何首乌降血脂有效部位及量效关系的实验研究

目的研究何首乌降血脂的有效部位及其量效关系。方法选用CO2超临界、系统溶媒（石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、75%乙醇、水）和水提醇沉的方法分别对何首乌进行提取,观察各提取物对腹腔注射蛋黄乳液致高血脂症模型小鼠血清总胆固醇（TC）及三酰甘油（TG）的影响,初步明确何首乌降血脂的有效活性部位,并对该有效部位进行量效关系的评定。结果何首乌超临界提取物、乙醇提取物和水提取物均有显著的降低血清TC和TG的作用,其中何首乌超临界提取物的降脂效果优于乙醇提取物和水提取物,其在0.50～1.00g/（kg.d）时降脂效果最佳;何首乌石油醚提取物、乙酸乙酯提取物和水提醇沉物虽也有一定的降血脂作用,但与对照组相比差异无统计学意义。结论何首乌超临界提取物为何首乌降血脂的有效活性部位,其有效剂量范围在0.50～1.25g/（kg.d）之间。     

何首乌提取物对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠的影响

目的研究何首乌不同提取物对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠血糖、胰岛素抵抗及InsR基因表达的影响。方法高脂饲料喂养联合腹腔内注射小剂量四氧嘧啶制造糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型,分别用二甲双胍、何首乌水提物、何首乌乙醇提取物、何首乌正丁醇提取物进行干预,观察给药前后大鼠空腹血糖、血清胰岛素水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛素敏感指数(ISI),采用RT-PCR法测定肝细胞膜InsR mRNA基因表达情况。结果三组何首乌提取物的血糖、FINS、HOMA-瓜水平较模型组显著下降(P<0.01),ISI水平显著上升(P<0.01);肝细胞膜上InsR基因表达量上升。结论何首乌提取物改善2型糖尿病大鼠的胰岛素抵抗,可能与上调InsR基因表达量有关。     

何首乌炮制前后及其主要成分体外抗氧化活性研究

目的：研究何首乌生品、炮制品及其主要成分的体外抗氧化活性,探讨何首乌的炮制机理及其抗氧化作用物质基础。方法：采用2,2-二苯基-1-苦肼基（DPPH）自由基清除实验及铁离子还原（FRAP）法抗氧化能力检测方法评价何首乌炮制前后及其主要化学成分的体外抗氧化活性。结果：DPPH自由基清除实验中,何首乌生品（S）,随着乙醇浓度的增加,对DPPH自由基的清除率也增加,制品（Q/H/Z）中,以90%乙醇提取所得样品的平均清除率为最高,其次是水、70%乙醇和50%乙醇提取物;FRAP法检测结果显示何首乌生品（S）、黑豆汁制品（H）、清蒸制品（Q）及市售制品（Z）的FRAP值范围分别为2.23~9.27 mmol·L^-1,5.94~9.66 mmol·L^-1,5.74~10.49 mmol·L^-1,3.99~10.40 mmol·L^-1 FeSO₄,不同溶剂提取物的FRAP值由大到小为70%醇 > 50%醇 > 水 > 90%醇;何首乌的组成成分中虎杖苷、白藜芦醇、槲皮苷、槲皮素、芦丁、儿茶素、金丝桃苷、二苯乙烯苷和没食子酸有明显的清除DPPH自由基的作用,没食子酸、槲皮素、槲皮苷、儿茶素、芦丁和白藜芦醇的FRAP值较高,具有较强的抗氧化作用。结论：何首乌炮制前后均有较强的抗氧化作用,虎杖苷、白藜芦醇、槲皮苷、槲皮素、芦丁、儿茶素、金丝桃苷、二苯乙烯苷和没食子酸对何首乌的抗氧化活性有一定的贡献作用。     

何首乌生品及不同炮制品的抗氧化活性研究

目的:研究何首乌生品及不同炮制品的抗氧化活性。方法:采用化学发光法对何首乌生品及不同炮制品清除自由基的能力进行比较。结果:以发光抑制率表示超氧化物歧化酶的活性,结果发光抑制率从高到低依次为生品、黑豆制品、清蒸品、黑豆加酒制品,即何首乌生品的抗氧化活性最高。结论:如果能采取一种炮制方法仅破坏何首乌的泻下成分而保留其有效成分,则能增强其补益效果,充分发挥其抗衰老作用。     

林氏降脂方对高脂血症模型大鼠的降脂与肝保护作用

目的:研究林氏降脂方对高脂血症模型大鼠的降脂与肝保护作用。方法:取雄性SD大鼠随机分为正常对照(等容蒸馏水)组、模型(等容蒸馏水)组、阳性对照(脂脉康胶囊0.4 g/kg)组和林氏降脂方高、中、低剂量[12.962、6.481、3.241 g(生药)/kg]组,每组10只。正常对照组大鼠普通饲料喂养,其余各组大鼠高脂乳剂联合高脂饲料喂养以复制高脂血症模型;复制模型的同时ig给予相应药物,每日1次,连续6周。末次给药后,处死各组大鼠,检测其血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,并观察其病理变化。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠的TC、TG、LDL-C、ALT、AST水平均升高,HDL-C含量减少,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,阳性对照组和林氏降脂方高剂量组大鼠的TC、TG、LDL-C、ALT、AST水平均降低,HDL-C含量增加;林氏降脂方中、低剂量组大鼠的TC、TG含量减少,HDL-C含量增加;林氏降脂方中剂量组大鼠的AST活性减弱,以上差异均具有统计学意义(P<0.01)。病理切片显示,模型组大鼠肝细胞弥散浊肿、重度脂肪变性,林氏降脂方中、低剂量组大鼠轻度脂肪变性,林氏降脂方高剂量组和阳性对照组大鼠肝细胞基本正常。结论:林氏降脂方对高脂血症模型大鼠具有降脂作用,并能改善肝脏脂肪变性。     

滇黄芩茎叶乙醇提取物及其不同溶剂萃取部位的抗氧化和降脂活性研究

目的:研究滇黄芩茎叶乙醇提取物及其不同溶剂萃取部位的抗氧化活性和降脂活性。方法:取滇黄芩茎叶用95%乙醇回流提取,得乙醇提取物;取上述提取物,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,回收溶剂得到不同溶剂萃取部位。以维生素C(Vc)为阳性对照,采用羟基自由基、超氧阴离子自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法检测滇黄芩茎叶乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物的体外抗氧化活性并计算半数抑制浓度(IC50)。以脂肪乳建立脂肪变性L02肝细胞模型,以非诺贝特(20μg/m L)为阳性对照,考察高、低质量浓度(100、50μg/mL)滇黄芩茎叶乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物对细胞中TC、TG含量的影响。结果:对羟基自由基的清除能力强弱排序为滇黄芩茎叶正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>Vc>乙醇提取物>石油醚萃取物,IC50分别为0.15、0.17、0.35、0.75、1.17 mg/mL;对超氧阴离子自由基的清除能力强弱排序为Vc>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>乙醇提取物>石油醚萃取物,IC50分别为0.034、0.55、0.75、3.32、3.73 mg/mL;对DPPH自由基的清除能力强弱排序为Vc>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>乙醇提取物>石油醚萃取物,IC50分别为0.003 2、0.028、0.033、0.048、0.057 mg/mL。滇黄芩茎叶乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对脂肪变性L02肝细胞中TC、TG含量均有显著的降低作用(P<0.01),其降脂能力强弱排序为正丁醇萃取物(低浓度)≈非诺贝特>乙酸乙酯萃取物(高浓度)>乙醇提取物(高浓度)>正丁醇萃取物(高浓度)>乙酸乙酯萃取物(低浓度)>乙醇提取物(低浓度)。结论:滇黄芩茎叶乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物均有一定的抗氧化活性和降脂活性(除石油醚萃取物外),其中正丁醇和乙酸乙酯萃取物的抗氧化活性和降脂活性较高。     

基于1H-NMR代谢组学技术评价何首乌炮制品中差异代谢物的研究

目的采用1H-NMR代谢组学技术评价何首乌炮制品中的差异代谢物。方法建立何首乌的1H-NMR指纹图谱,对黑豆汁制、黄酒制、清水制、黑豆汁加黄酒制何首乌以及生首乌进行分析,同时考察6、12、18、24、32、36 h炮制时间,采用主成分分析、偏最小二乘法判别分析等多元统计方法对不同炮制品与生品差异进行比较分析。结果在何首乌生品、炮制品中找到15种差异化学成分,其中苏氨酸、脯氨酸、没食子酸、β-葡萄糖、琥珀酸、乳酸、胆碱、甘氨酸含量具有随着炮制而升高趋势;而γ-氨基丁酸、蔗糖具有降低的趋势;二苯乙烯苷的含量是先升高后降低。结论基于NMR技术的代谢指纹图谱可以较好的评价何首乌的不同炮制工艺。     

不同提取工艺对北柴胡不同炮制品皂苷a含量及急性毒性实验比较研究

目的探讨不同提取工艺对北柴胡不同炮制品皂苷a含量的变化及对小鼠急性毒性的影响。方法分别采用水提取、60%乙醇提取和60%乙醇-水提取3种方法,制备北柴胡不同炮制品的提取物浸膏,运用HPLC法和经典急性毒性实验法,分别进行北柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a的含量测定及小鼠急性毒性比较研究。结果北柴胡生品、清炒品、醋炙品、酒炙品和蜜炙品不同炮制品水提取物中柴胡皂苷a的百分含量依次为0.08%0,.07%,0.00%0,.04%,0.00%,测得其最大给药量(MLD)值按含生药量计算分别为181.6,244.0,118.8,122.4和170.4 g.kg-1.d-1;60%乙醇提取物中柴胡皂苷a的百分含量依次为0.15%,0.06%,0.16%,0.09%,0.08%,测得其最小致死量(MTD)值按含生药量计算分别为94.0,93.6,50.8,60.4和48.4 g.kg-1.d-1;60%乙醇-水提取物中柴胡皂苷a的百分含量依次为0.20%,0.19%,0.30%,0.13%,0.20%,测得其MTD值按含生药量计算分别为46.4,54.2,62.4,53.6和32.0 g.kg-1.d-1。上述小鼠连续观察14天,死亡小鼠立即解剖未见明显的病理学变化,存活小鼠的体重、行为等变化可逐渐恢复。结论不同提取工艺对北柴胡不同炮制品柴胡皂苷a含量和毒性大小有不同的影响,以60%乙醇-水提取工艺样品柴胡皂苷a含量最高和毒性最大,提示柴胡的毒性大小与柴胡皂苷a含量高低有一定关系。     

苗药了哥王不同炮制品乙醇提取物对小鼠的急性毒性作用比较

目的:比较苗药了哥王生品、不同炮制品乙醇提取物对小鼠的急性毒性,为了哥王汗渍法炮制工艺优选及其安全用药提供依据。方法:采用汗渍法对了哥王的饮片炮制30d得炮制品一,对了哥王粗粉分别炮制14、7d得炮制品二和炮制品三。以70%乙醇为溶剂,采用渗漉法对了哥王生品及不同炮制品进行提取,并对不同乙醇提取物进行小鼠急性毒性实验。结果:了哥王生品、炮制品一乙醇提取物的半数致死量(LD_(50))分别为4.05、6.65 g/kg,相当于临床70kg成人日用量的19、32倍。而了哥王炮制品二、炮制品三乙醇提取物的LD50无法测出;最大耐受量(MTD)分别为20.0、15.0 g/kg,相当于临床70 kg成人日用量的95、71倍;最大给药量(MLD)分别近似为30.0、20.0 g/kg,相当于临床70kg成人日用量的143、95倍。结论:了哥王炮制品的毒性明显低于生品,且了歌王粗粉炮制14d后毒性低于炮制7d。     

花椒不同炮制品水提液的传导麻醉作用研究

目的比较花椒不同炮制品水提液对大鼠离体坐骨神经传导电位的影响,从而揭示花椒不同炮制品传导麻醉作用的差异。方法按照体重将Wistar大鼠随机分为空白组、溶剂组(水);花椒生品、清炒品、醋制品、盐制品、酒制品水回流提取液高、低2个剂量组(药物浓度0.2,0.1 g·mL^-1);阳性对照组(利多卡因20 mg·mL^-1),每组6只。剥离大鼠离体坐骨神经,用电刺激刺激远端神经干,利用PowerLab多通道生理检测仪记录正常动作电位与采用蘸有花椒不同炮制品(生品、清炒品、醋制品、酒制品、盐制品)水回流提取物的棉花包裹后的动作电位,观察空白组与给药组动作电位的振幅变化,以盐酸利多卡因为阳性对照分析数据。结果用蘸有花椒水回流提取物的棉花包裹后,大鼠离体坐骨神经动作电位的振幅产生显著变化,高、低电位差值如下:空白组(53.82±5.32)mV、溶剂组(52.97±6.34)mV、花椒生品低剂量组(25.42±7.51)mV、花椒生品高剂量组(16.80±6.68)mV、花椒清炒品低剂量组(32.56±8.71)mV、花椒清炒品高剂量组(29.69±7.72)mV、花椒醋制品低剂量组(41.59±6.92)mV、花椒醋制品高剂量组(31.40±7.42)mV、花椒盐制品低剂量组(24.95±7.19)mV、花椒盐制品高剂量组(13.36±5.54)mV、花椒酒制品低剂量组(41.20±6.21)mV、花椒酒制品高剂量组(32.49±6.25)mV和盐酸利多卡因组(9.06±3.86)mV。各药物组与空白组相比,高、低电位差均显著减小,各组局部麻醉作用由强到弱依次为盐酸利多卡因>花椒盐制品>花椒生品>花椒清炒品>花椒醋制品>花椒酒制品。结论花椒不同炮制品水提液均具有显著的局部麻醉作用,其中花椒盐制品传导麻醉作用最强。     

制首乌含药血清对L02肝细胞增殖和凋亡的影响

目的: 研究制首乌含药血清对L02肝细胞增殖和凋亡的影响。方法: 采用皮下注射氢化可的松,建立大鼠肾阴虚模型,分为空白对照组、制首乌低、中、高剂量组(10.8,21.6,43.2 g·kg^-1)。连续给药7 d后处死大鼠,制备含药血清。分别采用MTT法测定L02肝细胞线粒体功能、流式细胞术检测肝细胞凋亡率及显微镜观察肝细胞形态结构。结果: 15%的肾阴虚高剂量组含药血清作用48 h后对L02肝细胞增殖具有明显抑制作用,抑制率为16.83%(P<0.05)。肾阴虚中、高剂量组的细胞凋亡率显著性升高,分别为19.6%(P<0.05)和27.8%(P<0.01)。结论: 制首乌对证治疗肾阴虚证侯,当给药剂量超过21.6 g·kg^-1时,对肝细胞的毒性明显增强。     

Chronic toxicity of both raw and processed Polygoni Multiflori Radix on rats

Recently, adverse effects of Polygoni Multiflori Radix (PMR) and Polygoni Multiflori Radix Praeparata(PMRP)have attracted intensive attention worldwide. These adverse effects most occurred in caseswith high dose of prolonged medication course.Liver is usually the target organ of these adverse effects. In the present research,we performedin vivo chronic toxicity study and aimed to evaluate relationships between major constituents of water extractions and total anthraquinone of PMR and PMRP and chronic toxicity.SD rats of both sexes were given water extractions as well as total anthraquinone of PMR and PMRP for 12 weeks.We evaluated basic biochemical indexes, conducted microscopic observations of main organs and assessed early indicators of liver and renal fibrosis. Simvastatin, with hypertriglyceridemia and hypercholesterolemia as its main therapeutic areas, was investigated in our study. Component-toxicity relationships were also discussed.Five male rats died in our study, while all female rats survived, suggesting that some gender differences might be involved. Body weightwas significantly changed, and basic biochemical indexes were sporadically occurred during the research. Pathological examinations on liver and kidney showed slight alternations after 12 weeks without dose-dependent relationship. Increase in serum laminin (LN) was observed in almost all male rats, indicating that the risks of liver or kidney fibrosis still existed, especially for males, although no fibrosis was found in the pathological examination of liver and kidney.No major and severe adverse effects were observed after 12 weeks of administration of PMR and PMRP. Regular safety monitoring is still necessary during medication in order to prevent possible risks.     

葡萄籽原花青素降血脂药效部位筛选

目的：研究不同组分葡萄籽原花青素降血脂药效。方法：采用不同浓度乙醇渗漉提取、大孔树脂分离纯化,制得10%、30%、50%、70%乙醇部位葡萄籽原花青素提取物,建立大鼠高血脂模型,分别测定各组血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）的含量,以及Lee’S指数和脏器指数,对各提取物进行药效学研究,确定葡萄籽原花青素降血脂有效部位。结果：葡萄籽原花青素提取物10%、30%、50%乙醇部位具有明显降低高血脂大鼠模型的TG的含量（P<0.01）;同时50%乙醇部位还可以明显降低高血脂大鼠模型的ALT和AST含量（P<0.01）;10%、30%、50%、70%乙醇部位能抑制Lee’S指数的升高（P<0.01或P<0.05）;10%乙醇组显著升高肾脏指数;10%、30%、50%、70%乙醇组能显著升高脾脏指数（P<0.01）;10%、50%、70%乙醇组能显著降低总脂指数（P<0.01）。结论：50%乙醇部位葡萄籽原花青素提取物为葡萄籽降血脂有效部位。     

何首乌炮制前、后水溶性糖含量的比较研究

目的比较何首乌炮制前、后水溶性糖的含量。方法采用硫酸-蒽酮比色法测定何首乌生品及其炮制品中水溶性总糖、单糖-低聚糖、多糖的含量。结果葡萄糖检测浓度在0.06~0.60mg/ml范围内与吸收度线性关系良好;水溶性总糖、单糖-低聚糖平均回收率分别为99.2%(RSD=2.3%)、99.7%(RSD=2.5%)。结论何首乌炮制后水溶性总糖含量升高,其中单糖-低聚糖、多糖均有所增加,以多糖含量增加为主。     

基于细胞色素氧化酶CYP2D6的何首乌肝细胞毒性及相关成分研究

目的探究何首乌及其主要成分对人肝细胞L02中细胞色素氧化酶CYP2D6 mRNA表达的影响以及抑制CYP2D6活性或表达对何首乌肝细胞毒性的影响及相关成分辨识。方法利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)确定何首乌水提物(Polygoni Multiflori Radix,PMR)及其主要成分对L02细胞CYP2D6 mRNA表达的影响;使用CYP2D6抑制剂奎尼丁初步探究PMR对CYP2D6低活性L02细胞系的细胞毒作用;构建CYP2D6沉默的L02细胞系L02-shCYP2D6,进一步研究L02细胞中CYP2D6表达降低对PMR及其主要成分肝细胞毒性的影响;可能的肝细胞毒性成分与人肝微粒体进行体外孵育,通过考察加入不同CYP450酶特异性抑制剂对其代谢消除率的影响,探究影响其代谢的主要CYP450酶。结果在实验浓度下,PMR和芦荟大黄素(AE)对CYP2D6 mRNA表达有显著抑制作用(P<0.01),大黄素(EM)无明显影响,2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(TSG)仅在高浓度有一定激活作用,其余浓度无影响;PMR联合奎尼丁作用于L02细胞,发现PMR在高浓度下对L02细胞有一定毒性(P<0.01),各浓度抑制剂与之联用后均明显加重了其肝细胞毒性(P<0.01);PMR及其主要成分作用于CYP2D6敲低的L02细胞系,除TSG在高浓度下提升了肝细胞毒性外(P<0.01),PMR、EM、AE在实验浓度范围内肝细胞毒性均显著增加(P<0.01);人肝微粒体体外孵育实验显示,CYP2D6为EM、AE重要的代谢酶。结论PMR能够抑制肝细胞中CYP2D6的表达,而CYP2D6的低活性或低表达能够加重PMR肝细胞毒性,其中主要的毒性成分为EM和AE。     

抑制CYP2E1增强何首乌水提物肝毒性作用及其毒性成分筛选研究

目的 研究肝细胞色素氧化酶P450(CYP450)亚型CYP2E1与何首乌肝毒性的关系并筛选有关毒性成分.方法 MTT法检测CYP2E1特异性抑制剂二乙基二硫代氨基甲酸钠(DDTC)作用后何首乌水提物(PMR)对人肝细胞L02的毒性作用,及PMR和6种成分2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(2,...     

何首乌及其主要成分肝毒性机制的研究进展

何首乌Polygonum multiforum Thunb.是常用滋补中药,广泛应用于临床和保健产品,但是近年来不时出现何首乌及其制品致肝损伤的报道,引起关注。通过整理分析关于生首乌和制首乌的国内外相关报道,从生首乌和制首乌致肝毒性的物质基础（水提物、醇提物、二苯乙烯苷、蒽醌类化合物和没食子酸等）归纳总结其致肝毒性的药理作用研究进展。发现生首乌和制首乌的混淆以及长期高剂量给药可能是致肝损伤的主要原因。在不同病理动物和细胞模型中总结分析何首乌化学成分,发现其化学成分的结构以及成分之间的相互作用也是致肝损伤的原因之一。此外,何首乌引起的肝损伤是特征性的肝损伤,个体的体质差异也是重要原因。     

何首乌炮制工艺的研究

目的:优化何首乌高压炮制工艺,比较其与传统炮制工艺的差异。方法:采用正交设计,以水浸出物、二苯乙烯苷、水溶性糖含量为指标优化何首乌高压炮制工艺;比较高压炮制品与传统炮制品各指标含量、高效液相指纹图谱、不同分子量糖百分含量比的差异。结果:高压炮制何首乌影响因素大小依次为蒸制温度>蒸制时间>干燥温度;高压炮制法和传统炮制法热动力过程不同,所炮制的何首乌无论是醇溶性成分变化还是多糖分子量变化都存在差异。结论:高压炮制法能否代替传统炮制法,需药效学的进一步验证。