蝮蛇毒小分子多肽的分离、纯化及其抗肿瘤作用研究

目的从长白山岩栖蝮蛇蛇毒中分离纯化1种小分子多肽Saxis,测定理化性质,研究其对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法利用有机溶剂沉淀和Sephadex G-50S、ephadex G-25凝胶过滤色谱等方法分离纯化长白山栖岩蝮蛇蛇毒中的1种小分子多肽Saxis;采用Tricine-SDS-PAGE鉴定;利用Bradford蛋白质测定法测定蛋白质浓度;运用MTT比色法检测该小分子多肽对宫颈癌细胞Hela、肝癌细胞SMMC-7721和胃腺癌细胞SGC-7901的生长抑制作用。结果该小分子多肽Saxis的相对分子质量约为5 200,它能抑制Hela、SMMC-7721和SGC-7901细胞的增殖,并且对这3种肿瘤细胞的抗增殖作用具有药物剂量依赖关系,24 h的IC50分别为66.3,54.5,62.2μg/mL。结论利用有机溶剂沉淀和凝胶过滤色谱法可以从长白山岩栖蝮蛇蛇毒中分离纯化1种小分子多肽Saxis,其对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用。     

皖南尖吻蝮蛇毒提取物体外抗肿瘤活性的实验研究

目的：从中国皖南尖吻蝮蛇（Agkistrodon acutus）蛇毒中提取蛇毒金属蛋白酶x（snake venom metallopmteinases,SVMP-x）并观察其体外抗癌活性。方法：尖吻蝮蛇粗毒冻干粉溶解并经过离子交换和凝胶过滤后纯化后得到SVMP-x组分,CCK．8比色法测定该组分对体外培养的肿瘤细胞的细胞毒作用。结果：从中国皖南尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分（sVMP-x）,sVMP-x呈剂量依赖性抑制体外培养的人胃癌细胞株（SGC7901）、结肠癌细胞株（sw480）、神经母细胞瘤细胞株（SH—SY5Y）、肝癌细胞株（HepG2）及小鼠黑色素瘤细胞株（B16）的增殖,并且对SGC7901及B16的抑制作用强于5．氟脲嘧啶（5-FU）,对SGC7901的抑制作用呈剂量一时间依赖关系。结论：从尖吻蝮蛇粗毒冻干粉中成功提取出抗肿瘤组分SVMP-x,该组分对体外培养的肿瘤细胞有明显的抑制作用。     

眼镜蛇毒细胞毒素CTX-d的分离纯化及抗肿瘤活性

目的 分离纯化眼镜蛇毒细胞毒素,测定其体内外抗癌作用.方法 应用柱层析及RP-HPLC,从眼镜蛇毒粗毒中分离纯化细胞素素(CTX).体内外抗癌作用利用噻唑兰(MTT)法及对荷瘤小鼠U14瘤的抑瘤作用.结果 分离纯化获得的CTX-d不混有PLA2,在体内外实验中显示明显的抗肿瘤作用.结论 结合阳离子交换层析和RP-HPLC可从眼镜蛇毒中高效分离获得不含PLA2的CTX.     

尖吻蝮蛇毒研究进展

尖吻蝮(又名五步蛇,中药材名为蕲蛇)蛇毒,是从尖吻蝮毒腺中分泌的毒液,内含磷脂酶A₂、丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、C型凝集素、L-氨基酸氧化酶等多种蛋白类成分和肽类成分,具有多种生物活性,在抗肿瘤、抗血栓、抗炎、抗菌等方面发挥着重要作用。近年来,蛇毒研究日益广泛,但目前仍缺乏对尖吻蝮蛇毒全面系统的研究。本文通过检索尖吻蝮蛇毒的相关研究进展,在其来源、鉴别、活性成分、毒性研究及质量研究等方面进行总结与分析,以期为尖吻蝮蛇毒进一步开发利用提供参考。     

广西产尖吻蝮蛇蛇毒细胞毒素的纯化与活性鉴定

采用SephadexG50,Source30Q及phenylsepharoseHP柱层析从广西五步蛇蛇毒分离纯化出一种电泳纯细胞毒素I3H3,分子质量为36ku。I3H3对体外培养的人癌细胞有较强抑制和杀伤作用。用溴化二苯四偶氮盐比色法检测其对体外培养的人癌细胞的细胞毒作用,探索量效关系。其对体外培养的人肺癌细胞株(A549),人胃癌细胞株(BGC)和人鼻咽癌细胞株(KB)的抑制作用呈明显剂量依赖关系,作用24h的IC50分别为27.75,26.90和64.46μg/m1。     

中国皖南尖吻蝮蛇毒中细胞毒素的分离纯化和抗癌活性研究

目的寻找皖南尖吻蝮蛇毒中的抗癌组分并初步研究其性质.方法以DEAE-Sepharose FF,SOURCE 30S柱层析纯化粗毒;以MTT法检测细胞毒活性;以SDS-PAGE(银染)测定纯度;以还原性及非还原SDS-PAGE测定分子量;又测定了它们的热稳定性和pH稳定性.结果得到两个电泳纯的蛇毒类抗癌组分,分别命名为ACTX-6和ACTX-8,分子量为98kDa和27kDa,都不是糖蛋白,其中ACTX-6由两个分子量相近的亚单位以二硫键连接而成;它们对肺癌细胞A549最敏感;ACTX-6对热稳定而ACTx-8对热不稳定;ACTX-6的稳定pH范围为7-9,而ACTX-8在6-9的范围内活性都比较稳定.     

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝蛋白组分的分离纯化及其急性毒性实验研究

目的：从皖南尖吻蝮蛇毒中分离纯化-种新的抗凝蛋白组分．7221（ACPF-7221）。研究小鼠对ACPF-7221的急性毒性反应及死亡率并确定其L‰及95％可信区间。方法：先后用DEAESepharose Fast Flow阴离子交换柱层析、SephadexG75分子筛、SPSephamse FastFlow阳离子交换柱层析、SephadexGS0分子筛过滤对尖吻蝮蛇粗毒进行分离纯化,利用部分凝血活酶活性时间（APTT）活性检测筛选出抗凝成分。ACPF-7221从小鼠的尾静脉注射,根据每组小鼠的体重确定其相对应的给药量。根据死亡结果计算出LD50及其95％可信区间。结果：分离纯化的ACPF-7221由相对分子质量分别为25000、30000、50000的3种蛋白所构成三聚体,其蛋白含量约为65％。小鼠静脉注射LD50为7．848mg／kg,LD50（95％可信区间）分别为7．353～8．375mg／kg。结论：利用离子交换柱层析法可从皖南尖吻蝮蛇毒中提取出-种新的抗凝蛋白组分,此组分由3种相对分子质量各异的蛋白所构成三聚体。通过对小鼠急性毒性实验确定uk及其95％可信区间。肺为急性毒性的靶器官,肺出血窒息是其死亡的原因。     

尖吻蝮蛇毒和蝮蛇毒凝血酶样酶促凝的协同作用

目的：尖吻蝮蛇（ＤＡ）和蝮蛇（ＡＨ）蛇毒凝血酶样酶（ＴＬＥ）对促凝作用的协同效果。 方法：柱层析分离纯化ＴＬＥ并进行体外凝血试验。 结果：一个凝血单位ＤＡＴＬＥ为２．７μｇ，ＡＨＴＬＥ为３０４．４μｇ。它们单独作用形成的凝块很松脆，合用时凝血时间缩短，凝块的尿素溶解性下降。再配伍阈下浓度的凝血酶或生理浓度的Ｃａ＾２＋，凝血时间进一步缩短，凝块能够回缩，不溶于尿素５ｍｏｌ·Ｌ＾－１，对纤溶酶降解的抵     

尖吻蝮蛇毒中一种新抗凝血因子的纯化及特性研究

应用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱,从尖吻蝮蛇毒中分离出一个新的抗凝血因子.经Superdex 75 HR 10/30预装柱检测,纯度达99.9%.SDS-PAGE检测为单一条带,相对分子量52.2k.该因子有显著的抗凝血活性,延长白陶土部分激血活酶时间的临界浓度为0.2mg/ml,无纤溶活性、磷脂酶A2活性和出血活性.     

尖吻蝮蛇毒和蝮蛇毒凝血酶样酶促凝的协同作用

尖吻蝮蛇毒和蝮蛇毒凝血酶样酶促凝的协同作用魏文利１，孙家钧，陈家树（中山医科大学药理教研室，广州５１００８９，中国）关键词尖吻蝮蛇；蝮蛇；蛇毒；凝血酶类；血液凝固目的：尖吻蝮蛇（ＤＡ）和蝮蛇（ＡＨ）蛇毒凝血酶样酶（ＴＬＥ）对促凝作用的协同效果．方法：...     

白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化

目的用白眉蝮蛇蛇毒分离纯化纤溶酶。方法利用离子交换层析、亲和层析、分子筛层析技术进行分离纯化纤溶酶。结果得到了电泳纯的纤溶酶,其相对分子质量为24000。结论该工艺可以快速地分离纯化白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶：     

尖吻蝮蛇毒中一种新类凝血酶的分离纯化

用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱技术,从尖吻蝮蛇毒中纯化得到一个具有凝血活性的组分.经Superdex 75 HR10/30预装柱检测,纯度达99.91%.SDS-PAGE显示为单一条带,还原、非还原条件下分子量分别为59.25k、52.58k.该组分的凝血酶比活为41.5u/mg,精氨酸酯酶比活为14.29u/mg,但不激活血浆凝血因子ⅩⅢ.EDTA不能抑制其凝血活性,而苯甲磺酰氟则产生不可逆抑制作用.结果表明该酶是一种新尖吻蝮蛇毒类凝血酶.     

尖吻蝮蛇毒小分子多肽的分离及抗血小板聚集作用

目的从尖吻蝮蛇毒中分离纯化一种抗血小板聚集小分子多肽,研究其理化性质以及对ADP、胶原、凝血酶诱导的血小板聚集反应的影响。方法经SephadexG-75凝胶过滤,超滤,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析法分离纯化蛇毒组分,采用高效液相鉴定纯度,用SDS-凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子量,用比浊法测定其抗血小板聚集活性。结果从尖吻蝮蛇毒中分离相对分子质量约为7862u等电点为4.29的组分,该组分能抑制由ADP、胶原、凝血酶诱导的血小板聚集并成剂量依赖性。结论此法成功地从尖吻蝮蛇毒中纯化出抗血小板聚集组分。该组分与去整合素比较相似,可能属于去整合素家族。     

Screening of TNFR1 Binding Peptides from Deinagkistrodon acutus Venom through Phage Display

The venomous species Deinagkistrodon acutus has been used as anti-inflammatory medicine in China for a long time. It has been proven to have anti-inflammatory activity, but its specific anti-inflammatory components have not yet been fully elucidated. Tumor necrosis factor receptor-1 (TNFR1), which participates in important intracellular signaling pathways, mediates apoptosis, and functions as a regulator of inflammation, is often used as the target to develop anti-inflammatory drugs. The small peptides of snake venom have the advantages of weak immunogenicity and strong activity. To obtain the specific TNFR1 binding peptides, we constructed a T7 phage library of D. acutus venom glands, and then performed biopanning against TNFR1 on the constructed library. After biopanning three times, several sequences with potential binding capacity were obtained and one 41-amino acid peptide was selected through a series of biological analyses including sequence length, solubility, and simulated affinity, named DAvp-1. After synthesis, the binding capacity of DAvp-1 and TNFR1 was verified using surface plasmon resonance technology (SPR). Conclusively, by applying phage display technology, this work depicts the successful screening of a promising peptide DAvp-1 from D. acutus venom that binds to TNFR1. Additionally, our study emphasizes the usefulness of phage display technology for studies on screening natural product components.     

尖吻蝮蛇毒纤溶酶的柱层析分离

应用Sephadex G100、DEAE-Sepharose CL6B、Sephadex G75柱层析分离方法,对尖吻蝮蛇毒进行分离。实验表明,采用上述3种柱层析分离得到的纤溶酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳上为一条区带的单一蛋白。     

五步蛇蛇毒纤溶组分Ⅱ的分离和若干药效学的特征

五步蛇蛇毒经DEAE—sephadex A—50柱层析.获得15个蛋白组分。sephadex G—50柱再层析组分Ⅱ,呈单一个蛋白峰,聚丙酰胺凝胶电泳结果呈单一区带。狗血浆纤维蛋白平板法证实五步蛇蛇毒组分Ⅱ有溶解纤维蛋白的作用,同时狗血浆纤维蛋白热平板法还证实其溶解纤维蛋白的作用系直接性的。体外试管实验显示组分Ⅱ虽对纤维蛋白和纤维蛋白原均有溶解作用.但在浓度17.8mg·L~(-1)以下时.其溶解纤维蛋白活性相对较高。兔scO.1ml(500mg·L~(-1)组分Ⅱ未发现类似五步蛇全毒的出血反应。小白鼠腹腔注射纯化后的组分Ⅱ,LD_(50)为11.105 mg,kg~(-1).