多巴胺对骨关节炎的治疗作用及相关分子机制研究

目的:探讨多巴胺(DA)对骨关节炎的治疗作用及相关分子机制。方法:SPF级别雄性SD大鼠60只,随机分为模型组、多巴胺5μg/kg组、多巴胺10μg/kg组、多巴胺15μg/kg组、假手术组、阳性对照组。采用右膝关节前韧带交叉切断术建立骨关节炎(OA)大鼠模型,检测大鼠的机械性痛阈值和膝关节直径;采用ELISA法检测大鼠外周血液中白细胞介素(IL)-1β,IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;采用RT-PCR法检测大鼠关节组织中IL-1β,IL-6,TNF-α,金属基质蛋白酶(MMP)-3,MMP-9和MMP-13 mRNA表达水平;采用HE染色和番红固绿染色检测大鼠关节组织的病理学变化;采用Western Blot法检测大鼠关节组织中MMP-3,MMP-9,MMP-13,Akt,p-Akt,p-Iκ-Bα,Iκ-Bα,p-p65和p65蛋白表达水平。结果:多巴胺显著增加OA大鼠的机械性痛阈值,并减小OA大鼠的膝关节直径,差异有统计学意义(P0.05);同时下调OA大鼠外周血液中IL-1β,IL-6及TNF-α的表达水平,差异有统计学意义(P0.05);多巴胺显著下调OA大鼠关节组织中IL-1β,IL-6,TNF-α,MMP-3,MMP-9及MMP-13 mRNA表达水平,并缓解OA大鼠关节组织中炎性细胞浸润和软骨基质降解,差异有统计学意义(P0.05);除此之外,多巴胺显著下调OA大鼠关节组织中MMP-3,MMP-9,MMP-13,p-Akt/Akt,p-Iκ-Bα/Iκ-Bα及p-p65/p65蛋白表达水平,差异有统计学意义(P0.05)。结论:多巴胺对骨关节炎治疗具有潜在的价值,且这种作用可能与抑制Akt/NF-κb信号通路活化有关。     

黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的调控作用

目的观察黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)的调控作用,初步阐释黄芪甲苷治疗骨关节炎的分子作用机制。方法通过β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,激活其Wnt/β-catenin信号通路。Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞与正常人软骨细胞置于Transwell小室中共培养。倒置显微镜观察Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞对人软骨细胞形态学变化的影响。黄芪甲苷混悬液干预共培养体系,采用Western bolt方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;采用ELISA方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞、软骨细胞培养上清液MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达的影响。结果β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞后成功激活Wnt信号通路并与软骨细胞共培养。随培养时间的延长,软骨细胞生长逐渐受到抑制,软骨细胞胞体边缘与板壁接触处发白,折光度增加,细胞贴壁强度降低。黄芪甲苷干预后,Western blot检测发现滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达明显下调(P0.01);ELISA法检测发现滑膜与软骨细胞上清液中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达与正常对照相比明显升高(P0.01)。结论滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的激活可以使软骨细胞生长受到抑制。黄芪甲苷可以降低滑膜细胞β-catenin表达,且与干预时间长短相关。黄芪甲苷可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达。黄芪甲苷可能通过抑制OA滑膜Wnt/β-catenin信号通路,改善滑膜炎症、调控滑膜-软骨共同体系微环境、达到抑制软骨降解,促进软骨细胞功能恢复而治疗骨关节炎。     

温针灸对膝骨关节炎大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子水平及软骨中 Wnt3a.β-catenin 蛋白表达影响的研究

目的:探讨温针灸对膝骨关节炎(Knee osteoarthritis,KOA)大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响。方法:将48只大鼠随机分为正常组、模型组、药物组和温针灸组,每组12只。治疗2周后,比较大鼠滑膜组织TNF-α水平及软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达情况。结果:模型制备前各组大鼠LequesneMG评分差异无统计学意义。模型制备后与正常组比较,模型组、药物组、温针灸组LequesneMG评分均升高(P0.05)。治疗2周后,与正常组比较,模型组大鼠LequesneMG评分、滑膜组织TNF-α水平、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显升高(P0.05)。与模型组比较,温针灸组和药物组大鼠LequesneMG评分、滑膜组织TNF-α水平、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。与药物组比较,温针灸组LequesneMG评分、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平均明显降低(P0.05);滑膜组织TNF-α水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:温针灸可以降低KOA大鼠滑膜组织TNF-α水平,其机制为抑制软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达,从而达到优于西药的治疗效果,值得在临床上推广应用。     

补肾活血方对Wnt/β-catenin信号通路介导的人滑膜细胞与正常软骨细胞共培养体系的调控作用

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎发病中的作用,观察补肾活血方对异常的滑膜-软骨微环境的调控作用,初步阐释补肾活血方治疗骨关节炎的分子作用机制。方法:构建β-catenin过表达慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,Transwell小室共培养人滑膜细胞与正常人软骨细胞模拟滑膜软骨关节体系内环境;各时间点不同浓度药物干预共培养体系,Western bolt方法检测补肾活血方对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;ELISA方法检测补肾活血方对共培养体系中滑膜细胞、软骨细胞培养上清液基质金属蛋白酶-7(MMP-7),人Ⅱ型胶原交联羧基端肽(CTX-Ⅱ),软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达的影响。结果:Western blot检测发现β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞后滑膜细胞胞浆及胞核中β-catenin表达明显上调(P0.01),补肾活血方能够明显下调共培养滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达(P0.01);同时,ELISA法检测发现补肾活血方能够明显下调滑膜细胞与软骨细胞培养上清液中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达(P0.01)。结论:β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞可成功激活Wnt/β-catenin信号通路,Wnt/β-catenin信号通路激活后共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的水平明显上升;补肾活血方可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达,减轻异常滑膜细胞对软骨细胞的损害,减缓软骨基质的降解,有利于骨关节炎的缓解和恢复。     

假刺藤醇提物对佐剂关节炎模型大鼠血清IL-6、TNF-α及IL-1β的影响研究

目的研究假刺藤醇提物对弗氏完全佐剂(CFA)诱导的佐剂性关节炎(AA)大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、细胞肿瘤因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的影响,探讨其治疗类风湿性关节炎的作用。方法采用CFA诱导大鼠AA模型,给予不同剂量假刺藤醇提物治疗,进行全身及关节炎症肿胀程度评分以及血清细胞炎性因子(IL-6、TNF-α、IL-1β)水平的测定。结果与模型组比较,假刺藤醇提物能显著降低AA大鼠全身和关节炎症肿胀评分及显著降低血清中IL-6、TNF-α、IL-1β的水平(P0.05或P0.01)。结论假刺藤醇提物能拮抗AA大鼠病情发展,其机制可能与其下调血清炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表达有关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨阳和汤对兔膝骨关节炎的影响

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨阳和汤对兔膝骨关节炎模型的作用机制。方法将4～6月龄新西兰兔随机分为空白组、模型组、西乐葆组和阳和汤组,每组6只。除空白组外,其余各组膝关节腔内注射木瓜蛋白酶造模。造模成功后,阳和汤组予阳和汤灌胃,西乐葆组予西乐葆灌胃,空白组和模型组予生理盐水灌胃,每日1次,连续给药2周。灌胃前后分别测量4组兔膝关节皮温、周径,进行膝关节Lequesne MG评分。停药1周后采集标本,ELISA法检测关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-13含量;光镜下观察关节软骨病理改变并进行Mankin's评分;免疫组化检测软骨组织Wnt4、β-catenin表达情况。结果与空白组比较,模型组膝关节皮温、周径和Lequesne MG评分,关节软骨病理切片Mankin's评分及Wnt4、β-catenin表达,关节液IL-1β、TNF-α、MMP-13含量均明显升高(P0.05);与模型组比较,阳和汤组膝关节周径、Lequesne MG评分,软骨病理切片Mankin's评分及Wnt4、β-catenin表达,关节液IL-1β、TNF-α、MMP-13含量均明显降低(P0.05)。结论阳和汤能抑制骨关节炎炎症反应,修复软骨损伤,其机制可能与降低炎症因子TNF-α和IL-1β的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路和改善MMP-13有关。     

淫羊藿总黄酮对膝关节骨性关节炎大鼠核因子-κB通路的影响

目的:探讨淫羊藿总黄酮(Epext)对膝关节骨性关节炎的作用及分子机制。方法:将60只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、Epext(600,300,150mg/kg)组及阳性对照组,共6组;采用右膝关节前交叉韧带切断术建立大鼠膝关节骨性关节炎模型,测量机械性痛阈值和膝关节直径,第14天灌胃给药,连续4周,眼球取血,脱颈椎处死,分离膝关节滑膜组织;采用ELISA法检测血清中炎症因子的分泌水平;采用RT-PCR法和Western Blot法分别检测膝关节滑膜组织中炎症因子和NF-κB通路分子的表达水平。结果:术前大鼠的机械性痛阈值和膝关节直径差异均无统计学意义(P0.05);术后模型组大鼠的机械性痛阈值显著降低,膝关节直径显著增加,Epext显著增加KOA大鼠的机械性痛阈值和减小膝关节直径;ELISA和RT-PCR结果分别表明Epext显著抑制KOA大鼠血清和滑膜组织中IL-6,IL-1β,TNF-α的表达;苏木精-伊红染色结果表明Epext显著抑制KOA大鼠膝关节滑膜组织的炎性细胞浸润和滑膜增生;Western Blot结果表明Epext显著抑制KOA大鼠滑膜组织中p-IκB-α/IκB-α,p-p65/p65的表达,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:Epext通过抑制NF-κB通路对膝关节骨性关节炎治疗具有潜在价值。     

豨莶醇对佐剂性关节炎大鼠血清细胞因子及滑膜细胞凋亡蛋白的影响

目的探讨豨醇(奇任醇)对佐剂性关节炎(AA)大鼠血清细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及滑膜细胞Bcl-2、Fas-L蛋白表达的影响。方法采用弗氏完全佐剂建立SD大鼠AA模型,分别给予奇任醇、氢化可的松、阿司匹林 环磷酰胺治疗;ILISA法测定实验大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平;踝关节滑膜细胞进行Bcl-2、Fas-L免疫组化染色,运用计算机图像分析系统对染色结果进行分析。结果与正常组相比,模型组大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.01),滑膜细胞Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05),Fas-L表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,奇任醇组大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.01、0.05);滑膜细胞Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.05),Fas-L蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论奇任醇可降低AA大鼠血清细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6水平,下调滑膜细胞Bcl-2蛋白表达、促进Fas-L蛋白表达。     

祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的调控作用

目的观察祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法将GSK-3β选择性小分子抑制剂作用于正常人滑膜细胞,以激活Wnt/β-catenin信号通路。提取并检测胞核蛋白β-catenin的表达,从而确定最佳激活时间点。将对数生长期的滑膜细胞分为正常组、SB-216763激活组、祛痰化瘀利湿方组,分别采取相应的干预措施。Western blot方法检测滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测滑膜细胞培养上清液中Cyclin D1和MMP-7的表达。结果成功激活正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,SB-216763干预后激活组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达较正常组显著升高(P0.05);经中药含药血清干预后,祛痰化瘀利湿方组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达与激活组相比显著下调(P0.01)。结论印证了GSK-3β作为选择性小分子抑制剂能够激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;通路激活后,其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达显著升高;祛痰化瘀利湿方能够明显下调β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的表达;提示从单一信号通路方面可阐释祛痰化瘀利湿方治疗骨性关节炎的分子作用机制。     

祛寒逐风颗粒对骨性关节炎大鼠炎症反应的影响

目的:观察祛寒逐风颗粒对膝骨性关节炎(KOA)大鼠炎症反应和NF-κB介导NLRP3炎性小体活化的影响。方法:建立骨性关节炎大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、祛寒逐风颗粒组(3,6,9 g/kg)和阳性药组,测量大鼠机械性痛阈值和膝关节直径,采用酶联免疫吸附实验测量大鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-6的含量变化,采用RT-PCR法测量大鼠组织中IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA含量,采用苏木精-伊红染色和阿尔新蓝染色观察组织的病理学变化,采用蛋白免疫印迹法检测大鼠软骨组织中p-p65、p65、p-IκBα、NLRP3、Caspase-1 p20、IL-1βp17的蛋白水平。结果:与模型组比较,祛寒逐风颗粒组和阳性药组大鼠的机械性痛阈值增大,膝关节直径变小,血清中IL-1β、TNF-α和IL-6含量减少,组织中IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA水平下调,软骨损伤和纤维化缓解,软骨组织中p-p65、p65、p-IκBα、NLRP3、Caspase-1 p20、IL-1βp17蛋白表达下调。结论:祛寒逐风颗粒可能通过抑制NF-κB介导的NLRP3炎性小体活化显着改善KOA大鼠的炎症反应并缓解疼痛,对骨关节炎发挥治疗作用。     

白花丹素对类风湿关节炎大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响＊

目的 探究白花丹素（PLB）对类风湿关节炎（RA）大鼠Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。方法 将60只SD大鼠（每组12只）随机分为对照组、模型组、地塞米松组（模型+30 mg·kg^-1地塞米松）、PLB-L组（2 mg·kg^-1 PLB）、PLB-M组（4 mg·kg^-1 PLB）和PLB-H组（6 mg·kg^-1 PLB）；除对照组外均构建胶原诱导的关节炎（CIA）大鼠模型，药物组给予相应剂量的药物，对照组与模型组以生理盐水代替；观察大鼠一般情况；记录大鼠热刺激缩足反射潜伏期（PWTL）、机械性痛阈（PWT）及关节炎症积分；HE染色观察大鼠足关节滑膜组织病理学变化；酶联免疫吸附实验（ELISA）检测大鼠关节滑膜组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平；免疫应迹法检测各组关节滑膜组织中Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达情况。结果 与对照组相比，模型组大鼠皮毛无光泽、关节肿胀、跛行、活动量与进食量减少、精神倦怠；地塞米松组、PLB-L组、PLB-M组和PLB-H组大鼠皮毛光泽度、脱毛情况、饮食、精神及行动得到改善；与对照组相比，模型组大鼠PWT、PWTL显著降低，而关节炎症积分、足关节滑膜组织病理学程度、TNF-α、IL-6、Wnt3a、β-catenin、糖原合成酶激酶-3（GSK-3β）和基质金属蛋白酶13（MMP-13）水平显著增加（P<0.05）；与模型组相比，地塞米松组、PLB-L组、PLB-M组和PLB-H组PWT、PWTL显著增加，而关节炎症积分、足关节滑膜组织病理学程度、TNF-α、IL-6、Wnt3a、β-catenin、GSK-3β和MMP-13表达水平显著降低，存在PLB剂量依赖性（P<0.05）；与地塞米松组相比，PLB-H组上述指标无显著性差异（P>0.05）。结论 PLB对CIA大鼠关节滑膜增生及炎症反应的抑制作用，可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

CIA模型大鼠关节滑膜细胞NF-κB信号表达及姜酚胶丸的调控作用研究

目的探讨姜酚胶丸对胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜细胞NF-κB信号表达及炎症因子TNF-α、IL-1和IL-1β影响的研究。方法将6周龄雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、姜酚胶丸治疗组和雷公藤多苷对照组,每组10只。制备CIA模型,采用Western blot法检测关节滑膜细胞NF-κB/P65、IκBα表达,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-1β表达情况。结果 1姜酚胶丸治疗组及雷公藤多苷对照组可下调CIA大鼠滑膜细胞NF-κB/P65、IκBα的表达,与模型组比较均有显著性差异(P0.01);2姜酚胶丸治疗组及雷公藤多苷对照组可下调CIA大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-1β的表达,与模型组比较均有显著性差异(P0.01)。结论姜酚胶丸可通过降低CIA大鼠关节滑膜细胞NF-κB/P65、IκBα信号蛋白表达,显著下调CIA大鼠血清致炎因子TNF-α、IL-1、IL-1β表达,达到缓解炎症的作用。     

虎杖醇提物通过NLRP3/ASC/caspase-1轴干预小鼠急性痛风性关节炎的作用研究

通过NLRP3/ASC/caspase-1轴探讨虎杖醇提物(ethanolic extract of Polygonum cuspidatum, PCE)对C57BL/6小鼠急性痛风性关节炎的干预作用及机制。采用PCE高、中、低3个剂量,以秋水仙碱为阳性对照,小鼠采用踝关节注射尿酸钠晶体(MSU)造模。动物模型通过PCE干预后,采用HE染色观察滑膜组织形态学变化;采用ELISA法测定踝关节滑膜组织分泌的IL-1β,IL-6和TNF-α浓度;蛋白印迹(Western blot)法测定滑膜组织中NLRP3,ASC,caspase-1蛋白表达情况;RT-PCR法测定滑膜组织中NLRP3,ASC,caspase-1 mRNA表达情况。结果表明,与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加,滑膜组织IL-1β,IL-6,TNF-α表达水平显著升高,NLRP3,ASC,caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高;与模型组比较,虎杖醇提物组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度,关节滑膜IL-1β,IL-6和TNF-α水平以及NLRP3/ASC/caspase-1轴蛋白和mRNA表达均显著降低。该研究初步探明虎杖醇提物能防治小鼠急性痛风性关节炎,其机制可能是调控NLRP3/ASC/caspase-1轴在基因和蛋白水平上的表达。     

清热活血方药对CIA大鼠Wnt信号通路成骨细胞相关因子的影响

目的:分析清热活血方(QRHX)对类风湿关节炎大鼠Wnt信号通路相关因子表达的影响,探讨清热活血方药对CIA大鼠骨破坏的保护机制。方法:SD大鼠40只按随机数字表法分为正常组、模型组、清热活血方药组、依那西普组。通过滑膜病理切片观察各组大鼠关节滑膜病理改变,采用RT-PCR方法对各组大鼠滑膜DKK-1、β-catenin基因mRNA表达水平进行对比分析,通过ELISA检测各组大鼠血清DKK-1、β-catenin、TCF、LRP5的蛋白含量。结果:滑膜病理显示清热活血方药组大鼠滑膜中的炎症水平较模型组明显减轻,清热活血方药组大鼠滑膜中DKK-1mRNA表达水平和血清中DKK-1含量较模型组明显减少,β-catenin mRNA表达水平及血清β-catenin、TCF、LRP5含量与模型组比较显著升高。结论:清热活血方药能降低滑膜炎症水平,抑制Wnt信号通路中DKK-1细胞因子的表达,促进β-catenin、TCF、LRP5的表达,可能通过作用于Wnt/β-catenin通路在CIA大鼠骨破坏过程中发挥骨保护作用。     

当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎软骨细胞氧化应激损伤与炎症反应

目的:研究当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路对骨关节炎软骨细胞的氧化应激损伤及炎症反应的影响。方法:在大鼠膝关节中注射碘乙酸建立关节炎模型,3 mg/只,对照组注射等量的0.9%氯化钠溶液; 将关节炎模型大鼠分为模型组和当归多糖组。给药3周后,采用酶联免疫吸附法测定SD大鼠血清中炎症因子水平、氧化应激参数水平[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]、膝关节软骨中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA表达水平和c-Fos蛋白表达水平。采用酶标仪测定当归多糖处理48 h后的IL-1β,损伤SW1353细胞8 h后的细胞活性。通过PCR法检测MMP-13 mRNA、β-catenin mRNA、ADAMTS4 mRNA的表达水平。通过Western blot法测定β-catenin、MMP-13蛋白表达水平。结果:当归多糖治疗后,IL-1β、TNF-α、MDA、SOD、CAT水平及MMP-13 mRNA和c-Fos蛋白均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。在IL-1β刺激的SW1353损伤模型中,经过10、50、100 μg/ml当归多糖处理后,SW1353细胞活性较模型组增加,组间比较差异有统计学意义(均P<0.05); Wnt 4a、GSK-3β、β-catenin、ADAMTS4 mRNA和MMP-13 mRNA蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎软骨细胞的氧化应激损伤与炎症反应。     

八角枫丸剂抗大鼠类风湿性关节炎的作用机制

目的探讨八角枫丸剂抗大鼠类风湿性关节炎的作用机制。方法大鼠右后足及尾根部皮下注射牛源性Ⅱ型胶原蛋白0.1 mL,14 d后随机分为正常组、模型组、阳性药(15 mg/kg雷公藤多苷)组及八角枫丸剂高(84 mg/kg)、低(21 mg/kg)剂量组。测定大鼠足厚度、关节炎指数评分,进行踝关节组织病理学分析,计算胸腺和脾脏指数,ELISA法检测血清IL-1β、TNF-α、TGF-β1、IL-10水平,Western blot法检测滑膜组织NLRP3、TLR4、IRAK1蛋白表达。结果八角枫丸剂能减少大鼠足厚度、关节炎指数评分,缓解踝关节组织滑膜增生、炎细胞浸润、血管翳生成、骨破坏,降低血清IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平,升高IL-10水平,抑制滑膜组织NLRP3、TLR4、IRAK1表达的下调。结论八角枫丸剂可通过抑制NF-κB信号通路的激活来发挥对大鼠类风湿性关节炎的保护作用。     

姜黄素对佐剂型关节炎大鼠滑膜细胞核转录因子-kB表达的影响

目的 观察姜黄素对佐剂型关节炎模型大鼠膝关节腔液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量及对滑膜组织核转录因子-kB(NF-kB)表达的影响,探讨姜黄素治疗类风湿关节炎(RA)的可能作用机制.方法 SD大鼠左侧足趾皮内注射弗氏完全佐剂,制作成RA动物模型,经过姜黄素治疗后,通过酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠膝关节腔液TNF-α和IL-1β含量,免疫组织化学染色(SP)检测NF-kB的表达.结果 与正常对照组大鼠相比,RA模型组大鼠关节腔液TNF-α和IL-1β含量升高,膝关节滑膜组织NF-kB的表达增加;经过姜黄素治疗后以七指标恢复至正常水平.结论 姜黄素能下调滑膜细胞NF-kB的表达与活性,降低炎性细胞因子的表达,从而治疗RA.     

黄芪甲苷对类风湿关节炎肺间质病变大鼠的治疗作用和机制

目的 研究黄芪甲苷对类风湿关节炎肺间质病变(RA-ILD)大鼠的治疗作用并探讨可能机制。方法 Wistar大鼠48只随机分为对照组、模型组、黄芪甲苷高中低剂量组、雷公藤甲苷组;造模后给予相应药物。检测各组大鼠关节炎指数、肿胀程度,观察滑膜及肺组织病理特征,采用实时定量PCR、蛋白杂交印迹分析、免疫共沉淀等技术观察Notch和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达及结合情况。结果 黄芪甲苷(AS-IV)可以改善RA-ILD大鼠滑膜及肺组织的病理变化,可促进E-Cadherin、抑制Snail、ZEB-1 mRNA表达,其作用与剂量呈依赖性;AS-IV还可以显著抑制Notch通路关键蛋白NICD的表达及phos-β-catenin的表达水平;且AS-IV明显抑制了肺组织中β-catenin及NICD分别与Snail及ZEB-1的启动子区结合能力,而提高了β-catenin及NICD与E-Cadherin的启动子区的结合。结论 黄芪甲苷可能通过抑制Notch和Wnt/β-catenin信号通路减轻RA-ILD大鼠肺间质病变。     

壮医药线点灸联合甲氨蝶呤对佐剂关节炎大鼠NF-κB/IκB信号通路的影响

目的:从分子生物学角度探究壮医药线点灸联合甲氨蝶呤对佐剂关节炎大鼠NF-κB/IκB信号通路的影响,为壮医药线点灸联合甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎(RA)提供理论依据。方法:建立佐剂关节炎大鼠模型,并分为正常对照组(NC)、关节炎模型组(RA)、甲氨蝶呤组(MTX)和壮医药线点灸联合甲氨蝶呤组(CT)。观察并评估大鼠关节炎指数; ELISA法检测各组大鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量; qPCR和Western blotting法检测滑膜组织中P65、I-k Bα、TNF-α、IL-1β和COX-2的表达。结果:与RA组相比,MTX组和CT组均能显著降低关节炎指数(P 0. 05),且CT组显著低于MTX组(P 0. 05);与RA组相比,MTX组和CT组大鼠血清中TNF-α和IL-1β含量均显著下降(P 0. 05),其中CT组下降更为显著(P 0. 05 VS MTX); MTX组和CT组大鼠关节滑膜组织中P65、TNF-α、IL-1β和COX-2的mRNA和蛋白表达显著下调(P 0. 05 VS RA),I-k Bα显著上调(P 0. 05 VS RA),且MTX组和CT组相比差异亦具有显著性差异(P 0. 05)。结论:壮医药线点灸联合甲氨蝶呤干预能够显著改善大鼠关节炎症状,且其作用机制可能是通过调控NF-κB/IκB信号通路,从而抑制炎症因子释放和环氧化酶的表达来实现的。     

宽筋藤醇提物对佐剂性关节炎模型大鼠的影响

目的:研究宽筋藤醇提物对弗氏完全佐剂(CFA)诱导的佐剂性关节炎(AA)大鼠的影响。方法:除正常组外,其余各组大鼠足跖皮内注射CFA致AA大鼠模型,将模型大鼠随机分成模型组、宽筋藤高剂量组、宽筋藤中剂量组、宽筋藤低剂量组、甲氨蝶呤组,灌胃给药20 d后,进行全身及关节炎指数评分以及足爪肿胀度和血清细胞炎性因子的测定。结果:与模型组比较,宽筋藤醇提物能抑制AA大鼠关节肿胀程度,降低全身及关节炎指数评分和血清中白细胞介素-6(IL-6)、细胞肿瘤因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的水平。结论:宽筋藤醇提物能拮抗AA大鼠病情发展,其机制可能与其下调血清炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表达有关。