血小板特异性抗体对特发性血小板减少性紫癜诊断价值的研究

目的:检测特发性血小板减少性紫癜及非免疫性血小板减少症患者抗血小板特异性抗体与血小板相关抗体,评价其在特发性血小板减少性紫癜中的诊断价值。方法:用流式细胞仪检测血小板相关抗体PAIgG,PAIgA,PAIgM;用改良单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术检测抗血小板膜糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa,GPⅠb/Ⅸ)特异性自身抗体。结果:血小板相关抗体在特发性血小板减少性紫癜组敏感度为80%,在非免疫性血小板减少症组为63.3%。改良单克隆抗体特异性俘获血小板抗原法检测抗GPⅡb/Ⅲa和GPⅠb/Ⅸ抗体,在特发性血小板减少性紫癜组中的敏感度分别为53.3%和30%;在非免疫性血小板减少症组中除1例GPⅠb/Ⅸ阳性外,其余均为阴性;2组检出率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血小板相关抗体敏感度较高,但特异度较低;抗血小板特异性抗体敏感度虽较低,但特异性较高,可鉴别特发性血小板减少性紫癜和非免疫性血小板减少症。可作为特发性血小板减少性紫癜的特异性诊断指标。     

分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞及血小板特异性抗体检测在特发性血小板减少性紫癜诊断中的意义

目的 检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者及非免疫性血小板减少患者分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞、血小板特异性抗体的变化,评价其对诊断ITP及非免疫性血小板减少疾病的作用及临床意义.方法 应用酶联免疫斑点技术(ELISPOT)及改良血小板抗原单克隆抗体固相化检测技术(MAIPA)分别检测58例ITP患者、33例非免疫性血小板减少患者及31名正常对照者分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞频数、血小板特异性抗体(抗GPⅡb/Ⅲa抗体)表达的变化.结果 ITP患者分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞频数[(6.6±4.2)/105个外周血单个核细胞(PBMNC)]明显高于非免疫性血小板减少患者[(2.2±2.0)/105个PBMNC](P＜0.05)及正常对照组[(1.3±0.5)/105个PBMNC](P＜0.05),而分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞频数在非免疫性血小板减少患者及正常对照组间的差异无统计学意义(P＞0.05).通过ELISPOT法检测分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞对ITP诊断的敏感性为70.69%,特异性为90.91%,高于改良MAIPA法的敏感性(χ2=7.03,P＜0.05).根据ROC曲线,ELISPOT区分ITP患者和非免疫性血小板减少患者的鉴别效度为0.886.结论 通过检测分泌GPⅡ/bⅢa抗体B细胞及血小板特异性抗体能够较好地反映ITP的发病机制.应用ELISPOT方法检测ITP患者分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞具有较高敏感性及特异性,可提高ITP的实验窒诊断水平,对指导治疗有一定的临床意义.     

血小板相关抗体在维吾尔族免疫性血小板减少性紫癜诊断中的应用价值分析

目的探究血小板相关抗体在维吾尔族免疫性血小板减少性紫癜(ITP)诊断中的应用价值。方法选取该院40例确诊为ITP患者作为免疫组,同期选取30例非免疫性血小板减少性紫癜患者为非免疫组,20例体检健康者作为对照组,入组人群均为维吾尔族。观察比较各组人群血清中血小板相关抗体(PAIgA、PAIgM、PAIgG)水平及血小板特异性抗体(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)水平,并分析ITP患者各类血小板抗体水平与血小板水平的关系。结果非免疫组患者血小板相关抗体(PAIgA、PAIgM、PAIgG)及血小板特异性抗体(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)水平高于对照组;免疫组患者血小板相关抗体(PAIgA、PAIgM、PAIgG)及血小板特异性抗体(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)水平高于非免疫组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同血小板水平ITP患者血小板相关抗体(PAIgA、PAIgM、PAIgG)水平差异无统计学意义(P>0.05),血小板特异性抗体(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)水平随血小板水平的降低而升高,且血小板计数与GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ水平呈负相关关系(r=-0.282、-0.331,均P<0.05)。结论血小板抗体在ITP诊断和鉴别诊断中具有重要意义,其中,GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ水平还可作为评估疗效及预后的重要指标。     

自身免疫性血小板减少性紫癜相关抗体的研究

目的　探索对自身免疫性血小板减少性紫癜 (AITP)诊断特异和敏感的实验方法。方法　采用单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术 (MAIPA技术 )并加以改进 ,对比检测血小板洗脱液和血浆中血小板膜糖蛋白特异性抗体。结果　AITP患者血浆游离抗血小板膜糖蛋白 (GPⅡb Ⅲa、GPⅠb Ⅸ )抗体总阳性率为 38.89%(5 4例中 2 1例 ) ,洗脱血小板表面抗血小板膜糖蛋白 (GPⅡb Ⅲa、GPⅠb Ⅸ )抗体总阳性率为 6 8.5 2 %(5 4例中 37例 ) ,两者差异有显著性 (校正 χ2 =19.39,P <0 .0 0 5 )。原发AITP组血浆游离及洗脱血小板表面抗血小板糖蛋白 (GPⅡb Ⅲa、GPⅠb Ⅸ )特异性抗体总阳性率与继发性AITP组比较差异无显著性。AITP患者血小板数量与自身抗体滴度呈明显负相关。结论　MAIPA法检测血小板洗脱液中抗血小板糖蛋白抗体在AITP的诊断和治疗中具有高度特异性 ,且敏感性较血浆抗体检测显著提高。     

血小板抗体及淋巴细胞亚群检测在特发性血小板减少性紫癜中的诊断意义

目的 比较抗血小板特异性抗体、PAIgG及淋巴细胞亚群在特发性血小板减少性紫癜（ITP）及非免疫性血小板减少症中的水平,以评价其在ITP中的诊断价值.方法 用改良单克隆抗体特异性俘获血小板抗原法（MAIPA）检测患者血浆中抗血小板膜糖蛋白（GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb和P-选择素）的特异性抗体.利用流式细胞术（FCM）检测患者外周血中PAIgG及淋巴细胞亚群.结果 ITP组MAIPA的阳性率为63.3%,非免疫性血小板减少组为阴性;PAIgG分别为73.3%、45%.淋巴细胞亚群中,ITP组CD3、CD4、CD4/CD8显著高于正常对照组,CD8、CD19则显著低于正常对照组.结论 抗血小板特异性自身抗体抗体对提高ITP的诊断有一定的实用价值,淋巴细胞亚群的变化能较好地反映ITP 的病理机制.     

血小板相关抗体IgG初筛不能提高单克隆抗体特异性俘获血小板抗原对免疫性血小板减少性紫癜诊断的敏感性

目的评价血小板相关抗体IgG（PAIgG）初筛能否提高单克隆抗体特异性俘获血小板抗原（MAIPA）技术对免疫性血小板减少性紫癜（ITP）诊断的敏感性。方法用酶联免疫吸附竞争法检测PAIgG，改良MAIPA技术检测抗血小板GPⅡb／Ⅲa、GPⅠb／Ⅸ特异性抗体；190例血小板减少症患者同时行PAIgG及MAIPA检测，其中132例为ITP患者；采用Kappa检验进行两种诊断试验的一致性分析。结果单做PAIgG及PAIgG与MAIPA并联诊断ITP的敏感度分别为85．6％和90．2％，较单做MAIPA（53．0％）分别提高32．6％与37．2％；特异度分别为29．3％和24．1％，较单做MAIPA（81．0％）则分别下降51．7％与56．9％；PAIgG与MAIPA串联诊断ITP的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为48．5％、86．2％、88．9％和42．4％，均与单做MAIPA相当。ITP与非免疫性血小板减少症患者PAIgG与MAIPA测定结果之间的Kappa值分别为0．129与0．012，即两种试验对ITP及非免疫性血小板减少症诊断的一致性均较差。结论PAIgG检测不能作为MAIPA的过筛试验。     

直接MAIPA对免疫性和非免疫性血小板减少性紫癜的鉴别诊断

目的检测免疫性与非免疫性血小板减少患者血小板膜糖蛋白特异性自身抗体，评价该方法在免疫性和非免疫性血小板减少性紫癜鉴别诊断中的价值。方法应用改良直接单克隆抗体俘获血小板抗原技术(MAIPA)检测血小板膜糖蛋白(GPⅡh／Ⅲa、GP I b和GPI a／Ⅱa)特异性自身抗体。结果免疫性血小板减少患者自身抗体阳性率(76．4％)显著高于非免疫性血小板减少患者(3．6％)(P＜0．05)。直接MAIPA诊断免疫性血小板减少的敏感性为76．4％，特异性为96．4％，阳性预测值为97．1％。GPⅡh／Ⅲa特异性自身抗体阳性的免疫性血小板减少患者血小板计数与自身抗体吸光度比值呈显著负相关(r=-0．338，P＜0．05)。结论直接MAIPA检测血小板膜糖蛋白特异性自身抗体对于鉴别免疫性与非免疫性血小板减少有一定意义。     

南宁地区成人及儿童ITP患者体内血小板自身抗体特异性分布的研究

目的：研究血小板膜糖蛋白特异性自身抗体在成人及儿童原发免疫性血小板减少症（ITP）患者中分布的异同。方法应用酶联免疫吸附试验（PAKAUTO 试剂盒）检测 ITP 组（83例）及非 ITP 组（58例）患者血小板自身抗体,并分析成人组ITP（46例）,儿童组 ITP（37例）的抗 GP Ⅱ b／Ⅲ a 、抗 GP Ⅰ b／Ⅸ及抗 GP Ⅰ a／Ⅱ a 自身抗体特异性分布规律。结果 ITP 组血小板自身抗体阳性率为66．27％,高于非 ITP 组的6．90％,差异有统计学意义差异有统计学意义（P＜0．05）。成人组女性 ITP 患者占60．87％,儿童组女性 ITP 患儿占64．86％,差异无统计学意义（P ＞0．05）,但两组女性发病率均高于男性,差异有统计学意义（P＜0．05）。成人组 ITP 患者血小板自身抗体阳性率为63．04％,儿童组 ITP 患儿抗体阳性率为70．27％,差异无统计学意义（P＞0．05）;且成人组与儿童组 ITP 患者血小板自身抗体特异性分布差异无统计学意义（P ＞0．05）,均以抗 GP Ⅱ b／Ⅲ a 和抗 GPⅠ b／Ⅸ抗体多见。结论血小板自身抗体检测对 ITP 诊断、鉴别诊断及治疗均有重要的参考价值,GP Ⅰ a／Ⅱ a 抗体介导的 ITP很值得深入研究。     

血小板特异性自身抗体检测在特发性血小板减少性紫癜中的意义

目的 检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者体内的血小板特异性自身抗体与临床严重程度和临床疗效间的关系. 方法 应用改良的单克隆抗体特异性俘获血小板抗原(MAIPA)法检测血小板膜糖蛋白(GPⅡ bⅢa、GPIb)特异性自身抗体. 结果 ITP组(40例),10例为单一抗GPⅡ b Ⅲa抗体阳性.6例为单一抗GPIbα抗体阳性,20例为双抗体阳性,4例为双抗体阴性.非免疫性血小板减少组与正常对照组均为阴性.抗GPⅡbⅢa抗体(b=-0.071,P<0.01)、抗GPlbα抗体(b=-0.092,P<0.01)均与采血时血小板计数呈显著负相关.治疗后,双抗体阳性组8例治疗无效,单抗体阳性组(16例)1例治疗无效(χ2=6.09,P<0.05). 结论 血小板特异性自身抗体检测对鉴别特发性和非免疫性血小板减少症有一定价值.抗体种类与临床疗效有一定关系.     

一种新的血小板特异性抗体检测方法对免疫性血小板减少症诊断价值的研究

目的 检测血小板减少患者血清中针对血小板糖蛋白的特异性抗体,评价其对免疫性血小板减少症的诊断价值.方法 采用商业化试剂盒PAKAUTO,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各种血小板减少患者的自身血小板抗GPⅡb/Ⅲa、GPⅠ b/Ⅸ、GPⅠa/Ⅱa特异性抗体.结果 在免疫性血小板减少症诊断中此方法敏感性为44.0％,特异性为95.7％,阳性预测值为98.0％,阴性预测值为26.2％.阳性患者中GPⅡb/Ⅲa抗体阳性率为87％,GP Ⅰ a/Ⅱa抗体阳性率为35％,GPⅠb/Ⅸ抗体阳性率为10％.检测时未用免疫抑制剂患者阳性率(58.5％)高于用药患者(26.9％),差异有统计学意义(P ＜0.01);PLT≤20×109/L患者阳性率(51.6％)高于PLT＞ 20×109/L患者(27.8％),差异有统计学意义(P＜0.01);继发免疫性血小板减少症患者阳性率(66.7％)高于原发免疫性血小板减少症患者(41.7％),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PAKAUTO检测特异性强,可有效区分免疫性和非免疫性血小板减少,在免疫性血小板减少症临床诊断中可推广应用.     

流式免疫微球芯片技术分析特异性血小板自身抗体

目的建立流式免疫微球芯片技术（FCIBA）分析特异性血小板自身抗体的新方法。方法使用不同红色荧光强度的微球，包被不同血小板膜蛋白单克隆抗体（抗GPⅡb／Ⅲa、抗GPⅠa／Ⅱa、抗GPⅣ、抗GPⅠb／Ⅸ和抗HLA-ABC单克隆抗体），制备特异性血小板自身抗体检测微球，用流式细胞仪检测微球捕获的血小板抗原-自身抗体复合物，检测结果与微孔板改进抗原捕获ELISA（MACE）进行比较，并检测了部分免疫性以及非免疫性血小板减少性紫癜患者血清中的5种特异性血小板自身抗体。结果FCIBA分析抗GPⅡb／Ⅲa、抗GPⅠa／Ⅱa、抗GPⅣ、抗GPⅠb／Ⅸ和抗HLA-ABC5种特异性血小板自身抗体，批内重复性变异系数（CV）分别为4．82％、6．09％、5．04％、5．73％、5．30％；稀释试验呈对数线性相关，相关系数（r）分别为0．9972．0．9966．0．9988．0．9965、0．9982；新方法对5种特异性血小板自身抗体的分析结果均与MACE试验结果高度相关，r值分别为0．9289、0．9224、0．8894、0．9100、0．9134（P均〈0．01）。新方法分析98例免疫性血小板减少性紫癜患者的血清样本，血小板特异性自身抗体检出的阳性率为51．69％；其中，抗GPⅡb／Ⅲa为40．82％，抗GPⅠa／，Ⅱa为24．45％，抗GPⅣ为19．39％，抗GPⅠb／Ⅸ为32．65％，抗HLA-ABC为17．35％。新方法分析40例非免疫性血小板减少性紫癜患者的血清样本，阳性率为0。结论本研究建立了FCIBA分析特异性血小板自身抗体的新方法，可同时分析抗血小板GPⅡb／Ⅲa、GPⅠa／，Ⅱa、GPⅣ、GPⅠb／Ⅸ和HLA-ABC5种特异性血小板自身抗体。     

自身免疫性血小、板减少性紫癜的特异性免疫学诊断的研究

目的 检测自身免疫性血小板减少性紫癜（AITP）患者及非免疫性血小板减少症患者的抗血小板特异性抗体,并与血小板相关抗体（PAIgG)相比较,评价其诊断及鉴别诊断价值。方法 用酶联免疫吸附竞争法检测PAIgG,改良单克隆抗体特异性俘获血小板抗原（MAIPA）技术检测抗血小板GPⅡb/Ⅲa、GPIb/Ⅸ的特异性抗体。结果 血小板特异性抗体较PAIgG的敏感性低,但特异性明显增强。结论 抗血小板特异性抗体对鉴别免疫性与非免疫性血小板减少具有重要临床意义。     

血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体在特发性血小板减少性紫癜的表达

本研究旨在探讨特发性血小板减少性紫癜（ITP）中血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体的表达。选择45例ITP患者,运用ELISA方法检测患者的血浆和血小板洗脱物血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体。使用HPA分型试剂盒检测7个抗原系统HPA-1、2、3、4、5、6、15。结果表明,有45例患者检测到血清或者血小板洗脱物中存在血小板特异性糖蛋白抗体,其中以抗GPⅡb／Ⅲa／HIa和抗GpⅠb／Ⅸ最为常见;有11例患者同时表达HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体。对病例37和40进行家系调查,发现这些病例所产生的血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体与父母血小板抗原及HLA抗原不相合密切相关。结论：应用ELISA检测ITP病例的血浆和血小板洗脱物,并与病人的临床表现相结合,对提高ITP的诊断具有重要价值。     

标准剂量利妥昔单抗治疗复发难治性原发免疫性血小板减少症的临床研究

目的 探讨标准剂量利妥昔单抗治疗复发难治性原发免疫性血小板减少症(ITP)的疗效、安全性及治疗前后B细胞、血小板膜糖蛋白特异性自身抗体的变化.方法 利妥昔单抗每周375 mg/m2,静脉滴注,连用4周,治疗31例复发难治性ITP患者,不伴随使用免疫抑制剂、化疗药、抗凝药及激素冲击疗法.监测治疗前后的血常规,血清免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA),血小板GPⅡb/Ⅲa和(或)GP Ⅰb/Ⅸ特异性自身抗体及CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD20+细胞数.结果 12例完全有效,7例有效,12例无效.中位疗效持续时间6(2～48)个月,有效患者4例复发,其余疗效均维持较好.有效患者治疗后血小板自身抗体均转阴.治疗前后外周血血红蛋白、白细胞计数无明显变化,血清IgG、IgM、IgA无明显变化,CD3+、CD4+、CD8+细胞数无明显变化.治疗后CD19+/CD20+细胞明显下降.多数患者耐受好.结论 利妥昔单抗治疗复发难治性ITP疗效肯定,不良反应可以耐受.

Abstract：

Objective To evaluate the efficacy and safety of rituximab on B-lymphocytes and antiplatelet glycoprotein-specific antibodies in patients with refractory primary immune thrombocytopenic (ITP).Methods Thirty-one ITP patients with a median age of 36 years (range 16 -56 years) received solely intravenous rituximab at the dose of 375 mg/m2 once weekly for consecutive 4 weeks. Lab studies included complete blood count, serum concentrations of IgG, IgM and IgA. CD3+ , CD4 + , CD8 + , CD19 + and CD20 +cell numbers were assayed by flow cytometry and anti-platelet glycoprotein-specific antibodies ( GP Ⅱ b/Ⅲ a,GP Ⅰ b/Ⅸ ) were assayed by monoclonal antibody-specific immobilisation of platelet antigens (MAIPA) prior to and following rituximab therapy. The response was evaluated according to the response criteria of international working group of ITP. Results Complete responses were achieved in 12 cases, response in 7 cases,and no response in 12 cases. Responses were sustained 2 to 28 months ( median 6 months) with 4 cases relapsed. After 4 weeks of rituximab therapy, GP Ⅱ b/Ⅲ a and GP Ⅰ b/Ⅸ disappeared in responded patients, and CD 19 +/CD20+ cells were almost depleted in all patients. As expected, the serum concentrations of IgG, IgM2 IgA, and the T cell counts were not changed after therapy. Four patients developed infusion-related reaction, 1 impaired renal function, and 3 secondary infections. Conclusion Rituximab is effective and safe, and the adverse reaction is tolerable.     

国际各类品种血小板膜糖蛋白单克隆抗体试剂对血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术的影响

本研究按国际输血学会第14届国际血小板免疫学研讨会和合作研究项目的要求,分析比较国际常用血小板膜糖蛋白单免隆抗体（McAb）各类品种对血小板抗原McAb特异性免疫固定检测技术（MAIPA）检测血小板抗体结果的影响。向参加该研究的30个实验室发放10份含已知血小板抗体特异性的血清和1份阴性对照血清样本,以及9份不同类别（GPⅡb／Ⅲa、GPⅠa／,Ⅱa、GPⅠb／Ⅸ及GPⅣ）及克隆编号的血小板膜糖蛋白McAb和统一的实验研究技术方案,各参加实验室按方案进行检测并反馈结果数据,比较同一糖蛋白种类不同的McAb对MAIPA检测结果的影响。结果表明：GPⅡb／Ⅲa中AP2,Gi-5,PL2—73等几种McAb的平均S／CO值较高;GPⅠa／Ⅱa的McAb中MBC202．2和143．1的平均S／CO值较高;GPⅠb／Ⅸ的McAb中142．11和CLB—MB45（C042b）的平均S／CO值较高;GPⅣ的McAb中131．4的平均S／CO值较高。结论不同的McAb品种对样本的检测结果存在差异,McAb对MAIPA的灵敏度有重要影响。用MAIPA法检测血小板抗体时应同时使用相同糖蛋白种类而不同克隆号的McAb,以防止血小板抗体的漏检。     

抗P-selectin及血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa抗体检测在特发性血小板减少性紫癜与原发性干燥综合征伴血小板减少鉴别诊断中的意义

目的：探讨抗P-选择素（P-selectin）及血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）抗体测定在鉴别特发性血小板减少性紫癜（ITP）和原发性干燥综合征（pSS）伴血小板减少鉴别诊断中的意义。方法采用ELISA法分别测定40例ITP患者,36例pSS伴血小板减少患者及40名正常人血浆中的抗P-selectin及GPⅡb/Ⅲa抗体。结果 pSS伴血小板减少组、ITP组抗P-selectin及GPⅡb/Ⅲa抗体水平及阳性率均高于正常对照组（P＜0.01）;pSS伴血小板减少组抗P-selectin抗体水平及阳性率显著高于ITP组（P＜0.01）;而pSS伴血小板减少组抗GPⅡb/Ⅲa抗体水平及阳性率与ITP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论抗P-selectin及GPⅡb/Ⅲa抗体测定在ITP和pSS伴血小板减少鉴别诊断中有显著的临床意义。