SeO2逆转人卵巢癌耐药细胞株耐药性的研究

[目的]探讨SeO2对体外培养的人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP细胞耐药性的影响及其可能的作用机制.[方法]用MTT法、流式细胞术、电镜检测体外培养的COC1/DDP细胞在单独SeO2及与DDP联合作用下的增殖抑制及凋亡程度,用间接免疫荧光标记法在流武细胞仪上检测Survivin蛋白的表达水平.[结果]SeO2对COC1/DDP细胞的增殖抑制作用随SeO2浓度升高而明显增强,其最适浓度约10μmol/L,SeO2与DDP同时作用时增殖抑制作用明显增高;应用流武细胞术,10μmoL/L的SeO2与DDP同时作用于COC1/DDP细胞72 h,凋亡率达(30.66±2.34)%,电镜术也可检测到凋亡细胞存在;应用间接免疫荧光标记法在流式细胞仪上检测,SeO2与DDP同时作用72 h COC1/DDP细胞的Survivin蛋白表达水平明显降低.[结论]在体外,SeO2可增强COC1/DDP细胞对DDP的敏感性,诱导其凋亡.其诱导凋亡机制可能与下调Survivin蛋白的表达水平有关.     

米非司酮合用顺铂对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增殖及凋亡的影响

目的:探讨米非司酮合用顺铂对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增殖及凋亡率的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的米非司酮合用顺铂对COC1/DDP细胞株增殖活力的影响,采用流式细胞术观察不同浓度的米非司酮合用顺铂对COC1/DDP细胞株凋亡率的影响。结果:对照组和顺铂组比较,米非司酮加顺铂组细胞增殖活力OD值明显下降,细胞凋亡率明显升高,且随着米非司酮浓度的升高变化愈加显著(P<0.05和P<0.01)。结论:米非司酮联合顺铂对COC1/DDP细胞增殖活力均具有显著抑制作用,米非司酮可提高顺铂化疗的敏感性,其增敏作用与促进细胞凋亡有关,且与米非司酮的浓度呈剂量依赖关系。     

AG490单用或联合顺铂对人宫颈癌裸鼠移植瘤STAT3/Survivin信号转导通路的影响

目的:探讨STAT3信号转导通路对人宫颈癌裸鼠移植瘤生长、凋亡的影响以及与Survivin表达之间的关系。方法:建立宫颈癌裸鼠移植瘤模型并分组,AG490单用或联合顺铂(DDP)处理各组裸鼠,治疗期间观察并记录各组裸鼠皮下移植瘤的生长情况,计算肿瘤体积、肿瘤生长抑制率,绘制肿瘤生长曲线,观察用药后裸鼠体重变化;免疫组化、Western blot分别检测移植瘤P-STAT3、Survivin表达,流式细胞技术检测细胞凋亡。结果:AG490与DDP可以抑制宫颈癌移植瘤生长,促进宫颈癌细胞凋亡,同时使宫颈癌细胞P-STAT3、Survivin表达与活性明显下降;联合应用AG490与DDP,可以起协同作用,AG490可以增强DDP的药物敏感性并且减轻药物副作用。结论:JAK激酶抑制剂AG490与DDP联合应用可能为治疗宫颈癌提供了新的理论基础。     

槲皮素联合顺铂诱导宫颈HeLa细胞凋亡的实验研究

目的探讨槲皮素对HeLa细胞增殖和凋亡的影响以及联合顺铂的化疗效应。方法分别用不同浓度槲皮素、顺铂及不同浓度槲皮素联合顺铂处理HeLa细胞24 h;采用MTT法检测药物对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞仪和Hochest 33258检测药物作用后的细胞凋亡情况;荧光显微镜观察用PI荧光标记的细胞核形态学变化。结果槲皮素能抑制HeLa细胞增殖,且呈剂量依赖性;槲皮素联合顺铂与相同浓度槲皮素单用及顺铂单用处理HeLa细胞相比,前者对HeLa细胞的抑制作用更显著(p<0.01);不同浓度槲皮素与顺铂联合处理HeLa细胞与槲皮素单用及顺铂单用相比,前者显著提高了HeLa细胞的凋亡率(p<0.01)。结论槲皮素联合顺铂比槲皮素单用及顺铂单用对HeLa细胞的抑制作用更显著,因而产生更强的抗肿瘤效果。     

紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用

目的:探讨紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用。方法:取对数生长期SK-OV3/DDP细胞进行实验。实验分为顺铂组、紫杉醇组、联合组和空白对照组。顺铂组细胞给予顺铂15μg/ml;紫杉醇组细胞给予紫杉醇3.13μg/ml;联合组细胞给予顺铂15μg/ml+紫杉醇3.13μg/ml;空白对照组细胞不给予任何药品。所有细胞均培养48 h后进行实验。采用MTT法检测细胞的生长抑制率。采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期和凋亡率。结果:顺铂组细胞生长抑制率与空白对照组无明显增加(P<0.05),证实SKOV3/DDP对顺铂的耐药,紫杉醇组和联合组细胞生长抑制率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞生长抑制率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。顺铂组与空白对照组细胞多被阻滞于G1和S期,紫杉醇及联合组细胞多被阻滞于G2/M期,联合组作用较紫杉醇组更加明显(P﹤0.05)。顺铂组细胞凋亡率与空白对照组无明显差异(P>0.05),紫杉醇组和联合组细胞凋亡率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞凋亡率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。结论:紫杉醇联合顺铂可明显逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。     

盐酸小檗碱及其联合应用顺铂诱导宫颈癌细胞株凋亡研究

目的:研究不同浓度盐酸小檗碱(Ber)单用及联合应用顺铂(DDP)对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,并探讨其抗癌机制。方法:将不同浓度的盐酸Ber、DDP分别或联合作用于宫颈癌Hela细胞,采用MTT比色法检测细胞体外增殖的抑制作用;原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡率;免疫组化SABC法检测Hela细胞中NF-κBp65的表达。结果:MTT比色法表明盐酸Ber能抑制宫颈癌Hela细胞的体外增殖,并具有剂量、时间的依赖性(P<0.05);TUNEL法可检测到凋亡细胞,其凋亡率显示盐酸Ber诱导宫颈癌Hela细胞凋亡表现出剂量和时间的依赖性(P<0.05);免疫组化SABC法结果显示,盐酸Ber能引起细胞内NF-κBp65表达下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);盐酸Ber与DDP联合用药表现出明显的协同作用,且高剂量的盐酸Ber可增加DDP的疗效。结论:盐酸Ber对宫颈癌Hela细胞体外增殖具有明显的抑制作用,且能增强DDP对宫颈癌Hela细胞的抑制作用,并增加其诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡,其作用机制可能与降低NF-κBp65的表达有关。     

Pin1抑制剂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究Pin1抑制剂(Juglone)对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响,探讨Juglone的抗肿瘤作用。方法:体外培养人宫颈癌细胞SiHa,采用MTT试验观察细胞生长抑制状况,流式细胞仪检测细胞周期阻滞以及Hoechst33258检测细胞凋亡情况。结果:MTT试验表明,Juglone对宫颈癌SiHa细胞生长有明显的抑制作用,且随着作用浓度和作用时间的增加,抑制作用增强。流式细胞仪检测表明,Juglone药物(50μmol/L)培养12、24、48 h后,G2/M期细胞比例数明显增加,而S期细胞比例数却较对照组降低。Hoechst33258实验组可见凋亡细胞。结论:Juglone可能通过体外抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡途径抑制宫颈癌的发展。     

MTT法检测Hela细胞对化疗药物敏感性的研究

目的:分析宫颈癌Hela细胞对化疗药物顺铂的体外敏感性。方法:采用MTT法测定宫颈癌Hela细胞对4种不同浓度顺铂的体外敏感性。结果:不同浓度的顺铂对宫颈癌Hela细胞的生长均有一定的抑制作用。结论:MTT法检测有助于指导临床选择化疗药物剂量,提高化疗效果,减少副作用,具有重要的临床应用价值。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合顺铂对宫颈癌细胞凋亡作用的体外研究

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(SAHA)联合顺铂(DDP)对宫颈癌SiHa细胞生长抑制和促凋亡的效果。方法:以1μmol/L SAHA、2μmol/L SAHA、4μmol/L SAHA和1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml DDP分别组成单药组和不同SA-HA+DDP联合用药组,分别应用MTT方法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞术检测SiHa细胞早期凋亡的情况。结果:联合用药组肿瘤细胞大量坏死明显,对细胞增殖的抑制率明显高于相应单药组(P<0.05);SAHA与中低剂量的DDP联合给药表现为协同作用,而与较高剂量的DDP联合用药表现为单纯相加作用;联合作用较二者单独用药细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:SAHA对宫颈癌细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用,SAHA联合DDP有协同增敏作用。     

甲羟孕酮对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP耐药的逆转作用

目的:应用甲羟孕酮(Medroxyprogesterone Acetate,MPA)体外逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐顺铂(cisplatin,DDP)效应,并对其作用机制进行初步探讨。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MPA对SKOV3/DDP的细胞毒作用,确定MPA对此细胞株的非细胞毒性剂量作为逆转剂量,同法测定非细胞毒性剂量MPA联合DDP作用后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化,采用流式细胞技术(FCM)检测细胞周期及凋亡情况。结果:单用MPA浓度大于7.50 g/L时对SKOV3/DDP细胞有不同程度的抑制作用,且呈剂量依赖性。MPA浓度小于15.85 g/L时,其对细胞生长无明显抑制作用(细胞存活率均>90%),因此选用15.00 g/L作为逆转剂量。DDP联合15.00 g/L的MPA作用24、48、72 h后,顺铂的IC50分别下降至(57.72±0.48)g/L、(13.39±0.21)g/L、(7.93±0.18)g/L,逆转倍数分别为1.22,1.90,2.44倍。DDP与MPA联合作用于SKOV3/DDP细胞,使其细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞比例下降,并可以增加耐药细胞的凋亡率。结论:MPA可以逆转DDP引发的卵巢癌耐药,其可能的逆转耐药机制为促进细胞的凋亡,阻滞细胞周期进程。     

NaHS抑制宫颈癌细胞增殖的初步机制

目的:探讨NaHS对子宫颈癌细胞增殖的影响及其机制。方法:首先将子宫颈癌HeLa细胞分成对照组和不同剂量的NaHS处理组,并采用MTT法检测细胞存活率和流式细胞仪检测细胞凋亡率。使用不同浓度的格列本脲预先处理HeLa细胞30 min,再用400μmol/L的NaHS处理24 h,探讨NaHS抑制子宫颈癌细胞增殖的初步机制。结果:不同剂量的NaHS处理组能明显抑制HeLa细胞增殖而促进HeLa细胞凋亡;格列本脲预先处理可以部分阻断这种作用。结论:NaHS抑制子宫颈癌细胞增殖可能与ATP敏感性钾通道有关。     

去甲斑蝥素联合ABT-737对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）联合ABT-737对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测NCTD单药或联合ABT-737对宫颈癌细胞株HeLa、SiHa增殖的影响;采用流式细胞术分析NCTD联合ABT-737对宫颈癌细胞凋亡的影响。结果：NCTD单药能够显著抑制宫颈癌细胞株HeLa、SiHa的增殖,抑制作用呈剂量依赖性。NCTD与ABT-737联用后抑制作用明显增强。1 μmol/L ABT、60 μmol/L NCTD及两药联用诱导HeLa细胞的凋亡率分别为（31.65±7.75）%、（40.34±14.52）%和（63.03±10.90）%,诱导SiHa细胞的凋亡率分别为（9.76±0.04）%、（22.04±3.03）%和（58.36±2.31）%。NCTD、ABT两药联合的促凋亡作用比单药显著增强（P＜0.05）。结论：NCTD单药在体外能够明显抑制宫颈癌细胞HeLa、SiHa的增殖,与ABT-737联用后抑制增殖和促凋亡作用更加显著。     

Inotodiol对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

目的:研究桦褐孔菌单体(Inotodiol)对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法:采用MTT法检测Inotodiol对HeLa细胞的增殖抑制率;通过倒置显微镜、HE染色观察HeLa细胞形态学改变;通过免疫细胞化学法检测核增殖抗原Ki-67表达。结果:随着Inotodiol浓度增加及作用时间延长,抑制率明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。Inotodiol作用于Hela细胞后,形态学观察示细胞凋亡。Inotodiol组Ki-67表达明显降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Inoto-diol对宫颈癌HeLa细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用。     

5-氮杂胞苷对宫颈癌细胞FHIT基因去甲基化及抑制增殖作用

目的:探讨5-氮杂胞苷对Hela宫颈癌细胞脆性组氨酸三联基因(Fragile histidine triad gene,FHIT)启动子去甲基化作用及对其增殖的影响。方法:采用低浓度和高浓度5-氮杂胞苷作用Hela宫颈癌细胞,分别采用BSP和RT-PCR检测处理前后FHIT基因启动子甲基化状态和mRNA表达,应用MTT法检测细胞增殖改变。结果:Hela宫颈癌细胞FHIT基因启动子表现高度甲基化状态(CG位点甲基化率为80%～100%),mRNA表达完全受到抑制,细胞呈指数增殖状态;低浓度5-氮杂胞苷作用后的甲基化率显著降低(10%～40%),细胞增殖速度降低;高浓度组FHIT基因启动子甲基化状态被完全逆转,mRNA表达明显高于低浓度组,细胞增殖速度显著低于正常组和低浓度组。结论:5-氮杂胞苷可逆转Hela宫颈癌细胞FHIT基因甲基化状态,使基因恢复表达而抑制细胞增殖,去甲基化和抑制增殖作用随5-氮杂胞苷剂量增加而增加。     

IL-12联合DDP对人卵巢癌HO-8910细胞周期及增殖的影响

目的:探讨IL-12联合化疗药物顺铂(DDP)对人卵巢癌HO-8910细胞周期及增殖的影响,并阐明其抑制肿瘤细胞增殖的机理。方法:取对数生长期的人卵巢癌HO-8910细胞株分为对照组、单独使用DDP组、单独使用IL-12组及IL-12联合DDP组。按作用时间(0、24、48、72、96、120 h)和DDP浓度(0、2、4、8、16、32μmol/L)不同,采用MTT比色法分别测定IL-12单独或联合应用DDP对人卵巢癌HO-8910细胞的影响,绘制细胞生长曲线和计算细胞增殖抑制率。根据细胞生长曲线评价肿瘤细胞的增殖速度,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的变化,倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变。结果:单独应用DDP或IL-12时,其抑制率在96 h分别为28.93%和29.12%,而IL-12联合DDP在48 h抑制率为27.45%。HO-8910、HO-8910+DDP和HO-8910+IL-12细胞生长抑制曲线随时间延长而升高,在第96 h开始升高(P<0.01),而加入IL-12+DDP细胞的生长抑制曲线则从第48 h就开始升高,72 h达高峰(P<0.05);流式细胞仪检测显示,处于G1/G2期的HO-8910+IL-12+DDP细胞明显减少,而G2/M、S期细胞明显增多;电镜结果显示,HO-8910+IL-12+DDP细胞存在内质网扩张,线粒体空泡化,溶酶体增生,部分细胞可见染色质边集等凋亡前期改变。结论:IL-12联合DDP能抑制人卵巢癌HO-8910细胞增殖,有效地诱导细胞凋亡,增强DDP对肿瘤的治疗作用,为临床卵巢癌患者的治疗提供理论依据。     

GRIM-19对子宫颈癌细胞株HeLa细胞Survivin基因表达的影响

目的:探讨稳定转染GRIM-19对子宫颈癌细胞株HeLa细胞凋亡抑制基因Survivin的表达以及细胞增殖的影响。方法:采用脂质体转染法将GRIM-19重组质粒转染子宫颈癌细胞株HeLa细胞,建立稳定表达GRIM-19的HeLa细胞株,采用RT-PCR检测HeLa细胞转染GRIM-19后mRNA水平表达情况,采用WesternBlot检测稳定转染后GRIM-19与Survivin的表达情况,应用细胞计数法观察各组细胞增殖水平。结果:建立稳定的GRIM-19基因表达的HeLa细胞株,命名为HeLa/G19细胞,对照组细胞命名为HeLa/Con细胞。RT-PCR检测显示GRIM-19mRNA表达明显增加,WesternBlot检测显示GRIM-19的蛋白表达显著升高、Survivin蛋白的表达水平显著降低。细胞计数法实验显示HeLa/GRIM-19细胞增殖较HeLa/Con细胞明显减慢(P<0.05)。结论:GRIM-19可以抑制子宫颈癌细胞Survivin的表达,阻滞细胞的生长,可能是子宫颈癌治疗的新靶点。