补肾填精中药对骨质疏松症模型大鼠股骨中Smurf1信号转导蛋白表达影响的实验研究

目的 通过观察去卵巢骨质疏松症模型大鼠股骨中Smurf1 的表达变化,探索骨质疏松症的发病机理.方法 实验采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,同时应用补肾填精作用的纳米钙补肾填精中药低、高剂量组,对模型大鼠给药干预12周,用骨疏康颗粒剂、盖天力作为阳性对照组,以及正常对照组、假手术对照组和模型空白组,并与补脾中药补中益气汤作比较;免疫组化SABC法检测股骨中的Smurf1 蛋白活性表达.结果 与正常组相比较,模空组Smurf1 阳性表达显著下降,P<0.01;用药12周后,与模空组相比较,各用药组均可上调其表达情况,P<0.01.结论 骨组织中Smurf1阳性表达降低可能是骨质疏松症发生的机制之一,补肾填精中药可能通过改善和调控股骨中Smurf1的表达,而起到防治骨质疏松症的作用.     

补肾填精中药对骨质疏松症模型大鼠股骨中Smurf1信号转导蛋白表达影响的实验研究

目的 通过观察去卵巢骨质疏松症模型大鼠股骨中Smurf1 的表达变化,探索骨质疏松症的发病机理.方法 实验采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,同时应用补肾填精作用的纳米钙补肾填精中药低、高剂量组,对模型大鼠给药干预12周,用骨疏康颗粒剂、盖天力作为阳性对照组,以及正常对照组、假手术对照组和模型空白组,并与补脾中药补中益气汤作比较;免疫组化SABC法检测股骨中的Smurf1 蛋白活性表达.结果 与正常组相比较,模空组Smurf1 阳性表达显著下降,P<0.01;用药12周后,与模空组相比较,各用药组均可上调其表达情况,P<0.01.结论 骨组织中Smurf1阳性表达降低可能是骨质疏松症发生的机制之一,补肾填精中药可能通过改善和调控股骨中Smurf1的表达,而起到防治骨质疏松症的作用.     

补肾壮骨颗粒对去势大鼠骨质疏松症骨组织计量学的影响

目的观察补肾壮骨颗粒对骨质疏松症雄性与雌性大鼠的骨组织计量学的影响;探讨该药对不同性别大鼠骨质疏松症疗效差异的机制。方法雄性大鼠54例,雌性大鼠58例,各设假手术组、模型组、阳性药组、补肾壮骨颗粒高剂量组、补肾壮骨颗粒低剂量组,采用去势方法造成雄雌性大鼠骨质疏松模型,给药13w,观察不同性别各组大鼠骨组织计量学指标的变化。结果与模型组对照,补肾壮骨颗粒高剂量组雌性大鼠骨小梁面积百分比有增加趋势(P>0.05),骨小梁数目明显增加(P<0.05),分离度明显减少(P<0.05);而高剂量组雄性大鼠各指标均未见明显的改变(P>0.05)。结论补肾壮骨颗粒可改善去势造成的骨质疏松雌性大鼠模型的骨组织计量学指标,对雄性大鼠则无明显作用。     

运动对雌性大鼠去势后骨质疏松症的作用：骨组织形态…

本文以骨计量学方法研究早期运动对于ＳＤ雌性大鼠去势前后骨量的影响，结果表明（１）运动使生长期雌性大鼠的小梁骨量显著增加。（２）运动后去势的雌性大鼠与非运动后去势的雌性大鼠相比，于去势后第８周末，前者仍保有较高的小梁骨量，这提示，处于生长成熟期的雌性大鼠施以持续（１０周）、规律（５天／周）和适量（１８米／分，１小时／天）的跑台运动后，可明显减轻去势后骨质疏松的程序，此结果为探讨以适宜运动增加生长期骨     

麝香对颅骨骨缺损模型大鼠SDF-1表达的影响

目的 观察不同剂量麝香对颅骨骨缺损模型大鼠骨缺损处SDF-1表达的影响,探讨麝香促进外源性rBMSCs向骨缺损处迁移的机制.方法 采用贴壁筛选法培养rBMSCs,大鼠颅骨骨缺损模型的建立后回植rBMSCs,将模型组大鼠完全随机分为四组,高、中、低剂量组及空白对照组,并向高、中、低剂量组灌服麝香,空白对照组灌服生理盐水.14天后处死大鼠取出缺损部位的颅骨,并对其脱钙、制作切片.免疫组化染色,光学显微镜下观察,每个切片随机选取3个视野,进行统计学分析.结果 麝香能促进颅骨骨缺损模型大鼠骨缺损处SDF-1表达,给药各浓度组和空白组比较有显著统计学差异(P＜0.01),以低浓度效果最佳(P＜0.05).结论 麝香均促进外源性rBMSCs在大鼠体内向损伤部位迁移的机制与麝香促进颅骨骨缺损模型大鼠骨缺损处SDF-1表达有关.     

Smad1、Smad5在肾阳虚不育大鼠睾丸中表达的研究

目的: 观察Smad1、Smad5在腺嘌呤诱导的肾阳虚不育大鼠睾丸中的表达,探讨肾阳虚不育的病理机制,为防治男性不育提供可靠的实验依据。　方法: 60d雄性SD大鼠 48只,随机分为 6组(肾阳虚 7、14、21d组;正常对照7、14、21d组),每组 8只。以腺嘌呤 300mg/kg给大鼠灌胃,诱导肾阳虚不育大鼠模型,于灌胃第 7、14、21d,用免疫组化SABC法测定Smad1、Smad5在其睾丸中的表达。　结果: Smad1表达见于所有正常对照组及模型组大鼠睾丸各级生精细胞的胞质内,支持细胞及间质细胞未见表达;灌胃第 7、14d与正常对照组相比差异无显著性(P>0. 05),第 21d的表达较正常对照组及第 7、14d明显减弱(P<0. 05)。Smad5表达见于正常对照组及腺嘌呤灌胃第 7d大鼠睾丸的初级精母细胞及精原细胞的胞核内,两组比较差异无显著性(P>0. 05),其余各级生精细胞、支持细胞及间质细胞均未见表达;灌胃第 14、21d大鼠睾丸中未见Smad5表达。　结论: 肾阳虚大鼠睾丸中Smad1表达的减弱及Smad5的无表达,可能是导致其不育的病理机制之一。     

补肾中药血清对成骨细胞中Smad1/5信号转导蛋白活性的影响

目的研究补肾中药血清对离体SD大鼠成骨细胞中Smad1/5活性的变化。方法采用多次胶原酶消化法获取新生SD大鼠颅盖骨中的成骨细胞进行体外培养,并应用Gomori改良钙钴法对其进行碱性磷酸酶表达的鉴定;随机将实验用大鼠分为正常组、补肾中药组(补肾组)、骨疏康颗粒对照组(骨疏康组)、补中益气颗粒对照组(补脾组);对实验大鼠给药干预8d后,通过血清药理学的方法使用各组大鼠血清培养成骨细胞48h;应用免疫组化SABC方法检测成骨细胞中Smad1/5的活性表达。结果补肾中药血清作用于体外培养的成骨细胞48h后对于成骨细胞的增殖具有明显的促进作用,其效果优于正常组(P<0.01);成骨细胞中Smad1/5的活性表达,与正常组相比有所降低。结论成骨细胞中存在Smad1/5的表达,表明Smad1/5可能有促进成骨细胞分化、增殖的功能,对成骨细胞保持自身功能、维持骨密度的作用上发挥重要的作用。②具有益肾填精壮骨的补肾中药可以影响Smad1/5在成骨细胞中的表达,对于促进和维持成骨细胞的特性及功能具有重要作用,这可能是防治骨质疏松症的机理之一。     

人工虎骨粉对去卵巢大鼠骨组织中Sirt1/Runx2信号通路的影响

目的探讨人工虎骨粉对去卵巢大鼠骨组织中Sirt1/Runx2信号通路的影响。方法选取40只成年雌性SD大鼠,建立去卵巢大鼠模型,切除卵巢2周后分成人工虎骨粉组与去卵巢组,人工虎骨粉组给予灌胃人工虎骨粉0. 24 g/(kg·d),去卵巢组给予灌胃等效剂量的生理盐水。另取20只成年雌性SD大鼠作为假手术组,仅切除卵巢周围脂肪组织,不切除双侧卵巢,切除卵巢周围脂肪组织2周后给予灌胃等效剂量的生理盐水。连续给药12周后,进行股骨骨密度、骨代谢、骨生物力学、股骨组织学与Western Blot检测。结果与假手术组比较,去卵巢组股骨骨密度、最大载荷、断裂载荷、最大应力、弹性模量及股骨组织Sirt1、Runx2、Foxo1、Foxo3a蛋白表达降低,骨钙素、抗酒石酸酸性磷酸酶、血钙、血磷及碱性磷酸酶浓度升高,股骨组织呈现骨质疏松病理改变;与去卵巢组比较,人工虎骨粉组股骨密度、最大载荷、断裂载荷、最大应力、弹性模量及股骨组织Sirt1、Runx2、Foxo1、Foxo3a蛋白表达升高,骨钙素、抗酒石酸酸性磷酸酶、血钙、血磷及碱性磷酸酶浓度均降低,骨质疏松病理改变显著改善。结论人工虎骨粉可能通过调节Sirt1/Runx2信号通路来发挥抗骨质疏松作用。     

TGF-β1及其信号转导蛋白Smad 2/3在去卵巢大鼠骨组织中的表达及意义

目的观察转化生长因子β1（TGF-β1）及其信号转导蛋白Smad 2/3在去卵巢大鼠骨组织中的表达及意义.方法手术切除大鼠双侧卵巢.术后13周,取离体胫骨测量组织学参数髓腔面积百分率（%Ma.Ar）、骨小梁厚度（Tb.Th）,用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测大鼠骨组织TGF-β1 mRNA的表达,用免疫组化法检测Smad 2/3蛋白在骨组织中的定位,用Western blot杂交法检测骨组织TGF-β1、Smad 2/3蛋白表达.结果与对照组（Sham组）比较,模型大鼠（OVX组）骨组织Tb.Th缩小,%Ma.Ar明显增大,差异有显著性（P＜0.01）;OVX组TGF-β1的mRNA、蛋白及Smad 2/3蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）,Smad 2/3蛋白广泛表达于骨组织干骺端,主要表达于骨基质表面及骨小梁周围的成骨细胞.结论TGF-βl及其信号转导蛋白Smad 2/3可能在绝经后骨质疏松症中起重要调节作用.     

补肾中药对骨质疏松症大鼠下丘脑BMP-4、Smad6 mRNA及蛋白表达的影响

目的探索肾虚骨质疏松症的病理机制,研究补肾中药对肾虚骨质疏松大鼠防治作用的机理。方法实验采用去双侧卵巢的方法,建立肾虚骨质疏松症模型。补肾中药复方（高、中、低）剂量对实验大鼠治疗12周,以骨疏康颗粒、盖天力牡蛎钙作为阳性对照药,并设正常对照组和模型空白组。用RT-PCR法、Western印迹法检测肾虚骨质疏松症大鼠下丘脑组织中BMP-4、Smad6 mRNA和蛋白表达。结果①与正常组比较,模型空白组大鼠下丘脑组织中的BMP-4 mRNA和蛋白表达水平明显增强;Smad6 mRNA和蛋白表达水平明显降低。②与模型空白组比较,补肾中药组对模型大鼠下丘脑组织中的BMP-4 mRNA和蛋白表达明显降低;而Smad6 mRNA和蛋白表达明显增强。结论肾虚骨质疏松症的病理机制为肾精不足,骨髓、脑髓失养,表现在下丘脑-垂体-靶腺轴的调控失常,包括下丘脑组织的细胞因子及其信号传导通路的异常。     

成年大鼠睾丸Smad1和Smad5的免疫组织化学研究

目的 :探讨骨形态形成蛋白的细胞内信号传导分子Smad1和Smad5蛋白在成年大鼠睾丸内的表达。　方法 :应用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶 DAB 硫酸镍铵增强技术 ,检测成年大鼠睾丸Smad1和Smad5蛋白的表达和定位。　结果 :Smad1蛋白表达于大鼠睾丸精曲小管的各级生精细胞的胞质内 ,呈淡染的紫蓝色颗粒 ,胞核为阴性 ,免疫染色阳性细胞主要包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞 ;而Smad5蛋白阳性染色不明显 ,只有睾丸间质细胞呈弱阳性反应 ,免疫反应阳性物质主要定位于细胞质。　结论 :Smad1蛋白主要表达于睾丸精曲小管各级生精细胞 ,Smad5蛋白表达于间质细胞 ,为揭示TGF β超家族在精子发生中的分子机理提供了直接证据。     

川芎嗪对膝骨性关节炎大鼠软骨BMP-2、Smad1及BMP-2mRNA、Smad1mRNA表达的影响

目的观察川芎嗪治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠模型关节软骨中骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、Smad1表达的变化,并探讨川芎嗪治疗KOA的作用机制。方法制作大鼠膝关节炎模型,将建模成功的大鼠纳入模型对照组,常规饲养,川芎嗪高剂量组、川芎嗪低剂量组、阳性对照组行灌,正常组和模型组行等量生理盐水治疗6 w,实验结束后,各组大鼠分别行HE切片软骨Mankin评分、Western Blot检测软骨组织BMP-2、Smad1及实时荧光定量PCR检查BMP-2mRNA、Smad1mRNA的变化。结果各组软骨Mankin评分中,川芎嗪各剂量组和阳性对照组均较空白组高(P0.05),均较模型组低(P0.05),且川芎嗪高剂量组阳性对照组川芎嗪低剂量组(P0.05)。正常组、川芎嗪各剂量组及阳性对照组中软骨BMP-2、Smad1及BMP-2mRNA、Smad1mRNA相对表达量较模型组均高于模型组,差异有统计学意义(P0.05);与阳性对照组相比,川芎嗪高剂量组BMP-2、Smad1及BMP-2mRNA、Smad1mRNA表达量明显高于阳性对照组(P0.05),而川芎嗪低剂量组其表达则均低于阳性对照组。结论川芎嗪可能通过上调早期KOA大鼠BMP-2mRNA及Smad1mRNA基因的表达,从而促进BMP-2及Smad1蛋白的表达,这可能是在某种程度上减轻关节软骨退变、修复软骨损伤作用的机制之一。     

补骨生髓方对去势骨质疏松大鼠Smad/ERK信号通路的影响

目的探讨补骨生髓方对去势骨质疏松大鼠Smad/ERK信号通路的影响。方法通过采取去性腺法(摘除睾丸法)建立骨质疏松症大鼠实验模型,造模成功后按照实验方案对大鼠进行灌胃治疗,2个月后处死各组大鼠,HE常规染色,并通过免疫组织化学染色的方法检测正常对照组及各中药干预组去势大鼠ERK、p-ERK、Smad4蛋白的表达。结果与模型组比较,补骨生髓方高剂量组与中剂量组ERK蛋白的表达差异有统计学意义(P0.05),而低剂量组与模型组表达差异无统计学意义(P0.05);与模型组比较,补骨生髓方高剂量组与中剂量组p-ERK蛋白的表达差异有统计学意义(P0.05),而低剂量组与模型组表达差异无统计学意义(P0.05);与模型组比较,补骨生髓方高剂量组与中剂量组Smad4蛋白表达差异有统计学意义(P0.05),而低剂量组与模型组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论补骨生髓方在一定程度上能够上调ERK、p-ERK、Smad4蛋白的表达水平,其可能是通过调控ERK蛋白磷酸化介导的Smad/ERK信号通路来发挥作用;ERK、Smad4可能是今后治疗骨质疏松的潜在作用靶点,但仍需要进一步开展更深入的研究。     

肾淋巴循环障碍致肾小管间质纤维化及对转化生长因子β1和Smad2/3表达的影响

目的 探讨肾淋巴循环障碍对大鼠肾小管间质纤维化的作用及其与TGF-β1、Smad2/3表达变化的关系。 方法 雄性Wistar大鼠48只，随机分为淋巴循环障碍模型组和假手术对照组各24只。分别在术后1、2、4、8周每组各处死6只。测定尿蛋白量（24 h）和Scr。PAS和Masson染色观察肾组织病理改变。用实时PCR检测TGF-β1、Smad2/3、I型胶原（ColⅠ）mRNA的表达量。用免疫组化和（或）Western 印迹方法检测肾组织ColⅠ、TGF-β1、Smad2/3和磷酸化Smad2/3（p-Smad2/3）的蛋白表达量及主要表达部位。 结果 模型组大鼠尿蛋白显著增加，随着时间推移肾功能逐渐减退，并出现明显的组织病理改变，小管间质损伤指数明显高于对照组（P < 0.05或P < 0.01），并随时间延长而逐渐加重。肾组织中ColⅠ、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的蛋白和（或）基因表达水平也明显增高（P < 0.01），且主要表达在肾小管上皮细胞及肾间质。 结论 肾淋巴循环障碍可导致大鼠肾脏功能及小管间质的损害，并随着时间的延长而加重。其作用机制可能与激活TGF-β-Smad途径，导致肾小管间质纤维化有关。