肥大细胞microRNA-126表达差异对白介素-4分泌影响观察

目的观察micro RNA(mi R)-126在哮喘患儿外周血中的表达特点,检测其下调对肥大细胞白介素(IL)-4分泌的影响及可能机制。方法以2015年9~12月在南京医科大学附属南京儿童医院哮喘专科门诊就诊的哮喘患儿6例作为观察组,收集同期健康体检儿童作为对照组。应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测2组外周血mi R-126的表达差异。采用RT-PCR检测小鼠肥大细胞株(P815)中mi R-126的变化。将P815细胞分别转染mi R-126阴性对照序列(阴性对照组)及mi R-126抑制物(mi R-126下调组),应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测2组细胞上清IL-4水平,应用免疫印迹法(Western Blot)验证2组细胞磷酸化P38水平。结果哮喘组外周血mi R-126水平显著高于对照组(P0.05)。在细胞水平的研究发现,脂多糖(LPS)刺激后P815中mi R-126表达量增加(P0.05)。而mi R-126下调组的IL-4及磷酸化P38水平均低于阴性对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 mi R-126在哮喘患儿外周血表达升高。下调mi R-126可能通过减少磷酸化P38蛋白表达抑制肥大细胞IL-4分泌。     

EZH2对先天性巨结肠结肠组织中GFRα1表达的影响

目的 通过检测先天性巨结肠（HSCR）患儿结肠组织内胶质细胞源性神经营养因子受体α1（GFRα1）及果蝇Zeste基因增强子人类同源物2（EZH2）的表达水平,探讨EZH2在调控GFRα1基因表达及HSCR发病过程中的作用。方法 随机选取24例行巨结肠根治术的HSCR患儿,取痉挛段结肠组织为试验组。以同期18例因新生儿坏死性小肠结肠炎而接受手术治疗的患儿,取手术切除的坏死结肠组织作为对照组。利用实时荧光定量PCR及Western blot检测两组结肠组织内GFRα1、EZH2的表达水平。将人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y分为EZH2过表达组和阴性对照组,EZH2过表达组转染pCMV6-EZH2质粒,阴性对照组转染pCMV6质粒,检测转染后细胞中GFRα1、EZH2的表达水平。结果 与对照组相比,试验组GFRα1及EZH2 mRNA和蛋白的表达水平降低（P < 0.05）,且EZH2蛋白表达水平与GFRα1蛋白呈正相关（r=0.606,P=0.002）。与阴性对照组相比,EZH2过表达组EZH2及GFRα1表达水平明显上调（P < 0.05）。结论 HSCR患儿结肠组织中EZH2低表达可能是GFRα1表达不足,诱发HSCR的原因之一。     

血清miR-17-92基因簇对视网膜母细胞瘤诊断价值的研究

目的分析血清mi R-17-92基因簇对视网膜母细胞瘤(RB)的诊断价值。方法采用实时定量PCR法检测20例RB患儿、20名健康对照者的血清mi R-17-92基因簇表达水平,分析其在不同分期RB患儿的表达差异及综合治疗前后的变化,并采用ROC曲线判断其对RB的诊断价值。结果 RB患儿血清中mi R-17-92基因簇成员mi R-17-3P、mi R-17-5P、mi R-18a和mi R-20a的相对表达量均高于健康对照组,以mi R-18a升高更为显著,差异均有统计学意义(P0.05);两组mi R-19a、mi R-19b-1和mi R-92a-1相对表达量的差异无统计学意义(P0.05)。mi R-17-5P、mi R-17-3P、mi R-18a和mi R-20a表达量在早中期和晚期RB患儿之间的差异均无统计学意义(P0.05),但综合治疗后表达量显著降低(P0.05)。mi R-17-3P、mi R-17-5P、mi R-18a和mi R-20a对RB诊断价值的曲线下面积(AUC)分别为0.770、0.755、0.828和0.665,以mi R-18a的AUC最大,并具有较好的灵敏度(90%)和特异度(65%)。结论 mi R-17-92基因簇的mi R-17-3P、mi R-17-5P、mi R-18a和mi R-20a在RB患儿血清中高表达,mi R-18a有可能作为RB诊断的新指标。     

hsacirc0005777在肝母细胞瘤中的表达及对细胞增殖周期的影响研究

目的探索环状RNA hsa_circ₀005777在肝母细胞瘤中的表达及对肝母细胞瘤细胞增殖周期的影响。方法实验细胞包括人肝母细胞瘤细胞株HepG2和HUH6, 将实验细胞培养在含10%胎牛血清及1%双抗的DMEM培养基中, 置于37℃、5% CO2的恒温培养箱中。实验组织标本包括肝母细胞瘤肿瘤及癌旁组织标本, 来源于中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科住院患儿手术切除的组织。所有肿瘤组织标本和癌旁组织标本在手术切除后, 均立即浸泡在RNA later保存液中防止RNA降解, 随后放在-80℃冰箱保存。在肝母细胞瘤细胞株中转染hsa_circ₀005777过表达质粒, 为过表达组;未转染过表达质粒的细胞株作为阴性对照, 为对照组。检测内容包括:①鉴定hsa_circ₀005777在肝母细胞瘤细胞株中的性质及分布情况;②检测hsa_circ₀005777在肝母细胞瘤肿瘤、癌旁组织组织标本和肝母细胞瘤细胞株中的表达情况;③检测过表...     

let-7b通过靶向调控SALL4影响肝母细胞瘤细胞增殖能力的机制研究

目的初步研究let-7b和SALL4在肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)细胞恶性行为中的作用及二者间的相互作用机制。方法采用qRT-PCR检测let-7b在正常肝细胞(HL-7702)与HB细胞系、HB组织及癌旁组织中的表达水平,采用免疫组化法检测SALL4在HB组织及癌旁组织中的表达水平,并分析HB组织中let-7b与SALL4表达水平的相关性。通过MTT、细胞周期和凋亡等实验方法上调或抑制HB细胞中let-7b的表达水平,观察let-7b对HB细胞生物学功能的影响;通过生物信息学预测软件、双荧光素酶报告系统、qRT-PCR和western blot等实验,从体外水平验证let-7b与SALL4的靶向关系。采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同let-7b与SALL4表达水平的肝母细胞瘤患者总体生存率的差异。结果与癌旁组织相比,let-7b在HB组织中表达量显著降低,而SALL4表达量显著升高;let-7b在肝母细胞瘤组织中的表达水平与PRETEXT分期存在相关性(P=0.002),且HB组织标本中let-7b与SALL4的表达水平存在负相关性(r=-0.716,P<0.001)。let-7b低表达组HB患者的总体生存率显著低于let-7b高表达组(P=0.017)。SALL4阳性组HB患者的总体生存率显著低于SALL4阴性和弱阳性组(P=0.034)。MTT、细胞周期和凋亡实验结果显示,let-7b可抑制肝癌Hep G2细胞增殖,促进细胞的凋亡。而抑制内源性的let-7b可促进Hep G2细胞增殖,抑制细胞的凋亡。生物信息学软件预测及构建双荧光报告载体荧光检测等实验结果显示,let-7b与SALL4存在一定的靶向关系。结论let-7b和SALL4可作为肝母细胞瘤不良预后的潜在标记物;let-7b作为抑癌基因可以靶向调控SALL4的表达,抑制HB细胞的增殖。     

外周血hsa-miR-342-5p诊断儿童结核的特异度和灵敏度

目的评估外周血hsa-miR-342-5p检测对早期诊断儿童结核的价值。方法收集初治涂片阳性、涂片阴性结核患儿,肺炎患儿和正常儿童各20例,采集静脉血,TRIzol法提取外周血总RNA,q RT-PCR检测hsa-mi R-342-5p在各组间的相对表达水平,ROC曲线分析hsa-mi R-342-5p诊断儿童结核的特异度和灵敏度。结果 hsa-mi R-342-5p在涂片阳性结核、涂片阴性结核患儿、肺炎患儿和正常儿童四组间的差异具有统计学意义(F=21.94,P=0.00)。与正常儿童相比,hsami R-342-5p在涂片阳性结核、涂片阴性结核和肺炎患儿中的表达水平均下调,差异有统计学意义(P均0.01);与肺炎患儿相比,hsa-mi R-342-5p在涂片阳性结核、涂片阴性结核患儿中的表达也明显下调,差异有统计学意义(P0.01)。对于区分涂片阳性结核和肺炎,hsa-mi R-342-5p的特异度和灵敏度性均为90%;而区分涂片阴性结核和肺炎,其特异度和灵敏度分别为65%和100%。结论外周血hsa-mi R-342-5p有望成为新的分子指标用于儿童结核的早期诊断。     

外周血hsa-miR-342-5p诊断儿童结核的特异度和灵敏度北大核心CSCD

目的评估外周血hsa-miR-342-5p检测对早期诊断儿童结核的价值。方法收集初治涂片阳性、涂片阴性结核患儿,肺炎患儿和正常儿童各20例,采集静脉血,TRIzol法提取外周血总RNA,q RT-PCR检测hsa-mi R-342-5p在各组间的相对表达水平,ROC曲线分析hsa-mi R-342-5p诊断儿童结核的特异度和灵敏度。结果 hsa-mi R-342-5p在涂片阳性结核、涂片阴性结核患儿、肺炎患儿和正常儿童四组间的差异具有统计学意义(F=21.94,P=0.00)。与正常儿童相比,hsami R-342-5p在涂片阳性结核、涂片阴性结核和肺炎患儿中的表达水平均下调,差异有统计学意义(P均<0.01);与肺炎患儿相比,hsa-mi R-342-5p在涂片阳性结核、涂片阴性结核患儿中的表达也明显下调,差异有统计学意义(P<0.01)。对于区分涂片阳性结核和肺炎,hsa-mi R-342-5p的特异度和灵敏度性均为90%;而区分涂片阴性结核和肺炎,其特异度和灵敏度分别为65%和100%。结论外周血hsa-mi R-342-5p有望成为新的分子指标用于儿童结核的早期诊断。     

丝切蛋白在神经母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨丝切蛋白(cofilin, CFL)在神经母细胞瘤中的表达变化与意义。方法收集2017年1月至2019年1月在新疆维吾尔自治区人民医院及新疆维吾尔自治区儿童医院进行手术治疗的神经母细胞瘤患儿的肿瘤组织和癌旁组织各10例, 将最终符合实验标准的12例组织分为两组, 其中6例肿瘤组织作为肿瘤组织组, 6例癌旁组织作为癌旁组织组, 通过实时定量聚合酶链反应(quanti-ficational real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测两组CFL、Bax、Bcl-2、MCL-1的表达水平。将CFL siRNA转染至SK-N-SH细胞内, 采用CCK-8法检测细胞生长情况, 采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的差异变化。结果 CFL mRNA和蛋白在肿瘤组织组中的表达水平较癌旁组织组显著升高, 分别为(2.53±1.01)比(1.12±0.47)、(0.74±0.19)比(0.48± 0.15 ), 差异均具有统计学意义(P<0.05);Bax mRNA和蛋白在肿瘤组织组中的表达水平较癌旁组织组显著降低, 分别为(...     

MiR-483-3P下调RIOK3蛋白表达促进神经母细胞瘤的增殖和迁移

目的探讨microRNA-483-3P(miR-483-3P)对神经母细胞瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响,预测并验证miR-483-3P的靶基因及其对靶基因的影响。方法 miRNA微阵列芯片结果发现miR-483-3P在神经母细胞瘤中表达上调,差异倍数显著,并居于差异表达miRNA的首位。利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的miR-483-3P inhibitor、miR-483-3P inhibitor的阴性对照序列分别瞬时转染人人神经母细胞瘤SH-SY-5Y细胞株中,RT-qPCR技术检测各组中miR-483-3P的表达水平,CCK-8法检测各组癌细胞的增殖情况,Transwell小室实验检测各组癌细胞的体外侵袭和迁移能力。利用生物信息学软件预测miR-483-3P的靶基因并用荧光素酶报告基因检测实验、Western blot实验加以验证。结果与癌旁正常组织相比,miR-483-3P在神经母细胞瘤中高表达(P0.01);与阴性对照组相比,癌细胞转染miR-483-3P inhibitor后,miR-483-3P表达显著下调(P0.01),细胞的增殖情况和体外迁移能力均降低(P0.05)。生物信息学软件预测出RIOK3是miR-483-3P的靶基因之一,当细胞转染了miR-483-3P inhibitor后荧光酶活性升高(P0.01)。与阴性对照组相比,当细胞转染了miR-483-3P inhibitor后在蛋白质水平RIOK3表达升高(P0.01)。结论.RIOK3是miR-483-3P的靶基因之一,miR-483-3P能下调RIOK3的表达并显著促进神经母细胞瘤细胞的增殖和体外迁移。     

SNHG7-miR-653-5p-STAT2反馈通路在神经母细胞瘤进展中的调节作用研究CSCD

目的研究lncRNA SNHG7在神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)进展中的作用,以及SNHG7-miR-653-5p-STAT2反馈通路在神经母细胞瘤进展中的调节作用。方法从青岛大学附属医院收治的NB患儿体内获得92对NB组织及相邻非肿瘤组织。采用qRT-PCR检测SNHG7在神经母细胞瘤肿瘤组织及细胞中的表达情况。采用Kaplan-Meier分析神经母细胞瘤患儿的总体存活率。采用比色法(MTT法)和集落形成法检测SNHG7对SK-N-SH和SH-SY5Y细胞的作用。采用Transwell侵袭及迁移试验检测SK-N-SH和SH-SY5Y细胞的侵袭和迁移能力。采用荧光素酶检测miR-653-5p和SNHG7、STAT2之间的作用。采用RIP测定及RNA下拉测定检验SNHG7和miR-653-5p在NB中的相对表达情况。采用Spearman相关分析探究SNHG7与miR-653-5p、STAT2的相关性。结果qRT-PCR显示,92对NB组织及相邻非肿瘤组织中,肿瘤组织(n=53)中SNHG7的表达量高于非肿瘤组织(n=39)。SNHG7高表达的NB患儿(n=53)总生存期随月份的增加而逐渐降低,SNHG7低表达的NB患儿(n=39)总生存期随月份的增加也逐渐降低,两组差异有统计学意义(P=0.004)。细胞功能试验:①MTT法和集落形成法检测结果显示,SNHG7的下调对SK-N-SH和SH-SY5Y细胞的存活和增殖有明显抑制作用;②Transwell试验检测结果显示,敲低SNHG7可明显抑制SK-N-SH和SH-SY5Y细胞的细胞迁移和侵袭能力(P<0.05);③荧光素酶检测显示,miR-653-5p能降低SNHG7-WT(野生型)的荧光素酶活性,且miR-653-5p与STAT2-WT(野生型)之间存在特异性的相互作用。Spearman相关分析显示:①NB组织中SNHG7与miR-653-5p表达水平呈负相关(r=-0.281,P=0.007);②STAT2的表达量与NB组织中miR-653-5p表达水平呈负相关(r=-0.295,P=0.004),STAT2的表达量与NB组织中SNHG7表达水平呈正相关(r=0.296,P=0.004)。结论SNHG7通过miR-653-5p/STAT2通路促使NB进展,这为NB提供了一个新的治疗靶点和预测预后的生物标志物。     

狼疮性肾炎肾血管损害和miR-145的表达

目的评估狼疮性肾炎(LN)患儿肾血管损害(RVLs)并检测肾血管中mi R-145的表达。方法收集41例经肾活检证实为LN的系统性红斑狼疮(SLE)患儿的临床资料,评估肾小球损害和RVLs。根据RVLs评分及病理类型分组。采用原位杂交法检测mi R-145在肾血管中的表达。比较不同病理分型组间RVLs、肾血管mi R-145表达及肾小球损害评分差异;比较不同RVLs组间临床指标、肾小球损害评分及肾血管mi R-145表达差异。结果不同LN病理类型间,RVLs的差异无统计学意义(P0.05),肾血管mi R-145表达及肾小球损害评分差异有统计学意义(P0.01)。不同RVLs组间,临床指标及肾小球损害差异均无统计学意义(P0.05),而肾血管mi R-145表达差异有统计学意义(P0.01)。结论 LN患儿存在RVLs,mi R-145可能参与RVLs的发生机制。     

Apelin/APJ在小儿神经母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨Apelin/APJ (putative receptor protein related to the angiotensin receptor AT1)系统与小儿神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)发生发展的关系。方法收集10例NB患儿术后肿瘤组织及对应的癌旁肾上腺组织,采用免疫组化法检测Apelin及APJ蛋白在肿瘤及癌旁组织中的表达; Real-time PCR方法和Western blotting技术检测Apelin/APJ mRNA及蛋白的表达水平,采用ELISA方法检测NB患儿及健康儿童血浆中Apelin-36的水平。结果在收集的NB病例中,免疫组化结果显示,Apelin蛋白主要定位于神经母细胞瘤的细胞浆,呈强阳性表达,而APJ蛋白则主要在肿瘤胞核内表达,呈棕黄色颗粒,表达强阳性或中等阳性,两者均在对照组癌旁肾上腺组织中表达呈阴性或者弱阳性;与瘤旁组织比较,NB组织中Apelin、APJ mRNA和Apelin及APJ蛋白的表达水平均显著升高,且差异有统计学意义(P 0. 05)。NB患儿血浆Apelin-36的水平显著高于健康儿童对照组的水平(P 0. 05)。结论 Apelin/APJ系统在小儿神经母细胞瘤组织中高度表达,提示该系统与NB的发生发展密切相关。     

TGFBR1和FGF9蛋白参与miRNA-140-5p调控肾母细胞瘤细胞的增殖过程

目的 本研究拟探讨rniRNA-140-5p在肾母细胞瘤增殖过程中的调控作用以及TGF-BR1和FGF9蛋白参与此过程的作用机制.方法 采用miRNA芯片技术分析肾母细胞瘤患儿肿瘤组织和瘤旁正常组织的miRNA表达谱,结合生物信息学预测和文献报道,选取表达差异显著的miR-NA-140-5p作为研究对象,扩大样本进行Real-time PCR验证;MTS方法检测miRNA-140-5p对细胞增殖率的影响;双荧光素酶实验验证miRNA-140-5p的直接下游靶基因;Western-blot法检测TGF-BR1蛋白表达;ELISA法检测细胞上清中FGF9蛋白表达.结果发现与瘤旁组织相比,miRNA-140-5p在肾母细胞瘤组织和瘤旁正常组织的相对表达量分别为1.69±0.83和6.37±3.25,肾母细胞瘤组miRNA-140-5p的表达量明显降低(P＜0.05).在肾母细胞瘤细胞株G401及SK-NEP-1中,发现过表达miRNA-140-5p可有效降低G401及SK-NEP-1的增殖率,将miRNA无关序列(miRNA-con)转染组细胞增殖率设为100％,与其相比,转染miRNA-140-5p的G401细胞组的增殖率为(87±15)％比(100±20)％,SK-NEP-1细胞组为(91±12)％比(100±9)％,组间比较,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).利用生物信息学软件对miRNA-140-5p直接下游靶基因进行预测,结合肾母细胞瘤相关基因,选择TGFBR1和FGF9基因为miRNA-140-5p的直接下游靶基因;通过双荧光素酶实验证实miRNA-140-5p可直接靶向TGFBR1和FGF9基因.将miRNA-con转染组TGFBR1蛋白表达量设为1,与其相比,过表达miRNA-140-5p的G401及SK-NEP-1细胞内,TGFBR1蛋白表达量降低(G401细胞降为0.67;SK-NEP-1细胞降为0.87)(P＜0.05).与miRNA-con转染对照组相比,G401及SK-NEP-1细胞上清中FGF9蛋白表达量下降,G401组为(478.66±66.32) pg/ml比(535.64±78.53) pg/ml,SK-NEP-1细胞组为(486.57±71.01)pg/ml比(601.26±77.68) pg/ml,组间比较,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 患儿肾母细胞瘤中miRNA-140-5p表达量低于瘤旁正常组织,miRNA-140-5p影响肾母细胞瘤细胞的增殖,TGFBR1和FGF9蛋白可能参与了miRNA-140-5p调控肾母细胞瘤细胞增殖的过程.     

微小RNA-17-5p在小儿肾病综合征发病中的作用及其机制研究

目的 分析微小RNA-17-5p（miR-17-5p）在小儿肾病综合征（NS）发病中的意义及其通过激活素A（ActA）/Smads通路对肾足细胞凋亡的影响。方法 选取2018年3月至2019年3月收治的55例NS患儿为NS组,另选取50例同期体检的健康儿童为正常对照组,比较两组外周血miR-17-5p表达情况。培养人肾足细胞株,分别转染含miR-17-5p反义寡核苷酸重组质粒（抑制组）、含无意义随机序列的对照载体（阴性对照组）,未处理的人肾足细胞为空白组。比较各组细胞凋亡情况,以及转染后细胞miR-17-5p、ActA mRNA、Smads mRNA和相关蛋白表达情况。结果 NS组外周血miR-17-5p水平高于正常对照组（P < 0.001）。与空白组和阴性对照组比较,抑制组细胞凋亡率、miR-17-5p相对表达量更低,ActA、Smad2、Smad3三者的mRNA及蛋白相对表达量更高（P < 0.001）。结论 miR-17-5p在小儿NS外周血的含量升高,低表达miR-17-5p能抑制人肾足细胞的凋亡,其机制可能与上调ActA、Smad2、Smad3三者的mRNA及蛋白表达有关。     

微小RNA-17-5p在小儿肾病综合征发病中的作用及其机制研究

目的 分析微小RNA-17-5p（miR-17-5p）在小儿肾病综合征（NS）发病中的意义及其通过激活素A（ActA）/Smads通路对肾足细胞凋亡的影响。方法 选取2018年3月至2019年3月收治的55例NS患儿为NS组,另选取50例同期体检的健康儿童为正常对照组,比较两组外周血miR-17-5p表达情况。培养人肾足细胞株,分别转染含miR-17-5p反义寡核苷酸重组质粒（抑制组）、含无意义随机序列的对照载体（阴性对照组）,未处理的人肾足细胞为空白组。比较各组细胞凋亡情况,以及转染后细胞miR-17-5p、ActA mRNA、Smads mRNA和相关蛋白表达情况。结果 NS组外周血miR-17-5p水平高于正常对照组（P < 0.001）。与空白组和阴性对照组比较,抑制组细胞凋亡率、miR-17-5p相对表达量更低,ActA、Smad2、Smad3三者的mRNA及蛋白相对表达量更高（P < 0.001）。结论 miR-17-5p在小儿NS外周血的含量升高,低表达miR-17-5p能抑制人肾足细胞的凋亡,其机制可能与上调ActA、Smad2、Smad3三者的mRNA及蛋白表达有关。     

肾母细胞瘤组织中PTEN、PDCD4的表达及意义

目的 探究肾母细胞瘤组织中具有磷酸酶活性的抑癌基因PTEN及肿瘤抑制因子PDCD4 mRNA和蛋白表达及其临床病理联系。方法 采用RT-PCR和免疫组织化学法检测39例肾母细胞瘤和对照组15例癌旁2cm肾组织中PTEN、PDCD4 mRNA和蛋白表达,结合临床病理资料进行分析。结果 39例肾母细胞瘤组织中PTEN和PDCD4 mRNA均发生表达下调,且两种分子的mRNA的光密度在癌旁组织与肿瘤组织中比值均大于2。肾母细胞瘤组PTEN、PDCD4蛋白表达阳性率分别为17.95％、33.33％,远低于癌旁对照组阳性率93.33％、100％,差异有统计学意义(P＜0.05)。肾母细胞瘤组PTEN、PDCD4蛋白表达下调与患儿年龄、组织分级及临床分级、有无淋巴结转移等多种临床病理因素密切相关(P＜0.05)。肾母细胞瘤组与对照组PTEN、PDCD4蛋白表达在不同性别患儿中的差别不具有统计学意义(P＞0.05)。经直线相关分析,在肾母细胞瘤组织中PTEN与PDCD4蛋白表达存在正相关性(r= 0.877629,P＜0.05)。结论 肾母细胞瘤中PTEN及PDCD4 mRNA及蛋白与癌旁对照组织相比表达明显下调,可作为评价肾母细胞瘤生物学行为的参考指标。     

Survivin与Caspase-3在肝母细胞瘤中的表达及意义

目的 观察细胞凋亡抑制蛋白Survivin和细胞凋亡蛋白酶Caspase-3在肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)中的表达情况,探讨其相互关系及临床意义.方法 运用免疫组织化学S-P法检测20例HB、9例瘤旁组织、4例正常儿童和8例正常成人肝组织中Survivin和Caspase-3的表达,并对其结果进行研究.结果 Survivin在正常儿童、瘤旁组织和HB中阳性表达率分别为25.0%、33.3%和100%,成人肝组织中基本未见表达.Survivin在HB组织中的表达显著高于瘤旁及正常肝组织,但Survivin在正常儿童和正常成人肝组织中的表达无统计学差异.Caspase-3在正常成人肝组织、正常儿童肝组织、瘤旁组织和HB中阳性表达率分别为87.5%、0、55.6%和80%,Caspase-3在正常成人肝组织与HB组织中的表达显著高于正常儿童肝组织.Survivin和Caspase-3在HB组织中的表达无相关性.Survivin与Caspase表达构成比与患儿的年龄有相关性:63.6%的HB病例,其Survivin与Caspase-3的表达强度基本一致,均呈高表达状态,且本组患儿年龄的中位数值较高;仅36.4%病例的Survivin呈强表达而Caspase-3弱表达或不表达,本组患儿年龄的中位数值较小.结论 在HB中,Survivin的高表达与HB的发生发展关系密切.正常儿童与正常成人的肝组织中,其Caspase-3表达有显著性差别.Survivin与Caspase-3在HB中的表达率缺乏相关性.在HB的不同的年龄组中,Survivin与Caspase-3存在不同的表达关系,说明它们间可能存在不同的相互作用机制.     

儿童肾母细胞瘤Hedgehog通路相关分子BMI1和Gli1 表达及意义

目的探讨Hedgehog信号通路相关分子BMI1和Gli1在儿童肾母细胞瘤(NB)组织中的表达情况及其与预后的关系。方法收集37例NB患儿的NB组织及其癌旁正常组织的病理标本,通过免疫组织化学染色法观察BMI 1和Gli 1蛋白在肿瘤组织中的表达,分析其与NB患儿临床病理特征以及血清肿瘤标志物的关系。利用公共数据库分析BMI 1和Gli1 mRNA表达与NB患儿预后的关系。结果 37例患儿中男14例、女23例,中位年龄2岁(3个月～6岁)。NB组织中BMI 1和Gli 1蛋白表达均较癌旁正常组织增高,差异有统计学意义(P0. 01)。BMI 1阳性细胞在37例患儿肿瘤组织均被观察到,而Gli1阳性细胞在16例患儿肿瘤组织中未检测到。22例BMI1高表达的NB患儿更容易出现远隔转移,血清甲胎蛋白、糖类抗原-125(CA-125)表达增高,同时总体生存期也更短,差异均有统计学意义(P0.05);Gli1表达增高则与NB患儿临床病理特征或预后无相关性。结论 Hedgehog通路相关分子BMI 1和Gli 1在NB肿瘤组织中表达增高,BMI 1与肿瘤转移和预后不良呈正相关,可能是NB发展的一个重要影响因素。     

儿童恶性实体瘤肿瘤组织中VEGF的表达水平与临床预后的相关性研究

目的通过分析儿童多种恶性实体瘤肿瘤组织的血管内皮生长因子(VEGF)的表达特点,探讨其与肿瘤类型、远处转移及预后的相关性。方法筛选我院经病理确诊的66例恶性实体瘤患儿临床资料,提取手术切除肿瘤组织RNA后,通过荧光定量PCR检测VEGF因子mRNA表达相对量,应用统计学方法分析其表达特点与不同肿瘤类型、远处转移及预后的相关性。结果①恶性实体瘤分类:神经母细胞瘤(N B)21例(32%),肝母细胞瘤(H B) 17例(26%),肾母细胞瘤(WT) 12例(18%),横纹肌肉瘤(RMS)8例(12%),原始神经外胚层肿瘤(PNET)4例(6%),其他肿瘤4例(6%)。远处转移期46例(70%),非转移期病例20例(20%)。②VEGF基因相对表达:低表达组、中表达组、高表达组VEGF基因mRNA相对表达定量(2^-△ct)分别为(2.26±1.25)、(20.97±6.1)、(50.74±18.32),差异有显著性(F=101.617,P=0.001)。46例转移期患儿,VEGF因子mRNA中高表达35例(76%);20例非转移期患儿,VEGF因子mRNA中高表达9例(45%),差异具有显著性(P=0.008)。不同肿瘤类型VEGF因子mRNA中高表达比例不同,HB、NB、WT患儿肿瘤VEGF因子mRNA中高表达分别占88%(15/17)、57%(12/21)和75%(9/12)。其中转移期HB和WT患儿肿瘤组织中VEGF高表达率明显高于非转移期HB、WT患儿,差异有显著性(P=0.022、0.012)。③VEGF表达与预后:低表达组、中表达组、高表达组的平均生存时间分别为(61.8±12.0)个月、(40.4±6.3)个月和(37.2±4.2)个月。虽然Long-rank分析提示各组平均生存时间差异无显著性(X~2=1.458,P=0.482),但低表达组平均生存时间高于中、高表达组。结论实体瘤转移期患儿VEGF基因表达率明显增高,提示VEGF与肿瘤增殖及转移密切相关,VEGF表达检测对判断预后具有一定临床意义。     

血浆miRNA在儿童急性淋巴细胞白血病中表达特点

目的研究血浆miRNAs(hsa-let-7d-5p、hsa-miR-27a-3 p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-197-3p、hsa-miR-652-3p)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)不同疾病状态的表达特点。方法选取北京儿童医院2009年1月-2013年12月住院的ALL患儿血浆标本70例次,包括初诊-缓解配对30对,复发10例;对照组为2013年8月在北京儿童医院进行健康体检的志愿者30例。采用不提取RNA而直接RT-PCR方法检测患儿血浆中5种miRR NAs的表达情况,分析其表达与儿童ALL的诊断、治疗以及与TEL/AML1融合基因之间的关系。结果 5种miRNAs表达水平均呈现初诊组表达水平低于正常组,缓解后表达水平升高,而复发后表达水平再次明显降低的特点,各组间比较差异有显著性(P0.05);5种miRNAs对儿童ALL的诊断效能提示:ROC曲线下面积(AUC)均≥0.844,其中以hsa-let-7d-5p表达最高,AUC=0.956;在初诊组和缓解组,5种miRNAs的表达情况在有无TEL/AML1融合基因患儿血浆间差异无显著性(P0.05)。结论血浆中hsa-let-7d-5p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-197-3p、hsa-miR-652-3p在儿童ALL的发病过程中可能起到抑癌基因的作用,这为血浆miRNA用于儿童ALL的诊断、治疗及预后监测的分子标记物提供了一定的依据。