TNM分期和组织学类型有相关性。p300／CBP与肿瘤各临床病理参数无相关性。