内质网应激介导的胎盘滋养细胞凋亡在妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限中的研究

目的探讨内质网应激介导的胎盘滋养细胞凋亡在妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限中的作用。方法选取37例妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限的孕妇为GDM+FGR组,同期产检的50例妊娠期糖尿病合并正常新生儿出生体重的孕妇为对照组,分析两组孕妇妊娠结局、胎盘功能、胎盘内质网应激指标GRP78、内质网应激转录因子CHOP、凋亡相关分子Bax及Bcl-2的mRNA及蛋白表达水平。结果 (1)与对照组相比,GDM+FGR组孕期血糖控制较差,易并发生妊娠期高血压疾病、胎儿宫内窘迫、剖宫产及新生儿窒息(P0.01);(2)GDM+FGR组血清胎盘泌乳素水平下降,S/D比值增高,胎盘功能明显下降(P0.01);(3)与对照组相比,GDM+FGR组GRP78、CHOP及Bax的mRNA及蛋白水平均明显升高,Bcl-2则显著下降(P0.01),GDM+FGR组存在明显内质网应激介导的胎盘滋养细胞凋亡。结论妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限的不良妊娠结局可能与内质网应激介导的胎盘滋养细胞凋亡密切相关。     

胎儿生长受限VEGFA和VEGFR2在胎盘中的表达

目的检测胎儿生长受限(FGR)患者胎盘血管内皮生长因子(VEGFA)及其受体(VEGFR2)的表达,终末绒毛微血管超微结构的改变。方法通过Realtime-PCR、Western-blot和免疫组化,检测FGR胎盘VEGFA和VEGFR2的表达;通过透视电镜分析FGR胎盘终末绒毛微血管的结构。结果 FGR组VEGFA和VEGFR2的mRNA水平(1.28±0.48)、(1.73±0.29)和蛋白水平(0.71±0.32)、(0.61±0.25)明显低于正常妊娠组(4.21±1.72)、(3.71±0.89)(P0.01);1.90±0.76、1.75±0.48(P0.01);免疫组化分析FGR组VEFGA和VEGFR2均为低表达;FGR胎盘终末绒毛微血管呈退行性变。结论 FGR患者胎盘VEFGA和VEGFR2水平显著下降,可能是导致FGR发病机制的一个重要因素。     

白细胞介素-1β在胎儿生长受限孕妇胎盘组织中的表达及其意义

目的:通过生物信息学分析筛选胎儿生儿受限(FGR)孕妇产后胎盘组织中的白细胞介素(IL)家族差异基因,并进一步研究该基因在FGR发生发展中的作用机制。方法:对GEO数据库中获得的芯片GSE147776进行差异表达基因分析。收集FGR患者胎盘组织(FGR组)和正常胎盘组织(NP组)各18例,检测两组胎盘组织IL-1β的表达水平,并分析IL-1β表达量与孕妇分娩孕周、新生儿出生体质量和身长的相关性。对HTR-8/Svneo细胞给予IL-1β或IL-1β+IL-1受体抑制剂(IL-1RA)处理后与对照组(NC组)比较细胞凋亡情况,并检测B细胞淋巴瘤(Bcl-2)和半胱天冬酶-3(Caspase-3)的表达水平。结果:(1)与NP组相比,FGR组新生儿出生体质量、新生儿出生身长、1分钟Apgar评分和5分钟Apgar评分均显著降低,差异有统计学意义((印)P(正)<0.05)。(2)生物信息学分析显示,与NP组比较,FGR组胎盘组织IL-1β表达量显著升高,且胎盘组织中IL-1β的表达量与孕妇分娩孕周、新生儿出生体质量和身长呈负相关关系((印)r(正)<0,(印)P(正)<0.05)。(3)IL-1β处理HTR-8/Svneo细胞后细胞凋亡率显著增加,与NC组、IL-1β+IL-1RA组比较,细胞中的Bcl-2蛋白及mRNA的表达显著下降((印)P(正)<0.05),而Caspase-3蛋白及mRNA的表达显著上升((印)P(正)<0.05)。结论:利用生物信息学分析筛选出FGR患者胎盘组织IL家族差异表达基因IL-1β,并证明FGR患者胎盘组织中IL-1β表达显著升高,且IL-1β参与了胎盘滋养细胞的凋亡。     

肝脏组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路参与降低胎儿生长受限大鼠的胰岛素敏感性

目的 探讨肝脏组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinosital 3-kinase/protein kinase B,PI3-K/AKT)信号通路在胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)大鼠胰岛素敏感性降低中的作用. 方法 母鼠受孕后第1天始随机分为对照组和低蛋白组,各10只.低蛋白组孕鼠采用低蛋白饮食法(粗蛋白含量为8.00％)建立FGR仔鼠模型.测定对照组和低蛋白组FGR仔鼠生后3、7、14、30、60及90 d(每组每个时间点取雄性仔鼠8只)空腹血浆葡萄糖和血清胰岛素,计算胰岛素抵抗指数及胰岛素敏感指数.实时荧光定量聚合酶链反应技术检测雄性仔鼠生后7、14、30、60及90 d肝脏组织胰岛素受体底物1、2和葡萄糖转运蛋白4 mRNA表达水平,采用Western印迹技术测定胰岛素受体底物1、PI3-K(p110β亚基)、AKT、磷酸化AKT蛋白表达水平.采用简单相关及多重线性回归分析肝脏组织中PI3-K/AKT信号通路关键分子表达改变与胰岛素敏感性变化间的关系. 结果 (1)低蛋白组新生仔鼠平均出生体重为(4.92±0.36)g,低于对照组的(6.43±0.59)g,差异有统计学意义(t=14.73,P＜0.05).低蛋白组仔鼠中FGR发生率为88.2％(97/110),其中雄性仔鼠FGR发生率为94.1％ (48/51).(2)生后60 d时FGR仔鼠空腹血浆葡萄糖开始高于对照组,直至90 d.FGR仔鼠空腹血清胰岛素和胰岛素抵抗指数30 d时显著高于对照组,持续至90 d.FGR仔鼠胰岛素敏感指数自30 d始即显著低于对照组,直至90 d,差异均有统计学意义(P均＜0.05).(3)与对照组相比,FGR仔鼠7d时胰岛素受体底物1、2 mRNA表达均显著降低(0.45±0.02与0.68±0.03,t=16.633,P＜0.05;0.34±0.10与0.70±0.19,t=4.864,P＜0.05),并持续至生后90 d(0.48±0.03与0.59±0.05,t=5.237,P＜0.05;0.49±0.20与0.70±0.11,t=2.253,P＜0.05);胰岛素受体底物1、PI3-K及磷酸化AKT蛋白表达自14d时出现降低(0.22±0.05与0.52±0.11,t=7.024,P＜0.05;0.46±0.03与0.97±0.08,t=17.508,P＜0.05;0.62±0.10与0.89±0.08,t=6.100,P＜0.05),持续至生后90 d(1.11±0.08与1.32±0.14,t=3.714,P＜0.05;0.63±0.07与1.00±0.19,t=5.206,P＜0.05;0.28±0.03与0.45±0.10,t=4.880,P＜0.05).(4)FGR仔鼠磷酸化AKT蛋白表达量与胰岛素敏感指数呈正相关(r=0.704,P＜0.05);磷酸化AKT蛋白表达量分别与空腹血浆葡萄糖、空腹血清胰岛素和胰岛素抵抗指数变化呈负相关(r分别为-0.609、-0.561和-0.577,P均＜0.05). 结论 FGR仔鼠肝脏组织中PI3-K/AKT信号通路中某些关键分子表达发生变化,可能参与了胰岛素抵抗的发生.     

肝脏过氧化物体增殖物激活受体γ基因启动子甲基化及其mRNA表达下调降低胎儿生长受限大鼠胰岛素敏感性

目的 探讨肝脏过氧化物体增殖物激活受体γ (peroxisome proliferator-ativated receptorγ,PPARγ)基因启动子甲基化状态及其mRNA表达在胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)大鼠胰岛素敏感性降低中的作用. 方法 20只雌鼠受孕后第1天随机分为对照组和低蛋白组,各10只.低蛋白组采用低蛋白(粗蛋白含量为8.00％)法建立FGR模型.测定对照组仔鼠和低蛋白组FGR仔鼠生后3、7、14、30、60及90 d(每组每个时间点取雄性仔鼠8只)空腹血浆血糖和空腹血清胰岛素,计算胰岛素抵抗指数及胰岛素敏感指数.采用甲基化特异性聚合酶链反应和逆转录-聚合酶链反应技术测定仔鼠生后7和90 d时肝脏组织PPARγ基因启动子甲基化水平及其mRNA表达情况.采用Pearson相关分析及秩和检验分析肝脏组织中PPARγ基因启动子甲基化及其mRNA表达改变与胰岛素敏感性变化间的关系. 结果 (1)低蛋白组新生仔鼠平均出生体重为(4.92±0.36)g,低于对照组的(6.43±0.59)g(t=14.73,P＜0.05).低蛋白组仔鼠中FGR发生率为88.2％(97/110),其中雄性仔鼠FGR发生率为94.1％(48/51).(2)生后90 d时FGR仔鼠空腹血浆血糖、血清胰岛素和胰岛素抵抗指数显著高于对照组[空腹血浆血糖:(8.95±1.83) mmol/L与(6.21±1.14) mmol/L,t=-3.291,P＜0.05;血清胰岛素:(59.57±9.89) mU/L与(36.10±7.32) mU/L,t=-4.916,P＜0.05;胰岛素抵抗指数:0.967±0.297与0.410±0.135,t=-4.472,P＜0.05)],而胰岛素敏感指数低于对照组仔鼠(-3.043±0.294与-2.172±0.354,t=4.774,P＜0.05).(3)生后7d时,对照组仔鼠与FGR仔鼠PPARγ基因启动子甲基化程度差异无统计学意义(0/8与2/8,Fisher精确概率法,P＞0.05),生后90 d时FGR仔鼠甲基化程度高于对照组仔鼠(8/8与2/8,Fisher精确概率法,P＜0.05).PPARγ基因完全甲基化仔鼠PPARγ基因mRNA相对表达水平最低(27.2±1.6),其次是甲基化与非甲基化共存组(47.3±33.0),完全非甲基化组最高(144.6±21.2),差异均有统计学意义(P均＜0.05).(4)FGR仔鼠生后90 d时PPARγ基因mRNA表达量分别与空腹血浆血糖、血清胰岛素和胰岛素抵抗指数呈负相关(r分别为-0.819、-0.906和-0.860,P均＜0.05),而与胰岛素敏感指数呈正相关(r=0.947,P＜0.05). 结论 PPARγ基因启动子区高甲基化可能抑制其基因转录,从而参与FGR大鼠胰岛素抵抗的发生.     

let-7b及肿瘤坏死因子α在重度子痫前期胎盘组织中的表达及意义

目的探讨let-7b和肿瘤坏死因子α(TNF-α)在重度子痫前期(SPE)患者胎盘组织的表达情况及临床意义。方法选取2017年8月至2018年10月于中国医科大学附属第一医院剖宫产术分娩的产妇50例,SPE产妇(SPE组)30例,健康孕产妇(NC组)20例,均为单胎妊娠。QRT-PCR及Western-blot检测两组胎盘组织中let-7b、TNF-αmRNA及其蛋白的表达水平,统计分析两者相关性及临床意义。结果 let-7b在SPE组的相对表达明显低于对照组(0.07±0.01 vs. 0.23±0.03,P0.05);TNF-αmRNA在SPE组的表达明显高于对照组(0.47±0.05 vs.0.19±0.02,P0.05);TNF-α蛋白在SPE组表达显著增高(1.01±0.11 vs. 0.55±0.04,P0.05);let-7b和TNF-α显著负相关(r=-0.41,P0.05);SPE组与对照组孕产妇的血压及新生儿出生体重相比差异显著[收缩压(163.80±4.67)mmHg vs.(124.90±2.16)]mmHg,舒张压(108.30±3.06)mmHg vs.(76.62±2.63)mmHg,新生儿出生体重(2505.00±162.60)g vs.(3593.00±154.50)g,P0.05];SPE组胎盘组织TNF-α的表达与收缩压及舒张压显著正相关(r=0.92和0.90,P0.05)。结论 let-7b可能通过负向调控TNF-α的表达,参与了SPE的发生和发展。     

尼莫地平对生长受限胎鼠大脑皮层钙离子通道表达的影响及意义

目的探讨孕期应用钙离子拮抗剂尼莫地平对生长受限胎鼠脑组织钙离子通道表达及神经元凋亡的影响。方法SD孕鼠随机分为三组:(1)对照组,10只,于妊娠17d行假手术;(2)胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)组,20只,于妊娠17d缩窄双侧子宫动脉;(3)治疗组:20只,建模同FGR组,术后予尼莫地平0.2mg/(kg.d)腹腔注射直至分娩。采用RT-PCR技术检测各组仔鼠大脑皮层P/Q型钙离子通道亚单位α1A、L型钙离子通道亚单位α1DmRNA水平;通过脱氧核糖核酸转移酶介导的X-dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotide transferase X-dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测各组新生仔鼠皮层神经元凋亡情况。结果(1)皮层α1A mRNA水平:对照组为0.464±0.062,明显低于FGR组(0.653±0.093,P<0.01)及治疗组(0.628±0.103,P<0.01),而FGR组和治疗组之间差异无统计学意义(P>0.05);α1DmRNA水平FGR组高于治疗组(分别为0.992±0.074和0.797±0.800,P<0.01),治疗组高于对照组(0.712±0.097,P<0.01)。(2)皮层神经元凋亡率:治疗组低于FGR组[分别为(2.98±0.54)个/高倍视野和(5.05±1.17)个/高倍视野,P<0.01],但高于对照组[(2.3±0.69)个/高倍视野,P<0.01]。结论尼莫地平孕期干预能抑制FGR胎鼠大脑皮层钙离子通道亚单位α1DmRNA的水平,降低神经元凋亡率,对FGR胎鼠神经系统损伤可能有一定的保护作用。     

孕鼠补充牛磺酸减少胎儿生长受限胎鼠脑细胞凋亡

目的 通过建立胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)大鼠模型,探讨孕鼠补充牛磺酸对FGR胎鼠脑细胞凋亡以及胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase 3)表达的影响. 方法 将15只Sprague-Dawley (SD)孕鼠随机分为对照组、FGR模型组(模型组)、FGR+孕鼠补充牛磺酸组(牛磺酸组),每组5只.通过低蛋白饮食法建立FGR模型,牛磺酸组自妊娠第12天开始于饲料中添加牛磺酸300 mg/(kg·d)直至自然分娩.对照组每窝随机取2只适于胎龄胎鼠,牛磺酸组与模型组每窝随机取2只FGR胎鼠,应用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)法检测各组胎鼠脑神经细胞凋亡情况.用免疫组织化学方法检测GDNF和caspase-3表达情况.统计学方法采用单因素方差分析、Kruskal-Wallis秩和检验、SNK检验和Tamhane's检验. 结果 (1)对照组、模型组及牛磺酸组胎鼠总数分别为65、60和59只,胎鼠平均体重为(6.36±0.44)、(4.55±0.45)和(5.11±0.67)g.模型组胎鼠均发生FGR,牛磺酸组胎鼠FGR发生率为76.3％ (45/59),成功建立FGR模型.(2)对照组胎鼠脑组织内偶见TUNEL阳性细胞;模型组明显增多,在大脑皮质、海马、白质区均有分布;牛磺酸组较模型组则明显减少.3组TUNEL阳性细胞数分别为(0.46±0.11)、(14.76±3.42)和(6.78±1.93)个(H＝429.80,P＝0.000).(3)对照组胎鼠大脑皮质内仅有少量GDNF阳性细胞分布,模型组明显增多,牛磺酸组则进一步增多.3组GDNF阳性细胞数分别为(93.56±6.73)、(120.36±6.23)和(139.56±5.28)个(H=715.17,P＝0.000).(4)对照组胎鼠大脑皮质内仅见少数caspase 3阳性细胞分布,模型组明显增多,牛磺酸组较模型组显著减少,但仍多于对照组.3组caspase 3阳性细胞数分别为(7.50±2.31)、(151.32±24.43)和(37.28±11.21)个(F=132.54,P＝0.000). 结论 FGR胎鼠脑细胞凋亡显著增多.孕鼠补充牛磺酸可以显著减少FGR胎鼠脑细胞凋亡,其机制可能与牛磺酸能够促进GDNF表达和减少caspase-3表达有关.     

特发性胎儿生长受限与胎盘细胞凋亡及bcl-2基因表达的关系

目的 探讨特发性胎儿生长受限(FGR)与胎盘细胞凋亡及bcl-2基因表达的关系.方法 应用透射电镜、脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法(TUNEL)、流式细胞技术(FCM)检测特发性FGR孕妇(FGR组)及正常妊娠妇女(对照组)各15例的胎盘细胞凋亡情况,并采用RT-PCR技术观察两组胎盘细胞中bcl-2基因相对表达量.结果 电镜下观察到FGR组胎盘合体滋养细胞核膜皱缩,核仁消失,染色质致密、凝聚;TUNEL 检测 FGR 组胎盘细胞凋亡率为13.68%,高于对照组的4.05%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);FCM检测胎盘S期细胞比率FGR组为3.4%,对照组为2.2%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05),FCM检测的胎盘细胞凋亡率变化趋势与TUNEL检测结果一致;FGR组胎盘细胞bcl-2基因相对表达量为0.19±0.13,对照组为0.55±0.17,两组比较,差异也有统计学意义(P<0.05).结论 特发性FGR的发生与胎盘细胞凋亡增加有关,胎盘细胞凋亡增加与胎盘细胞中bcl-2基因表达下调有一定关系.     

妊娠肝内胆汁淤积症胎盘超微结构及其表皮生长因子受体表达的研究

目的　观察妊娠肝内胆汁淤积症 (intrahepaticcholestasisofpregnancy ,ICP)胎盘超微结构病理改变和表皮生长因子受体 (EGFR)的表达 ,研究胆汁酸对滋养细胞的毒性作用及其对胎儿生长发育的影响。　方法　透射电镜观察 2 2例ICP患者胎盘组织 ,其中ICP合并胎儿生长受限 (fetalgrowthrestriction ,FGR) 7例、ICP未合并FGR 15例 ,应用免疫组化方法和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术测定胎盘滋养细胞表皮生长因子受体 (EGFR)的表达 ,并和 15例正常晚期胎盘比较。　结果　电镜显示 ,ICP胎盘合体滋养细胞较对照组微绒毛减少、内质网扩张、线粒体肿胀或髓鞘样改变 ,核染色质异常分布。ICP合并FGR组上述病理改变更为明显 ,绒毛间质毛细血管减少 ,并出现大量胶原原纤维。ICP合并FGR组胎盘EGFR免疫组化的平均A值 (0 .2 39± 0 .0 17)和ICP未合并FGR组EGFR免疫组化的平均A值 (0 .2 5 3± 0 .0 15 )均比对照组 (0 .384± 0 .0 16 )低 ,差异具非常显著性 (P<0 .0 1)。ICP合并FGR组胎盘EGFRmRNA指数 (0 .2 30± 0 .0 4 8)和ICP未合并FGR组EGFRmRNA指数 (0 .2 31± 0 .0 4 2 )表达均比对照组 (0 .4 6 0± 0 .0 5 1)低 ,差异具非常显著性 (P <0 .0 1) ,ICP合并FGR组与ICP未合并FGR组之间胎盘EGFR的表达无显著性差异 (P     

青海高原地区胎儿生长受限患者胎盘组织人类白细胞相关抗原G表达的研究

目的:探讨青海高原地区胎儿生长受限(FGR)患者人类白细胞相关抗原G(HLA-G)mRNA及蛋白的表达及临床意义。方法:收集2015年1~12月在青海大学附属医院产科分娩的20例FGR患者(FGR组)和20例正常妊娠妇女(正常妊娠组)的胎盘组织,采用实时荧光定量PCR及Western blot分析检测HLA-G mRNA及蛋白在两组胎盘组织中的表达差异。结果:FGR组胎盘组织中HLA-G mRNA表达水平(0.449±0.116),明显低于正常妊娠组(0.963±0.226),差异有统计学意义(P=0.000)。FGR组胎盘组织HLA-G蛋白表达灰度值(0.375±0.101),亦明显低于正常妊娠组(0.797±0.177),差异有统计学意义(P=0.002)。结论:青海高原地区FGR患者胎盘组织HLA-G mRNA及蛋白表达水平均明显降低,HLA-G的表达量降低在FGR的发生发展过程中可能起着重要的作用。     

胎儿生长受限对其肾脏发育的影响

目的：探究胎儿生长受限（fetal growth restriction,FGR）的宫内环境对胎儿肾脏发育的影响。方法：收集2009年11月—2011年12月于天津市中心妇产科医院产科因胎儿原因要求引产的11例FGR和同期12例非FGR死胎或死产胎儿的肾脏组织标本（所有标本的采集均征得患方的知情同意和院伦理委员会的认可）,测量其质量和体积,应用TUNEL法分析肾脏组织细胞凋亡率,并对Bax和Bcl-2蛋白在凋亡细胞中的阳性表达率进行检测。结果：与非FGR组相比,FGR组胎儿的平均肾脏体积、质量和肾单位数目均明显下降（P＜0.01）,而其细胞凋亡率明显增加（P＜0.01）。进一步检测发现,FGR组细胞内促凋亡蛋白Bax的阳性表达率明显增加（P＜0.01）,伴随有凋亡抑制基因Bcl-2的阳性表达率显著降低（P＜0.01）。结论：生长受限的宫内环境可能通过促进细胞凋亡而影响胎儿肾脏发育,为将来进一步探讨FGR的分子机制和成人期疾病的发病机制提供了新的线索。     

胎儿生长受限孕妇的胎盘GLUT1表达与血清皮质醇的关系

目的探讨胎盘葡萄糖转运蛋白(glucose transporter,GLUT)的表达在胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)发生发展中的作用及其与孕妇血清皮质醇(cortisol,CORT)水平的相关性.方法用免疫组织化学法检测20例FGR孕妇(FGR组)及24例正常妊娠孕妇(对照组)胎盘GLUT1的表达.利用放射免疫分析法测定两组孕妇产前血清CORT水平.同时测量新生儿出生体重和胎盘重量.结果FGR胎盘GLUT1表达水平(149.8±8.2)较对照组(155.9±6.5)明显降低(P＜0.05),胎盘合体滋养层基底膜面GLUT1的表达水平(135.3±4.2)较对照组(153.9±8.5)明显降低(P＜0.01).胎盘GLUT1表达水平与孕妇血清CORT水平呈负相关(r=-0.803,P＜0.01).结论胎盘组织中,特别是基底膜面的GLUT1表达水平下降可能是FGR的病因之一,CORT可能通过抑制胎盘GLUT1的表达,参与FGR的发病过程.     

剖宫产出生仔鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白表达变化及神经元细胞凋亡检测

目的 探讨剖宫产出生的仔鼠海马和额叶皮质区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化以及神经元细胞凋亡情况.方法 将38只SD孕鼠自确定受孕时起随机分为2组:阴道产组19只和剖宫产组19只.阴道产组不进行任何处理,剖宫产组于孕第21天剖宫取仔鼠.阴道产组仔鼠48只和剖宫产组仔鼠40只,分别于出生后30、115 d处死仔鼠取脑组织,采用免疫组织化学(免疫组化)EnVision染色法分析单位面积中GFAP阳性染色细胞数量,蛋白印迹法定量检测两组仔鼠海马和额叶皮质区GFAP的表达;用末端转移酶标记染色法检测神经元细胞凋亡情况.结果 (1)GFAP表达:仔鼠出生后115 d,海马区GFAP阳性染色细胞数:阴道产组为(29.7±10.9)个,剖宫产组为(36.2±2.8)个,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);额叶皮质区GFAP阳性染色细胞数:阴道产组为(23.2±4.6)个,剖宫产组为(36.8±5.9)个,两组比较,差异也有统计学意义(P＜0.01).仔鼠出生后30 d,额叶皮质区GFAP阳性染色细胞数:阴道产组为(27.8±6.0)个,剖宫产组为(39.4±4.5)个,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);海马区GFAP阳性染色细胞数:阴道产组为(31.5±3.5)个,剖宫产组为(37.2±7.0)个,两组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).蛋白印迹法检测阴道产组及剖宫产组仔鼠海马及额叶皮质区GFAP蛋白的表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)神经元细胞凋亡情况:仔鼠生后115 d,剖宫产组仔鼠海马区凋亡细胞零星分布,阴道产组海马区未见凋亡细胞.结论 剖宫产术对不同年龄段仔鼠的海马和皮质区GFAP表达有不同影响,可导致海马、额叶皮质区GFAP蛋白表达上调,海马区甚至出现细胞凋亡.     

胎儿生长受限产妇胎盘生乳素水平变化及其与胎盘损害的关系

目的　探讨胎儿生长受限 (FGR)产妇血清及脐血胎盘生乳素 (HPL)的变化及其与胎盘损害的关系。方法　对 2 0 0 3年 1月至 2 0 0 4年 6月在汕大医学院第二附属医院妇产科分娩的 32例晚期妊娠FGR患者 (FGR组 )和 32例正常晚期妊娠产妇 (对照组 )采用化学发光法 (CLIA)检测血清及脐血HPL水平 ,并对两组产后胎盘胎膜组织进行病理学检查。结果　 (1)FGR组产妇血清HPL水平 (2 76± 0 6 2 )mg/L显著低于对照组 (4 4 9±0 6 9)mg/L(P <0 0 1) ;FGR组脐血HPL水平 (2 98± 0 5 8)mg/L显著低于对照组脐血HPL水平 (4 78± 0 70 )mg/L(P <0 0 1)。 (2 )FGR组母血及脐血胎盘生乳素水平与新生儿体重呈显著正相关关系 (r =0 5 6 7及r =0 6 92 ,P <0 0 1)。 (3)FGR组中 2 1例有胎盘病理改变 (占 6 5 6 3% ) ,对照组中 6例有胎盘病理改变 (占18 75 % ) ,两组比较差异有显著性意义 (P <0 0 1)。 (4)FGR组胎盘有明显病理改变者母血及脐血HPL水平显著低于无病理改变者 (P <0 0 1)。结论　FGR时胎盘发生明显病理变化。胎盘损害可能导致母血及脐血中HPL水平降低 ,从而使胎儿生长发育不良。     

ABCA1对胎盘脂质代谢的影响

目的:探讨ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)对胎盘脂质代谢的影响。方法:应用酶消化法分离胎盘原代滋养细胞,流式细胞术进行细胞纯度鉴定,免疫荧光检测细胞中ABCA1的表达情况。实验组应用肝X受体激动剂(T0901317)上调(以无菌磷酸缓冲盐溶液代替T0901317作为对照组)或siRNA下调(以mock-siRNA代替siRNA作为模拟转染组)滋养细胞中ABCA1的表达水平并应用RT-PCR及Western-blot进行验证,采用Amplex胆固醇检测试剂盒检测ABCA1表达改变后滋养细胞在实验开始后的2小时、4小时、6小时及8小时胆固醇流出率。结果:从足月胎盘中分离出原代滋养细胞,其纯度在90%以上,ABCA1在滋养细胞中存在表达。加入T0901317后,滋养细胞中ABCA1在蛋白水平的表达量(0.37±0.04)明显高于对照组(0.08±0.02),差异有统计学意义(P0.05);而在转染siRNA后,滋养细胞中ABCA1在蛋白水平的表达量(0.10±0.01)低于对照组(0.16±0.02),差异有统计学意义(P0.05)。在ABCA1表达上升后2小时、4小时、6小时、8小时,滋养细胞胆固醇流出率与对照组相比明显升高(4.70±0.03 vs 3.39±0.00、7.66±0.05 vs 5.28±0.02、14.73±0.03 vs 8.66±0.02、20.94±0.07 vs 13.47±0.03),差异均有统计学意义(P0.05);而当ABCA1表达量下降后2小时、4小时、6小时、8小时,滋养细胞胆固醇流出率与对照组相比明显降低(2.30±0.03 vs 3.53±0.02、3.35±0.03 vs 5.17±0.01、5.37±0.05 vs 7.01±0.02、7.56±0.06 vs 11.49±0.03),差异均有统计学意义(P0.05)。结论:当胎盘中ABCA1表达出现异常时,可通过影响滋养细胞胆固醇的转运而导致母胎界面脂质代谢出现紊乱。     

子痫前期患者胎盘组织中Rho激酶Ⅱ表达与滋养细胞凋亡的研究

目的探讨Rho激酶Ⅱ(Rho-associatedProteinKinaseⅡ,ROCKⅡ)在正常妊娠和子痫前期患者胎盘的分布和表达及与滋养细胞凋亡的关系。方法采用免疫组织化学法检测30例子痫前期(轻、重度)孕妇和15例正常妊娠妇女胎盘中ROCKⅡ的分布和表达,采用TUNEL法检测三组胎盘滋养细胞的凋亡情况。结果ROCKⅡ在正常妊娠和子痫前期患者胎盘的滋养细胞、内皮细胞、基质细胞中均有表达,以滋养细胞表达为主。子痫前期重度和轻度组以及正常妊娠组ROCKⅡ的免疫组化积分分别为(4.53±0.58)、(3.18±0.59)和(2.06±0.63),P<0.01。正常妊娠和子痫前期患者胎盘的滋养细胞、内皮细胞、基质细胞均存在凋亡,以滋养细胞凋亡为主。重度子痫前期组胎盘滋养细胞凋亡(0.28±0.03)%显著高于子痫前期轻度组(0.22±0.04)%,子痫前期轻度组显著高于正常妊娠组(0.16±0.05)%(P<0.01)。滋养细胞ROCKⅡ表达和滋养细胞凋亡具有相关性(r=0.96,P<0.01)。结论子痫前期患者胎盘组织中Rho激酶Ⅱ的高表达可能与其滋养细胞凋亡增加有关。     

靶向ERR α siRNA对不同类型子宫内膜癌细胞凋亡的影响

目的探究si RNA作用于不同类型子宫内膜癌细胞雌激素受体相关受体α(estrogen receptor-related receptorα,ERRα)的表达及细胞的凋亡情况。方法 si RNA处理RL952、AN3-CA、HEC-1A和HEC-1B细胞,以RL952、AN3-CA为Ⅰ型子宫内膜癌体外模型,HEC-1A、HEC-1B为Ⅱ型子宫内膜癌体外模型;采用荧光定量PCR法检测ERRαm RNA的表达,Western blot法检测ERRα蛋白的表达,流式细胞仪分别检测si RNA干扰后4株子宫内膜癌细胞的凋亡情况。结果 si RNA组较对照组ERRαm RNA表达水平显著下降(RL952:0.701±0.017 vs.1.165±0.019;AN3-CA:0.899±0.019 vs.1.362±0.007;HEC-1A:0.093±0.004 vs.0.541±0.038;HEC-1B:0.158±0.004 vs.0.356±0.001;P均0.05)。各株细胞si RNA组与对照组ERRαm RNA的表达比较,差异有统计学意义(P0.05),ERRαm RNA表达分别减少了39.77%、34.01%、82.82%和55.78%。West ern blot结果显示,4株细胞RNA干扰后ERRα蛋白表达与m RNA表达趋势一致。4株细胞凋亡率:RL952为(30.000±1.056)%vs.(10.572±1.027)%;AN3-CA为(32.931±1.613)%vs.(10.274±0.882)%;HEC-1A为(17.272±0.950)%vs.(8.704±0.608)%;HEC-1B为(18.703±1.877)%vs.(3.801±0.265)%,si RNA干扰4株细胞后凋亡率与各自对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 si RNA能够有效抑制子宫内膜癌中ERRα的表达,ERRα低表达可能与子宫内膜癌细胞的凋亡增加密切相关。     

先兆子痫患者母胎界面上细胞凋亡的研究

目的:研究先兆子痫患者母胎界面上细胞凋亡水平及凋亡相关分子的表达变化。方法:分别收集妊娠25、27、29、30和31周及足月分娩的正常妊娠者和先兆子痫患者的胎盘组织,采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP刻痕末端标记法(TUNEL)检测母胎界面上细胞凋亡情况, 并行凋亡细胞定位;RT-PCR检测正常妊娠和先兆子痫胎盘组织中P53,Bcl-2和Bax的mRNA表达水平的差异。结果:正常妊娠和先兆子痫患者胎盘中发生凋亡的细胞数目都随孕周延长而逐渐增高,但先兆子痫的胎盘中细胞凋亡率明显高于正常妊娠者;正常妊娠胎盘中凋亡细胞主要为合体滋养层细胞,足月胎盘绒毛内血管内皮细胞亦有少量细胞凋亡,而先兆子痫胎盘中细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞和绒毛内血管内皮细胞均发生明显的凋亡;RT-PCR显示先兆子痫胎盘组织中P53和Bax的mRNA水平明显高于同期妊娠的正常胎盘,而Bcl-2水平显著降低。结论:正常妊娠过程中胎盘组织中只在有限部位出现少量细胞凋亡,而先兆子痫胎盘组织中细胞过度凋亡, 且凋亡细胞分布广泛,并伴有凋亡相关分子的表达上调。表明先兆子痫的发生与胎盘组织中滋养层细胞大量凋亡密切相关。     

胎儿生长受限大鼠胰岛素敏感性的动态变化

目的 探讨胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)大鼠胰岛素敏感性的变化规律.方法 母鼠受孕后第1天始随机分为对照组和低蛋白组,各10只.低蛋白组孕鼠采用低蛋白饮食法建立FGR模型.低蛋白组仔鼠中出生体重低于对照组仔鼠平均出生体重两个标准差者定为FGR鼠.测定对照组和FGR仔鼠(每组雌雄各8只)生后3、7、14、30、60及90 d空腹血浆血糖(fasting plasma glucose,FPG)及空腹血清胰岛索(fasting serum insulin,FINS),计算胰岛素抵抗指数及胰岛素敏感指数.90 d时测定血甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和糖化血红蛋白,同时行腹腔葡萄糖耐量实验.结果 (1)低蛋白组仔鼠平均出生体重为(4.92±0.36)g,低于对照组的(6.43±0.59)g,差异有统计学意义(t=14.73,P＜0.05).(2)雄性FGR鼠生后60 d时FPG高于对照组[(9.38±1.57)mmol/L与(5.58士1.24)mmol/L],直至90 d[(8.95±1.83)mmol/L与(6.21±1.14)mmol/L],差异有统计学意义(t=-3.291,P＜0.05);雌性FGR鼠90 d时FPG为(9.08±1.65)mmol/L,高于对照组的(6.73土0.67)mmol/L,差异有统计学意义(t=-3.226,P＜0.05);雄性FGR鼠FINS 30 d时开始高于对照组,直至90 d时;雌性FGR鼠60及90 d时FINS 高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);雄性及雌性FGR鼠胰岛素抵抗指数及胰岛素敏感指数分别于30 d及60 d始与对照组相比出现改变,直至90 d,差异有统计学意义(P均＜0.05).腹腔葡萄糖耐量实验结果显示,从0 min始各时间点雄性和雌性FGR鼠血糖均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)生后90 d时,雄性FGR鼠糖化血红蛋白为(7.03±0.54)%,高于对照组的(4.37±0.64)%,差异有统计学意义(t=-8.028,P＜0.05).无论雄性或雌性仔鼠,2组血脂水平差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 FGR鼠在生后早期尚能维持正常的FPG和FINS水平,随着日龄增加,胰岛素敏感性从青年期逐渐降低,直至成年期,而且雄性FGR鼠更易发生胰岛素抵抗.

Abstract：

Objective To investigate the regular pattern of dynamic changes of insulin sensitivity in fetal growth restriction (FGR) rats. Methods Twenty pregnant female rats were randomly divided into two groups as normal-protein group (NP) and low-protein group (LP), which respectively received normal protein diet (20% protein) and low protein diet (8% protein) during pregnancy. Weights of newborns were measured within 6 hours after birth, and the LP offspring whose birth weights were at least 2 standard deviations below the mean of NP offspring (≤2 standard deviations) were defined as FGR rats. At day 3, 7, 14, 30, 60 and 90 after birth, rats were fasted for 12 hours and then angular vein blood was collected to measure fasting plasma glucose (FPG) and fasting serum insulin (FINS) level. At 90 days of age, intraperitoneal glucose tolerance test (IPGTT)was performed; and blood triglyceride ( TG ), low-density lipoprotein cholesterol ( LDL-C ),high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and glycosylated hemoglobin Alc (HbAlc) were measured. Insulin sensitivity was evaluated by FINS, insulin resistance index (HOMA-IR), insulin sensitivity index (ISI) and IPGTT. Results (1) Birth weights of LP offspring [(4. 92 ± 0. 36) g]were significantly lower than those of NP ones [(6. 43 ± 0. 59) g] (t = 14. 73, P＜0. 05). The incidence of FGR in LP was 88. 2% ; and for the male and female rats, the FGR rate was 94. 1% and 83. 1%, respectively. (2) FPG levels in the male FGR rats were significantly higher than in the NP from the age of 60 days [(9.38 ± 1.57) mmol/L vs (5. 58 ± 1.24) mmol/L] to 90 days [(8. 95 ±1.83) mmol/L vs (6. 21± 1.14) mmol/L] (t=-3. 291, P＜0. 05), while FPG levels in female FGR rats increased significantly only at 90 days of age [(9. 08±1.65) mmol/L vs (6.73±0. 67) mmol/L](t=-3. 226,P＜0. 05). FINS levels were significantly higher in FGR rats than in the NP from the age of 30 days (male FGR rats) or 60 days (female FGR rats) to 90 days (P＜0. 05, respectively).Similarly, HOMA-IR was significantly higher in FGR rats than in the NP at the age of 30 days (male FGR rats) or 60 days (female FGR rats) to 90 days (P＜0. 05, respectively). ISI in male FGR rats showed a reduction in comparison with the NP from the age of 30 to 90 days, while as to the female FGR rats it was significantly lower than in the NP only at 60 days of age and continued to 90 days (P＜0. 05, respectively). IPGTT showed that after injection of glucose, blood glucose at all four points (from 0 min to 120 min) in both male and female FGR rats were higher than that in the NP (P＜0. 05). (3) No significant difference was observed in TG, LDL-C and HDL-C at 90 days of age between the FGR rats and NP ones, while HbA1c in the male FGR rats was significantly higher than that in the NP [(7. 03±0. 54) % vs (4. 37±0. 64)%,t= -8. 028, P＜0. 05]. Conclusions FGR rats are able to maintain glucose balance and normal insulin levels during their earlier age, while insulin sensitivity decreased from adolescence to adulthood. The change of insulin sensitivity is different between male and female FGR rats, and male FGR rats are more likely to develop insulin resistance.