眼眶成纤维细胞与甲状腺相关眼病

研究表明,眼眶成纤维细胞在甲状腺相关眼病的发生和发展中起中心作用,既是靶细胞,同时又是效应细胞,现就这两方面作用作一综述。     

眼眶成纤维细胞与甲状腺相关眼病研究进展

甲状腺相关眼病的发病机制尚不完全清楚,临床缺乏确实有效的治疗方法.眼眶成纤维细胞作为靶细胞和效应细胞参与了自身免疫、炎症反应和组织重塑等多个病理过程.我们就眼眶成纤维细胞在甲状腺相关眼病发病机制中的作用的研究进展做一综述,并讨论该领域治疗研究方向.     

甲状腺相关眼病患者及正常人眼眶成纤维细胞的培养和鉴定

目的:体外培养甲状腺相关眼病患者和正常人的眼眶成纤维细胞,并进行比较、观察及鉴定。方法:采用组织块培养法,体外培养甲状腺相关眼病患者和正常人的眼眶成纤维细胞,并进行细胞形态观察及免疫组织化学鉴定。结果:甲状腺相关眼病患者与正常对照的眼眶成纤维细胞形态区别不明显,Vimentin染色均呈阳性,而Desmin,S-100,CK均呈阴性。结论:甲状腺相关眼病患者与正常人的眼眶成纤维细胞体外培养的形态及免疫组织化学鉴定无明显差异。     

眼眶成纤维细胞与Graves眼病

Graves眼病 (Graves′ophthalmopathy ,GO)是最常见的眼眶病 ,通常认为它是一种与甲状腺疾病相关的器官特异性的自身免疫性疾病〔1〕,但具体的发病机理不清 ,是临床治疗中亟待解决的一大难题。该病没有理想的动物模型 ,有关病因学的研究主要依靠临床资料。眼眶成纤维细胞 (orbitalfibroblast,OF)作为靶细胞和效应细胞 ,在GO的病理发生过程中起重要作用。 1987年Bahn等在体外成功培养了OF ,为体外研究GO患者的OF提供了一种模式〔2〕。现将OF在GO发病中的作用和有关治疗方法的研究综述如下 :一、眼眶自身抗原1 促甲状腺激素受体 (TSH…     

甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞超微结构及细胞因子分泌功能研究

目的 比较培养的甲状腺相关眼病(TAO)患者、正常人及经活动期TAO患者血清处理后的眼眶成纤维细胞(OFs)在超微结构与分泌细胞因子功能方面的差异。方法 取5例TAO患者与4例正常对照者的眼眶结缔组织和眼外肌进行OFs原代培养,传代后,部分OFs加入活动期TAO患者的血清后再培养。应用透射电镜观察两组OFs的超微结构,应用酶联免疫吸附分析法检测两组培养上清液中的白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)。结果 TAO患者与正常人OFs的超微结构未见明显差异;加入血清培养后的OFs的核仁增大、边移,内质网增多,微绒毛增多、变长。TAO患者与正常人培养的OFs上清液中仅检测到IL-1,其量前者明显高于后者;经活动期TAO患者血清处理后的OFs上清液中可检测到IL-1、TNF-α及IFN-γ。结论 TAO患者与正常人的OFs超微结构基本相同。经活动期TAO患者血清处理后的OFs有增殖现象,其分泌细胞因子功能明显增强。     

TGF-β1对甲状腺相关性眼病眼眶成纤维细胞外基质基因表达的影响

目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对甲状腺相关性眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)患者眼外肌来源成纤维细胞(orbital fi-broblasts,OF)细胞外基质(extracellular matrix,ECM)主要成分金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)、胶原Ⅰ(collagen typeⅠ,COL-Ⅰ)、胶原Ⅲ(collagen typeⅢ,COL-Ⅲ)及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)基因表达水平的影响。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察10μg·L-1TGF-β1刺激OF后不同时间点(0h、3h、6h、12h、24h、48h)及不同浓度TGF-β1(1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1)刺激OF24h后TIMP-1、COL-I、COL-Ⅲ及FN mRNA表达的变化。结果 10μg·L-1TGF-β1刺激OF的时间效应:TIMP-1mRNA在3h和6h分别为对照组的1.50倍和2.46倍(P<0.01);COL-ⅠmRNA在24h和48h分别为对照组的5.49、3.69倍(P<0.01);COL-ⅢmRNA在24h和48h分别为对照组的2.14、1.63倍(P<0.01);FN mRNA在12h和24h后分别为对照组的2.45、1.53倍(P<0.01)。不同浓度TGF-β1刺激OF24h后剂量效应:与空白对照组相比,TIMP-1mRNA在5μg·L-1和10μg·L-1时分别为空白对照组的1.79、1.46倍(P<0.01);COL-ⅠmRNA在1μg·L-1和10μg·L-1分别空白对照组的1.94、3.29倍(P<0.01);COL-ⅢmRNA在5μg·L-1和10μg·L-1分别空白对照组的1.52、3.28倍(P<0.01);FN mRNA在1μg·L-1和10μg·L-1分别为空白对照组的1.30、2.45倍(P<0.01)。结论 TGF-β1以剂量和时间依赖的方式刺激OF表达TIMP-1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ及FN mRNA,TGF-β1可能在TAO眼外肌纤维化机制中发挥了重要的作用。     

生长抑素类似物眼眶显像在甲状腺相关性眼病诊疗中的应用

⁹⁹Tc^m-生长抑素类似物眼眶显像在甲状腺相关性眼病患者诊疗中发挥着重要作用,其不仅可用于判断患者眶周炎性活动度、早期诊断疾病、决定是否需要治疗以及选择治疗方案,同时也为该病评价疗效、判断预后和相关研究提供重要的客观依据。因此,⁹⁹Tc^m-生长抑素类似物眼眶显像在甲状腺相关性眼病中的应用有助于规范该病诊疗行为,有效提高诊疗水平和效率。（眼科, 2016, 25： 361-364）     

细胞因子与眼眶成纤维细胞

细胞因子的主要功能是作为细胞间信号传递分子、介导和调节机体免疫应答和炎症反应.眼眶成纤维细胞是Graves眼病自身免疫反应的靶细胞,受局部浸润淋巴细胞分泌的细胞因子的刺激后可大量增殖并分泌大量葡萄糖胺聚糖.作为免疫炎症反应中的效应细胞,眼眶成纤维细胞在接受适宜刺激后可强烈表达某些细胞因子,通过旁分泌和自分泌方式作用于眼眶,加剧炎症反应,维持眼眶免疫反应的持续性.通过对近几年的相关文献进行分析总结,探讨细胞因子与眼眶成纤维细胞之间的关系在Graves眼病中的作用.     

SB431542和TGF-β1对甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞α-SMA及CTGF基因表达的影响

目的　探讨转化生长因子-β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β１,ＴＧＦ-β１）和ＳＢ４３１５４２（ＴＧＦ-β１受体酶抑制剂）对甲状腺相关性眼病（ｔｈｙｒｏｉｄ-ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｏｐｈｔｈａｌｍｏｐａｔｈｙ,ＴＡＯ）患者眼眶成纤维细胞α平滑肌激动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）及结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ）基因表达的影响,为ＴＡＯ眼外肌纤维化的治疗寻找潜在的药物治疗靶点。方法　实验分为３组。第１组:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ,ＲＴ-ＰＣＲ）检测不同浓度ＴＧＦ-β１（０μｇ?Ｌ－１、１μｇ?Ｌ－１、５μｇ?Ｌ－１、１０μｇ?Ｌ－１、２０μｇ?Ｌ－１）刺激ＴＡＯ患者眼眶成纤维细胞后α-ＳＭＡ及ＣＴ-ＧＦｍＲＮＡ的表达情况;第２组:采用ＲＴ-ＰＣＲ检测１０μｇ?Ｌ－１ＴＧＦ-β１在不同的时间点（０ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）刺激ＴＡＯ患者眼眶成纤维细胞后α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达情况;第３组（分为４小组处理）:眼眶成纤维细胞不加任何干预、使用３０μｍｏｌ?Ｌ－１ ＳＢ４３１５４２刺激眼眶成纤维细胞、１０μｇ?Ｌ－１ ＴＧＦ-β１ 单独刺激眼眶成纤维细胞、３０μｍｏｌ?Ｌ－１ ＳＢ４３１５４２联合１０μｇ?Ｌ－１ ＴＧＦ-β１刺激眼眶成纤维细胞（ＳＢ４３１５４２预先刺激眼眶成纤维细胞１ｈ,然后再加入ＴＧＦ-β１）,采用ＲＴ-ＰＣＲ检测α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达。结果　ＴＧＦ-β１在一定的浓度范围内（１～１０μｇ?Ｌ－１）以剂量依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ,随着浓度增加ｍＲＮＡ表达增加,各浓度组（１μｇ?Ｌ－１、５μｇ?Ｌ－１、１０μｇ?Ｌ－１、２０μｇ?Ｌ－１）与空白对照组（０μｇ?Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＴＧＦ-β１在一定的时间范围内（０～２４ｈ）以时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ,随着时间延长ｍＲＮＡ表达增加,各时间组（３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）与０ｈ相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β１诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ在２４ｈ达到峰值,而ＣＴＧＦｍＲＮＡ在１２ｈ即可达到峰值。ＳＢ４３１５４２对眼眶成纤维细胞α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达均有抑制作用。结论　一定范围内,ＴＧＦ-β１以剂量和时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达,ＳＢ４３１５４２可抑制其表达。     

甲状腺相关性眼病眼外肌来源成纤维细胞的原代培养和鉴定

目的体外培养和鉴定甲状腺相关性眼病眼外肌来源的成纤维细胞,为进一步研究甲状腺相关性眼病眼外肌纤维化发病机制提供实验条件。方法采用组织块培养法,进行细胞形态观察和免疫细胞化学鉴定。结果甲状腺相关性眼病眼外肌成纤维细胞原代培养成功并稳定传代,细胞呈长梭形;细胞免疫化学鉴定:波形蛋白染色阳性,而角蛋白、结蛋白、S-100染色均阴性,证明为中胚层来源的成纤维细胞。结论组织块贴壁法培养的细胞符合甲状腺相关性眼病眼外肌成纤维细胞的形态学和免疫学特征,可作为研究甲状腺相关性眼病眼外肌纤维化的体外模型,为进一步实验打下基础。     

The role of cell mediated immunopathogenesis in thyroid-associated ophthalmopathy

Currently, thyroid-associated ophthalmopathy (TAO) lacks effective treatment due to our lack of clarity in its immunopathogenesis. Orbital fibroblasts play a key role in altering inflammation and immune response in TAO, and are considered as the key target and effector cells in its pathogenesis. The orbit infiltrating CD34+ fibrocytes add on to the process by expressing high levels of autoantigens and inflammatory cytokines, while also differentiating into myofibroblasts or adipocytes. This review focuses on the role of orbital fibroblasts and CD34+ fibrocytes in the pathogenesis of TAO, highlighting the basis of emerging treatments.     

眼眶平衡减压术治疗甲状腺相关眼病

目的 探讨平衡眼眶减压术治疗甲状腺相关眼病的疗效和手术方法。方法 采用内外壁眼眶减压术治疗20例35眼甲状腺相关眼病患者。术后随访平均14个月。观察术后视力、眼球突出度和眼球运动等情况。结果 20例35眼中除1例行眶外壁减压外，其余均行内外壁平衡眼眶减压术。眼球突出度缓解3～11mm，其中3～4mm者5眼，5～9mm者28眼，10～11mm者2眼，平均6．32mm。视力从术前数指提高至0．1者6眼，提高2行以上者8眼，无变化21眼。术后眼球运动明显好转者9眼，运动障碍加重2眼。无视力丧失及术后感染。结论 平衡眼眶减压术是治疗甲状腺相关眼病的有效方法。     

改良三壁眶减压术治疗重症甲状腺相关性眼病的疗效观察

目的观察改良三壁眶减压术治疗重症甲状腺相关性眼病的效果。方法对我院收治的3例(6眼)经内科治疗无效的重症甲状腺相关性眼病患者实施改良三壁眶减压术,观察患者术后视力、眼球突出度及外观情况。结果术后4眼视力轻度提高,2眼保持不变;眼球后退5.3～12.6mm,平均9.5mm;睑裂闭合不全者术后均闭合良好,外观满意;1眼出现少量眶内血肿,治疗后吸收;4眼出现双眼复视,均于1个月内消失;术后CT显示眼眶减压良好。结论改良三壁眶减压术可有效扩大眼眶容积,降低眶内压,还纳眼球,减少眼球突出,改善外观,对内科保守治疗、常规眶减压术无效的重症甲状腺相关性眼病患者安全有效。     

小鼠眼眶成纤维细胞TLR4基因静默对甲状腺眼病的效应研究

目的：构建小鼠眼眶成纤维细胞TLR4的shRNA慢病毒干扰载体,研究TL4^-/-的成纤维细胞对甲状腺相关性眼病的治疗作用和机制。

方法：设计、构建、筛选小鼠眼眶成纤维细胞TLR4基因的最优干扰shRNA表达质粒,选择Gateway方法将质粒导入慢病毒表达载体中,使用重组慢病毒载体感染小鼠眼眶成纤维细胞,研究其对免疫炎性反应的负向调控能力,并在小鼠甲状腺眼病模型中采用沉默成纤维细胞TLR4基因的方法,观察其体内治疗效果。

结果：筛选出具有最好基因静默效果的shRNA序列,导入慢病毒载体,病毒滴度为1.5×10⁶TU/mL。转染慢病毒的Balb/c小鼠眼眶成纤维细胞能够负向调控免疫应答,抑制免疫炎症反应。在疾病动物模型中转染了干扰病毒载体实验组小鼠,其眼病发生发展情况均优于对照组。

结论：成功获得了小鼠成纤维细胞TLR4^-/-shRNA的慢病毒载体,转染了该载体的小鼠眼眶成纤维细胞能够抑制正向免疫应答,可以有效地抑制甲状腺眼病的发展,揭示干扰TLR4表达可能成为防治甲状腺眼病的生物诊疗措施。     

甲状腺相关眼病免疫学发病机理的研究进展

甲状腺相关眼病目前被认为是一种与Graves病关系密切的器官特异性自身免疫性疾病,其具体发病机制至今仍未明确。已有研究发现:自身抗原、眶内成纤维细胞、免疫细胞、细胞因子及免疫介质等都是该病发病过程中的重要因素。     

The effect of intravenous high-dose glucocorticoids and orbital decompression surgery on sight-threatening thyroid-associated ophthalmopathy

AIM: To report the effects of intravenous high-dose glucocorticoids (ivGC) and orbital decompression (OD) surgery for treatment of sight-threatening thyroid-associated ophthalmopathy (TAO). METHODS: A retrospective review of medical records from patients with sight-threatening TAO [definite or highly suspected dysthyroid optic neuropathy (DON)] treated with ivGC (60 cases) and OD (25 cases) was conducted at the Zhongshan Ophthalmic Center between January 2001 and January 2009. Patients were initially treated with ivGC (ivGC group). If no significant improvement in visual function was obtained, they then received OD surgery (OD group). The pre- versus post-treatment efficacies of either ivGC or OD in these patients were assessed using several indices, including visual acuity, intraocular pressure, ocular alignment, ocular motility, and exophthalmos. RESULTS: Nighty-one eyes had definite DON while 79 were considered to have highly suspected DON. In the ivGC group, 51 individuals (85.0%) eventually demonstrated normal vision, while 10 patients (16.7%) demonstrated a reduction in deviation (P<0.01), and 35 cases (58.3%) showed slight improvements in ocular motility (P<0.01). In OD group, visual acuity improved in 24 cases (96.0%, P<0.01) and all patients showed varying reductions of exophthalmos (mean: 4.35±1.13 mm, P<0.01). Eight cases (32.0%) experienced an 8-15 PD reduction of deviation and ocular motility improved in 12 cases (48.0%), while 3 patients (12.0%) developed new-onset strabismus with diplopia post-surgically (P<0.01). Patients were followed up at an average of 1.55±1.07y. CONCLUSION: Both ivGC and OD show good therapeutic efficacy in the treatment of sight-threatening TAO. The presence of extremely poor eyesight (≥0.5logMAR) was corrected in some patients with ivGC alone, thus sparing these patients from subsequent OD surgery. In patients who were refractory to steroids, subsequent OD surgery often provided satisfactory outcomes, however, new-onset strabismus with diplopia was observed in 12.0% of these cases.     

甲状腺相关眼病组织病理学研究

目的:探讨甲状腺相关眼病组织病理学改变。方法:收集我院2000/2005经症状、体征、甲状腺功能和CT证实为甲状腺相关眼病,并行眼眶减压术或复视矫正术的TAO患者共21例,行HE染色,Masson染色和阿辛蓝染色,观察TAO的病理学改变。结果:HE染色可见脂肪间隙增宽,间质伊红红染,纤维隔形成,肌纤维断裂,纤维化,淡染,部分溶解,空泡形成,Masson染色可见肌肉间质蓝染,脂肪组织血管增多,间质蓝染;阿先蓝染色可见脂肪间质蓝染。结论:甲状腺相关眼病主要组织病理学改变有脂肪间隙增宽,纤维隔形成,血管新生;肌纤维不同程度肌浆凝集,肌纤维断裂,纤维化,淡染,部分溶解,空泡形成。急性期可见糖胺聚糖沉积,肌束间炎性细胞浸润。     

透明质酸与甲状腺相关眼病

甲状腺相关眼病中重要的病理表现为糖胺聚糖在眶后组织中的聚集,从而出现复视、眼球突出、上睑挛缩等各种临床表现,其中透明质酸作为糖胺聚糖的主要成分在甲状腺相关眼病的病理过程中发挥了重要作用。本文就透明质酸和甲状腺相关眼病的关系作一综述。     

Epigenetics effect on pathogenesis of thyroid-associated ophthalmopathy

Thyroid-associated ophthalmopathy (TAO) is an autoimmune disease. Recent studies have found the aberrant epigenetics in TAO, including DNA methylation, non-coding RNAs, and histone modification. Many genes have an aberrant level of methylation in TAO. For example, higher levels are found in CD14, MBP, ANGLE1, LYAR and lower levels in DRD4 and BOLL. Non-coding RNAs are involved in the immune response (miR-146a, miR-155, miR-96, miR-183), fibrosis regulation (miR-146a, miR-21, miR-29), adipogenesis (miR-27) and are thought to play roles in TAO. MicroRNA is also related to the clinical activity score (miR-Let7d-5p) and may be a predictor of glucocorticoid therapy (miR-224-5p). The quantities of H4 in TAO are increased compared with euthyroid control subjects, and the role of histone modifications in Graves’ disease may lead to better understanding of its role in TAO. More studies are needed to explain the role of epigenetics in TAO and provide potential therapeutic strategies.