五种乙型肝炎病毒核酸荧光定量检测试剂盒的比较

目的 比较5种国内外HBV DNA定量检测试剂盒的灵敏度、特异度和符合率.方法 分别应用A、B、C、D 4种国产和德国Roche公司生产的荧光定量试剂盒检测国家HBV DNA标准品、7份灵敏度稀释血浆(15.6～1 000 IU/mL)、15份健康献血者和45份慢性乙型肝炎患者血浆.统计学分析采用平行性检验.结果 5种试剂盒对9份阳性和8份阴性国家标准品均能正确检出,并能准确定量标准品中的灵敏度样本;对灵敏度稀释血浆,Roche试剂盒和国产试剂盒C、D均能检出最高稀释度样本(15.6 IU/mL),而试剂盒A和B检测限分别为125 IU/mL和500 IU/mL,Roche试剂盒及C试剂盒的定量检测结果与理论值的符合率高,两者检测结果经平行性检验存在线性相关(r>0.98);检测15份健康献血者血浆,试剂盒D有2份假阳性;检测慢性乙型肝炎患者血浆,Roche试剂盒对1×102～1×108 IU/mL范围的样本检测的变异系数均<15%,而国产试剂盒变异系数较大.4种国产试剂盒与Roche试剂盒的符合率为50%～96 %,其中A为61%,B为50%,C为96%,D为83%,试剂盒C符合率显著高于试剂盒D、A和B(X2=5.62,P<0.05;X2=28.93,P<0.01;X2=44.31,P<0.01).各种试剂盒符合率最高的区段均在1×104～1×108 IU/mL.结论 国产HBV DNA定量试剂盒质量差异较大,试剂盒c与Roche试剂盒定量检测HBV DNA的符合率最高,国产试剂盒质量有待进一步提高.     

胃蛋白酶原分析灵敏度的确定及其对胃癌的诊断价值

目的确定胃蛋白酶原PGⅠ、PGⅡ酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒的分析灵敏度及其对胃癌的诊断价值。方法采用ELISA双抗体夹心法检测PGⅠ和PGⅡ,确定ELISA试剂盒的生物检测限（BLD）、功能灵敏度（FS）。评价以PGⅠ≤75μg/L、PGI/PGⅡ≤3.0为临界值,对早期胃癌诊断价值。结果①PGⅠ试剂盒的BLD和FS均为0.375μg/L,PGⅡ试剂盒均为0.394μg/L。②以PGⅠ≤75μg/L、PGⅠ/PGⅡ≤3.0为临界值,对早期胃癌诊断的灵敏度等10项指标优于以PGⅠ≤35μg/L、PGⅠ/PGⅡ≤1.5为临界值。结论PGⅠ、PGⅡ试剂盒的BLD和FS显著低于临界值,能满足临床检测的需要。联合检测血清中PGⅠ、PGⅡ和PGⅠ/PGⅡ比值,有助于胃癌的诊断与治疗后复发的判断。     

Der f 1血清特异性IgE ELISA检测方法的建立

目的利用粉尘螨变应原第1组分重组蛋白rDer f 1建立特异性IgE ELISA检测方法,并对哮喘患者血清进行检测。方法以rDer f 1为包被抗原,分别建立间接ELISA法和亲和素-生物素复合ELISA(ABC-ELISA)法,检测Der f 1特异性IgE阳性标准血清和39例哮喘患者血清中的Der f 1特异性IgE,并分析检测结果。结果间接ELISA法和ABC-ELISA法检测Der f 1特异性IgE的最适抗原包被浓度和血清稀释倍数均为15μg/ml和1︰2,间接ELISA法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体适宜稀释倍数为1︰1 000,ABC-ELISA法生物素标记抗人IgE抗体和HRP标记亲和素的稀释倍数分别为1︰1 000和1︰2 000。用间接ELISA和ABC-ELISA检测IgE的灵敏度分别为0.68U/ml和0.73U/ml,检测患者血清中Der f 1特异性IgE的阳性率分别为92.3%和97.4%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于重组变应原rDer f 1的ELISA法检测粉尘螨特异性IgE具有较高的敏感度,可用于螨过敏性疾病的实验诊断。     

四种国产乙型肝炎表面抗原定量检测试剂对弱阳性样本检测结果的一致性比较

目的 比较4种国产HBsAg定量检测试剂与ARCHITECT i2000免疫检测系统对HBsAg弱阳性样本检测结果的一致性及检测值之间的相关性.方法 采用4种国产发光法检测系统和i2000检测系统分别检测185例HBsAg弱阳性血清标本以及不同浓度HBsAg的标准品.应用描述性统计和相关分析计算不同试剂分析结果的精密度、一致性和相关性.结果 4种国产发光法检测系统对i2000检测系统定量为0.05～1.00 IU/ml的弱阳性结果判断的符合率分别为25.93%、35.19%、51.85%和18.52%;对定量为＞1.00～10.00IU/ml的弱阳性结果判断的符合率分别为71.76%、87.79%、95.42%和69.47%.4种国产试剂均检测阴性的标本为i2000检测值在0.05～0.80IU/ml的低值阳性标本;i2000检测结果≥7.93 IU/ml的样本,4种国产发光法检测系统符合率为100%.国产试剂检测结果之间的相关性分析结果显示,其相关系数为0.8629～0.9265.结论 国产检测系统的分析灵敏度略低于i2000检测系统,检测值≤0.80IU/ml的样本不能给出与i2000一致的检测结果;对于≥7.93 IU/ml的样本,国产试剂均可给出与i2000一致的结果.

Abstract：

Objective To evalue the coincidence and correlation between the four domestic quantity assay reagents and with ARCHITECTi2000 immunoassay system.Methods 185 weak-reactive serum samples and standard materials of different concentrations were tested by four domestic quantity assay reagents for HBsAg test and ARCHITECTi2000 immunoassay system.The coincidence,the precision and the correlations between different systems were analyzed.Results The coincidence rates of the results of 0.05-1.00 IU/ml samples between the four domestic quantity assay reagents and ARCHITECTi2000 immunoassay system were 25.93%,35.19%,51.85% and 18.52% respectively,and for those results of ＞ 1.00-10.00 IU/ml samples the coincidence rates were 71.76%,87.79%,95.42% and 69.47% respectively.The samples of 0.05-0.80 IU/ml weak-reactive serum samples detected by the i2000 system were all negative detected by the four domestic systems.The coincidence rates of＞7.93 IU/ml serum samples detected by i2000 system were 100%detected by the four domestic systems.The correlations of the four domestic quantity assays were around 0.8629-0.9265.Conclusions The analysis sensitivity of the four domestic quantity assay reagents were below the i2000 system.The results of under 0.80 IU/ml samples detected by i2000 system were disaccord with the results detected by the four domestic systems,whereas for the sapmples over 7.93 IU/ml the results were consistent.     

磁珠吸附法定量检测乙型肝炎病毒的效能

目的建立磁珠吸附定量检测HBV DNA的方法,并评价该方法的检测效率。方法将病毒载量为10~7IU/mL的血清样本,倍比稀释成不同浓度的HBV DNA作为血清标准品(理论值),分别用磁珠吸附定量法(试剂1)、磁珠法(试剂2)、煮沸法(试剂3)3种方法提取HBV DNA,从灵敏度、定量线性关系方面比较本实验方法与国产磁珠法核酸自动提取法和传统煮沸法的提取效果,并对本实验方法进行稳定性验证。结果灵敏度:HBV DNA定量的检测下限理论值为10~1IU/mL,试剂1为3.520×10~1 IU/mL,试剂2为9.123×10~3 IU/mL,试剂3为6.195×10~1 IU/mL。相关性:试剂1、试剂2、试剂3提取HBV DNA定量与理论值相关性分析的r值分别为0.986、0.950、0.979(均P0.01)。稳定性:3种方法检测的相对偏差均值分别为0.243±0.405(试剂1)、1.189±0.855(试剂2)、-0.439±0.618(试剂3),试剂1对同一样本在不同时间检测结果的相对偏差均值为0.505±0.659。结论本实验所设计的血清HBV DNA提取方法灵敏,定量线性关系好,结果稳定准确,为定量检测HBV DNA奠定了基础。     

HIV口腔黏膜渗出液快速检测试剂的方法学评价北大核心CSCD

目的构建艾滋病病毒（HIV）口腔黏膜渗出液（OMT）快速检测试剂（RDTs）评价盘,评价HIV OMT RDTs的质量。方法采集健康志愿者的口腔黏膜渗出液,用稀释液稀释HIV抗体阳性和阴性的血浆样本,分别构建实验室基础盘、实验室干扰盘、实验室线性稀释系列盘和实验室精密度盘。用6家HIV OMT RDTs（编号：试剂AF）分别检测构建的评价盘和HIV抗体口腔黏膜渗出液快速试剂的国家参考品,肉眼判读检测结果并测定GOD值。结果根据肉眼判读,试剂AF的敏感性、特异性、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率均为100%,分析特异性≥95.12%（39/41）,分析灵敏度≥3/5;试剂D的批内精密度高于其他试剂,试剂F的线性范围为28214。根据GOD值,试剂AE的特异性,阴性参考品符合率均为100%,分析特异性≥95.12%（39/41）,敏感性≥92.50%（37/40）,阳性参考品符合率≥95.00%（19/20）,分析灵敏度≥3/5,线性范围分别为28216、27217、26216、26215、25212,批内精密度介于4.91%34.28%之间。结论试剂AF的敏感性、特异性、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、分析灵敏度、分析特异性较好,试剂BD的线性范围较宽,但饮食因素可能造成试剂D、E出现假反应性,试剂的批内精密度差别较大。     

狂犬病毒核蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒研制

目的 研制狂犬病毒（RV）核蛋白（NP）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立RV NP TRFIA 试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果 试剂盒准确度好,线性范围为5～2 500 mEU/mL,灵敏度为1.018 mEU/mL,精密度良好,分析内精密度为2.7%～9.3%,分析间精密度为3.5%～12.2%。将15份疫苗样品用本法与国内常用ELISA检测试剂盒同时检测,其相关系数r为 0.85,稳定性试验表明试剂可以在4 ℃稳定半年,37 ℃稳定7d。结论 试剂盒各项已检测指标达到临床检验要求,有望替代同类产品进一步作临床检测试验。     

反转录环介导等温扩增技术对丙型肝炎病毒可视化分型检测

目的 应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)可视化检测丙型肝炎病毒(HCV)1b和2a基因型,为RT-LAMP技术应用于现场或基层医院提供初步探索经验。方法 首先,收集临床阳性样本并用荧光定量PCR分型检测,把样本基本分为1型和非1型。然后分别根据HCV 1b和2a基因型设计RT-LAMP引物并优化反应条件,通过互换模板实验验证这2套引物的特异性,并通过检测稀释的模板以验证引物的灵敏度。同时用钙黄绿素进行产物显色,使HCV分型检测可视化。最后用RT-LAMP方法检测临床样本,并计算阳性率,应用配对卡方检验比较RT-LAMP和荧光定量PCR的统计学差异。结果 优化好的RT-LAMP体系的特异性好,对HCV 1b型的检测灵敏度为10³ IU/mL,2a型的检测灵敏度为10⁴ IU/mL。另外,利用钙黄绿素进行产物检测的效果和电泳结果相当。通过对临床样本分型检测,HCV 1b型样本的RT-LAMP检测结果和荧光定量PCR差异无统计学意义(P>0.05),HCV 2a型样本的RT-LAMP检测结果和荧光定量PCR差异有统计学意义(P<0.05),但是未检出的样本中有2例为HCV 2b型。结论 RT-LAMP对HCV的可视化分型检测具有较好的特异性和灵敏度,操作简便,具有在现场或基层医院的应用前景。     

2种PCR试剂盒定量检测血清HBV DNA含量的比较

目的探讨AMPLIPREP-COBAS TAQMAN法(罗氏COBAS法)和北京鑫诺美迪PCR-荧光探针"一管法"检测血清HBV DNA含量的性能差异。方法采用2种方法同步检测175例乙型肝炎患者血清样本,并将黄疸、溶血和脂血标本作为干扰样本,分析2种方法的相关性、一致性和抗干扰性。取一已知定量为2.24×109IU/ml的标本,用阴性血清做1+9(即1∶10)的稀释,并依次稀释至2.24×10 IU/ml,比较2种方法的线性范围和灵敏性的差异。结果 175份均有数值的标本中,2种试剂检测结果比较差异无统计学意义。2种试剂对黄疸、溶血和脂血标本的定量值影响不大。对于HBV DNA1.70×108IU/ml的样本,罗氏COBAS法结果只显示1.70×108IU/ml,而"一管法"无须稀释仍能准确定量;对于HBV DNA1.00×102IU/ml的样本,"一管法"仅能检测到病毒,而罗氏COBAS法的稳定性和线性更好。结论 PCR-荧光探针"一管法"与进口罗氏COBAS法具有良好的一致性,且省时、省力,价格低廉,适合在我国推广应用。     

10家临床实验室定值冰冻人血清校准前后γ-GT测定结果分析

由多家实验室用参考方法对覆盖该测定方法测量范围的多份新鲜混合血清进行检测获得参考值结果,用于校准不同检测系统是酶学测定标准化工作的重要部分,可提高临床酶学活性测定的准确性和实验室间的可比性。本研究对贵阳地区10家二级以上医院的生化实验室,采用由北京大学第一医院和北京中生公司依据IFCC推荐方法联合定值γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）冰冻人血清校准γ-GT不同检测系统,分析校准前后不同检测系统-GT测定结果室间变异及其与参考方法测定间的偏差。以证明采用冰冻人血清统一校准γ-GT的可行性。材料：γ-GT校准品：-70℃冰冻保存人血清,用定值γ-GT活性浓度为74.16U/L,0.5ml/eppendorf管分装。血清样本：5支不同浓度冰冻混合人血清样本,参考方法定值γ-GT活性浓度,依次为43.01、74.16、125.47183.36、258.84U/L,0.5ml/eppendorf管分装,-70℃冰冻密封保存。贵阳市10家二甲以上医院生化实验室的10套检测系统。方法：参考方法定值：用参考方法测定制备分装的6瓶酶校准品,由北京两家酶学参考实验室共同定值,每瓶重复测定2次,取其平均值作为酶校准品定值,5个不同浓度混...     

两种国产乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的检测效能评价

比较两种国产不同核酸提取方法定量检测乙型肝炎病毒（HBV）核酸试剂的检测效能。方法选择经抗病毒治疗且HBV DNA 载量在﹤1×10^4 IU/ml的乙型肝炎患者血清标本36份,采用两种国产HBV核酸定量检测试剂盒平行检测HBV DNA,对阳性血清进行梯度稀释后再检测,从定量线性范围、准确性、灵敏度、特异性等方面比较两种试剂的差异。结果在36例临床血清中,14份经科华试剂检测的结果为﹤500 IU/ml,而圣湘试剂检测的结果仍﹥1.00×10^3 IU/ml;对其中获得检测数据的31份标本进行两种试剂检测结果的相关性分析,发现一致性较好（r=0.817,P﹤0.05）;两种方法检测乙型肝炎患者血清HBV DNA的阳性率分别为55.6％和94.4％,差异具有统计学意义（x2=12.07,P=0.000）;对强阳性血清进行梯度稀释后定量检测显示,两种试剂检测水平的平均值与理论水平的线性相关性较好（湖南圣湘r=0.999,上海科华r=0.992）,但圣湘所有检测的相对偏差均在±0.3logIU/ml之内,而科华有两次检测的相对偏差超出了±0.3logIU/ml范围,提示圣湘试剂检测结果更稳定,使用纳米磁珠核酸提取法的检测结果较煮沸法更加准确。结论以纳米磁珠为提取核酸方法不仅具有更广的线性范围,同时可显著提高国产HBV DNA检测试剂的灵敏度和准确性。     

AFP/CEA双标记时间分辨荧光免疫分析试剂的研制及性能鉴定

目的研制甲胎蛋白（AFP）及癌胚抗原（CEA）的双标记时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂,并鉴定其性能。方法将抗AFP单克隆抗体（E014）与抗CEA单克隆抗体（3E6）混合包被96孔板,用钐标记抗AFP单克隆抗体（E010）,铕标记抗CEA单克隆抗体（S001）,用双抗体夹心一步法建立AFP/CEA TRFIA试剂,测定其线性相关性、灵敏度、精密度、回收率、特异性,并与对应的单标记进口试剂进行比较。结果 AFP分析灵敏度为0.3 U/ml,线性范围为0.3~800 U/ml,平均回收率为99.8%,分析内和分析间变异系数分别为2.1%~5.8%、4.1%~8.7%;CEA分别为0.2 ng/ml、0.2~400 ng/ml、100.3%、2.4%~5.6%、4.8%~9.8%。该试剂与对应的单标记进口试剂的相关系数分别为0.99、0.98。结论成功研制了AFP/CEA双标记TRFIA试剂,其性能均达到临床检测要求,可替代国内外的单标记试剂。     

纳米磁珠分选联合TRFIA检测血清半乳糖凝集素-3对胰腺癌诊断的价值

目的 采用纳米磁珠分选联合时间分解荧光免疫测定（纳米磁珠-TRFIA）的方法检测血清半乳糖凝集素-3（Galectin-3）的浓度,评价其对胰腺癌的诊断价值.方法 收集88例胰腺癌、50例急性胰腺炎、10例胰腺囊肿患者的血清,以20位健康者作为正常对照组.先采用Galectin-3抗体耦联的纳米磁珠对人外周血清进行分选,再用TRFIA法检测Galectin-3浓度,并与常规TRFIA法检测所得的血清Galectin-3浓度进行比较.应用受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）确定诊断胰腺癌的界值,获取诊断胰腺癌的敏感性.结果 纳米磁珠-TRFIA法检测Galectin-3浓度在0.78 ～ 100 ng/ml范围内呈线性关系,批内CV≤6.38％,批间CV≤7.22％,平均回收率为105.3％.纳米磁珠-TRFIA法检测正常对照组的血清Galectin-3浓度为0.38（0.02～3.06） ng/ml,显著高于常规TRFIA法检测得到的0.18（0.00～2.64） ng/ml（P=0.000）.纳米磁珠-TRFIA法检测的胰腺癌、急性胰腺炎、胰腺囊肿患者血清Galectin-3浓度分别为4.85（0.00 ～42.67）、0.69（0.00～ 13.62）、0.70（0.00 ～ 14.54） ng/ml,胰腺癌患者明显高于急性胰腺炎、胰腺囊肿患者及正常对照者（P值均＜0.01）,而其他3组之间的浓度差异无统计学意义.Galectin-3诊断胰腺癌的AUC为0.851 ±0.040,95％可信区间0.772 ～ 0.929.以Galectin-3浓度1.07 ng/ml为诊断界值时,胰腺癌、急性胰腺炎、胰腺囊肿患者及正常对照者的阳性率分别为84.1％（74/88）、34.0％ （17/50）、20.0％ （2/10）、10.0％ （2/20）,对胰腺癌的诊断敏感性显著高于其他3组（P值均＜0.01）.结论 纳米磁珠分选联合TRFIA法可富集血清中的Galectin-3,从而提高血清Galectin-3检出敏感性及其对胰腺癌的诊断价值.     

甲状腺素运载蛋白时间分辨免疫荧光试剂盒的制备和效能评价

目的制备甲状腺素运载蛋白(transthyretin,TTR)的时间分辨免疫荧光(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒并对其性能进行评价。方法将抗TTR的4H2单克隆抗体作为包被抗体包被至96孔板,用Eu^3+标记3E4单克隆抗体作为检测抗体,制备双抗体夹心TRFIA试剂盒,应用该试剂盒对42例川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿及13名健康儿童的血清进行检测,以稀释回收率、准确度、精密度、稳定性等指标对试剂盒的效能进行评价。结果该研究制备的TTR TRFIA试剂盒与Western blot法同时检测42份KD临床样本和13份健康样本,两方法的结果符合率为100%,特异性强。试剂盒的最低检出浓度为0.05μg/ml,稀释回收率为88.00%~111.00%,分析内精密度为8.01%~9.17%,分析间精密度为8.88%~11.82%。稳定性实验表明该试剂盒可在4℃稳定保存6个月,37℃稳定保存7 d。结论该研究制备的TTR TRFIA试剂盒具有准确性高、方便快捷等优点,适用于大批量临床KD血清样品的TTR检测,为快速区分丙种球蛋白敏感型和无反应型的KD患儿提供了方法。     

抗酸杆菌荧光染色镜检的应用研究

目的对荧光显微镜检测抗酸杆菌的应用进行评价。方法5个结核病专业诊疗机构共收集2157份标本,每份标本均采用荧光染色（FS）、萋-尼染色（Z-N染色）镜检。其中1245份标本同时进行传统培养检查,并且以培养结果为最终的金标准,计算FS和Z-N染色镜检方法的敏感度、特异度和正确指数[正确指数-（敏感度＋特异度）-11（假阴性率＋假阳性率）]。所有结果采用SPSS17．0统计软件完成配对7。检验,以P〈O．05为差异有统计学意义。结果全部标本荧光染色镜检阳性率为10．8％（234／2157）,萋-尼染色镜检阳性率为8．8％（190／2157）,两种镜检方法阳性率差异有统计学意义（X2=25．473,P〈0．001）。初诊标本经荧光染色镜检的阳性率为15．9％（179／1127）,萋一尼染色阳性率为13．2％（149／1127）,荧光染色镜检检出抗酸杆菌的能力较萋尼染色高20．1％;两种镜检方法检查初诊标本的阳性率,差异有统计学意义（X2=18．000,P〈0．001）。同时完成涂片和培养的标本,荧光染色镜检阳性率13．8％（172／1245）,培养阳性率15．2％（189／1245）,两者比较差异无统计学意义（X2=2．173,P=0．140）。同时完成涂片和培养的初诊标本,荧光染色镜检阳性率16．4％（128／781）,培养阳性率19．7％（154／781）,分离培养阳性率较荧光染色阳性率高20．3％,差异有统计学意义（X2=7．861,P〈0．01）。荧光染色镜检的敏感度为60．3％（114／189）、特异度为94．5％（998／1056）,假阴性率为39．7％（75／189）、结果正确指数为0．548,萋-尼染色镜检相应指标分别是56．6％（107／189）,97．1％（1025／1056）,43．4％（82／189）和0．537。结论与萋一尼染色镜检比较,荧光染色镜检具有更高的敏感度和很好的特异度;能够提高工作效率,降低工作强度,适合在工作量较大、人力资源紧张的基层实验室开展。     

基于PGMY09/11引物的PCR法检测高危型HPV的效果观察

目的评估基于PGMY09/11引物的PCR法检测高危型人乳头瘤病毒（HPV）效果。方法采用HC II试剂盒和基于PGMY09/11引物的PCR技术检测感染HPV16的50份样品和感染HPV18的50份样品,样品模板DNA分别按照1∶1、1∶2、1∶4、1∶8和1∶16倍比稀释,比较2种方法检测的敏感性和一致性。同时采用HC II试剂盒和基于PGMY09/11引物的PCR技术检测感染单纯疱疹病毒（HSV）和沙眼衣原体（CT）的20份样品及单一感染HPV16和HPV18的10份样品,评估基于PGMY09/11引物的PCR检测HPV的特异性。结果 HC II试剂盒和基于PGMY09/11引物的PCR对1∶1、1∶2稀释的HPV16和HPV18的检出率均为100%;HC II对1∶4稀释的HPV16和HPV18的检出率为36%和46%,但不能检出1∶8和1∶16稀释的HPV16和HPV18样品;基于PGMY09/11引物的PCR对1∶4、1∶8和1∶16稀释的HPV16检出率分别为100%、90%和32%,对1∶4、1∶8和1∶16稀释的HPV18样品检出率分别为100%、86%和40%。HC II试剂盒和基于PGMY09/11引物的PCR对HPV16检测的整体一致性为84.1%（Kappa值为0.674）,对HPV18检测的整体一致性为81.7%（Kappa值为0.598）。基于PGMY09/11为引物的PCR方法不能检测HSV和CT合并感染。结论基于PGMY09/11为引物的PCR方法检测出高危型HPV具有较高的敏感性和特异性,与市售HC II试剂盒检测结果具有较高一致性,可用于HPV感染诊断。     

中东呼吸综合征冠状病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种快速、敏感、特异的实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法,用于中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)的检测。方法根据中东呼吸综合征冠状病毒S蛋白基因的保守序列设计并合成一对引物及一条特异性TaqMan探针。通过条件优化,以10倍系列稀释重组质粒为标准品,进行Real-time PCR扩增,绘制标准曲线,并进行重复性、准确性、特异性及敏感性检测。结果建立的Real-time PCR方法检测中东呼吸综合征冠状病毒所绘制标准曲线的相关系数0.99,灵敏度为1.00×101拷贝,高于常规PCR方法(1.00×102拷贝);用该方法检测中东呼吸综合征冠状病毒基因为阳性,其他6种对照呼吸道病原体及冠状病毒基因检测均呈阴性;批内、批间重复试验的变异系数均1%。结论建立的中东呼吸综合征冠状病毒Real-time PCR检测方法灵敏、特异、重复性好,可用于中东呼吸综合征冠状病毒感染的快速诊断和流行病学调查。     

血清嗜酸性粒细胞阳离子蛋白与儿童变应性鼻炎严重程度的相关性

目的探讨儿童变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）患者血清中嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（eosinophil cationic protein,ECP）的水平及其与疾病严重程度的关系。方法 119例吸入性AR患者、22例健康对照组采用UniCAP100系统进行吸入物变应原过筛试验检测Phadiatop并检测血清ECP、血清总IgE（TIgE）、血清特异性IgE（sIgE）水平以及嗜酸粒细胞（EOS）计数,对119例吸入性AR患者进行症状评分。结果吸入性AR组与对照组的血清TIgE分别为（479.77±68.70）和（69.27±17.90）IU/ml;血清ECP分别为（29.36±3.18）和（13.66±1.86）ng/L;外周血EOS计数分别为（512.32±246.72）和（256.32±184.23）细胞/mm3;sIgE：屋尘螨分别为（46.95±3.37）IU/ml和0,粉尘螨分别为（60.09±3.41）IU/ml和0,差异有统计学意义,P〈0.05。AR的严重程度与血清ECP之间无相关性。结论血清ECP水平,TIgE、sIgE和EOS计数在吸入性AR患者中明显高于对照组,对AR的发病有着至关重要的作用,但是不能准确反应疾病的严重程度。     

时间分辨荧光免疫分析法检测C反应蛋白方法的建立及应用

目的 制备4,7-（氯磺酸基苯基）-1,10-菲啰啉-2,9-二羧酸（BCPDA）鳌合剂,并以其建立时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术检测C反应蛋白（CRP）的方法.方法 用二甲基甲酰胺（DMF）溶解自制BCPDA后测定其吸光度;以BCPDA分别标记铕（Eu3＋）、CRP多克隆抗体制备CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3＋荧光标记物;以纳米磁珠为固相载体包被CRP单克隆抗体,分别加入CRP抗原及CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3＋,应用六合一板式检测仪检测CRP荧光强度.结果 自制BCPDA吸收光谱为220～360 nm, 用337 nm 的紫外光激发得到CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3＋的荧光发射光谱, 利用TRFIA可检测到0.1 mg/L 的CRP抗原.结论 本研究成功制备CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3＋荧光标记物并建立了TRFIA检测CRP的方法,此为临床检测CRP提供了新的思路,亦为TRFIA的推广应用提供了理论依据.     

血吸虫病时间分辨免疫荧光检测试剂盒的研制和效能评价

目的研制日本血吸虫SjP38的时间分辨免疫荧光分析(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒,并评价其效能。方法将抗SjP38的9G7单克隆抗体作为捕获抗体包被96孔板,Eu~(3+)标记1A6单克隆抗体作为检测抗体,研制SjP38 TRFIA试剂盒,并评价试剂盒的准确度、灵敏度、精密度、稳定性以及与病原学检测方法的符合率等指标。结果自制试剂盒准确度好,线性范围为2~1 250 ng/ml,最低检出浓度为0.14 ng/ml;精密度良好,分析内精密度为3.6%~4.6%,分析间精密度为5.1%~6.7%。定性试验表明该试剂盒可在4℃稳定半年,37℃稳定7 d。自制试剂盒与病原学检测方法的阳性符合率为95%,阴性符合率为100%。结论所研制试剂盒的各项性能及检测指标均达到临床检验的要求,但临床推广使用还有待进一步的验证。