BL21（DE_3）／PET－11做为人IL－2表达系统的研究

ＢＬ２１（ＤＥ_３）／ＰＥＴ－１１做为人ＩＬ－２表达系统的研究公茂凯，章静波，刘德培，张世馥刘丕旭，董敏（中国医学科学院中国协和医科大学北京基础医学研究所，北京１００００５）关键词白细胞介素２，ＢＬ２１（ＤＥ_３），聚合酶链反应中图号Ｒ３９２。１２白细...     

IL—2／IL—2R系统与慢性HBV感染

白细胞介素2(IL-2)/白细胞介素2受体(IL-2R)系统在T淋巴细胞活化增殖过程中起着非常重要的作用。目前已经证实慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染存在着一定程度的细胞介导免疫功能缺陷。     

IL-21编码基因的克隆及其在大肠杆菌中表达

①目的 利用基因工程技术从人偏桃体细胞CDNA中克隆出白细胞介素21（IL-21）的编码基因，并在大肠杆菌中进行表达。②方法 以人扁桃体细胞经PHA刺激的CDNA文库为模板，经PCR获得IL-21的全基因片段。测序确认后，分别设计含BamH I和SalI酶切位点的引物，经PCR获得IL-121成熟肽的编码基因。将此IL-21基因插入表达载体PGEX4T-2，重组克隆经酶切与测序确认后转化大肠杆菌DH5α进行IPTG诱导表达。③结果 琼脂糖凝胶电泳显示重组质粒的PCR和双酶切产物与理论值的大小相等。SDS-PAGE显示经IPTG诱导后的大肠杆菌DH5α亦表达一与理论相符的条带。目的蛋白约占总菌体蛋白的10%。④结论 成功地构建了IL-21编码基因克隆载体并获得的大肠杆菌中的成功表达。     

鼻咽癌患者IL—2活性及IL—2R表达的测定

本实验检测了15例鼻咽癌患者放射治疗前后及正常人的IL-2活性及IL-2R表达能力,结果发现鼻咽癌病人IL-2活性及IL-2R表达均明显地低于正常人。且在放疗后进一步下降。     

人白细胞介素—9cDNA的PCR扩增及其在大肠杆菌的表达

利用ＰＣＲ技术从人外周血Ｔ细胞ｃＤＮＡ文库中扩增出人ＩＬ－９的ｃＤＮＡ，将其连入大肠杆菌表达载体后，可大大肠杆菌高效表达出人重组ＩＬ－９融合蛋白，表达量占菌体蛋白的２５％左右，有明显的刺激正常人骨髓细胞集落形成的活性。     

直肠癌患者血清中IL—2和SIL—2表达的研究

目的 对直肠癌患者血清中白细胞介素－２（ＩＬ－２）和可溶性白细胞－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）进行检测。方法 对ＩＬ－２和ＳＩＬ－２Ｒ的检测均采用ＥＬＩＳＡ双抗夹心法。结果 直肠癌患者手术前和手术后１０￣２０ｄ血汪肿ＩＬ－２含量明显低于正常对照组，而ＳＩＬ－２Ｒ含量则显著高于正常对照组。其手术前与术后１０￣２０ｄ血清中ＩＬ－２和ＳＩＬ－２Ｒ表达相比较经统计学处理无明显差异。结论 本研究提示，直肠癌患者采     

乙肝疫苗接种后无（弱）应答者IL—2活性水平研究

为探讨乙肝疫苗接种后无弱应答的发生机制,在以往流行病学研究的基础上,对２０ 例无（ 弱） 应答者的ＩＬ－ ２活性水平进行了检测。结果无弱应答者的ＩＬ－ ２ 活性水平为（７４ ．５ ±２１ ．４） ,明显低于强应答者的（２９８ ．０ ±５０ ．３）（ Ｐ＜ ０ ．０１） ;且在强应答者中发现,接种乙肝疫苗后的抗－ ＨＢｓ 滴度与ＩＬ－ ２ 活性水平呈正相关,表明无（ 弱） 应答的发生除与接种条件、宿主的一般因素有关外,还与体内的ＩＬ－ ２ 活性水平有关     

带瘤小鼠淋巴细胞IL—2产生和IL—2R表达的改变

采用H_(22)肝癌小鼠模型研究了带瘤小鼠淋巴细胞IL—2产生和IL—2R表达的改变。实验证实,带瘤小鼠淋巴细胞IL—2产生、IL—2R表达及二者结合反应均明显低于正常小鼠。这一研究对于阐明带瘤宿主免疫功能低下的机理具有重要意义。     

CD3AK细胞加IL—2治疗恶性肿瘤体外与临床应用研究

ＣＤ３ＡＫ细胞在体外对体外癌细胞系细胞杀伤活性最强，对自体细胞杀伤活性与ＴＩＬ细胞接近，且均显著大于ＬＡＫ细胞，ＣＤ３ＡＫ细胞ＩＬ－２治疗癌症患者３０例中，ＣＲ＋ＰＲ１４例，有效率为４６％，Ｋｅｒｎｏｆｓｋｙ的生活质量标准评分治疗后有显著提高（Ｐ〈０．０１），血浆ＩＬ－２活性治疗后有明显提高（Ｐ〈０．０５），Ｔ４／Ｔ８治疗后有所提高。     

人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

目的：构建人CIDE-3基因的原核表达载体，并在E．coli BL21（DE3）中表达．方法：提取人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞的总RNA，经RT—PCR扩增人CIDE-3基因片段，并将其克隆入原核表达载体pET28a（＋）中，构建重组质粒pET28a（＋）-CIDE-3.经限制性内切酶Bam H I、Xho I双酶切鉴定及序列测定后，转化E．coli BL21（DE3），经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白．     

肾小球疾病患儿外周血IL—2活性水平及IL—2受体表达的研究

观察急性肾炎和肾病综合征患儿外周血白细胞介素－２（ＩＬ－２）活性及Ｔ细胞白细胞介素－２（ＩＬ－２）表达。结果：（１）肾病患儿肾病期ＩＬ－２活性及ＩＬ－２Ｒ均下降，并与疾病的活动性有关；（２）肾病患儿ＩＬ－２活性变化与ＩｇＧ含量变化呈正相关，提示ＩＬ－２活性下降可能是低ＩｇＧ血症的原因之一；（３）急性肾炎患儿在急淋期淋巴细胞产生ＩＬ－２及表达ＩＬ－２Ｒ的能力均降低，而未经ＰＨＡ刺激的淋巴细胞ＩＬ－２     

肺外结核患者血清IL—2及sIL—2R检测的意义

通过检测ＩＬ２及ｓＩＬ２Ｒ，了解肺外结核患者的免疫功能及与肺结核患者免疫功能的区别。采用双抗体夹心ＥＬＳＡＳ法分别测定了３０例肺结核和２８例肺外结核患者血清中的ＩＬ２及ｓＩＬ２Ｒ水平，并在抗结核化疗３个月后再次测定，结果显示肺外结核患者血清ＩＬ２明显低于肺结核患者（Ｐ＜０００１），而其ｓＩＬ２Ｒ却明显高于后者（Ｐ＜０００１）；经抗结核化疗３个月后肺外结核患者血清中的ＩＬ２明显升高而ｓＩＬ２Ｒ明显降低，与肺结核患者同期相比无显著差异（Ｐ＞００５）。由此可见Ｔ细胞活化后ｓＩｌ２Ｒ表达增强作为免疫封闭因子，是造成肺外结核免疫功能低下的主要原因