温脾通络开窍法对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及海马Tau蛋白磷酸化表达的影响

目的探讨温脾通络开窍法对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学＊-7记忆及海马Tau蛋白磷酸化表达的影响。方法应用脑立体定位技术向大鼠右侧海马注射冈田酸制备AD大鼠动物模型,采用经典的Morris水迷宫实验,对AD大鼠动物模型进行筛选并观察温脾通络开窍法对AI）大鼠学习记忆障碍的改善作用,以及采用蛋白免疫印迹法检测AD大鼠海马组织Tau蛋白磷酸化总量。结果温脾通络开窍汤高、中剂量组AD大鼠逃避潜伏期、成功找到平台次数与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;温脾通络开窍汤高、中、低剂量组AD大鼠海马Tau蛋白磷酸化水平较模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论温脾通络开窍法对AD大鼠学习记忆障碍具有明显的改善作用,且可降低AD大鼠海马TaU蛋白异常磷酸化水平,这可能是其抗AD的作用机制之一。     

山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠GSK-3β和磷酸化GSK-3β的影响

目的 研究山茱萸多糖对阿尔茨海默病(AD)大鼠GSK-3β和磷酸化GSK-3β的影响,探讨其对AD大鼠的保护作用机制.方法 清洁级Wistar大鼠120只,随机分为青年组、假手术组、模型组、多奈哌嗪对照组、山茱萸多糖水提液组、山茱萸水煎剂组,每组20只.采用海马注射Aβ-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)制作AD大鼠模型,免疫组化(SABC)法和免疫蛋白印迹法检测GSK-3β蛋白和GSK-3β(Ser9)蛋白的表达水平.结果 与青年组、假手术组比较,模型组大鼠海马组织GSK-3β蛋白表达增加(P＜0.05),GSK-3β(Ser9)蛋白表达降低(P＜0.05);与模型组比较,多奈哌嗪对照组,山茱萸多糖水提液组,山茱萸水煎剂组大鼠的GSK-3β蛋白表达显著减少(P＜0.05),GSK-3β(Ser9)蛋白表达增加(P＜0.05).结论 山茱萸多糖通过抑制GSK-3β蛋白过度激活,促进GSK-3β(Ser9)蛋白表达途径防治AD的发生发展.     

通络救脑口服液对AD大鼠海马单胺氧化酶活性、脂褐素含量的影响

目的从单胺氧化酶(MAO)活性和脂褐素含量两个方面探讨通络救脑口服液对海马注射β-淀粉样蛋白1-40建立的老年性痴呆(AD)模型大鼠的治疗作用。方法采用大脑海马立体定向注射凝聚态β-淀粉样蛋白1～40(Aβ1～40)诱导老AD动物模型。药物干预4w后,用分光光度法检测大鼠海马MAO活性,用荧光分光光度法检测脂褐素的含量。结果与假手术组比较,模型组海马MAO活性和脂褐素含量均明显升高(P0.05);与模型组比较,通络救脑口服液低、中、高各剂量组MAO活性和脂褐素含量均明显降低(P0.05)。结论通络救脑口服液能降低Aβ1～40建立的AD模型大鼠海马MAO活性和脂褐素含量,对AD有一定的治疗作用。     

通络玉液汤对糖尿病大鼠大动脉管壁保护作用的机制

目的探讨通络玉液汤对糖尿病大鼠大动脉管壁保护作用的机制。方法选取SD大鼠72只随机分为正常对照4 w组、8 w组;糖尿病4 w组、8 w组;通络玉液汤4 w组、8 w组。酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组血清血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。结果糖尿病4 w组、8 w组较正常对照组VEGF、TNF-α水平明显增高(P0.01);通络玉液汤4 w组、8 w组较糖尿病组VEGF、TNF-α水平明显减少(P0.01);通络玉液汤4 w组、8 w组较糖尿病组血糖、血脂(除高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显升高外)明显降低(P0.05,P0.01)。结论通络玉液汤能明显改善大鼠糖尿病导致的大动脉管壁损伤,其机制可能与其抑制VEGF、TNF-α的合成,降低血糖、血脂有关。     

地黄益知浸膏对老年性痴呆大鼠海马磷酸化CREB、GSK-3β表达的影响

目的观察地黄益知浸膏（Dihuang Yizhi Jingao,DHYZJG）对老年性痴呆（AD）大鼠学习记忆能力及海马组织环磷酸腺苷反应单元结合蛋白（cyclic AMP response element-binding protein,CREB）、pCREB Ser133、糖原合成酶激酶（glycogen synthase kinase,GSK）-3β、pGSK-3βSer9表达的影响,探索其防治AD的可能机制。方法采用右侧海马注射β淀粉样肽（Aβ）25~35制备AD大鼠模型,用穿梭箱及水迷宫检测其学习记忆能力;应用免疫印迹法测定其CREB、GSK-3β的磷酸化水平。结果DHYZJG可剂量依赖性地改善AD大鼠的学习、记忆能力;与AD组相比,DHYZJG高剂量组海马pCREB Ser133水平显著增高（P〈0.01）,pGSK-3βSer9水平明显增高（P〈0.05）。结论DHYZJG可明显改善AD大鼠认知功能障碍,其机制可能与其上调海马CREB、GSK-3β蛋白的磷酸化水平有关。     

通络救脑口服液对AD大鼠海马CA3区超微结构及C-反应蛋白表达的影响

目的 观察通络救脑口服液对β-淀粉样蛋白_(1～40)(Aβ_(1～40))诱导的老年性痴呆(AD)模型大鼠海马CA3区超微结构及C反应蛋白(CRP)表达的影响.方法 140只SD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、阴性对照组、阳性对照组及3个实验组(12、24、48 mg·kg~(-1)·d~(-1)剂量组),共7组.采用大脑海马立体定向注射凝聚态Aβ_(1～40)诱导AD动物模型,药物干预4 w后,透射电镜观海马组织超微结构的变化,免疫组织化学染色和计算机图像分析技术测定海马区CRP阳性目标积分光密度.结果 电镜观察结果 显示:模型组大鼠海马变性,通络救脑口服液能改善大鼠海马神经元病理改变.与假手术组比较,模型组大鼠海马区CRP蛋白表达增高(P＜0.05);与模型组比较,通络救脑口服液低、中、高各剂量组CRP蛋白表达均显著降低(P＜0.05).结论 通络救脑口服液对AD模型大鼠脑内海马组织超微病理改变具有改善作用,并且能明显降低大脑海马组织CRP蛋白的表达,具有抗炎作用.     

通络玉液汤对糖尿病大鼠大动脉内皮细胞保护作用的机制研究

目的探讨通络玉液汤对糖尿病大鼠大动脉血管内皮细胞保护作用的机制。方法选取SD大鼠72只随机分为正常对照4周组、8周组;糖尿病4周组、8周组;通络玉液汤4周组、8周组。检测各组大鼠血清C-反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果糖尿病4周组、8周组与对照组同时间点比较IL-6、CRP明显增高、SOD明显降低(P0.01);通络玉液汤4周组、8周组与糖尿病组同时间点比较,IL-6、CRP明显减少、SOD明显增高(P0.01)。结论通络玉液汤能明显改善糖尿病导致的大动脉血管内皮细胞损伤,其机制可能与其抑制血管内皮细胞的慢性炎症反应及清除自由基有关,与用药时间长短无关。     

丁苯酞对AD大鼠模型海马BACE及NEP活性含量的影响

目的 探讨丁苯酞对AD大鼠模型海马组织β分泌酶(BACE)和中性内肽酶(NEP)活性含量的影响.方法 选用健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为4组,假手术组、模型组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组.采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导AD模型,灌胃时间为4周,以ELISA 法测定海马组织匀浆中β-分泌酶及中性内肽酶的活性含量.结果 用药组大鼠海马组织β-分泌酶的活性含量没有明显降低,与模型组之间差异无统计学意义(P>0.05);用药组大鼠海马组织中性内肽酶的活性含量明显升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),但丁苯酞低剂量组与高剂量组之间差异无统计学意义.结论 丁苯酞可以促进AD大鼠模型海马组织的中性内肽酶的活性含量,并可能通过促进其活性含量加速Aβ的降解,但对于β分泌酶却没有明显的影响.     

大豆异黄酮对Aβ25-35诱导的AD大鼠模型海马组织形态及超微结构的影响

目的研究大豆异黄酮对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病（AD）大鼠模型海马组织形态及超微结构的影响。方法采用Aβ25-35双侧海马注射的AD大鼠模型,分组后给予不同剂量大豆异黄酮,HE染色及透射电镜观察大豆异黄酮对海马组织形态及超微结构的影响。结果HE染色显示,模型组大鼠海马CA1～CA4区及齿状回神经元数量较假手术组明显减少,可见较多的神经细胞胞质浓染,核固缩。大豆异黄酮及雌激素治疗组神经元数量较模型组增多,胞质浓染神经元少见。透射电镜下,模型组海马CA1区神经元较少,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体缩小,核膜完整,核染色质电子密度增强。大豆异黄酮治疗组大鼠海马CA1区异常神经元较模型组明显减少。结论大豆异黄酮能有效地改善Aβ25-35所致AD大鼠海马神经元丢失。     

三棱莪术汤对膝骨关节炎大鼠的影响及作用机制

目的 探讨三棱莪术汤对膝骨关节炎大鼠模型的影响及作用机制。方法 将72只SD大鼠随机分为对照组、模型组、塞来昔布组及三棱莪术汤20、40、80 mg/kg剂量组。除对照组,另外5组建立膝骨关节炎软骨损伤模型,造模成功后塞来昔布组及三棱莪术汤各剂量组给予相对应的药物干预,对照组和模型组给予相同体积的生理盐水。连续灌胃3个月后测定大鼠机械痛阈和热刺激潜伏期,进行关节炎症积分和光镜软骨检测(Mankin)评分;测定膝关节软骨组织中含半胱氨酶的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)1、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3 mRNA和蛋白表达水平;组织匀浆后检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(INF)-γ、白细胞介素(IL)-17表达水平。结果 塞来昔布组、三棱莪术汤不同剂量组大鼠机械痛阈、热刺激潜伏期明显高于模型组,关节炎症积分、Mankin评分明显低于模型组(P<0.05);随着三棱莪术汤剂量的增加大鼠机械痛阈、热刺激潜伏期逐渐提升,关节炎症积分、Mankin评分逐渐降低。塞来昔布组、三棱莪术汤不同剂量组Caspase1、NLRP3 mRNA和蛋白表达水平明显低于模型组,差...     

丹星通络汤对脑缺血大鼠大脑caspase-3蛋白表达的影响

目的 观察丹星通络汤对局灶性脑缺血大鼠大脑caspase-3蛋白表达及形态学的影响,探讨丹星通络汤对脑缺血再灌注（I/R）损伤的保护作用机制。方法 40只大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、丹星通络汤大剂量组和小剂量组,采用大鼠I/R模型,应用免疫组化方法观察各组caspase-3表达阳性细胞数,HE染色观察各组大鼠脑组织形态学变化。结果 与模型组相比,治疗组caspase-3表达阳性细胞数均降低（P〈0.05）;与尼莫地平组相比,丹星通络汤大剂量组caspase-3表达阳性细胞数降低（P〈0.05）。结论 丹星通络汤可能通过抑制caspase-3蛋白的表达,而对脑I/R损伤起保护作用。     

通络玉液汤对2型糖尿病心肌病大鼠心功能及心肌结构的影响

目的探讨通络玉液汤对糖尿病心肌病(DC)大鼠心肌的治疗作用及其机制。方法采用高糖高脂饮食+小剂量链脲佐菌素腹腔注射的方法复制2型DC大鼠模型。将48只大鼠随机分为正常对照组、DC组、通络玉液汤4 w组、通络玉液汤8 w组。分别处理4 w和8 w后,BL-420生物机能实验系统测定各组大鼠左心室功能指标;测定大鼠空腹血糖(FBG)、血清中肌酸激酶(CK)及超氧化物歧化酶(SOD)活性的改变,左室重量指数(LVMI)和心脏重量指数(HWI)的变化,透射电镜观察心肌细胞的超微结构。结果与DC组比较,用药组大鼠左心室收缩末压(LVSP)、左心室等容收缩期压力最大上升速率(+dp/dt max)、左心室等容收缩期压力最大下降速率(-dp/dt max)的数值明显升高(P0.01),左心室舒张末压(LVEDP)值明显下降(P0.01),FBG、CK水平明显降低(P0.01),SOD活性明显上升(P0.01,P0.05),LVMI和HWI数值明显下降(P0.01),心肌超微结构损伤明显减轻,且通络玉液汤8 w组效果优于通络玉烫汤4 w组。结论通络玉液汤可通过抗氧化作用,改善心功能,减轻心肌损伤,且随干预时间的延长,治疗效果更加显著。     

通络玉液汤对2型糖尿病心肌病大鼠心功能及心肌纤维化的影响

目的探讨通络玉液汤对2型糖尿病(T2DM)心肌病大鼠心肌损伤的治疗作用及其机制。方法采用高糖高脂饮食+小剂量链脲佐菌素腹腔注射的方法复制T2DM心肌病大鼠模型。将48只大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病心肌病组、苯那普利阳性药物对照组、通络玉液汤组。分别处理8 w后,测定大鼠空腹血糖(FBG)水平,超声多普勒检测心功能,Masson染色测定心肌胶原含量,免疫组化、实时定量RT-PCR法分别观测心肌转化生长因子(TGF)-β1蛋白、基因的表达。结果与糖尿病心肌病组比较,各治疗组左心室收缩末期内径显著减小(P0.05)、射血分数及短轴缩短率显著升高(P0.01),FBG水平显著下降(P0.01),TGF-β1基因、蛋白的表达显著减弱(P0.01,P0.05),心肌间质纤维化程度显著减轻,以通络玉液汤组治疗效果最为显著。结论通络玉液汤可降低血糖,并通过降低TGF-β1表达来减轻糖尿病心肌病心肌损伤,改善心功能。     

黄芩茎叶总黄酮对AD大鼠模型海马神经元超微结构的影响及抗氧化作用

目的 探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对AD大鼠模型学习记忆功能、海马神经元超微结构变化的影响及抗氧化作用.方法　采用Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力,电镜观察海马神经元的超微结构;检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量.结果 模型组大鼠2 min内穿越平台区域的次数较对照组明显减少(P<0.01),在平台象限停留的时间明显减少(P<0.01),给药组大鼠穿越平台区域的次数较模型组明显增多(P<0.05),在平台象限停留的时间较模型组明显延长(P<0.05).对照组海马神经元超微结构正常,模型组损伤严重,给药组较模型组损伤减轻.模型组SOD、CAT、GSH-Px含量较对照组明显降低(P<0.05),给药组较模型组明显升高(P<0.05).结论 SSTF对海马注射Aβ_(25-35)引起大鼠学习记忆能力降低及海马神经元超微结构损伤具有保护作用.其机制可能是增强大鼠体内抗氧化酶活性,从而减少活性氧对神经元的损伤.     

抑制GSK-3β减轻大鼠急性心肌缺血/再灌注损伤的作用

目的:评估糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）抑制剂TDZD-8减轻大鼠急性心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)的作用,并探讨此作用是否与其下调NF-κB、抑制炎症有关。方法: 取健康雄性SD大鼠60只,随机分为缺血/再灌注(I/R)组、I/R+TDZD组、I/R+载体(Vehicle,V)组及假手术（Sham）组。大鼠局部心肌缺血30 min,再灌注3 h。用TTC染色计算心肌梗死面积,HE染色及ELISA法评估心肌组织中中性粒细胞浸润及炎性因子(TNF-α和IL-6)的变化;用Western blot测定心肌组织中NF-κB、GSK-3β磷酸化的水平。结果: TDZD-8能明显降低心肌梗死的面积和心肌组织中性粒细胞浸润、抑制NF-κB激活以及心肌源性TNF-α和IL-6的浓度(P<0.01)。结论: GSK-3β抑制剂TDZD-8能够减轻MIRI,其作用可能与其抑制NF-κB的激活及炎症反应有关。     

金思维对Aβ42所致AD模型大鼠海马CA1区GAP-43表达的影响

目的 观察金思维对β淀粉样蛋白(Aβ)所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马CA1区GAP-43异常表达的影响.方法 应用凝聚态Aβ1-42在大鼠海马内注射以建立动物模型.造模3 d后采用Morris水迷宫法筛选学习记忆积分异常者,纳入药物实验.给药4周后,取脑冷冻切片,采用免疫组化法和计算机图像分析技术测定海马CA1区GAP-43阳性神经元数目,采用Image-Proplus显微图像分析系统测定海马CA1区GAP-43阳性细胞的免疫反应产物的光密度(OD)值.结果 给药4周后,金思维组海马CA1区GAP-43阳性细胞数升至77.06个±14.66个,不仅显著高于模型组的52.33个±28.45个(P＜0.01),而且与多奈哌齐组(51.26个±22.44个)相比亦有统计学意义(P＜0.01).但金思维组海马CA1区GAP-43阳性细胞OD值(75.44±5.29)与多奈哌齐组(73.09±5.18)相比无统计学意义(P＞0.05).结论 金思维可使Aβ所致AD模型大鼠海马CA1区GAP-43的表达量增加,为金思维提取物促神经生长提供了新的证据.     

通络玉液汤对2型糖尿病心肌病大鼠心肌形态结构和氧化指标的影响

目的探讨通络玉液汤对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌形态结构和氧化指标的影响。方法采用高糖高脂饮食+小剂量链脲佐菌素腹腔注射的方法复制DCM模型。将36只大鼠随机分为3组:正常对照组、DCM组、通络玉液汤组。分别处理8 w后,测定大鼠空腹血糖(FBG)、血清丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,左室重量指数(LVMI)和心脏重量指数(HWI),光镜及透射电镜观察心肌细胞形态结构。结果与正常对照组比较,DCM组FBG、MDA水平明显升高,SOD活性明显下降,LVMI和HWI明显增大(均P<0.01),心肌细胞肌原纤维排列紊乱、断裂、溶解,线粒体肿胀变性,嵴、膜断裂、缺失。与DCM组比较,通络玉液汤组FBG、MDA水平明显下降,SOD活性明显上升,LVMI和HWI明显下降(均P<0.01),病理改变明显减轻。结论通络玉液汤可降低血糖,对抗脂质过氧化反应、改善DCM心肌损伤。     

Aβ诱导海马神经元调亡的机制及补肾方的调控作用

目的 探讨Aβ诱导海马神经元凋亡的机制及补肾方的药效。方法 原代培养的大鼠海马神经元经Aβ1-42处理后,FDA与PI双染判断神经元存活率,Hoechst33258染色、TUNEL检测神经元凋亡,免疫细胞化学观察Caspase-3表达,Northern Blot、RT-PCR研究凋亡相关基因怕表达。结果 神经元经Aβ1-42处理后,活细胞数减少,染色质浓缩、核碎裂,TUNEL染色阳性神经元增多,Caspase-3表达增加,bcl-2的mRNA表达减少,而bax与c-jun表达增加、c-fos的表达变化不明显。补肾方可明显改善上述变化。结论 Aβ通过对凋亡相关基因表达的调控并经Caspase-3途径引起神经元凋亡。补肾方可抑制Aβ诱导调亡。     

脑通汤对缺氧/复氧大鼠海马神经元Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的探讨脑通汤对缺氧/复氧(H/R)大鼠海马神经元Bcl-2、Bax和半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达的影响及防治海马神经元凋亡的作用机制。方法取培养9 d的海马神经元,随机分为正常细胞组、H/R模型组、正常血清组、脑通汤大、中、小剂量含药血清组。除正常细胞组以外,各组均缺氧24 h再复氧2 h造模。采用免疫组化检测海马神经元Bcl-2、Bax蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3基因的表达。结果免疫组化显示:与正常细胞比较,模型组Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达明显升高、Bcl-2/Bax比值下调(P0.05)。与模型组比较,脑通汤大、中、小剂量含药血清组Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值明显增高,Bax蛋白表达明显下降,呈剂量依赖性(P0.05);但正常血清组上述指标无显著变化(P0.05)。实时荧光定量PCR显示:Bcl-2、Bax mRNA趋势同蛋白表达一致,Caspase-3 mRNA趋势同Bax mRNA表达一致。结论脑通汤可通过上调Bcl-2蛋白及基因表达和Bcl-2/Bax比值,抑制Bax及Caspase-3的过度表达,从而抑制H/R海马神经元凋亡。