Pax5在早期B细胞定向分化发育中的作用

B细胞的定向分化是多个转录因子参与的复杂调控过程,其中Pax5基因编码的B细胞特异性激活蛋白(BSAP)在B细胞的早期定向分化中起着决定性作用.本文着重从Pax5激活多个B系特异性基因、抑制非B系基因的表达和Pax5-/-pro-B细胞的多向分化潜能等方面,综述Pax5在B细胞早期定向分化中的作用.     

Cx43和Pax3蛋白在早期人胎小肠黏膜的表达及意义

缝隙连接(gap junction),又称间隙连接、通讯连接,是由两个相邻细胞之间的连接通道而形成的一种特殊膜结构.Cx43是一种主要的细胞间缝隙连接蛋白,Cx43基因的表达状态与胚胎发育、细胞诱导、分化、生长控制、细胞凋亡等生物过程有着十分密切的关系[1-3].Pax3基因是进化高度保守的Pax基因家族中的一员,其编码的128个氨基酸组成的成对结构域普遍存在于各种生物体内.Pax3作为一种重要的调控基因,其蛋白能够在体外与某些DNA靶序列结合并激活下游报告基因的转录,在胚胎发育过程中对组织和器官的特异化起着重要的调控作用[4].目前关于Cx43和Pax3蛋白在动物和人肠组织中的病理生理机制研究报道较多[5-7],但关于Cx43和Pax3蛋白在早期人胎小肠黏膜层组织细胞发育过程中的表达、分布规律及作用机制的研究,国内外未见文献报道.本文应用免疫组织化学方法,研究早期人胎小肠生长发育过程中,Cx43和Pax3蛋白在小肠黏膜层的分布、变化趋势,探讨两者在小肠黏膜层组织细胞生长发育过程中的作用及意义.     

成对盒基因4与糖尿病研究的最新进展

成对盒(paired box,Pax)基因编码一个转录因子家族,进化上非常保守.有研究结果表明,内胚层衍生的胰腺其分化通过Pax家族的Pax4和Pax6来完成[1].最近越来越多的证据表明,Pax4对成熟胰岛B细胞的扩增和生存至关重要,而且其突变/多态与1、2型糖尿病的发生和进展相关.     

淫羊藿素诱导小鼠胚胎干细胞体外定向分化为神经细胞

目的:采用淫羊藿素(icaritin,ICT)改变小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)体外培养微环境,论证ICT提高ES细胞体外定向分化为神经细胞的效应。方法:采用拟胚体培养法,评价ICT对ES细胞体外定向分化为神经细胞的诱导作用;并利用RT-PCR法和免疫荧光法鉴定神经细胞特异基因和蛋白表达谱。结果:ICT在10-7mol/L浓度时,对ES细胞定向分化为神经细胞表型呈现最佳诱导效应,在分化d8 8时,分化率高达80%(P<0.001),并呈良好的量效和时效关系。分化神经表型者表达神经元特异性微管蛋白(β-tubulin Ⅲ)基因和神经胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)基因,同时伴有神经前体细胞特异性标志蛋白(nestin)及β-tubulin Ⅲ和GFAP特异性蛋白阳性表达。结论:应用拟胚体培养微环境调控法,ICT可诱导小鼠ES细胞定向分化为神经细胞,并与神经发育依赖性特异基因和蛋白表达呈正相关。     

K562细胞向不同细胞系分化时bcl-6表达变化及其机制

目的 研究诱导K562细胞向不同髓系细胞系定向分化过程中bcl-6表达变化及其机制，以探讨bcl-6与K562细胞定向分化的关系。方法 以Western blot方法检测TPA（tetradecanoylphorbol 13-acetate）、羟基脲（Hu）及HMBA（hexamethylene bisacetamide）为诱导剂分别诱导K562细胞向巨核细胞系、红细胞系及巨噬细胞系分化时bcl-6表达变化。PCR、克隆、直接DNA测序方法分析bcl-6基因5′调控区序列变异情况。结果 bcl-6仅在TPA诱导K562细胞向巨核细胞分化时表达上调，bcl-6基因5′调控区序列未发现有突变发生。结论 bcl-6可能是调控K562细胞向不同细胞系定向分化的关键基因，在TPA诱导的K562细胞向巨核细胞分化过程中发挥重要作用，TPA诱导的K562细胞bcl-6表达上调与其调控区基因变异可能无关。     

重组人 BMP-2 诱导 C3H10T1/2 间质干细胞定向成骨分化早期基因表达谱分析简

目的 研究间质干细胞早期定向成骨分化基因表达谱,为研究基因对早期成骨定向分化调控机制提供实验基础.方法 分别提取重组人骨形成蛋白2（rhBMP-2）诱导组和对照组C3H10T1/2细胞总RNA,进行扩增标记后,与ArraySTAR小鼠基因芯片杂交,应用生物信息学软件GeneSpring和GATHER对基因芯片数据进行分析.应用STRING在线软件对差异表达基因构建蛋白互作网络并进行网络分析.结果 C3H10T1/2早期成骨分化中,主要富集发育、器官形成等分子功能本体以及细胞因子-细胞因子受体作用信号通路.成骨分化1d和4d均上调表达基因42个,下调表达基因45个.网络分析研究表明：Egfr、Cxcl 12等信号分子参与调控rhBMP-2诱导成骨分化.结论 筛选的差异表达基因和信号分子对早期成骨分化调控具有重要作用,为进一步全面解析早期成骨定向分化提供实验基础.     

微粒体Ⅱ相代谢酶基因在小鼠胚胎干细胞定向分化肝细胞中的表达

目的:评价微粒体Ⅱ相代谢酶基因在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)定向分化肝细胞中的表达,为进一步探索酶蛋白表达及其催化活性提供依据。方法:ES细胞体外悬滴培养定向分化成肝细胞表型,RT-PCR法检测肝细胞发育依赖性基因AFP、ALB、CYP7a1的表达,免疫细胞化学法确认成熟肝细胞特异性标记物白蛋白(ALB)表达,RT-PCR法检测上述肝细胞中Ⅱ相代谢酶尿苷二磷酸葡萄糖醛酸结合酶系(UGTs)和微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(mGST1)基因表达。结果:ES细胞在定向分化至d8时,肝细胞发育依赖性基因AFP和ALB有较高表达,d18时AFP表达甚微而ALB表达显著增加,并伴有成熟肝细胞特异性基因CYP7a1的表达。定向分化呈肝细胞表型时,成熟肝细胞特异性蛋白ALB呈强阳性表达。分化过程中Ⅱ相代谢酶基因UGT1a1、UGT1a9在分化前后均稳定表达;UGT1a6表达呈发育依赖性;UGT2b5未见表达;mGST1在分化前后均有少量表达,但在成熟肝细胞中表达显著增加,与成熟小鼠肝相似。结论:ES细胞体外悬滴培养可定向分化为成熟肝细胞;Ⅱ相代谢酶UGTs、mGST1基因在分化成熟肝细胞表达与小鼠肝细胞相似,可望为Ⅱ相代谢酶代谢深层次研究提供高效模型。     

体外诱导小鼠胎肝间充质干细胞向胰岛B样细胞分化的研究

目的:体外分离和定向诱导小鼠胎肝间充质干细胞向胰岛B样细胞分化.方法:无菌条件下从正常C57BL/6J胎鼠肝中分离出间充质干细胞,体外培养传3代后用高浓度葡萄糖培养基以及碱性纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和尼克酰胺诱导分化,观察胎肝间充质干细胞诱导前后形态变化;用RT-PCR检测细胞诱导前后胰十二指肠同源异型基因盒1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)、胰岛素原1(proinsulin-1,INS-1)、葡萄糖转运子2(glucose transporter-2,GLUT-2)表达情况;胰岛素免疫细胞化学染色鉴定诱导后细胞胰岛素的表达;在形成胰岛样细胞簇后,用双硫腙做胰岛B细胞特异性染色.结果:RT-PCR显示诱导5 d后PDX-1、INS-1、GLUT-2均有表达,而诱导前的细胞则没有检测到表达;胰岛素免疫细胞化学表明细胞簇内的细胞胰岛素染色强阳性;细胞簇双硫腙染色阳性(每个T-25培养瓶有80～120个).结论:从胎肝中分离出的间充质干细胞在体外可以定向诱导分化为胰岛B样细胞.     

丹酚酸B体外干预骨髓间充质干细胞分化过程中cTnT的表达

[目的]观察丹酚酸B(SalB)体外干预骨髓间充质干细胞(MSCs)后细胞形态及心肌特异性蛋白肌钙蛋白T(cTnT)的表达。[方法]培养、纯化及鉴定MSCs,用SalB、5-氮胞苷组(5-aza)、SalB联合5-aza(SalB+5-aza)分别定向诱导分化,观察此过程中MSCs的形态学变化并采用免疫细胞化学法鉴定诱导后MSCs心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达。[结果]诱导后的MSCs体积增大,增殖减慢,并出现肌管样结构;免疫细胞化学结果显示诱导后MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT。[结论]SalB在体外定向诱导MSCs分化为心肌细胞的过程中发挥了一定的作用。     

Wilson病ATP7B基因铜离子结合区缺失突变体构建及功能研究

【目的】构建ATP7B基因铜离子结合区缺失突变体,研究其在Tx小鼠肝细胞中的表达及功能。【方法】利用长片断PCR和质粒重组技术构建不同铜离子结合区的缺失体,脂质体介导转染Tx小鼠肝脏细胞,然后进行高铜、低铜孵育,观察ATP7B突变蛋白在细胞内的定向移动及对铜离子转运功能的影响。【结果】ATP7B基因1-4铜离子结合区逐个缺失后,ATP7B蛋白定向移动减慢至消失;5-6铜离子结合区缺失,细胞铜转运功能停滞。【结论】ATP7B基因6个铜离子结合区功能不同,其中1-4结合区主要根据铜浓度诱导ATP7B蛋白细胞内定向移动,而5-6结合区则直接参与铜离子细胞外转运。     

B细胞系特异性单克隆抗体ZCH－4－2E8的制备鉴定及其初步应用

本文报告一种识别Ｂ细胞系白血病相关抗原的鼠单克隆抗体ＺＣＨ－４２Ｅ８（ＩｇＧ１），免疫印迹试验示其所识别的抗原分子量为２４５ｋｄ。经多种细胞系、正常外周血细胞成分、骨髓单个核细胞、胚胎肝、脾、胸腺和１３８例急、慢性白血病细胞的鉴定结果表明，２Ｅ８为Ｂ细胞系特异性单抗，其反应谱与ＣＤ１９类似，但其尚能识别早至１８周龄的胚胎脾（Ｂ）细胞，阳性率为３１．９％（ＣＤ１９为０％）。作者认为：２Ｅ８是一种能用于分化早期Ｂ细胞系急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的诊断和急性未分化型白血病（ＡＵＬ）鉴别诊断的Ｂ细胞系特异性单抗。     

RNAi干扰WT1和Pax2表达对逆转肾小管上皮间充质转化的作用

 【目的】 探讨抑制肾小管上皮间充质转化(EMT)过程中胚胎发育关键基因WT1和Pax2的表达对EMT的逆转作用。【方法】 采用RNAi技术分别抑制WT1和Pax2。分别构建pshRNA-WT1和pshRNA-Pax2表达载体,采用脂质体转染技术,使质粒瞬时转染NEK52E细胞后用10 ng/mL IL-1α刺激细胞,分别提取不同时间点细胞的RNA和蛋白质,采用RT-PCR和Western blot检测细胞WT1、Pax2、Snail、上皮细胞标志E-cadherin和间充质标志α-SMA的mRNA和蛋白质的表达,并观察NRK52E细胞的形态。【结果】构建的pshRNA-WT1和pshRNA-Pax2表达载体可在转染细胞内发挥RNAi作用抑制WT1和Pax2基因的表达,抑制率分别为80.4 %和82.7 %。分别抑制WT1和Pax2基因后EMT过程受阻,α-SMA和Snail的表达显著减少,E-cadherin的表达无显著性变化,细胞形态未发生明显的成纤维化样改变。【结论】 WT1和Pax2基因是EMT中的关键基因,分别抑制胚胎发育关键基因WT1和Pax2均可使EMT受阻。阻断WT1和Pax2的表达有望中止EMT及肾纤维化的发生。     

系统性红斑狼疮BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞的分化发育

目的:研究Yaa基因与骨髓B细胞系细胞的分化发育是否有相互关系.方法:用Whitlock-Witte法从骨髓细胞中培养纯化出B细胞系细胞,继而检测B细胞系细胞对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激后的表型、增殖反应和抗DNA抗体的产生以及对地塞米松诱导后的凋亡情况.结果:用Whitlock-Witte法成功地从骨髓细胞中培养分离出B细胞系细胞.经LPS刺激后,雌雄BXSB小鼠B细胞系细胞膜表面CD19抗原和膜表面Ig的分布相似,都出现较强的增殖反应和产生IgM类型的抗ssDNA和dsDNA 抗体,但是对地塞米松诱导的凋亡作用不敏感.结论:Yaa基因对BXSB小鼠骨髓中B细胞系细胞的分化发育无影响,提示Yaa基因仅在外周免疫器官的成熟B细胞中表达活性;并且BXSB小鼠骨髓中的自身反应性B细胞系细胞未被删除,可能是产生自身抗体的内在原因之一.     

淋巴瘤细胞转染GM-CSF 基因后生物学特性的变化

目的：制备高表达GM－CSF的淋巴瘤细胞系，观察淋巴瘤细胞转染GM－CSF基因后生物学特性的改变。方法：将小鼠GF－CSF真核表达质粒用电穿孔法导入小鼠淋巴瘤细胞系RMA，有限稀释法制备单个细胞克隆，经RT－PCR，骨髓祖细胞增殖实验和集落形成实验筛选相对高表达GM－CSF的RMA克隆，并观察其生物学特性的改变。结果：获得了高表达GM－CS的RMA细胞系,其同基因动物体内致瘤性降低。结论：淋巴瘤细胞系RMA转染GM－CSF基因后致瘤性降低。     

Hematopoietic-supportive effect of (2S, 3R)-ent-catechin on marrow-depressed mice

Hematopoiesis is an active process of cell proliferation, differentiation and release. It is the process during which hematopoietic stem cells (HSCs) proliferate and differentiate to mature blood cells under the effect of hemetopoietic growth factors (HGFs) in certain hematopoietic microenvironment. HSCs are sources of hematopoiesis of a body that can self-renew, differentiate to blood cells of every lineage and maintain the constancy of them. As the major tissue of hematopoiesis bone marrow is filled with all kinds of blood cells in various developmental stages. Under the normal conditions, the ordered proliferation and differentiation of hematopoietic stem cells/hematopoietic progenitor cells (HSC/HPC) depend on the regulation of cytokine network.     

无关供者造血干细胞移植中活化型KIR的作用

目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体（killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR）在无关供者中的分布及对无关供者造血干细胞移植预后的影响。方法采用序列特异性引物PCR（PCR-SSP）分型技术检测HLA及KIR基因型。检测了30例无关供者中KIR的基因型分布、30例无关供者造血干细胞移植供受者对KIR及HLA基因型,并对15例接受HLA相合、非去除T细胞无关供者造血干细胞移植（HSCT）的恶性血液病患者病例资料进行回顾性分析。结果检测的30例HLA相合无关供者造血干细胞移植中,24例患者KIR2DL1不合,2例KIR2DL2/2DL3不合,12例KIR3DL1不合,共计28例患者KIR不合。无关供者造血干细胞移植中,5个活化型KIR阳性组生存时间明显延长。结论绝大多数无关供者携带与无关供者造血干细胞移植关系密切的三组KIR,无关供者造血干细胞移植中5个活化型KIR阳性组生存时间明显延长。     

Immunotoxin depletion of T cells and its effect on hematopoietic progenitor cells in human cord blood

Objective　To study the selective toxicity of immunotoxin (IT) on T cells in cord blood and simultaneously determine its effect on hematopoietic progenitor cells. Methods　The percentage of CD5 and CD8 T cell subsets in cord blood (CB) and bone marrow (BM) as well as peripheral blood (PB) was measured by immunoenzymatic labeling of monoclonal antibodies using immune complexes of alkaline phosphatase and monoclonal anti-alkaline phosphatase (APAAP complexes). One-way mixed lymphocyte cultures (MLC) were performed to compare the proliferative response of CB with that of PB. The proliferative capability of cord blood T cells and T lymphocyte transformation capacity were evaluated in the presence of anti-CD8 or anti-CD5 immunotoxin by one-way MLC and colorimetric MTT (tetrazolium) assay, respectively. The effect of IT on the growth of hematopoietic progenitor cell of colony forming unit-granulocyte and macrophage (CFU-GM), burst forming unit-erythroid(BFU-E), multipotential hemotapoietic progenitors (CFU-Mix) from CB were estimated by colony-forming assays. Results　A certain proportion of CD5 and CD8 T cells existed in CB. The alloproliferative capacity of CB was similar to that of PB. CD5: Ricin at a dosage of 1×10-10-1×10-8 mmol/L and CD8: Ricin concentration in the range of 1×10-9-1×10-8 mmol/L effectively decreased both the proliferative capability of T cells in MLC during CB and T cell transformation. Over the dosage of 1×10-10-1×10-9 mmol/L, both kinds of IT didn’t obviously affect the growth of hematopoietic progenitor cells. Conclusion　CD5: Ricin and CD8: Ricin may effectively deplete T cells and may not significantly inhibit the function of hemaptopoietic cells at a specific dosage.     

New insight into genes in association with asthma: literature-based mining and network centrality analysis

Background Asthma is a heterogeneous disease for which a strong genetic basis has been firmly established.Until now no studies have been undertaken to systemically explore the network of asthma-related...