miR-124-3p与miR-506-3p在蛋白C降低中的作用及机制研究

目的:探讨miR-124-3p和miR-506-3p在蛋白C(protein C,PROC)降低中的作用及机制。方法:将PROC 3'-UTR野生型(PROCwt)和PROC 3'-UTR突变型(PROCmut)克隆构建到含萤火虫荧光素酶报告质粒中(Luc-PROCwt和Luc-PROCmut),利用双荧光素酶报告体系...     

Survivin与Caspase-3在肝母细胞瘤中的表达及意义

目的 观察细胞凋亡抑制蛋白Survivin和细胞凋亡蛋白酶Caspase-3在肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)中的表达情况,探讨其相互关系及临床意义.方法 运用免疫组织化学S-P法检测20例HB、9例瘤旁组织、4例正常儿童和8例正常成人肝组织中Survivin和Caspase-3的表达,并对其结果进行研究.结果 Survivin在正常儿童、瘤旁组织和HB中阳性表达率分别为25.0%、33.3%和100%,成人肝组织中基本未见表达.Survivin在HB组织中的表达显著高于瘤旁及正常肝组织,但Survivin在正常儿童和正常成人肝组织中的表达无统计学差异.Caspase-3在正常成人肝组织、正常儿童肝组织、瘤旁组织和HB中阳性表达率分别为87.5%、0、55.6%和80%,Caspase-3在正常成人肝组织与HB组织中的表达显著高于正常儿童肝组织.Survivin和Caspase-3在HB组织中的表达无相关性.Survivin与Caspase表达构成比与患儿的年龄有相关性:63.6%的HB病例,其Survivin与Caspase-3的表达强度基本一致,均呈高表达状态,且本组患儿年龄的中位数值较高;仅36.4%病例的Survivin呈强表达而Caspase-3弱表达或不表达,本组患儿年龄的中位数值较小.结论 在HB中,Survivin的高表达与HB的发生发展关系密切.正常儿童与正常成人的肝组织中,其Caspase-3表达有显著性差别.Survivin与Caspase-3在HB中的表达率缺乏相关性.在HB的不同的年龄组中,Survivin与Caspase-3存在不同的表达关系,说明它们间可能存在不同的相互作用机制.     

P53蛋白及PCNA表达与肝母细胞瘤临床病理关系

用免疫组织化学法检测１７例肝母细胞瘤中Ｐ５３蛋白及ＰＣＮＡ的表达、分布,探讨这两种指标与肝母细胞瘤的临床病理关系和价值。材料和方法：取自我院外科手术标本１７例,男１２例,女５例。年龄最小５天,最大１１岁。病理分型按《外科病理学》标准。根据肿瘤组织分化程度分为组织结构分化好类型（ＦＨ）,及组织结构分化差类型（ＵＨ）,方法：常规ＳＰ法,一抗Ｐ５３１∶５０稀释,ＰＣＮＡ１∶１００稀释,对照组１１例取自非肝脏疾病尸检肝组织。结果判断：每张切片观察１０个光镜高倍视野下肿瘤细胞核有棕黄色颗粒为阳性,计数１０…     

癌基因MDM2过度表达与儿童急性淋巴细胞白血病的发病和预后的关系

ＭＤＭ2是抑癌基因ｐ53的拮抗基因。ｐ53基因突变发生于人类许多肿瘤,所以被认为与这些肿瘤的发生有关,而在白血病中ｐ53基因突变则少见,却有Ｐ53蛋白功能的失活[1,2]。ＭＤＭ2过度表达是ｐ53基因突变以外的另一ｐ53基因失活途径。我们用反转录聚合酶链反应(ＲＴＰＣＲ)方法检测了儿童急性淋巴细胞白血病(ＡＬＬ)治疗前外周血单个核细胞中ＭＤＭ2ｍＲＮＡ表达情况,并分析ＭＤＭ2过度表达与儿童ＡＬＬ发病及预后的关系。对象1997年3月～1998年10月收治初发儿童ＡＬＬ32例,其中男23例,女9例;年龄1.5～11岁,平均年龄6.6岁。初诊时外周血幼稚细…     

肝母细胞瘤各组织类型的免疫表达和预后的关系

目的 探讨肝母细胞瘤各组织类型的免疫表达和预后的关系。方法 对２４例肝母细胞瘤进行临床病理分析和组织学分型,其中１８例作７种标记的免疫组化研究。结果 胎儿型１２例,胚胎型７例,间变型３例和上皮间叶混合型２例;细胞角蛋白,甲胎蛋白,Ｓ－１００蛋白和波形蛋白在肿瘤上皮细胞浆的表达分别为１４例,１０例,９例和６例,癌胚抗原,Ｐ５３和Ｐ１６蛋白在细胞核中表达分别是１１例,９例和７例;     

Kail／CD82表达水平与神经母细胞瘤转移的关系探讨

目的探讨Kail／CD82表达水平与神经母细胞瘤转移之间的关系。方法选取40例各期神经母细胞瘤石蜡标本,采用RT—PCR检测KailmRNA的表达;采用免疫组化检测Kai1基因的蛋白产物CD82的表达水平,研究其与神经母细胞瘤转移之间的关系。结果RT．PCR监测显示：有淋巴结或远处转移的神经母细胞瘤KailmRNA的相对含量为0．0748±0．0063,而无转移者为0．4576±0．0226,差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组化显示：无转移的神经母细胞瘤CD82的阳性表达率为71．43％;而有淋巴结或远处转移者阳性表达率为31．58％,差异有统计学意义（P〈0．05）,有骨髓浸润者与无骨髓浸润者Kail／CD82的表达无统计学意义（P〉0．05）。结论Kail／CD82表达水平可作为判断神经母细胞瘤是否转移的一个潜在标志。     

miR-876-5p通过靶向FOXM1对儿童髓母细胞瘤细胞增殖的影响

目的:探讨微小核糖核酸876-5p(micro ribonucleic acid-876-5p, miR-876-5p）通过靶向叉头盒蛋白M1(forkhead box M1,FOXM1）对儿童髓母细胞瘤（medulloblastoma ,MB）细胞增殖的影响。方法:收集2018年1月至2020年10月在湖南省儿童医院...     

GYPC和TRIP3基因表达水平与儿童急性淋巴细胞白血病预后的关系

目的研究儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）复发及缓解的分子生物学机制,探讨GYPC、TRIP3基因的表达水平与儿童ALL预后的关系。方法应用半定量逆转录 聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测儿童ALL初治患者、缓解患者、复发患者及正常对照儿童GYPC基因、TRIP3基因的表达。结果儿童ALL GYPC基因表达：①GYPC基因表达水平在复发患者中最高,不仅高于正常对照组（P<0.01）和完全缓解组（P<0.01）,也高于初治组（P<0.01）。②初治患者中,GYPC基因阳性表达者的完全缓解(CR)率与阴性表达者差异无显著性,但未缓解患者治疗前GYPC基因表达水平高于完全缓解患者（P<0.05）。儿童ALL TRIP3基因表达：①TRIP3基因在初治组ALL中的表达水平与复发组ALL中的表达水平相比差异无显著性,在缓解组ALL中表达水平明显高于复发组及初治组（P<0.01）及正常对照组;②在初治的ALL患儿中,TRIP3基因表达阳性者其治疗后的完全缓解率高于表达阴性者（P<0.05）。完全缓解患者治疗前TRIP3基因表达水平高于未缓解患者（P<0.05）。结论GYPC可能是儿童ALL的不利因素,GYPC高表达者疗效差,易复发。TRIP3基因高表达者对化疗药物反应敏感,易于缓解。［中国当代儿科杂志,2009,11（1）：29-32］     

Serabelisib抗人肝母细胞瘤HepG2细胞的作用及其机制探讨

目的探讨小分子抑制剂Serabelisib抑制PI3K-Akt信号通路活性及对人肝母细胞瘤细胞系增殖、凋亡的效应作用及其相关机制。方法采用不同浓度的小分子抑制剂Serabelisib(0μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L)处理人肝母细胞瘤细胞Hep G2细胞,通过四氮唑盐比色法检测Serabelisib对细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞仪检测细胞凋亡变化情况,采用蛋白质免疫印迹检测Serabelisib处理后Hep G2细胞中PI3K信号通路活性及凋亡相关蛋白表达变化情况。结果当Serabelisib浓度≥4μmol/L时,对人肝母细胞瘤细胞系Hep G2细胞增殖具有显著抑制作用,随着Serabelisib浓度增加,其对Hep G2细胞增殖的抑制率逐渐增大,具有剂量和时间依赖性。随着Serabelisib浓度增加,Hep G2细胞凋亡率明显升高,同样具有剂量依赖性。蛋白质免疫印迹检测发现Serabelisib处理后的Hep G2细胞中PI3K信号通路中关键激酶Akt磷酸化水平降低,促凋亡蛋白PARP 89KD裂解片段表达增加。结论Serabelisib通过抑制PI3K/Akt信号转导通路,抑制人肝母细胞瘤Hep G2细胞增殖,并诱导凋亡。     

miR-92a-3p靶向调控PTEN对神经母细胞瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨微小RNA-92a-3p （micro RNA-92a-3p, miR-92a-3p）靶向调控PTEN对神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用miR-92a-3p mimics及其抑制基因（inhibitor）分别转染至SH-SY5Y细胞,根据实验需要分为miR...     

血清miR-200c-3p 表达水平对判断新生儿呼吸窘迫综合征严重程度和预后的价值

目的探讨血清miR-200c-3p表达水平对判断新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)严重程度和预后的价值。方法选取2016年6月—2019年6月收治的102例NRDS新生儿,应用新生儿急性生理学评分围生期补充II(SNAPPE-II)评分进行评估。根据患儿生存情况分为生存组(n=73)和死亡组(n=29),按照X线结果和病情严重程度分为轻度组(Ⅰ、Ⅱ级,67例)和重度组(Ⅲ、Ⅳ级,35例),采用实时荧光定量PCR检测各组血清miR-200c-3p表达水平。应用ROC曲线分析miR-200c-3p表达水平及SNAPPE-II评分预测NRDS患儿死亡的价值。结果死亡组血清miR-200c-3p表达水平及SNAPPE-II评分均明显高于生存组,重度组miR-200c-3p表达水平、SNAPPE-II评分及病死率高于轻度组,差异均有统计学意义(P0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-200c-3p表达水平联合SNAPPE-II评分预测NRDS死亡的曲线下面积(AUC)为0.93(95%CI:0.87～0.98),明显高于单项miR-200c-3p(0.84,95%CI:0.78～0.90)及SNAPPE-II评分(0.80,95%CI:0.75～0.86),差异有统计学意义(P0.05),其灵敏度和特异度为94.0%和88.5%。NRDS患儿血清miR-200c-3p表达水平与SNAPPE-II评分呈显著正相关(r=0.84,P0.01)。结论血清miR-200c-3p表达水平升高与NRDS病情严重程度及预后相关,miR-200c-3p联合SNAPPE-II评分对NRDS预后判断具有较高价值。     

血浆微小核糖核酸-101-3p和微小核糖核酸-141-3p在脓毒症患儿中表达的意义

目的:探讨血浆微小核糖核酸-101-3p(miR-101-3p)及微小核糖核酸-141-3p(miR-141-3p)在脓毒症患儿中的表达及其临床意义。方法:选择2016年1月至2019年10月三亚市人民医院收治的153例脓毒症患儿,根据其病情严重程度分为脓毒症非休克组(94例)和脓毒症休克组(59例);根据脓毒症患儿2...     

血清miR-922及miR-506对儿童急性淋巴细胞白血病诊断及预后判断的价值

目的 探讨血清miR-922及miR-506表达水平对儿童急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）诊断及预后判断的价值。 方法 前瞻性选取132例ALL患儿（ALL组）和80例健康儿童（健康对照组）纳入本研究,采用实时荧光定量PCR技术检测ALL组和健康对照组血清miR-922及miR-506表达水平。绘制受试者工作特征曲线分析miR-922及miR-506对儿童ALL的诊断价值。应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用多因素COX回归模型分析影响ALL患儿预后不良的因素。 结果 ALL组血清miR-922及miR-506表达水平均明显高于健康对照组（P<0.001）。受试者工作特征曲线分析结果显示,miR-922及miR-506诊断儿童ALL的最佳截断值分别为1.46、2.17。miR-922高表达组（≥1.46）及miR-506高表达组（≥2.17）的淋巴结肿大、白细胞计数≥50×10⁹/L、中高危险度分层、MLL基因重排、染色体核型异常的发生率均明显高于miR-922及miR-506低表达组（P<0.05）。Kaplan-Meier分析结果显示,miR-922及miR-506高表达与ALL患儿生存期短有关（P<0.05）。多因素COX回归分析结果显示,白细胞计数≥50×10⁹/L、危险度分层为中高危、MLL基因重排、miR-922≥1.46及miR-506≥2.17可提示ALL患儿预后不良（P<0.05）。 结论 miR-922及miR-506表达水平对儿童ALL诊断及预后判断均有较好的价值。     

神经母细胞瘤细胞的分化逆转与癌基因表达调控

神经母细胞瘤是小儿常见的实体肿瘤，恶性度极高，自行消退与体外诱导后分化成熟是其特点之一。分化疗法是临床治疗的一个新方向。     

狼疮性肾炎患儿外周血单个核细胞miR-151a-3p的表达及其与疾病活动度和血管损害的相关性

目的:探讨狼疮性肾炎(LN)患儿外周血单个核细胞(PBMC)miR-151a-3p的表达及其与疾病活动度和血管损害的相关性。方法:选取2016年1月至2019年3月海南省妇女儿童医学中心收治的LN患儿87例,其中Ⅱ型16例、Ⅲ型14例、Ⅳ型34例、Ⅴ型17例、Ⅵ型6例;另选取健康体检儿童40例作为健康对照组。采用系统性...     

LINE1-ORF1p过表达对肾母细胞瘤细胞WT_CLS1增殖的影响

目的 制备LINE1-ORF1p多克隆抗体,研究LINE1-ORF1p过表达对肾母细胞瘤细胞WT_CLS1增殖的影响。方法 利用基因工程方法原核表达LINE1-ORF1p,免疫家兔制备多克隆抗体。间接ELISA法检测抗体效价,通过Western blot及免疫组化方法检测抗体对LINE1-ORF1p的特异性识别能力。构建真核表达载体pEGFP-N1-LINE1-ORF1,转染WT_CLS1细胞,通过Western blot和qRT-PCR检测LINE1-ORF1蛋白和基因的表达情况,采用细胞增殖实验和平板克隆形成实验检测LINE1-ORF1p对WT_CLS1细胞增殖及肿瘤细胞克隆形成的影响。结果 制备的LINE1-ORF1p抗体效价 > 1：16 000,能对细胞及肿瘤组织内LINE1-ORF1p特异识别。转染pEGFP-N1-LINE1-ORF1的WT_CLS1细胞,其LINE1-ORF1的mRNA及蛋白水平显著增高（P < 0.05）,细胞增殖能力和克隆形成能力都显著增强（P < 0.05）。结论 LINE1-ORF1p可以促进肾母细胞瘤细胞的生长和肿瘤细胞克隆形成,可能参与肾母细胞瘤的发病机制。     

干扰Foxp3在神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2中的表达及对其免疫功能的影响

目的 探讨降低Foxp3的表达对神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2免疫功能的影响.方法 设计、合成Foxp3的siRNA干扰序列,转染神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2,分别采用Real-time PCR及流式细胞术观察Foxp3以及共刺激分子CD86在于扰前后的表达;最后将Foxp3干扰的SK-N-BE2细胞与人外周血共培养,观察Foxp3的不同表达水平对上述培养体系中T淋巴细胞功能的影响.结果 本研究设计、合成的siRNA显著降低了Foxp3在神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2中的表达,低表达Foxp3的SK-N-BE2细胞上共刺激分子CD86的表达显著升高,且在共培养体系中细胞因子IFN-γ、IL-17的表达出现轻微上调,但同时显著降低了免疫抑制分子IL-10、TGF-β在mRNA水平的表达.结论 Foxp3在神经母细胞瘤中的高表达可能是该细胞逃避免疫监视的重要机制,干扰Foxp3的表达能降低共培养体系中的免疫抑制分子表达,表明干预该分子可望为肿瘤的免疫防治提供新的思路.     

mdm2基因在肾母细胞瘤中的表达及其与临床病理因素的关系

目的探讨mdm2基因在小儿肾母细胞瘤中的表达及其与临床病理因素的关系。方法应用免疫组织化学技术检测24例肾母细胞瘤中的mdm2表达水平,分析mdm2与临床病理因素的关系。结果在24例肾母细胞瘤中mdm2的表达水平与淋巴结转移、临床分期及分化程度呈明显相关性(P<0.05)。结论mdm2基因高表达是肾母细胞瘤转移中的重要的分子生物学事件,检测肾母细胞瘤mdm2的表达情况对评估患儿的预后可能具有重要意义。     

姜黄素对原代培养神经母细胞瘤细胞的抑制作用及其对Caspase-3/Bcl-2表达的影响

目的探讨姜黄素对原代培养的神经母细胞瘤细胞的影响及其相关机制。方法用MTT法和Giemsa染色观察姜黄素对原代培养的神经母细胞瘤细胞生长的抑制作用。蛋白印迹法观察姜黄素对神经母细胞瘤细胞Caspase-3和Bcl-2表达的影响。结果姜黄素对原代培养的神经母细胞瘤细胞有明显的增殖抑制作用,呈剂量依赖性。与阴性对照组相比,姜黄素使Caspase-3表达明显升高,Bcl-2表达明显下降。结论姜黄素可诱导神经母细胞瘤细胞凋亡,升高Caspase-3活性、降低Bcl-2活性可能是其重要作用机制之一。