尼美舒利联合表阿霉素对人膀胱癌EJ细胞的体外作用

目的:探讨尼美舒利对人膀胱癌EJ细胞的体外作用及其与表阿霉素的协同抗肿瘤作用。方法:通过MTT法检测尼美舒利及其与表阿霉素联合对EJ细胞的生长抑制作用,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI荧光染色法检测EJ细胞在尼美舒利作用下的凋亡率,免疫组化SP法检测尼美舒利对EJ细胞中Bcl-2和Bax表达的影响。结果:40μmol/L尼美舒利作用24、48、72h细胞生长抑制率分别为15.18%、30.79%和43.50%;浓度360μmol/L时,抑制率分别升为50.45%、70.98%和88.67%。单用表阿霉素(0.2mg/L)作用48h抑制率为25.51%;合用40、120、400μmol/L尼美舒利抑制率升为58.52%、69.38%和80.30%。40、120、400μmol/L的尼美舒利作用12h时细胞的凋亡率为2.41%、8.27%和15.05%,作用36h时凋亡率分别升为13.32%、27.60%和42.48%。随着尼美舒利浓度增加,EJ细胞中Bcl-2表达下调,Bax的表达上调(P<0.05)。结论:尼美舒利可能通过下调Bcl-2表达和上调Bax表达来抑制人膀胱癌EJ细胞的增殖并诱导其凋亡,...     

尼美舒利联合阿霉素对胃癌MGC803细胞的体外作用

目的:探讨尼美舒利联合阿霉素对胃癌MGC803细胞的协同作用。方法:通过MTT法和流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI荧光染色法检测不同浓度的尼美舒利及其与阿霉素联合对胃癌MGC803细胞的生长抑制作用和凋亡率。结果:25μmol/L尼美舒利作用24h、72h细胞生长抑制率为10.90%和32.52%;浓度400μmol/L时,抑制率升为39.90%和91.78%。单用阿霉素(0.25mg/L)作用48h抑制率为28.56%,合用25、400μmol/L尼美舒利抑制率升为68.50%和89.30%。100μmol/L尼美舒利作用6h时细胞的凋亡率为5.67%,作用24h时凋亡率升为29.60%。结论:尼美舒利能抑制胃癌MGC803细胞的增殖并诱导其凋亡,与阿霉素具有协同作用。     

尼美舒利联合阿霉素对胃癌MGC803细胞的体外作用

目的：探讨尼美舒利联合阿霉素对胃癌MGC803细胞的协同作用。方法：通过MTT法和流式细胞仪Annexin V-FITC/PI荧光染色法检测不同浓度的尼美舒利及其与阿霉素联合对胃癌MGC803细胞的生长抑制作用和凋亡率。结果：25µmol/L尼美舒利作用24h，72h细胞生长抑制率为10.90%和32.52%；浓度400µmol/L时，抑制率升为39.90%和91.78%。单用阿霉素(0.25mg/L) 作用48h抑制率为28.56%；合用25、400µmol/L尼美舒利抑制率升为68.50%和89.30%。100µmol/L尼美舒利作用6h时细胞的调亡率为5.67%，作用24h时调亡率升为29.60％。结论：尼美舒利能抑制胃癌MGC803细胞的增殖并诱导其凋亡，与阿霉素具有协同作用。     

大蒜素对人胃癌MGC803细胞体外作用的研究

目的 探讨大蒜素对人胃癌MGC803细胞的作用.方法 MTT法检测MGC803细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期改变和免疫组化SP法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果 2μg/ml大蒜素作用24h、72h后细胞的生长抑制率为14.01%±2.36%和50.57%±7.01%;浓度8μg/ml时抑制率升为35.42%±5.55%和89.66%±19.92%.2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素作用于MGC803细胞24h后G0/G1期细胞比率明显下降,而G2/M期比率明显上升.经2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素处理后MGC803细胞的bcl-2蛋白表达明显下调,bax蛋白的表达明显上调.结论 大蒜素能通过诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期来抑制癌细胞的生长增殖.其机制可能与下调bcl-2和上调bax蛋白表达诱导癌细胞调亡有关.     

不同浓度吗啡与5-氟尿嘧啶联合应用对MCF-7乳腺癌细胞Bcl-2、 Bax表达的影响

目的:研究吗啡与5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合应用对MCF-7乳腺癌细胞Bcl-2、Bax表达的影响.方法:药物作用48 h后通过Western Blot检测Bcl-2、Bax表达情况.结果:Bcl-2表达情况:未处理组最强.单独应用吗啡时,250 μmol/L及1 250 μmol/L引起Bcl-2表达减弱.单独应用500 μmol/L 5-Fu时Bcl-2表达减弱.与5-Fu联合应用,随其中吗啡浓度的增加,Bcl-2表达逐渐减弱,且均具有协同作用.Bax表达情况:未处理组最弱.单独应用吗啡时,250μmol/L及1 250 μmol/L引起Bax表达增强.单独应用500 μmol/L 5-Fu时Bax表达增强.与5-Fu联合应用,随着吗啡浓度的增加,Bax表达逐渐增强,且均具有协同作用.结论:一定浓度的吗啡、5-Fu及联合应用于MCF-7乳腺癌细胞48 h能下调Bcl-2表达、上调Bax表达,且与其中吗啡的浓度有一定的剂量依赖关系,两药联合应用具有协同作用.     

紫杉醇与顺铂联合化疗对宫颈鳞癌细胞株HCE1作用的实验研究

目的 观察紫杉醇加顺铂联合化疗在宫颈鳞癌细胞株HCE1中的协同效应,指导进一步临床应用.方法 (1)培养宫颈鳞癌细胞株HCE1,观察活细胞生长情况并摄片.(2)实验分组及检测:①终浓度为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L的紫杉醇培养HCE1细胞;②终浓度为20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml顺铂培养HCE1细胞;③紫杉醇联合顺铂培养HCE1细胞,通过MTT比色法检测培养24 h、48 h、72 h后细胞增殖活力,并计算细胞生长抑制率;流式细胞仪分别检测24 h、48 h、72 h三个不同时间点的细胞凋亡发生率,并分析细胞周期改变.结果 (1)紫杉醇处理后凋亡细胞明显增多,细胞缩小变圆,细胞膜出泡等.(2)经终浓度分别为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L紫杉醇处理HCE1细胞24 h时,细胞抑制率分别为(9.5±0.66)%、(17.1±1.51)%、(33.3±1.77)%,48 h时,细胞抑制率分别为(28.0±2.27)%、(45.2±3.15)%、(66.0±2.95)%,72 h时,细胞抑制率分别为(39.4±2.81)%、(66.2±7.02)%、(81.5±1.78)%;经终浓度分别为20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml顺铂处理HCE1细胞24 h时,细胞抑制率分别为(3.6±0.56)%、(6.5±0.98)%、(14.1±2.52)%,48 h时,细胞抑制率分别为(6.5±0.46)%、(9.9±1.35)%、(20.0±3.05)%,72 h时,细胞抑制率分别为(14.1±3.05)%、(42.1±3.90)%、(59.4±4.26)%;联合处理组以48 h 20 μmol/L紫杉醇联合20 μg/ml顺铂对HCE1细胞的增殖抑制作用为例,细胞增殖抑制率为(30.2±3.34)%,综上可见紫杉醇和顺铂以时间和剂量依赖性特点抑制宫颈癌细胞的增殖,紫杉醇联合顺铂对人宫颈癌HCE1细胞的增殖抑制具有协同作用.(3)流式细胞仪细胞周期分析表明,紫杉醇处理组G1期细胞比例有所增加,S期细胞比例明显降低,顺铂处理组G1期细胞比例明显降低,反之S期细胞比例明显升高,紫杉醇联合顺铂处理组G1期细胞比例和S期细胞比例介于紫杉醇处理组和顺铂处理组之间.以20 μmol/L紫杉醇作用HCE1细胞48 h为例,G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(86.0±3.01)%、(9.1±0.66)%,40 μg/ml顺铂作用HCE1细胞48 h G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(2.1±0.26)%、(92.2±6.24)%,20 μmol/L紫杉醇联合40 μg/ml顺铂作用HCE1细胞48 h G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(13.2±0.78)%、(80.5±2.46)%.(4)细胞凋亡分析表明,紫杉醇处理组细胞凋亡率较对照组升高,呈时间和剂量依赖性特点;顺铂处理组细胞凋亡率较对照组也升高,呈时间和剂量依赖性特点;紫杉醇联合顺铂处理组细胞凋亡率较单药处理组高.结论 紫杉醇与顺铂联合对宫颈癌细胞的抑制作用明显增强,提示紫杉醇可与顺铂对宫颈癌细胞增殖的抑制产生协同作用.     

大蒜素对人胃癌MGC803细胞体外作用的研究

目的探讨大蒜素对人胃癌MGC803细胞的作用。方法MTT法检测MGC803细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期改变和免疫组化SP法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果2μg/ml大蒜素作用24h、72h后细胞的生长抑制率为14.01%±2.36%和50.57%±7.01%;浓度8μg/ml时抑制率升为35.42%±5.55%和89.66%±19.92%。2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素作用于MGC803细胞24h后G0/G1期细胞比率明显下降,而G2/M期比率明显上升。经2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素处理后MGC803细胞的bcl-2蛋白表达明显下调,bax蛋白的表达明显上调。结论大蒜素能通过诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期来抑制癌细胞的生长增殖。其机制可能与下调bcl-2和上调bax蛋白表达诱导癌细胞调亡有关。     

ZD6474对伊马替尼耐药的K562细胞增殖的影响

目的 探讨酪氨酸激酶抑制剂ZD6474(Vandetanib)对K562细胞及其衍生的伊马替尼耐药的K562/G细胞的增殖抑制作用及其分子机制.方法 通过逐渐增加药物浓度的方法诱导伊马替尼耐药的K562/G细胞株,采用Western blot方法检测耐药细胞株中明显变化的分子.WST方法检测伊马替尼和ZD6474对细胞增殖的影响,流式细胞术检测药物对细胞周期的影响.采用RT-PCR、Western blot和体外Src激酶卣接测定的方法研究ZD6474作用的分子机制.结果 伊马替尼对K562细胞的IC50值为(0.28 4-0.04)μmol/L,而对K562/G细胞的IC50值为(15.80±0.93)μmol/L,K562/G细胞的耐药倍数为56倍,Western blot结果提示其耐药机制与磷酸化Src激酶(p-Src)的表达增强,Bcl-2和磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达升高有关.ZD6474呈剂量依赖的方式抑制K562和K562/G细胞增殖,48 h的IC50值分别为1.61 μmol/L和3.18 μmol/L.ZD6474作用24 h,可以显著诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡.分子机制研究显示,ZD6474显著抑制Src激酶活性,上调Bax/Bcl-2的比例,以及下调p-STAT3表达.结论 ZD6474可以有效抑制伊马替尼耐药的K562/G和亲本K562细胞增殖,诱导凋亡.其机制与ZD6474显著抑制Src激酶活性有关.     

环靶明对前列腺癌PC3细胞株生长的影响及其作用机制研究

目的 观察环靶明(Cyclopamine)对体外培养的人前列腺癌PC3细胞株增生、细胞周期及凋亡率的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法不同浓度环靶明处理体外培养的前列腺癌PC3细胞后,用MTT法检测药物处理24,48和72 h后的细胞增殖活性; 流式细胞仪检测药物处理72 h后的细胞周期分布和细胞凋亡率; Real-time RT-PCR 法检测用药后细胞Gli1,Bax和Bcl-2 mRNA的表达变化。结果 经5,10和15 μmol/L的环靶明处理后,PC3细胞的生长抑制率明显升高,且与药物浓度高低和作用时间长短呈一定正相关关系; 环靶明作用于PC3细胞72 h后,15 μmol/L环靶明组G0/G1期细胞数量增加,S期、G2/M细胞数量下降; 5,10和15 μmol/L环靶明组的细胞凋亡率分别为7.54%±1.19%,12.47%±2.11%和24.15%±3.40%,与对照组相比,差异具有统计学意义(t=5.414,7.159,10.413,均P<0.05)。明还可在转录水平下调Bcl-2 mRNA和上调Bax mRNA的表达,促进细胞凋亡。结论 环靶明可抑制PC3细胞生长,其作用机制可能与阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关。     

大蒜素对LM-8细胞Bcl-2及Bax表达的影响

背景:有研究证实,大蒜素对LM-8细胞增殖及凋亡有影响.目的:观察大蒜素干预C3H小鼠骨肉瘤细胞株LM-8细胞Bcl-2、Bax凋亡蛋白的表达,以及LM-8细胞的形态学变化与Bcl-2及Bax变化的关系.设计:随机分组,非盲法,细胞水平体外实验.单位:实验于2006-09/2007-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成.材料:实验所用C3H小鼠LM-8骨肉瘤细胞株购自解放军第四军医大学实验动物中心.大蒜素为武汉汇海公司产品,是从大蒜球茎中分离出的硫化物.Cell Counting Kit-8试剂购于上海同仁化学研究所,Bcl-2和Bax抗体及SP试剂盒购于福州迈新生物技术开发公司.方法:以含体积分数为0.1新生牛血清的1640完全培养基,培养LM-8细胞,制作细胞爬片.SP免疫细胞组织化学技术检测细胞爬片中Bcl-2和Bax蛋白表达;倒置显微镜下观察5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度大蒜素作用前后LM-8细胞形态变化;将LM-8细胞调整至7.5×107L-1接种于96孔板,用1.0,5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度的大蒜素处理细胞,设立不加任何处理因素的对照组及不含细胞和药物的培养基空白组,孵育24,48,72 h后取出培养板,加入CCK-8测定吸光度值,计算LM-8细胞生长抑制率:以5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度大蒜素干预LM-8细胞24,48,72 h,消化离心收集细胞,以流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化.主要观察指标:LM-8细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达;LM-8细胞形态及增殖、凋亡情况.结果:①Bcl-2和Bax蛋白表达:大蒜素可以降低Bcl-2表达,增强Bax表达,经15.0mg/L大蒜素作用72h,Bcl-2和Bax蛋白表达阳性率及Bcl-2/Bax表达与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).②LM-8细胞的形态:经不同质量浓度大蒜素干预后均出现明显凋亡表现.③LM-8细胞的增殖:大蒜素能明显抑制LM-8细胞的增殖,当大蒜素浓度从1.0 mg/L增加到15.0 mg/L,LM-8细胞72 h时生长抑制率由(23.87±3.26)%增至(58.32±5.38)%,在72 h其药物半数抑制率浓度是11.09 mg/L.④LM-8细胞的凋亡:5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度的大蒜素作用72 h后可诱导LM-8细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P＜0.05).结论:①大蒜素可抑制LM-8细胞增殖,该效应与大蒜素的浓度和时间有关.②大蒜素可诱导LM-8细胞凋亡,作用呈浓度依赖性.③大蒜素抑制LM-8细胞增殖和诱导LM-8细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达有关.     

Akt特异性抑制剂MK2206诱导U937及RS4;11细胞凋亡及其机制

目的:本研究探讨Akt激酶抑制剂MK2206对U937及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:以不同浓度MK2206处理U937及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;Annexin V/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记法分析细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测Bax、Bcl-2、XIAP、CDK1、caspase-3基因mRNA表达的变化。结果:MK2206对U937及RS4;11细胞增殖具有抑制作用,且抑制效应呈一定的时间和剂量依赖性,U937细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.48±0.15)和(0.09±0.01)μmol/L,RS4;11细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.91±0.02)和(0.68±0.11)μmol/L。0.5μmol/L MK2206作用于U937细胞及1.0μmol/L MK2206作用于RS4;11细胞24 h、48 h,Annexin V/7-AAD标记的阳性细胞升高,U937细胞组24 h细胞凋亡率为(4.18±0.70)%,48 h细胞凋亡率为(22.53±4.67)%,均高于对照组的(1.35±0.34)%(P0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P0.05);RS4;11细胞组24 h和48 h细胞凋亡率分别为(5.74±0.58)%和(10.07±1.24)%,均高于对照组的(1.32±0.31)%(P0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P0.05)。流式细胞术检测细胞周期结果显示,U937细胞组G2/M期细胞比例为(96.78±9.11)%,高于对照组的(9.64±0.91)%(P0.05);RS4;11细胞组G2/M期细胞比例为(14.19±3.82)%,高于对照组的(5.75±1.28)%(P0.05)。荧光定量PCR检测结果示,两种细胞中Bax、caspase-3 mRNA相对表达水平升高,而Bcl-2、XIAP表达水平降低,同时伴CDK1 mRNA水平的减少,与各自对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:MK2206能有效抑制U937及RS4;11细胞增殖及促进细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调Bax与caspase-3基因表达、下调Bcl-2与XIAP基因表达有关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平下降有关。     

三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞促凋亡作用的体外实验

目的 探讨三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞(HCSMC)的促凋亡作用机制及其对损伤动脉再狭窄防治的意义.方法 将人冠状动脉平滑肌细胞传代培养,将细胞分为正常对照组、三氧化二砷(浓度分别为1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 μmol/L)组,通过原位细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL),流式细胞仪检测细胞周期观察三氧化二砷促细胞凋亡作用,WESTERN印迹检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化,RT-PCR检测三氧化二砷对E2F-1的作用.结果 随三氧化二砷浓度的增加它能够抑制HCSMC的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关(观察第7天、浓度为5.0 μmol/L时活细胞数为(4.41±0.10)×105/mL与正常对照组(30.11±0.93)×105/mL相比较差异具有统计学意义(P＜0.05),TUNEL可见凋亡细胞由16.0%±3.1%增至38.7%±2.7%(P＜0.05),流式细胞仪可见4.0 μmol/L三氧化二砷作用HCSMC 48 h后代表细胞凋亡的亚二倍体峰在48 h为最多,WESTERN印迹可见三氧化二砷上调凋亡促进基因Bax的表达而下调凋亡抑制基因Bcl-2表达.RT-PCR可见E2F-1 mRNA表达于48 h最少(P＜0.05).正常对照组均不见典型上述变化.结论 三氧化二砷可促进HCSMC的凋亡,降低HCASMC转录因子E2F-1 mRNA表达,从而抑制HCASMC的过度增殖、迁移和黏附.     

藏红花素对缺氧环境下Wistar大鼠视网膜Müller细胞活性和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 观察不同浓度藏红花素对缺氧条件下RMC活性和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法 改良Reichenbach等方法原代培养Müller细胞,并采用GFAP和Vimentin染色鉴定RMC.RMC培养基中加入终浓度10 μmol/L、50 μmol/L和100 μmol/L藏红花素,于1~7 d计数细胞,于24 h和48 h台盼蓝染色测定细胞活性,对照组RMC培养基中未加入藏红花素.培养液中加入终浓度为200 μmol/L的CoCl2建立化学缺氧模型.实验分4组:缺氧组(H组)、藏红花素处理组(C组)、缺氧+藏红花素处理组(HC组)和正常对照组(NC组),其中C和HC组培养液中加入10 μmol/L藏红花素.处理24 h,台盼蓝染色检测细胞活性,采用Western blot法半定量检测GFAP的表达.结果 含10 μmol/L和50 μmol/L藏红花素的培养液中,细胞生长无抑制;100 μmol/L 藏红花素的培养液中细胞增生受到抑制,培养24 h和48 h RMC活性分别为(68±7)%、(59±9)%,与对照组相比,明显降低(t24h=3.723,P<0.05;t48h=4.103,P<0.05).在缺氧条件下,正常细胞和10 μmol/L 藏红花素的培养液中细胞活性受到明显抑制,藏红花素可减轻缺氧环境对细胞活性的抑制作用.在缺氧条件下,GFAP表达明显升高(t=2.945,P<0.05);藏红花素可部分抑制GFAP高表达(t=3.362,P<0.05).结论 缺氧能诱导体外培养视网膜Müller细胞死亡,适合浓度藏红花素可抑制缺氧诱导的视网膜Müller细胞死亡.     

冬凌草甲素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1的作用研究

目的探讨冬凌草甲素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1的抗白血病效应及其作用机制。方法以急性单核细胞白血病细胞株THP-1为研究对象,应用改良四甲基偶氮唑盐法测定4、6、8μmol/L浓度冬凌草甲素处理72 h后THP-1细胞的增殖抑制率,以及计算2、4、6、8、10μmol/L冬凌草甲素处理24、72、120 h后的细胞生存率并绘制生长曲线;显微镜下观察4、6、8μmol/L冬凌草甲素处理24 h后THP-1细胞的形态学变化;采用流式细胞术检测0、4、6、8μmol/L冬凌草甲素处理24 h后THP-1细胞凋亡率;采用Western blot法检测6μmol/L冬凌草甲素处理THP-1细胞0、12、24 h后Akt/m TOR、Raf/MEK/ERK细胞信号转导通路的变化,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果 14、6、8μmol/L冬凌草甲素处理72 h后细胞增殖抑制率分别为(20.02±11.15)%、(45.99±12.76)%、(86.39±9.18)%,与4μmol/L冬凌草甲素比较,6、8μmol/L冬凌草甲素处理后细胞增殖抑制率均升高,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);冬凌草甲素处理72 h后细胞半抑制浓度为(6.12±1.48)μmol/L;细胞生长曲线显示,冬凌草甲素对THP-1细胞的生长抑制作用呈时间和浓度依赖性。2冬凌草甲素处理24 h后,THP-1细胞出现凋亡,形成凋亡小体,浓度越高细胞凋亡小体形成越多。30、4、6、8μmol/L冬凌草甲素(分别设为对照组及4、6、8μmol/L组)处理24 h后,THP-1细胞凋亡率分别为(3.7±1.1)%、(16.2±3.3)%、(30.1±4.3)%、(49.5±6.7)%,对照组与各浓度组凋亡率比较差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);与4μmol/L组比较,6、8μmol/L组凋亡率均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。4经Western blot法检测6μmol/L冬凌草甲素处理THP-1细胞24 h后可抑制细胞内Akt/m TOR、Raf/MEK/ERK信号转导通路的活化,并下调Bcl-2、上调Bax的表达。结论冬凌草甲素通过抑制Akt/m TOR、Raf/MEK/ERK信号转导通路的活化,以及调节凋亡调节蛋白Bax和Bcl-2的表达而发挥抗白血病效应。     

MicroRNA-21调控口腔鳞癌细胞顺铂耐药及其作用机制

目的:探讨micro RNA-21(mi RNA-21)在人口腔鳞癌顺铂耐药细胞中的表达及其作用机制。方法 :采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测mi RNA-21在口腔鳞癌细胞株Tca8113及顺铂耐药细胞株Tca8113/DDP的表达;采用体外转染法将mi RNA-21模拟物(mimics)或抑制物(inhibitor)分别转染Tca8113和Tca8113/DDP细胞,采用RT-PCR检测转染前后细胞中mi RNA-21的表达情况;采用CCK8实验检测转染前后细胞对顺铂敏感性的变化;并用Western blot检测转染前后细胞中PTEN的表达变化。采用双荧光素酶报告基因验证mi RNA-21是否作用于PTEN基因的3’-UTR区预测靶位。结果:mi RNA-21在Tca8113/DDP细胞中的表达水平是Tca8113细胞的(8.26±1.37)倍(P<0.01)。Tca8113细胞转染mi RNA-21 mimics后,细胞中mi RNA-21表达水平是转染前的(10.51±2.18)倍(P<0.01),顺铂对Tca8113细胞增殖的抑制率较转染前明显下降(P<0.05),细胞内PTEN表达水平较转染前明显下降(P<0.05)。Tca8113/DDP细胞在转染mi RNA-21 inhibitor后,细胞中mi RNA-21表达水平是转染前的(0.32±0.14)倍(P<0.01),顺铂对Tca8113/DDP细胞增殖的抑制率与转染前比较明显增加(P<0.05),细胞内PTEN表达水平较转染前明显增高(P<0.05)。经双荧光素酶报告基因验证PTEN是mi RNA-21的靶基因。结论:mi RNA-21在口腔鳞癌顺铂耐药细胞Tca8113/DDP中异常高表达,下调其表达可部分逆转细胞耐药性,mi RNA-21可能通过作用于PTEN参与口腔鳞癌细胞顺铂耐药的发生和发展。     

橙皮苷抑制人舌癌Tca8113细胞体外增殖的实验观察

目的: 橙皮苷对舌癌细胞株 Tca-8113的杀伤效果观察。方法：将舌癌细胞株 Tca-8113分别加入10，20，40，80，100μmol/L橙皮苷，放入培养箱中孵育72h。采用MTT 法测定各孔吸光度值( A) 并比较肿瘤细胞的生长抑制率。结果：随着橙皮苷的浓度的升高，对Tca8113细胞的抑制率也越高 (r=0.904，P<0.05)，IC50为84.42mol/L。结论：橙皮苷对舌癌细胞具有明显的抑制效应，且呈浓度依赖性。     

西妥昔单抗体外增强人鼻咽癌细胞对紫杉醇化疗敏感性的实验研究

目的 观察西妥昔单抗(C225)体外增强人鼻咽癌CNE-1细胞对紫杉醇(PTX)化疗敏感性作用,并探讨可能的作用机制。方法 将人鼻咽癌CNE-1细胞株随机分为对照组、PTX组、联合用药组,PTX组采用30μg/ml PTX处理,联合用药组采用30μg/ml PTX+250μg/ml C225处理,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO)。MTT法检测细胞的PTX耐药性,取对数期的CNE-1细胞分为9组,4组分别加入浓度为0. 01μmol/L、0. 1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L的PTX;另有4组也加入PTX,同时加入C225,使C225最终浓度为250μg/ml,空白对照组中加入等体积的DMSO,培养48 h。MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布,Western blotting、RT-PCR分别检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、BCL2-相关X蛋白(Bax)蛋白水平及其基因相对表达量。结果 PTX组CNE-1细胞抑制率为(15.99±2. 13)%,联合用药组CNE-1细胞抑制率为37. 10%(37. 10±2. 48)%,差异有统计学意义(t=11.184,P=0.000)。与对照组相比,PTX组、联合用药组的细胞凋亡率、G0～G1期细胞比率均升高(P 0. 05),而S期细胞比率降低(P 0. 05)。与PTX相比,联合用药组的细胞凋亡率、G0～G1期细胞比率升高(P0. 05),S期细胞比率与M期细胞比率均明显降低(P 0. 05)。MTT检测PTX耐药性结果显示,空白对照组、C225组细胞的细胞活性随着PTX浓度增加而降低,空白对照组、C225组CNE-1细胞的PTX IC50分别为4. 179μmol/L、0. 25μmol/L。与对照组相比,PTX组、联合用药组Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平与基因相对表达量均明显降低(P 0. 05),而Bax蛋白水平与基因相对表达量均明显升高(P 0. 05)。与PTX相比,联合用药组Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平与基因相对表达量均明显降低(P 0. 05),而Bax蛋白水平与基因相对表达量均明显升高(P 0. 05)。结论 在PTX化疗的基础上增加C225处理,可以促进PTX对人鼻咽癌CNE-1细胞的增殖抑制作用以及促凋亡作用,降低细胞的CNE-1细胞的PTX IC50,增强CNE-1细胞对PTX敏感性。     

静脉移植人脐血单个核细胞与心肌梗死家兔心肌细胞凋亡及凋亡基因bcl-2、bax

背景:研究表明经冠状动脉或经心肌内脐血干细胞移植可促进心肌梗死区血管新生、减低心肌梗死范围和改善心功能等,但脐血干细胞静脉移植对心肌细胞凋亡的影响尚不清楚.目的:观察人脐血单个核细胞静脉移植对急性心肌梗死心肌细胞凋亡及凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:45只成年家兔随机分3组:移植组15只,于急性心肌梗死后24h,经耳缘静脉注入2x107BrdU标记人脐血单个核细胞悬液500 μL;对照组15只,于急性心肌梗死后24h,同途径注入生理盐水500μL;假手术组15只,左前降支穿线不结扎,术后24h同途径注入生理盐水500 μL.移植后1,2,4周超声检测心功能;移植后4周心肌组织切片苏木精-伊红染色观测心肌病理变化;脱氧核糖核酸末端转移酶介导末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;免疫组化法检测心肌BrdU阳性细胞及Bcl-2、Bax蛋白在心肌细胞表达水平.结果与结论:①与对照组比较,移植组心功能显著改善.②移植组梗死周边区存在BrdU阳性细胞.③与对照组比较,移植组Bcl-2蛋白水平显著升高,Bax蛋白水平显著降低.④移植术后4周移植组心肌细胞凋亡数显著低于对照组.实验证实经静脉移植人脐血单个核细胞可迁移至急性心肌梗死周边区:调控急性心肌梗死后心肌细胞Bcl-2及Bax蛋白表达水平,抑制梗死周边区域心肌细胞凋亡,并改善心肌梗死后心功能.     

川芎嗪对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡反应的影响

目的研究川芎嗪对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的体外动脉粥样硬化(AS)样损伤内皮细胞抗凋亡蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白Bax表达的影响,为川芎嗪临床应用提供新的理论及实验依据。方法 ox-LDL(50 mg/L,12 h)诱导体外培养的人冠状动脉内皮细胞,加入川芎嗪(1和10μmol/L),Western blot检测川芎嗪对Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。结果 ox-LDL可抑制AS样损伤细胞模型Bcl-2蛋白的表达(与正常对照组比较,ox-LDL模型组Bcl-2与β-actin的相对光密度比值显著降低:0.33±0.08 vs.0.58±0.09,P<0.01),增加Bax蛋白的表达(ox-LDL模型组vs.正常对照组:0.67±0.10 vs.0.21±0.05,P<0.01);川芎嗪则可有效逆转上述病理改变[川芎嗪(1和10μmol/L)显著增加Bcl-2蛋白的表达:0.55±0.06,0.61±0.10,P<0.01;显著降低Bax蛋白表达:0.15±0.09,0.18±0.06,P<0.01]。结论川芎嗪靶向内皮细胞,抑制ox-LDL诱导的AS早期内皮细胞的凋亡反应,从而有效干预AS早期泡...     

重组腺病毒p53 上调凋亡调控因子通过凋亡通路增强胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性的体外研究

目的 探讨转染p53 上调凋亡调控因子(PUMA)的人脑胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性增强的作用机制.方法 将人脑胶质瘤细胞U87MG 分为正常对照组、空载体组和实验组进行培养,分别将感染复数(MOI) ＝50 的空载体腺病毒(Ad-△ BH3)和携带PUMA 的重组腺病毒(Ad-PUMA)转染U87MG 细胞,转染后用MTT 比色法测定各组细胞的存活率并计算替莫唑胺(TMZ)IC50,流式细胞仪检测细胞周期的变化,应用TUNEL 法检测细胞的凋亡情况.Western blot 检测凋亡相关蛋白p53、Bax 的表达.结果 外源性PUMA 基因在Ad-PUMA 转染U87MG 48 h 后,随着时间延长,PUMA 表达使U87MG 细胞的增殖能力降低并诱导凋亡,转染24 h、48 h、72 h 的生长抑制率分别为17.3%、35.6%、43.3%,凋亡率分别为20.3%、31.4%、45.4%.正常对照组、Ad-PUMA、Ad-△BH3 组细胞的TMZ IC50分别为(15.0 ±1.9)μmol/L、(2.3 ±0.1)μmol/L 和(14.4 ±1.6)μmol/L.PUMA 表达的U87MG 细胞DNA 合成受到抑制,周期阻滞在G2 期;Western blot 检测显示p53 表达在各组中差异无统计学意义(P ＞0.05)、PUMA 和Bax 在实验组中表达较对照组强,差异有统计学意义(P ＜0.01).结论 Ad-PU-MA 转染可有效增强人脑胶质瘤细胞U87MG 对TMZ 的敏感性,抑制人脑胶质瘤细胞U87MG 的增殖,通过诱导细胞G2 期阻滞促进其凋亡,促凋亡机制不依赖于p53.