前列腺素E2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

目的：探讨前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）mRNA表达的影响。方法：将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol/L）的PGE2分别处理2、8、24、48h,使用Trizol抽提总RNA,通过半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）来观察人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达强度变化。结果：10^-9～10^-6mol/LPGE2在2～24h可上调人牙周膜成纤维细胞RANKL mRNA的表达,但抑制OPGmRNA的表达,且RANKL/OPG比率呈上升趋势。结论：PGE2有可能通过调节人牙周膜成纤维细胞的RANKL/OPG mRNA表达比例,从而间接地调节破骨细胞的分化和活性。     

IL-1β对人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响

目的:以体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)为研究对象,观察不同浓度的白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化剂配体(RANKL)mR-NA表达的影响。方法:组织块法体外原代培养HPDLF并鉴定,以第5代HPDLF作为实验靶细胞,分别用不同浓度(0、0.01、0.1、1、10、100 ng/mL)的IL-1β进行干预,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HPDLF中OPG、RANKL mRNA的表达。结果:IL-1β在0.01～10 ng/mL浓度范围内能明显上调HPDLF中OPG mRNA的表达(P<0.05),并在0.1 ng/mL时上调作用达到最大(P<0.05)。此后,随着IL-1β浓度的增加,OPG mRNA的表达量逐渐减少。IL-1β在0.01～100 ng/mL浓度范围内均可明显上调HPDLF中RANKL、RANKL/OPGmRNA的表达(P<0.05),且呈剂量依赖性,即随着IL-1β浓度增加,HPDLF中RANKL、RANKL/OPG mRNA的表达也逐渐增加,各浓度组两两比较除10 ng/mL与100 ng/mL相比无显著性差异外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-1β可促进HPDLF中RANKL mRNA的表达,上调RANKL/OPG mRNA的比值。     

miR-223调控人牙周膜成纤维细胞中RANKL表达的功能初探

目的：探讨miR?223对人牙周膜成纤维细胞中核因子?κB受体活化因子配体（ RANKL）的调控作用。方法：构建过表达miR?223的人牙周膜成纤维细胞,Western blot及实时定量RT?PCR检测人牙周膜成纤维细胞内RANKL和骨保护素（ OPG）的表达,计算RANKL／OPG比值的改变。结果：过表达miR?223的人牙周膜成纤维细胞,RANKL的表达明显下调,RANKL／OPG比值下降。结论：miR?223可调控RANKL的表达,破坏RANKL／OPG比例的平衡,改变破骨细胞的微环境,影响破骨细胞分化。     

重组人白介素-1α对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG影响的荧光定量RT-PCR研究

目的：通过观察重组人白介素-1α（rhIL-1α）对体外培养人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）核因子kB受体活化因子配基（RANKL）和骨保护素（OPG）表达的影响来探讨牙槽骨改建的调节机制。方法：以不同浓度rhIL-1α（0、5、10、20μg/L）作用于体外培养HPDLFs,于24 h后收集细胞,利用荧光定量RT-PCR技术检测RANKLmRNA和OPG mRNA的表达。结果：rhIL-1α同时上调HPDLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,但RANKL/OPG的比值增加,这种调节作用在10μg/L的作用浓度时最明显。结论：rhIL-1α可在体外影响HP-DLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,调节RANKL/OPG比值,与牙槽骨改建密切相关。     

MTA对牙周膜干细胞RANKL/OPG表达水平的影响

目的 探讨MTA对人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的影响。方法 通过酶消化法分离培养PDLSCs,依据碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性筛选最佳MTA刺激浓度,将PDLSCs分别于对照组（普通培养基）和2 mg/mL MTA条件培养液培养3 d和7 d后,蛋白免疫印迹法分别检测RANKL、OPG蛋白表达。结果 MTA刺激3 d和7 d组,OPG蛋白表达较对照组升高,RANKL蛋白表达较对照组降低。结论 MTA可通过调节RANKL/OPG系统,参与调节PDLSCs成牙/骨及破牙/骨活性。     

IL-17对人牙周膜成纤维细胞RANKL表达的影响

目的 观察IL-17对人牙周膜成纤维细胞RANKL表达的影响,探讨IL-17调控牙周炎骨改建的可能致病机制。方法 用不同浓度（0、10、25、50 ng/mL）的IL-17处理人牙周膜成纤维细胞。选择最佳刺激浓度,用该浓度的IL-17处理细胞不同时间（0、12、24 h）。通过实时定量RT-PCR和Western-blot的方法检测细胞中骨吸收相关因子RANKL的表达水平。结果 IL-17可显著提高人牙周膜成纤维细胞RANKL的表达水平,并随着浓度的提高和刺激时间的延长而增加。结论 IL-17可上调人牙周膜成纤维细胞的RANKL表达,提示IL-17可通过调控人牙周膜成纤维细胞骨吸收相关因子的表达参与牙槽骨的改建。     

内毒素刺激对体外培养人牙龈成纤维细胞表达OPG和RANKL的影响

目的:检测内毒素(LPS)刺激后,体外培养人牙龈成纤维细胞(HGFs)表达骨保护素(OPG)和核因子-kB受体活化因子配体(RANKL)的变化,探讨其对牙槽骨吸收的影响.方法:组织块法培养正常HGFs并鉴定来源,以5 μg/ml LPS刺激第4 代细胞,在0、6、12、24、48 h各时间点用免疫细胞化学方法检测OPG...     

中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞RANKL／OPG表达的影响

目的：探讨中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的影响。方法：将系列浓度的中间普氏菌培养上清作用于牙龈成纤维细胞,显微镜下观察细胞的变化。实时定量 RT-PCR法和 Western blot法分别检测 RANKL、OPG mRNA及蛋白水平的表达,并计算 RANKL/OPG的比值。结果：牙龈成纤维细胞的数量随中间普氏菌培养上清浓度的增加而减少,50μg/mL 时,显微镜下没有活细胞存在。在mRNA水平上和蛋白水平上,RANKL/OPG的比值在12．5μg/mL处理组均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论：中间普氏菌培养上清可诱导人牙龈成纤维细胞表达 RANKL 和 OPG,破坏 RANKL/OPG比例的平衡,影响破骨细胞分化的细胞因子微环境,在破骨细胞分化和牙周炎骨吸收中起着一定的调节作用。     

人健康和炎性牙槽骨成骨细胞COX-2、PGE2、OPG,RANKL的表达

目的：初步探讨COX-2、PGE2、OPG和RANKL在牙周炎发病机制中所起的作用及其相互关系。方法：采用组织块法对人健康和牙周炎性牙槽骨进行体外培养和传代,加入含100μg/LrhOPG的不含胎牛血清的DMEM2mL。严格按照ELISA试剂盒说明进行操作,获得各指标的检测数值。结果：牙周炎组RANKL、PGE2、COX-2的表达较健康组明显增高,OPG的表达较健康组明显降低。加入rhOPG后,牙周炎组RANKL、PGE2、COX-2的表达明显降低;OPG表达明显增加。健康组RANKL、PGE2、COX-2表达明显降低;OPG表达增加。结论：RANKL、PGE2、COX-2可促进牙周炎的发生、发展,而OPG对牙周炎的发生、发展可起抑制作用,同时表明人工重组OPG可能协同其内源性OPG来共同抑制RANKL、PGE2、COX-2的活性。     

A20对IL-17介导人牙周膜细胞RANKL表达影响

目的探究A20对IL-17调控人牙周膜细胞表面RANKL表达的影响。方法转染人牙周膜细胞(h PDLCs)A20siRNA、慢病毒,获得A20沉默/过表达h PDLCs,分为沉默组、正常组、过表达组,IL-17(50 ng/ml)刺激一定时间,ELISA,PCR,Western-blot检测RANKL表达。结果 A20沉默组的h PDLCs RANKL蛋白表达水平较正常对照组高,A20过表达组较正常对照组低,IL-17(50ng/ml)刺激下,A20沉默组较正常对照组RANKL表达水平高,过表达组较正常对照组低。结论本研究首次发现A20可能参与调控IL-17引起的h PDLCs RANKL表达。     

OPG/RANKL对骨改建的调控作用

通过破骨细胞对旧骨的吸收和成骨细胞的新骨形成,骨组织发生空间形态的改变,这种新骨替代旧骨的过程称为骨改建.绝经后的骨质疏松症和许多病变中骨改建率增加,但新骨形成不足,骨量减少,骨折几率增加.骨吸收依赖于被称为RANKL的细胞因子,而OPG与RANKL结合后,可阻止其单一同源受体RANK的活化.大量的体内和体外实验表明,RANKL与OPG的比例是影响骨吸收和骨改建的重要决定因素之一.     

雌激素受体β对牙周膜成纤维细胞RANKL表达的影响

目的：研究雌激素受体β（estrogen receptorβ,ERβ）对人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament,HPLF）核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）表达的影响。方法：采用基因干涉方法抑制了HPLF细胞中ERβ基因的表达,用雌激素干预ERβ抑制的和未抑制的HPLF细胞,研究细胞RANKL表达的情况。结果：雌激素明显降低了ERβ抑制的HPLF细胞RANKL的表达,但对ERβ未抑制的HPLF细胞RANKL的表达没有显著影响。结论：雌激素可能通过ERβ抑制牙周膜成纤维细胞RANKL的表达。     

骨化三醇对人牙周膜细胞维生素D受体、RANKL和骨保护因子表达的调节

目的 探讨骨化三醇(又称1α,25-二羟维生素D3,以下简称VD3)对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand,RANKL)和骨保护因子(osteoprotegerin,OPG)表达的调节作用及相关机制.方法 原代培养12个供体来源的hPDLC群,传代培养至第3代,分别以10-8 mol/L VD3(VD,组)和0.1%无水乙醇处理(对照组),6 d后用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测VDR、RANKL和OPG mRNA的表达水平.分析12个细胞群RANKL基因转录起始位点上游调控区DNA碱基序列.结果 VD3组与对照组相比,VDR mRNA表达水平显著上调(P=0.003),为对照组的(3.04±1.06)倍;RANKL mRNA表达水平显著升高(P=0.001),为对照组的9.82(0.75～119.18)倍;OPG mRNA表达水平为对照组的(94.48±39.15)%,P=0.136;OPG/RANKL比值显著下调(P=0.003),为对照组的10.36%(1.01%～138.00%).未发现RANKL基因上游调控区序列突变位点;-1832(m7984870,C/G)多态性位点基因型与RANKL mRNA的表达和调节之间无显著相关性.结论 在hPDLC中,VD3可以促进VDR mRNA的表达;VD3可显著上调RANKL mRNA的表达从而降低OPG/RANKL比值,而对OPG mRNA的表达水平影响较小.在VD3作用下,细胞群间RANKL mRNA表达的差异性可能与RANKL基因上游调控区碱基序列无关.     

低氧调控大鼠骨髓间充质干细胞OPG/RANKL mRNA的表达

目的:探讨低氧处理对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow derived mesenchymal stem cells,rBMSCs)骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κb受体活化因子配体(receptor activator of NF-κb ligand,RANKL)mRNA表达的影响.方法:采用全骨髓细胞贴壁法分离、培养rBMSCs,应用化学低氧剂氯化钴(CoCl2)建立低氧模型,分别以0、50、100、200、400μmol/L浓度的CoCl2孵育细胞,首先采用MTT法检测CoCl2对细胞增殖的影响;利用实时荧光定量PCR及Western免疫印迹检测低氧诱导因子1 α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达情况.rBMSCs经低氧处理0、12、24、48、72、96 h,实时荧光定量PCR检测OPG、RANKL mRNA的表达.采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析.结果:与对照组相比,200、400 μmol/L的CoGl2抑制rBMSCs增殖(P＜0.05),而50、100 μmol/L CoCl2实验组的增殖并未产生显著影响(P＞0.05).在50、100 μmol/L CoCl2实验组,rBMSCs表达HIF-1α的mRNA和蛋白水平均高于对照组,100 μmol/L CoCl2组较50 μmol/L CoCl2组高.100 μmol/L CoCl2孵育12h时,低氧组和对照组rBMSCs的OPG、RANKL mRNA的表达无变化(P＞0.05);24、48、72、96 h时,与常氧组相比,低氧组OPG mRNA表达水平升高,RANKL mRNA表达水平下降,OPG/RANKL的比值显著升高(P＜0.05).结论:100 μmol/L CoCl2低氧处理可通过调控rBMSCs OPG、RANKL mRNA的表达,从而促进成骨分化.     

实验性大鼠根尖周炎骨质破坏与RANKL／OPG关系的研究

[摘要]目的：观察核因子-κB受体活化因子配体（receptoractivatorfornuclearfactor-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprote—gerin,OPG）在大鼠根尖周炎发展各阶段表达的变化与根尖周病损发展之间的关系。方法：选取8周龄雄性Wistar大鼠,随机一侧下颌第一磨牙为实验组,对侧下颌第一磨牙作为对照组;术后1、3、7、14、21d处死动物,拍摄颌骨x线片,计算根尖周骨破坏面积;组织切片,免疫组织化学检测根尖周组织中RANKL、OPG的表达。结果：根尖周骨破坏面积自术后3d开始显著增大,21d达到峰值,呈时间依赖关系;RANKL的表达量在3d组明显增高,7d组表达量到达峰值,14d组开始下降;OPG的表达量在1d组即出现有显著性上升,3d组表达趋于平缓,21d组达峰值。RANKL、OPG的变化与根尖周病变发展的变化趋势有着显著相关性。结论：RANKL／OPG系统在根尖周炎炎症性骨质破坏机制中起重要调节作用。     

17β-雌二醇对人根尖牙乳头干细胞RANKL、OPG表达影响的研究

目的:探讨17β-雌二醇对人根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAPs)核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法:通过酶消化法分离培养SCAPs,将SCAPs分别于对照组(普通培养基+10μmol/L无水乙醇)和含0.1μmol/L17β-雌二醇的培养基培养3d和7d后,实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法分别检测RANKL、OPG mRNA和蛋白表达。结果:17β-雌二醇刺激3d和7d组,OPGmRNA和蛋白表达均较对照组升高(P<0.01),RANKL mRNA和蛋白表达均较对照组降低(P<0.01)。结论:17β-雌二醇可能通过调节RANKL/OPG系统,参与调节SCAPs成牙/骨及破牙/骨活性。     

罗红霉素对人牙周膜成纤维细胞TNF-α、IL-6释放的影响

目的:探讨罗红霉素对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)释放的影响。方法:采用ELISA方法,检测在不同剂量的罗红霉素作用下,脂多糖诱导的人牙周膜细胞中IL-6、TNF-α释放的变化。结果:LPS刺激后人牙周膜细胞TNF-α的释放显著高于正常对照组(360 pg/m l vs 80 pg/m l,3 h,P<0.05)。与L组相比,罗红霉素组(20μg/m l)TNF-α水平12 h显著降低,3~6 h与L组无明显差异,而12 h(520 pg/m l vs 710 pg/m l)、24 h(220 pg/m l vs 680 pg/m l)显著降低(P<0.05)。LPS组IL-6水平显著高于正常对照组(360 pg/m l vs 105 pg/m l,P<0.05),罗红霉素组(20μg/m l)IL-6分泌量在6 h(420 pg/m l vs 670 pg/m l)、12 h(590 pg/m l vs 810 pg/m l)和24 h(340 pg/m l vs 630 pg/m l)较L组均显著降低(P<0.05)。结论:罗红霉素能显著抑制LPS刺激后人牙周膜细胞IL-6、TNF-α的释放。     

肿瘤坏死因子对培养人牙周膜成纤维细胞c-fos表达的诱导作用

目的：深入探索肿瘤坏死因子对人牙周膜成纤维细胞的生物学功能影响的机制。方法：将５０００Ｕ／ｍｌ肿瘤坏死因子作用于培养至第三代的人牙周膜细胞３ｈ后，进行ＦＯＳ免疫组化反应。结果：几乎所有的ＰＤＬＦｓ核均染为棕黄色，为ＦＯＳ免疫组化反应阳性，对照组细胞核未见着色。结论：由于ｃ－ｆｏｓ的表达可以提示核内基因的进一步改变，因而从更深的层次上说明肿瘤坏死因子对牙周膜成纤维细胞的生物学功能的影响