雷公藤多苷通过JAK2/STAT3信号通路减轻溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜细胞凋亡及炎症的实验研究

目的研究雷公藤多苷(TG)通过Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活子3(STAT3)信号通路对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜细胞凋亡及炎症的调节作用。方法将SD大鼠分为对照组、UC组、TG组、AG490组,UC组、TG组、AG490组采用三硝基苯磺酸/乙醇灌肠的方式建立UC模型,TG组给予TG灌胃干预,AG490组给予JAK2/STAT3抑制剂AG490干预。检测肠黏膜细胞凋亡率、凋亡基因及JAK2/STAT3表达、炎症细胞因子含量。结果 UC大鼠肠黏膜细胞凋亡率、Caspase-9、Caspase-3、p-JAK2、p-STAT3的表达水平及TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均明显高于对照组,Bcl-2、Bcl-xL的表达水平明显低于对照组(P 0. 05); TG组大鼠肠黏膜细胞凋亡率、Caspase-9、Caspase-3、p-JAK2、p-STAT3的表达水平及TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均明显低于UC组,Bcl-2、Bcl-xL的表达水平明显高于UC组(P 0. 05)。AG490组大鼠肠黏膜细胞凋亡率、Caspase-9及Caspase-3的表达水平、TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均明显低于UC组,Bcl-2、Bcl-xL的表达水平明显高于UC组(P 0. 05)。结论 TG能够通过JAK2/STAT3信号通路减轻UC大鼠肠黏膜细胞的凋亡及炎症。     

LC通过调控miR-4500表达对前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨细梗香草总皂苷(LC)对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡的影响及其对miR-4500的调控作用。方法 采用不同剂量的LC处理DU145细胞，分别将miR-NC、miR-4500 mimics转染至DU145细胞，分别将anti-miR-NC、anti-miR-4500转染至DU145细胞后加入LC处理细胞；噻唑蓝(MTT)、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡；采用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测前列腺癌组织、癌旁组织及DU145细胞中miR-4500的表达量。结果 LC可明显提高细胞增殖抑制率、凋亡率(P<0.05),且呈剂量依赖性；前列腺癌组织中miR-4500的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);LC可明显提高细胞中miR-4500的表达水平(P<0.05);转染miR-4500 mimics可明显提高细胞增殖抑制率及凋亡率(P<0.05);转染anti-miR-4500可明显逆转LC对DU145细胞增殖及凋亡的作用(P<0.05)。结论 LC可通过上调miR-4500的表达诱导前列腺癌DU145细胞凋亡。     

弓形虫对4种肿瘤细胞增殖及凋亡的影响

用1×104个/ml~32×104个/ml 6个不同浓度刚地弓形虫RH株速殖子体外分别作用于对数生长期的乳腺癌MCF-7、前列腺癌DU-145、食管癌EC-109和肺癌A549细胞(5×104/ml)24 h,运用CCK-8法测定弓形虫对上述肿瘤细胞的抑制作用,计算细胞抑制率。用1×104、2×104和4×104个/ml弓形虫速殖子体外作用于A549细胞24 h后,流式细胞仪检测肿瘤抑制基因P53和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)基因所编码蛋白质的表达情况。结果显示,随着弓形虫速殖子浓度升高,各肿瘤细胞增殖抑制率增高,其效果与剂量呈正相关。1×104个/ml弓形虫速殖子即对MCF-7、DU-145、EC-109和A549细胞增殖有抑制作用,其抑制率分别为19.7%、4.5%、28.0%和20.8%。各实验组肿瘤细胞增殖情况与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测A549细胞凋亡,凋亡率上升,且p53蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调。     

丝裂霉素联合尼美舒利对人膀胱癌EJ细胞增殖和Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察丝裂霉素（MMC）联合尼美舒利（NIM）对人膀胱癌EJ细胞增殖和Bcl-2、Bax表达的影响。方法将EJ细胞分为四组,对照组加入不作处理的细胞培养液,MMC组加入MMC100μl（2 mg/L）,NIM组加入NIM100μl（300μmol/L）,联合组加入MMC和NIM（剂量同前）。采用MTT法观察各组细胞生长抑制率,免疫组化染色法检测各组Bcl-2及Bax的表达情况。结果联合组244、8、72 h细胞生长抑制率低于其余三组,MMC组和NIM组生长抑制率亦低于对照组,三组均呈时间依赖性;联合组Bax阳性表达率高于其余三组,MMC组和NIM组高于对照组;MMC组和NIM组Bcl-2阳性表达率高于对照组。结论 MMC联合NIM可增强二者各自对EJ细胞的促凋亡作用,其可能机制与Bcl-2蛋白下调及Bax蛋白上调表达有关。     

南海真菌代谢物对前列腺癌细胞DU-145的影响

目的 观察南海真菌代谢物1386A对雄激素非依赖性前列腺癌DU-145细胞增殖的影响.方法 体外培养前列腺癌DU-145细胞,MTT法测定不同浓度1386A作用后细胞的生长情况.结果 DU-145细胞在不同浓度1386A(40、20、10、5 μmoL/L)作用24、48、72 h后,生长抑制率分别为61%、43%、30%、5%和91%、84%、63%、23%以及99%、96%、81%、52%.1386A作用DU-145细胞24、48、72 h后的半抑制率(IC50)分别是25.31、8.62、4.79μmol/L.结论 南海真菌代谢物1386A对雄激素非依赖性前列腺癌DU-145细胞具有抑制作用,且存在一定的剂量和时间依赖关系.     

蛋白激酶C抑制剂对宫颈癌细胞化疗药物耐药的影响

目的观察蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素对经紫杉醇处理的宫颈癌细胞增殖、凋亡及蛋白激酶C、P-糖蛋白（P-gp）表达的变化,探讨蛋白激酶C抑制剂对宫颈癌细胞紫杉醇耐药的影响。方法培养人宫颈癌Hela细胞,设立星形孢菌素组、紫杉醇组、联合组及对照组。星形孢菌素组加入星形孢菌素0.6μmol/L;紫杉醇组加入紫杉醇0.1μmol/L;联合组先加入星形孢菌素0.6μmol/L,随后加入紫杉醇0.1μmol/L;对照组不加入星形孢菌素及紫杉醇。四组细胞干预后继续培养48 h,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测蛋白激酶C及P-gp蛋白表达。结果星形孢菌素组、紫杉醇组及联合组增殖抑制率分别为38.11%±0.70%、49.96%±1.60%及60.31%±1.80%,联合组增殖抑制率高于星形孢菌素组及紫杉醇组（P均〈0.05）,星形孢菌素组增殖抑制率低于紫杉醇组（P〈0.05）。对照组、星形孢菌素组、紫杉醇组及联合组细胞凋亡率分别为7.13%±0.56%、17.73%±0.59%、36.51%±0.34%、56.72%±0.68%,星形孢菌素组、紫杉醇组及联合组细胞凋亡率均高于对照组（P均〈0.05）,联合组细胞凋亡率高于其他三组（P均〈0.05）。星形孢菌素组、联合组蛋白激酶C及P-gp蛋白表达均低于对照组（P均〈0.05）,联合组蛋白激酶C及P-gp蛋白表达均低于星形孢菌素组、紫杉醇组（P均〈0.01）。结论星形孢菌素可抑制经紫杉醇处理后的宫颈癌细胞的增殖、促进其凋亡,改善宫颈癌细胞对紫杉醇的耐药性。星形孢菌素可能通过减少P-gp蛋白表达改善宫颈癌细胞对紫杉醇的耐药性。     

吲哚美辛对前列腺癌DU145细胞增殖与凋亡的影响及机制探讨

目的观察吲哚美辛对人激素非依赖性前腺癌细胞系DU145增殖和凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法采用不同浓度的吲哚美辛处理DU145细胞。应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测并计算细胞增殖抑制率；流式细胞术检测细胞周期分布，并计算细胞凋亡率；采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定细胞培养上清PGE2；应用RT-PCR法检测Bcl-2和Bax mRNA。结果吲哚美辛可明显抑制DU145细胞增殖（P〈0．05），并具有时间一剂量依赖性；经吲哚美辛作用后，S期细胞明显增多，G2/M期细胞减少，细胞出现凋亡峰；细胞上清中PGB量明显减少（P〈0．001）；Bcl-2 mRNA表达降低，BaxmRNA表达下降，Bcl-2／Bax下降（P〈0．05）。结论吲哚美辛对前列腺癌细胞DU145生长具有抑制作用，阻滞细胞向c2／M期转化，并促进其凋亡。其作用可能与抑制细胞PGE2释放、下调Bel-2／Bax有关。     

大蒜素对卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP增殖的影响及机制

目的探讨大蒜素对卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP凋亡的影响及机制。方法将SKOV-3/DDP细胞随机分为四组,大蒜素组加入40μg/mL的大蒜素,顺铂组加入40μg/mL的顺铂,联合组加入大蒜素和顺铂各40μg/mL,对照组不干预。各组分别培养24、48 h。采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;RT-PCR法测定Bax、Bcl-2mRNA表达;Western blot法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果顺铂组、大蒜素组、联合组各时点(24 h、48 h)增殖抑制率明显高于对照组,联合组明显高于大蒜素组、顺铂组,P均<0.05。顺铂组、大蒜素组、联合组各时点Bax mR-NA和蛋白水平明显高于对照组,大蒜素组、联合组Bcl-2 mRNA和蛋白水平明显低于对照组,P均<0.05;顺铂组48 h Bcl-2蛋白明显高于对照组,P<0.05;联合组各时点Bax mRNA和蛋白水平明显高于、Bcl-2 mRNA和蛋白水平明显低于对照组,P均<0.05。结论大蒜素诱导SKOV-3/DDP凋亡作用优于顺铂,两者联合具有协同作用,其机制可能为上调Bax表达和下调Bcl-2表达有关。     

hnRNP H与子宫内膜癌化疗敏感性的相关性

目的探讨敲低核不均一核糖核蛋白H(hnRNP H)对子宫内膜癌细胞Ishikawa细胞紫杉醇化疗敏感性的影响。方法利用hnRNP H siRNA转染子宫内膜癌细胞Ishikawa,敲低目的基因表达,通过实时PCR和Western印迹检测(对照组、阴性对照组、siRNA组)hnRNP H mRNA、蛋白表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)实验检测紫杉醇对Ishikawa细胞存活率的影响,流式细胞仪检测对照组、紫杉醇组、siRNA组及紫杉醇+siRNA组各组细胞凋亡率的变化,Western印迹检测对照组、紫杉醇组、siRNA组及紫杉醇+siRNA组各组细胞凋亡蛋白(Caspase 3/9 Bcl-2、Bax)的表达变化。结果 Real-time PCR和Western印迹检测证实hnRNP H siRNA可有效降低hnRNP H在mRNA及蛋白水平表达。紫杉醇对细胞存活率的影响呈时间及剂量依赖性,流式细胞仪检测:对照组凋亡率3.07%,应用紫杉醇组凋亡率29.16%、沉默hnRNP H组凋亡率34.72%、应用紫杉醇+沉默hnRNP H组凋亡率45.03%;Western印迹检测凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bax在紫杉醇+siRNA组表达显著升高,与对照组、紫杉醇组、siRNA组相比有统计学差异(P<0.05),Bcl-2在紫杉醇+siRNA组表达显著下调,与对照组、紫杉醇组、siRNA组相比较差异显著(P<0.05)。结论应用siRNA沉默子宫内膜癌Ishikawa细胞中hnRNP H的表达,使Ishikawa对紫杉醇化疗敏感性明显增加,促使肿瘤细胞凋亡。HnRNP H可作为子宫内膜癌基因治疗新靶点。     

多烯紫杉醇对人食管癌EC-109细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨多烯紫杉醇对食管癌EC-109细胞株增殖、凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测多烯紫杉醇对EC-109细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪技术检测多烯紫杉醇对EC-109细胞周期和细胞凋亡的影响,Western印迹法测定多烯紫杉醇对EC-109细胞蛋白激酶B(Akt)-1蛋白表达的影响。结果多烯紫杉醇各浓度组A值均低于阴性对照组(P0.05);各浓度组的早、晚期凋亡率与阴性对照组比较均增高(P0.05),除0.01 nmol/L组外,各组随着浓度的增高其早、晚期的凋亡率也升高;低浓度(0.01 nmol/L)多烯紫杉醇处理的细胞阻断G2/M期短暂、不完全,而高浓度(10 nmol/L)多烯紫杉醇对食管癌细胞的G2/M期阻断较低浓度的完全、持久;多烯紫杉醇各浓度组处理的EC-109细胞Akt-1蛋白条带灰度值与空白对照组比较显著减弱,说明对其表达具有明显抑制作用,其中10 nmol/L组最强,抑制率为85%,0.01 nmol/L较弱。结论多烯紫杉醇对人食管癌EC-109细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于G2/M期,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

EZH2抑制剂联合顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨EZH2抑制剂UNC1999联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法传代培养人肺癌A549细胞系,取生长良好的传代细胞分为对照组、联合用药组、顺铂组和UNC1999组。所有组均给予RPMI 1640培养液及10%的胎牛血清培养,对照组不加药液,联合用药组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L UNC1999药液及2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;UNC1999组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的UNC1999药液;采用MTT比色法检测各组细胞增殖抑制率中IC50及联合指数(CI)。Western印迹法检测各组相关凋亡蛋白及细胞外调节蛋白激酶(ERK)及p-ERK的表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,UNC1999组、顺铂组、联合用药组细胞增殖均受到不同程度抑制(P0.05)。各组细胞增殖抑制作用存在剂量-时间依赖关系,且UNC1999与顺铂存在协同作用。UNC1999组、顺铂组、联合用药组与对照组比较细胞凋亡差异显著(P0.05)。UNC1999组、顺铂组、联合用药组中凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显升高,p-ERK蛋白表达明显降低,联合用药组Bcl-2表达低于对照组(P0.05)。结论 EZH2特异性抑制剂UNC199可能通过抑制MAPK-ERK细胞通路起到抑制肺癌A549细胞增殖,促进其凋亡,与顺铂单药或联合均具有协同效应。     

JAK2/STAT3信号通路在阿托伐他汀抗大鼠血管平滑肌细胞增殖凋亡中的作用研究

目的探讨阿托伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)非调脂作用机制与转录信号传导子和激活子3(Stat3)信号传导通路的关系,明确其细胞内信号传导机制。方法分别将阿托伐他汀、酪氨酸激酶抑制剂AG490及二者联合作用于大鼠VSMCs,应用MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察药物对细胞凋亡的影响,进一步用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测药物作用前后 Stat3通路相关蛋白JAK2、STAT3、Cyclin D1、Bcl-2的表达及磷酸化活性。结果阿托伐他汀及AG490 都呈浓度依赖性方式抑制大鼠VSMCs增殖水平,促进其凋亡,二者联合应用则具协同作用。阿托伐他汀及AG490处理VSMCs后p-JAK2、p-Stat3、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平随作用时间延长而下降 (P<0．05),并且联合组蛋白表达水平较单独处理组相比有显著性差异(P<0．01)。结论阿托伐他汀对大鼠VSMCs非调脂作用机制与癌基因Star3信号通路高度相关,与酪氨酸激酶抑制剂AG490联合应用则具协同作用,可能通过作用于JAK2／Stat3下游靶基因Cyclin D1、Bcl-2影响其增殖及凋亡。     

姜黄素对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响及其机制

目的观察姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡及细胞内核因子κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法将对数生长期T24细胞分为两组,实验组加入10、20、50、100μmol/L姜黄素,对照组加入完全培养液。培养24、48、72 h时采用MTT比色法检测两组细胞增殖抑制率;培养24 h采用流式细胞术检测细胞凋亡率、Western blot法检测细胞内NF-κB蛋白表达情况。结果实验组细胞增殖抑制率明显高于对照组,且呈时间—剂量依赖性,P均<0.05;实验组24 h细胞凋亡率明显高于、NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组,且呈剂量依赖性,P均<0.05。结论姜黄素能有效抑制人膀胱癌T24细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与下调NF-κB表达有关。     

索拉菲尼联合华蟾素对离体肝癌细胞株SMMC-7721的协同抑制效应观察

目的探讨索拉非尼与华蟾素对离体肝癌细胞株SMMC-7721协同作用的机制。方法将离体肝癌细胞株SMMC-7721分成四组,索拉非尼组予索拉非尼6.0μmol/L干预,华蟾素组予华蟾素0.6μmol/L干预,联合组予索拉非尼和华蟾素联合干预（剂量同前）,对照组不做任何干预。MTT法检测四组细胞增殖抑制率,FCM法检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测M c l-1 mRNA表达,W estern b lot法检测M c l-1蛋白表达。结果联合组细胞增殖抑制率及凋亡率均明显高于索拉非尼组和华蟾素组,索拉非尼组和华蟾素组均明显高于对照组（P均〈0.05）。索拉菲尼组及联合组M c l-1 mRNA的表达均明显低于对照组（P均〈0.05）,而华蟾素与对照组相比差异无显著性;索拉菲尼、华蟾素及联合组M c l-1蛋白表达均明显低于对照组（P均〈0.05）。结论索拉非尼联合华蟾素对SMMC-7721细胞显示出协同抑制作用,其机理可能为抑制M c l-1蛋白表达。     

雷公藤内酯醇联合紫杉醇对人卵巢癌耐顺铂细胞株体外活性的影响及机制

目的探讨雷公藤内酯醇（TP）联合紫杉醇对人卵巢癌耐顺铂细胞株（CoC1/DDP）体外活性的影响及其可能机制。方法将对数生长期CoC1/DDP细胞随机分为4组,TP组采用10 ng/ml TP作用于细胞,紫杉醇组采用3.13μg/ml紫杉醇,联合组采用10 ng/ml TP和3.13μg/ml紫杉醇,空白对照组不作任何处理（调零组）,采用MTT法检测各组细胞生长抑制率,透射电子显微镜下观察细胞超微结构变化,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果联合组生长抑制率明显高于单药组,且呈时间依赖性（P〈0.05）;透射电子显微镜示TP组、紫杉醇组、联合组细胞均呈凋亡改变,联合组细胞凋亡率明显高于单药组,紫杉醇组与联合组细胞周期中G2/M期的比例明显增高（P均〈0.05）。结论 TP联合紫杉醇可协同抑制CoC1/DDP细胞生长,促进其凋亡,其机制可能为使细胞阻滞于G2/M期。     

AG490联合健择对人胰腺癌细胞生长的影响

目的:探讨Janus激酶(JAK)特异性抑制剂AG490联合化疗药物健择对人胰腺癌细胞系SW1990的生长增殖及STAT3转导通路的影响和其机制.方法:人胰腺癌细胞系SW1990分为对照组、AG490组、健择组及AG490 健择处理组.培养48 h后,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞仪检测细胞凋亡.Western blot和RT-PCR检测STAT3,Cyclin D1,Bcl-xL,Bax,Survivin的表达情况.结果:AG490组和健择组的细胞增殖明显低于对照组(2.20±0.25,2.30±0.220 vs 3.78±0.42,P<0.05),凋亡率明显高于对照组(35.40%±3.08%,34.64%±1.38% vs 16.49%±1.45%,P<0.05)。并且,AG490 健择组细胞增殖(1.49±0.15)明显低于明显低于AG490或健择组(P<0.05),而凋亡率(43.80%±1.57%)则明显高于AG490或健择组(P<0.05).AG490处理SW1990 48 h后,p-STAT3表达明显低于对照组(13.83%±0.64% vs 79.87%±1.43%,P<0.05),同时Cyclin D1(mRNA:15.63%±0.59% vs 43.83%±0.64%,P<0.05:蛋白:17.50%±0.92% vs 49.87%±1.27%,P<0.05),Bcl-xL(mRNA:13.93%±0.21% vs 75.70%±0.46%,P<0.05:蛋白:34.17%±1.70% vs 83.93%±0.80%,P<0.05)和Survivin(mRNA:58.27%±0.42% vs 82.93%±1.68%,P<0.05:蛋白:13.23%±1.03% vs 18.60±1.08%,P<0.05)表达也明显降低,而Bax的表达则明显增高(mRNA:10.33%±1.18% vs 5.43%±0.70%,P<0.05:蛋白:13.07%±1.04% vs 6.23%±2.40%,P<0.05),健择处理组上述指标与对照组相似.结论:阻断STAT3信号转导通路可以抑制人胰腺癌细胞增殖,促进其凋亡,健择联合AG490能起协同作用.AG490联合健择可能为胰腺癌治疗提供新的思路.     

miR-138-5p通过调控自噬影响乳腺癌细胞他莫昔芬耐药性的体外研究

目的 探讨miR-138-5p对乳腺癌细胞他莫昔芬(TAM)耐药性的影响及其机制。方法 体外培养乳腺癌细胞MCF-7和TAM耐药细胞株MCF-7/TAM,设置正常对照组(MCF-7细胞)、耐药对照组(MCF-7/TAM细胞)、LV-NC组(MCF-7/TAM细胞+慢病毒空载体)和LV-miR-138-5p mimics组(MCF-7/TAM细胞+miR-138-5p mimics慢病毒)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞miR-138-5p表达水平;通过MTT法检测各组细胞增殖抑制率;通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率;通过MDC染色法检测各组细胞自噬小体数量;通过Western blot法检测各组细胞LC3Ⅱ、Beclin-1、Bcl-2蛋白表达水平。结果 与正常对照组相比较,耐药对照组、LV-NC组细胞miR-138-5p、增殖抑制率、凋亡率、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1表达水平及自噬小体数显著升高(P<0.05)。过表达miR-138-5p后,细胞增殖抑制率、凋亡率、蛋白Bcl-2表达水平显著升高...     

5-氟尿嘧啶对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制探讨

目的 观察5-氟尿嘧啶（5-FU）对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,并探讨其可能的机制.方法 将对数生长期的MCF-7细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别加入终质量浓度为20、10、1、0.1μg/mL的5-FU,对照组加入100 mL的RPMI-1640完全培养液.培养24、48、72 h后,采用MTT法测定MCF-7细胞的吸光度并计算细胞抑制率,显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白.结果 与对照组比较,随着5-FU浓度增加以及用药时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐增加（P均＜0.05）;细胞数量逐渐减少,凋亡现象更加明显;G1期细胞比例明显升高、S期细胞比例逐步降低（P均＜0.05）,但G2期细胞比例变化不明显;Bax蛋白相对表达量逐渐增加,Bcl-2蛋白相对表达量逐步减少（P均＜0.05）.结论 5-FU对人乳腺癌MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;该作用与其促进细胞凋亡,上调Bax蛋白、下调Bcl-2蛋白表达有关.     

Bcl-2反义寡核苷酸对环已亚胺诱导U251细胞凋亡的影响

目的 探讨Bcl-2反义寡核苷酸对环已亚胺（CHX）诱导胶质瘤细胞U251凋亡的影响。方法在光镜下观察Bcl-2反义寡核苷酸、CHX及二者联合应用对U251凋亡的形态学改变;应用MTT法检测各组U251细胞的抑制率;通过DNA电泳检测CHX诱导U251细胞凋亡的情况。结果 Bcl-2反义寡核苷酸可明显促进CHX诱导的U251凋亡,对照组、SODN组与CHX组、AODN组、SODN＋CHX组及AODN＋CHX组的细胞抑制率相比P均〈0．01,AODN组、SODN＋CHX组和AODN＋CHX组的细胞抑制率相比P均〈0．01;Bcl-2反义寡核苷酸可促进细胞凋亡,呈现出特征性的DNA梯状带。结论Bcl-2反义寡核苷酸和CHX均可诱导胶质瘤细胞U251发生凋亡,且Bcl-2反义寡核苷酸可明显促进CHX诱导的胶质瘤细胞U251凋亡,提高胶质瘤细胞对CHX的敏感性。     

SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞凋亡的影响及可能机制

目的观察SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞系细胞凋亡和细胞凋亡关键调控因子(Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3)表达变化的影响,探讨SIRT1在前列腺癌发生的可能机制。方法体外培养DU145细胞,实验分对照组(DMSO组)和sirtinol组(终浓度为10,25和50μmol/L),Western印迹检测DU145细胞SIRT1蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测DU145细胞中细胞凋亡关键调控因子Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3的蛋白表达。结果与对照组相比,随着sirtinol浓度的增加,SIRT1蛋白表达水平逐渐降低,细胞凋亡比例增加,诱导细胞发生凋亡。不同浓度sirtinol作用DU145细胞后Bcl-2蛋白表达减少,且随剂量增加表达越低;Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比率降低;伴随Cytochrome C的释放和Caspase-3的激活。结论下调SIRT1表达诱导前列腺癌细胞DU145细胞凋亡,其机制可能与改变细胞凋亡关键调控因子Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3的蛋白表达相关。