新生大鼠纹状体神经元ATP敏感钾通道的特性

为确定纹状体神经细胞上存在ＡＴＰ敏感钾通道，用膜片钳技术在培养新生的大鼠纹状体神经元上记录了单通道电流。在细胞贴附式时，胞外给予ＮａＣＮ可诱发一种电导为６０ｐＳ的钾离子单通道，其激活不依赖于膜电位。去极化使通道平均开放时间和开放概率增大。     

新生大鼠纹状体神经元ATP敏感钾通道的特性

为确定纹状体神经细胞膜上存在ＡＴＰ敏感钾通道，用膜片钳技术在培养新生的大鼠纹状体神经元上记录了单通道电流。在细胞贴附式时，胞外给予ＮａＣＮ可诱发一种电导为６０ｐＳ的钾离子单通道，其激活不依赖于膜电位。去极化使通道平均开放时间和开放概率增大。在内面向外式时，ＡＴＰ或优降糖（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ）均可抑制通道活动，通道激活不依赖于胞内Ｃａ￣（２＋）。结果表明，大鼠纹状体神经细胞膜上存在一种６０ｐＳ的ＡＴＰ敏感钾通道。     

新生大鼠海马神经元原代培养及钾离子通道特性研究

目的建立大鼠海马神经元原代培养方法,记录钾电流并观察其特性。方法无血清培养法进行海马神经元原代培养,从形态学和电生理学方面鉴定细胞活性;全细胞膜片钳技术记录钾电流,从药理学和动力学观察钾通道特性。结果经5～7d培养,获得胞膜完整、胞质均匀的海马神经元,并记录到典型的全细胞电压依赖性钾电流(IK)、延迟整流钾电流(IKDR),IK和IKDR均为外向电流,激活电压分别为-50mV和-40mV,随着去极化程度增加而增加,能被已知的钾通道的阻断剂4-AP和TEA-Cl阻断,IK和IKDR的半数最大激活膜电位(V1/2)分别为(22.1676±2.1778)mV(n=6)和(17.8457±1.7767)mV(n=6),斜率因子(κ)分别为(-6.1541±3.0541)mV(n=6)和(-6.5193±2.1894)mV(n=6)。结论在该实验条件下培养的海马神经元形态和生理特性良好,较好的表达了电压依赖性钾离子通道特性,适合电生理研究。     

马桑内酯对锥体神经元ATP敏感钾通道的作用

目的　研究致痫剂马桑内酯 (CL)对大鼠海马锥体神经细胞膜 ATP敏感钾通道 (KATP)的影响及KATP在癫痫发病中的作用。方法　用膜片钳单通道电流记录和组织培养技术对锥体神经元 ATP敏感钾通道进行研究。结果　对称性高钾溶液条件下 ,KATP的翻转电位接近 0 m V,通道可被 TEA阻断 ;0 .5 mol/ L的 ATP可抑制通道活动 ;30μmol/ L的二磷酸核苷 (DNP)可使通道开放增多 ;其电流 -电压曲线可被直线拟合 ,通道电导值为78.2 3± 12 .0 4 p S。 CL可明显激活 KATP,优降糖能抑制激活的通道。结论　在 CL诱导的癫痫发作中 ,ATP敏感钾通道开放的作用是降低动作电位频率、保护神经元 ,可能起一种负反馈调节作用     

大鼠皮层神经元膜片钳单通道记录模型

介绍我室建立的大鼠大脑皮层神经元膜片钳单通道记录模型。方法：大鼠大脑皮层神经元急性分离和膜片单通道记录技术。结果：急性分离的皮层神经元经鉴定成活良好。记录的Ｌ，Ｎ－和Ｔ－型钙通道的单通道电活动与文献报道基本一致。结论：我室建立的膜片钳实验方法是可靠的。     

大鼠海马锥体神经元延迟整流钾电流的发育变化

目的 研究大鼠海马锥体细胞延迟整流钾电流(Ik)在出生后不同发育阶段的变化.方法 采用膜片钳全细胞记录模式比较3个不同年龄组,即出生后7～10天(P7-10组)、25～30天(P25-30组)和56～60天(P56-60组)Wistar大鼠急性分离的海马锥体神经元Ik的变化及通道动力学和药理学特征.结果 随着动物的发育,Ik的电流密度上调,由p-10的(32±13)pA/pF逐渐增加到P25-30的(54±20)pA/pF和P56-60的(70±18)pA/pF.随年龄增大,Ik的激活曲线左移,其半数最大激活电位(V1/2)由-12.2mV逐渐增加到-17.8 mv,而斜率因子无明显变化.四乙铵(TEA)可剂量依赖性地抑制Ik,其中P7-10组的Ik对低浓度的TEA(2和5mmol/L)较P25-30及P56-60组更敏感.结论 在大鼠海马锥体神经元的发育过程中Ik逐渐增加,并伴有通道激活动力学和药理学特性的改变.上述变化可能与海马锥体神经元的成熟以及认知功能的日益完善有关.     

G蛋白对阿片受体调节延迟整流钾通道的影响

目的观察G蛋白在阿片受体激动剂对钾通道的双相调节中所起的作用。方法利用膜片钳技术(patchclamp),采用全细胞记录方式,观察在电极液中分别加入G蛋白稳定抑制剂(GDPβS)、百日咳毒素(PTX)、二磷酸核苷酸激酶(NDPK)及环磷酸腺苷(cAMP)后,对阿片受体激动剂调节NG108-15细胞膜延迟整流钾通道作用的影响。结果(1)GDPβS能够阻断高浓度δ-阿片受体选择性激动剂(DPDPE)对钾电流的兴奋作用及低浓度DPDPE对钾电流的抑制作用(P<0.05)。(2)高浓度DPDPE对钾电流的兴奋性调节作用完全被PTX阻断(P<0.05),而霍乱毒素CTX对DPDPE对钾电流的双相调节作用无影响。(3)尿苷二磷酸(UDP)能够阻断NDPK对高浓度阿片受体激动剂对细胞膜钾通道兴奋性调节作用,而UDP对低浓度阿片受体激动剂的抑制作用无影响。(4)cAMP对高浓度阿片受体激动剂具有调节作用(P<0.05),而对低浓度阿片受体激动剂的抑制作用无影响。结论阿片受体对NG108-15细胞膜上延迟整流钾通道具有双相调节作用,其中高浓度激动剂引起的兴奋作用可能由Gi/o介导,并与cAMP有关,而其抑制作用可能是由G蛋白βγ亚单位直接作用。     

大鼠纹状体神经元型一氧化氮合酶神经元的分布和超微结构特征

目的 观察大鼠纹状体神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫阳性神经元的分布以及阳性神经元的超微结构特征.方法 取健康成年SD大鼠,ABC法显示nNOS免疫阳性神经元,包埋前染色方法对阳性细胞进行免疫电镜观察.结果 光镜下,nNOS免疫阳性细胞呈棕褐色,胞体及突起清晰,纹状体外侧区阳性细胞较多,内侧区较少.各区内阳性细胞以中、小型细胞为主,且大多数为中型细胞,小型细胞次之,大型细胞最少.透射电镜观察nNOS阳性神经元核大,胞浆少,呈中间神经元的特征;阳性颗粒呈黑色斑块样,在胞体内,可见小的阳性物质分布于胞核周围或者细胞膜内侧均无膜样结构包裹,大的团块样阳性物质主要存在于胞浆,有清晰的单层膜样结构包裹,亦可见部分无膜样结构包裹的大的阳性物质;在树突和轴突集中的部位亦可见免疫阳性物质,但并不在突起终末的囊泡内;脑组织内微血管壁旁的免疫阳性终末较多见,其突起毗邻血管外膜.结论 大鼠纹状体nNOS免疫阳性神经元以中、小型细胞为主,符合中间神经元的特征,nNOS阳性物质分布于胞质和突起,大块物质多有膜性结构包裹,小块和部分大块阳性物质以及位于轴树突内的无膜性结构包裹,这可能与其功能状态有关.     

肾上腺髓质瘤无性繁殖细胞的延时整流单钾离子通道

用片膜钳技术,在大鼠肾上腺髓质瘤无性繁殖细胞(PC12细胞)膜记录电压依赖性单钾离子通道活动:在细胞贴附式下去极化电流可激活一个电导为35～55皮西门(pS)的外向钾离子单通道。通道开放呈爆发型和快速闪动型,平均开放时间在0.5～20ms范围,其潜伏期随去极化程度增大而略变小。由撕开的膜片测得的翻转电位表明此通道选择性地让钾离于通过。通道在低钙(10 nmol/L自由钙离子)溶液中开放,增高胞浆侧钙离于浓度对通道开放无明显影响。20mmol/L四乙铵(TEA)可阻断该通道。在200ms的去极化脉冲中通道开放时间所占比例随去极化程度增大而增大,每20～30mV电位可使开放比率增高e(2.73)倍。在7～25秒长的去极化维持电位中,通道进入然后退出一个长时间的失活状态。以上结果表明,这类通道属于延时整流型钾通道。     

汉防己碱对大鼠皮层神经元钙通道的阻滞作用

在急性分离的大鼠大脑皮层神经元上,用膜片钳单通道记录技术研究汉防己碱（Ｔｅｔ）对电压依赖性钙通道的影响。结果表明,Ｔｅｔ７．５μｍｏｌ／Ｌ、１５μｍｏｌ／Ｌ和３０μｍｏｌ／Ｌ可浓度依赖性抑制大鼠皮层神经元膜Ｌ－和Ｎ－型电压依赖性钙通道,使其开放时间缩短,关闭时间延长,开放概率降低,从而降低钙内流,其对Ｌ－型钙通道的作用与钙通道阻滞剂Ｖｅｒａｐａｍｉｌ相似但较弱。Ｔｅｔ的多种药理作用可能与其阻滞通道     

吡拉西坦对海马神经元钙激活钾通道的作用

目的 研究吡拉西坦对原代培养海马神经元钙激活钾通道（KCa通道）的作用,以揭示吡拉西坦抗缺血性脑损伤的电生理机制。方法 应用膜片钳制技术记录原代培养的海马神经元的单通过电流活动,经p-CLAMP软件进行微机采样储存数据和数据的分析处理。结果 吡拉西坦对KCa通道具有明显的激活作用,增加通道开放概率,缩短通道关闭时间（P＜0．01）。结论 吡拉西坦可能通过激活KCa通道而对缺血神经元具有保护作用。     

1-磷酸鞘氨醇对豚鼠心室肌细胞单通道延迟整流钾电流的影响

目的： 观察1-磷酸鞘氨醇（S1P）对豚鼠心室肌细胞单通道延迟整流钾电流的影响,探讨S1P在室性心律失常中的作用。方法： Langendorff离体心脏逆向灌流法分离豚鼠心室肌细胞,随机选取心室肌细胞分为正常对照组、S1P(2.2 μmol·L^-1)组及S1P(2.2 μmol·L^-1)+Suramin（200 μmol·L^-1）组。应用细胞贴附式记录方式记录心室肌细胞延迟整流钾电流（I_K）。结果：细胞贴附式记录及通道动力学分析 ,S1P组心室肌细胞通道开放时间及开放概率明显低于正常对照组(P<0.05),关闭时间明显高于正常对照组（P<0.05）;S1P+Suramin组通道开放时间、开放概率以及关闭时间与正常对照组比较差异无显著性（P>0.05）。结论： S1P抑制心室肌细胞延迟整流钾电流外流,该作用通过缩短开放时间、延长关闭时间、降低开放概率实现,且通过膜受体介导。     

海马神经干细胞体外诱导分化过程中延迟整流钾通道的电生理特性

目的 研究大鼠海马源神经干细胞(NSC)分化前及其体外诱导分化的神经元样细胞在不同发育阶段延迟整流钾电流(IDR)的电生理特性.方法 利用无血清培养、单细胞克隆技术,体外培养SD大鼠海马组织源NSC.应用膜片钳技术全细胞模式记录IDR的电生理特性.结果 IDR的电流密度在NSC分化前和体外分化(DIV)0～6 d分别为45 pA/pF±4 pA/pF和56 pA/pF±10 pA/pF(+50 mV,标本数=9),而在DIV＞6 d的发育过程中保持稳定;IDR的半数最大激活膜电位(V1/2)在NSC分化前和DIV 0～6 d分别为9 mV±3 mV和12 mV±3 mV(标本数=9,P＜0.05),激活曲线右移,斜率参数K值无明显改变,但IDR激活特性在DIV＞6 d的发育过程中无明显改变;IDR的失活特性NSC分化前后及不同发育阶段的神经元样细胞中均无改变.结论 NSC分化/发育过程中,IDR的特性改变均发生在DIV 0～6 d,提示IDR通道在神经发育过程中发挥作用,且发育初始阶段对于细胞功能的成熟尤为重要.     

急性分离的大鼠海马及皮层神经元快速失活钾电流特性的比较

目的 探讨海马及皮层神经元细胞膜上快速失活钾通道的特性。方法 急性分离大鼠海马及皮层神经元;利用whole-cell膜片钳技术记录IA电流。结果 海马神经元上的IA通道电流幅度较皮层神经元大、潜伏期短。结论 海马神经元与皮层神经元上的IA电流特征存在差别。     

Effects of sodium ferulate on the ultrarapid delayed rectifier K^＋ current in human atrial myocytes

Objective To study the effects of sodium ferulate on the ultrarapid delayed rectifier K current(Ikur) in human atrial myocytes.MethodsHuman atrial myocytes were isolated by enzyme dispersion method. Ikur in human atrial myocytes were recorded by using the whole cell patch clamp. The changes of Ikur were compared in the absence and the presence of sodium ferulate. ResultsThere was no effect of 0.4 g/L sodium ferulate on I-V relation of Ikur However, 0.4 g/L sodium ferulate inhibited Ikur to some degrees at each test pulse. The current densities of Ikur at 60 mV decreased from 4.997 ± 0.35 PA/PF to 3.331 ± 0.26 PA/PF(n = 6, P ＜ 0.05). The inhibitory effect was concentration-dependent. IC50 was(0.41 ± 0.03)g/L and the Hill coefficient was 0.95 ± 0.05. ConclusionSodium ferulate as a potassium channel blocker can inhibit Ikur in human atrial myocytes effectively.     

UMR106细胞膜钾离子通道的记录及鉴定方法研究

目的 :建立一种研究大鼠成骨肉瘤细胞 (UMR10 6 )钾离子通道的方法。方法 :采用膜片钳技术 ,在细胞贴附方式下用内面向外的方法记录。并用TTX、CdCl2 分别阻断电压依赖性钠通道和钙通道。结果 :首次在URM10 6细胞上记录到一种电导为 8.79ps电压依赖性钾通道的通道电流。并观察了开放时间、关闭时间以及开放概率随电压的变化。结论 :通过使用钾通道阻断剂证实本方法记录的是一种电压依赖性内向整流型钾通道。     

罗比卡因对脊髓背角神经元钠电流特性的影响

目的 探讨酰胺类避麻药罗比卡因对脊髓神经阻滞作用的机制。方法 以全细胞膜片钳技术记录罗比卡因对急性分离新生ＳＤ鼠（０￣７ｄ）脊髓背角神经元钠电流的影响。结果 在电压钳的状态下（钳制电压Ｖｈ－８０ｍＶ，刺激电压Ｖｔ０ｍＶ），罗比卡因（１０－４００μｍｏｌ）对钠电流有抑制作用，且呈浓度依赖性，其ＩＣ５０为１１７．３２μｍｏｌ，明显高于相同电压钳条件下布比卡因的ＩＣ５０（５３．７０１μｍｏｌ）；罗比卡因     

应用膜片钳制技术对豚鼠耳蜗外毛细胞高电导钾通道电生理特性的研究

为了研究耳蜗外毛细胞的基本电生理特性，应用细胞膜片钳制技术对豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜的高电导的钾通道进行了初步研究。结果显示，其高电导钾通道有以下典型特征：①具有明显的电压依赖性。在膜去极化时，通道被激活，其去极化程度越高，通道活动越强。在非对称性钾浓度梯度下，其反转电位为－３０ｍＶ，斜率电导约１３３±３ｐＳ（ｎ＝５）；②通道活动能被特异性阻断剂四乙胺（ＴＥＡ）在较高浓度下（＞１０ｍｍｏｌ／Ｌ）阻断，ＴＥＡ的阻断效应呈浓度依赖性；③胞浆内钙浓度的增高，能显著激活该通道，增加其开放概率和平均开放时间。上述结果表明：豚鼠耳蜗外毛细胞存在着高电导的电压依赖的钙激活的钾通道。该研究为进一步开展通道活动的调控，以及药物等因素对通道活动影响的研究，提供了有价值的资料。