异甘草素减轻重症急性胰腺炎小鼠心肌损伤机制

目的探讨异甘草素(ISL)对重症急性胰腺炎(SAP)心肌损伤的保护机制。方法将雄性小鼠36只随机分为对照组、SAP组和ISL组,每组12只,SAP组和ISL组采用L-精氨酸制备小鼠SAP模型,ISL组首次注射精氨酸24h后腹腔注射ISL100mg/kg,对照组和SAP组给予等量DMSO。检测各组血清肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)及心脏组织超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽活性、丙二醛水平。采用Western blot法检测心脏组织中核转录因子-E2相关因子2(Nrf2)及血红素加氧酶(HO-1)蛋白表达水平。结果 SAP组小鼠心肌细胞肿胀,部分细胞崩解,心肌纤维结构消失,有较多炎性细胞浸润,ISL组心肌损害减轻。与对照组比较,SAP组SOD及谷胱甘肽活性明显降低,丙二醛及Nrf2、HO-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与SAP组比较,ISL组cTnI、CK-MB、LDH、丙二醛水平明显下降,SOD[(102.1±10.4)U/mg vs (81.2±7.7)U/mg]及谷胱甘肽活性[(16.2±2.8)U/mg vs (11.2±3.6)U/mg]明显升高,且更进一步激活了Nrf2、HO-1蛋白水平表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ISL可能通过激活心脏组织中Nrf2/HO-1通路,减轻SAP诱导的心肌损伤。     

血脂康对db/db糖尿病小鼠胰岛分泌功能和氧化应激影响的研究

目的探讨血脂康对db/db糖尿病小鼠胰岛分泌功能和氧化应激(OS)的影响。方法选取db/db小鼠40只,随机分为血脂康组和db/db组,各20只,另选取db/m小鼠20只作为对照(NC)组,分别给予血脂康和安慰剂灌胃。每周监测代谢指标,8周后行腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT),离体胰岛灌流评价胰岛分泌功能,免疫组织化学法分析胰岛内8-羟-2c-脱氧鸟苷(8-OHdG),4-羟壬烯醛(4-HNE)和gp91phox的表达水平。结果干预8周后,血脂康组FPG和FIns均低于db/db组[FPG:(18.4±3.4)vs(25.9±2.2)mmol/L;FIns:(7.7±0.8)vs(9.8±1.4)mIU/L,P<0.05]。IPGTT糖负荷后各时间点,血脂康组葡萄糖曲线下面积(AUCg)均低于db/db组[(1800.7±187.1)vs(2550.0±179.6),P<0.05],而胰岛素曲线下面积(AUCi)显示,30min时AUCi 0~30高于db/db组[(285.3±8.9)vs(268.5±10.4),P<0.05]。与db/db组比较,血脂康组在给予16.7mm高糖刺激1min后胰岛素分泌升高。免疫组织化学法显示,与db/db组比较,血脂康组胰岛内8-OhdG,4-HNE和gp91phox的表达降低更明显(P<0.05)。结论血脂康能降低胰岛OS反应,并改善葡萄糖代谢。     

老年2型糖尿病合并肌少症患者血清25羟维生素D与外周血单个核细胞血红素加氧酶1 mRNA的表达水平及意义

目的探讨老年T2DM合并肌少症(SP)患者血清25羟维生素D[25(OH)D]与外周血单个核细胞(PBMC)血红素加氧酶1(HO-1)mRNA的表达水平及意义。方法选取2018年11月至2019年4月于我院内分泌科收治的120例门诊及住院老年患者,分为单纯SP组(SP组)、单纯T2DM组(T2DM组)、T2DM合并SP组(T2DM+SP组),每组各40例。另选取40名同期我院老年健康体检者为正常对照组(NC组)。采用双能X线吸收测量法测定四肢骨骼肌质量指数(SMI),RT-PCR测定各组PBMC中HO-1 mRNA的表达水平。Pearson相关分析SMI与其他指标的相关性;Logistic回归分析老年T2DM患者合并SP的影响因素。结果与NC组比较,SP、T2DM组HO-1mRNA表达升高[(24.28±11.9)vs(49.53±12.3)vs(51.45±12.1),P0.05],25(OH)D降低[(26.27±5.45)vs(16.27±3.53)vs(15.17±2.48),P0.05];T2DM+SP组HO-1 mRNA较NC组升高[(24.28±11.9)vs(63.59±12.5),P0.05],25(OH)D降低[(26.27±5.45)vs(8.23±1.57),P0.05];与T2DM+SP组比较,SP、T2DM组HO-1 mRNA表达降低[(63.59±12.5)vs(49.53±12.3)vs(51.45±12.1),P0.05],25(OH)D升高[(8.23±1.57)vs(16.27±3.53)vs(15.17±2.48),P0.05]。Pearson相关分析显示,SMI与HO-1 mRNA表达呈正相关(r=0.546,P=0.012),与25(OH)D呈负相关(r=―0.554,P=0.024)。Logistic回归分析结果显示,HbA_1c、TG、HO-1 mRNA及25(OH)D均为老年T2DM患者合并SP的影响因素。结论 25(OH)D水平降低及HO-1 mRNA表达升高可能通过氧化应激反应共同参与老年人群糖脂代谢紊乱和肌量流失。     

姜黄素对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用及其机制初探

目的探讨姜黄素对高脂饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的防治作用及其机制。方法 SD大鼠36只随机分为正常组、模型组和治疗组(每组12只)。正常组全程饲以普通饲料,另两组均给予高脂饮食。6周末,每组各处死2只大鼠。验证非酒精性单纯性脂肪肝(NAFL)造模成功后,给予治疗组50mg·kg-1·d-1姜黄素灌胃,正常组、模型组给予相应体积的0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)灌胃。6周治疗结束后,留取血样和肝组织,计算肝指数,进行血脂、肝功能和病理组织学检查;检测肝脏组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;Western印迹检测肝脏转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)的水平。结果模型组大鼠肝组织出现NASH的病理特征。治疗组大鼠与模型组相比,血清三酰甘油、TC、ALT、AST及肝组织MDA水平均明显降低(0.36±0.17)mmol/L比(0.67±0.14)mmol/L,(1.01±0.06)mmol/L比(1.40±0.20)mmol/L,(43.67±3.22)U/L比(83.00±4.36)U/L,(82.50±7.42)U/L比(122.33±3.51)U/L,(0.54±0.95)nmol/mgprot比(1.57±0.03)nmol/mgprot;均P<0.01。肝组织脂肪变、炎症程度明显改善,GSH含量和SOD的活性升高(1.64±0.17)mg/gprot比(1.17±0.17)mg/gprot,(420.12±42.03)U/mgprot比(335.53±25.81)U/mgprot;均P<0.05。且该组肝组织内Nrf2蛋白表达较正常组、模型组显著升高(均P<0.01)。结论姜黄素可通过降脂、减弱氧应激,延缓大鼠从NAFL向NASH的进展,该作用可能与其诱导Nrf2在肝脏中的表达相关。     

白藜芦醇对db/db小鼠胰岛β细胞功能的影响

目的观察白藜芦醇对db/db小鼠胰岛β细胞的作用并探讨其可能机制。方法取12只db/db小鼠,随机分为糖尿病(DM)组和白藜芦醇干预组,每组各6只,另设对照(Con)组小鼠6只。干预4周后,比较各组OGTT后血糖水平,免疫组织化学分析胰岛中3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK-1)蛋白表达量的改变。体外培养小鼠胰岛细胞株MIN6细胞并分为正常葡萄糖(NG)组、高糖(HG)组、高糖+白藜芦醇(HG+Res)组、高糖+白藜芦醇+PI3K特异性抑制剂Wortmannin(HG+Res+Wo)组。Western blot测定4组细胞PDK-1、磷酸化蛋白激酶B(p-AKt)水平,CCK-8法和流式细胞仪检测MIN6细胞增殖、凋亡率;ELISA测定上清液中胰岛素水平。结果与DM组比较,白藜芦醇干预组OGTT血糖曲线下面积下降(P0.05)、胰岛细胞PDK-1蛋白表达增加[阳性率(0.57±0.32)%vs(1.74±0.47)%,P0.01];与HG组比较,白藜芦醇干预后MIN6细胞中PDK-1、p-Akt蛋白增加、上清液中胰岛素水平增加[(124.95±5.37)vs(181.19±30.77)pmol/L]、细胞增殖(D值)增加[(0.71±0.10)vs(1.02±0.09)]、凋亡率下降[(19.3±2.1)%vs(11.2±1.4)%](P0.01);与HG+Res组比较,HG+Res+Wo组MIN6细胞PDK-1表达、Akt磷酸化水平减低,上清液中胰岛素水平及细胞增殖下降、凋亡率增加(P0.05)。结论白藜芦醇可能通过激活胰岛β细胞PDK-1/Akt通路、改善胰岛β细胞功能。     

小檗碱对糖尿病db/db小鼠骨骼肌蛋白质代谢的影响及机制研究

目的 探讨小檗碱对糖尿病/胰岛素抵抗模型db/db小鼠骨骼肌蛋白质代谢及肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin-1)表达的影响.方法 db/db小鼠为研究对象,以野生型为对照组.予小檗碱(5 mg·kg-1·d-1)腹腔注射3周,观察体重和食量;3周末处死,分离胫骨前肌和腓肠肌.胫骨前肌冰冻切片行层黏连蛋白免疫组化染色,荧光显微镜下观察并拍照,测量肌纤维横截面积并计算肌纤维面积分布图;同位素[14C]-苯丙氨酸掺入法检测肌肉蛋白合成,[3H]-酪氨酸释放率分析检测肌肉分解代谢;Northern印迹检测腓肠肌Atrogin-1和肌环指蛋白1(MurF-1)转录水平,Western印迹检测蛋白翻译水平.结果 小檗碱能明显降低db/db小鼠血糖水平[(18.55---3.79对26.32±4.02)mmol/L,P＜0.01],降低脂肪重量[(2.75±0.30对3.77±0.52)g,P＜0.05],使胫骨前肌的肌重/胫骨长度比值及肌纤维横截面积下降,肌纤维面积分布图明显左移;小檗碱使野生型j、鼠和db/db小鼠的蛋白质合成率下降18％ ～ 22％;蛋白质分解率升高24％～ 26％,使肌肉特异性的Atrogin-1、MurF-1转录和翻译水平增高,同时使真核转录因子3调节亚基(eIF3-f)蛋白水平降低.结论 小檗碱具有降糖降脂作用,但可引起骨骼肌蛋白质合成下降,促进蛋白质分解代谢,加剧糖尿病的骨骼肌消耗,其机制与上调Atrogin-1和MurF-1表达,同时下调elF3-f有关.     

吡格列酮联合胰高血糖素样肽-1治疗对db/db糖尿病小鼠胰岛β细胞的影响

目的 评价胰高血糖素样肽类似物利拉鲁肽与胰岛素增敏剂吡格列酮联合治疗db/db小鼠糖尿病的效果.方法 35只8周龄,体重(35.3±2.5)g的雄性db/db小鼠分为(1)对照组(n=8):给予生理盐水0.1 ml,2次/d;(2)吡格列酮组(n=9):给予吡格列酮(饲料中含0.02%吡格列酮)+生理盐水0.1 ml,2次/d;(3)利拉鲁肽组(n=9):给予利拉鲁肽300 mg/kg,2次/d;(4)联合治疗组(n=9):给予吡格列酮(饲料中含0.02%吡格列酮)+利拉鲁肽300mg/kg,2次/d.利拉鲁肽用灭菌生理盐水稀释后皮下注射,每天8:00和16:00给药,持续4周.行腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)和胰岛素耐量试验(ITT),评价胰岛β细胞的增殖.采用单因素方差分析进行数据统计分析.结果 干预4周后,联合治疗组糖化血红蛋白(4.5±0.6)%,糖耐量试验血糖曲线下面积(1814±91)mmol·min·L-1,游离脂肪酸(202.0±20.4)μmol/L,TG(0.81±0.28)mmol/L均明显低于对照组[(7.3±0.4)%,(4042±183)mmol·min·L-1,(272.5±21.7)μmol/L,(1.35±0.21)mmol/L],P值均＜0.05;胰岛素曲线下面积(1639±372)μg·min·L-1,脂联素(16.7±2.0)mg/L,胰岛组织切片胰岛素阳性面积(59.5±1.5)%和胰岛新生β细胞比例(2.4±0.5)%均显著高于对照组[(834±201)μg·min·L-1,(10.2±1.8)mg/L,(22.4±1.5)%和(0.8±0.3)%],P值均＜0.05.且联合治疗组上述指标均低于或高于单药治疗组.联合治疗显著改善胰岛β细胞和α细胞分布,恢复正常的胰岛形态.结论 吡格列酮联合利拉鲁肽治疗相比单药更好地改善db/db小鼠糖脂代谢,保护胰岛β细胞功能并促进其增殖.

Abstract：

ObjectivesTo evaluate the effect of combination of liraglutide,a glucagon-like peptide-1 analogue and pioglitazone,an insulin sensitizer,on diabetic db/db mice.Methods Thirty-five 8-week old male db/db mice were divided into control group (n = 8 ),pioglitazone group (n =9 ),liraglutide group (n =9) and combined therapeutic group (n =9),which was given normal saline 0.1 ml,2/d,pioglitazone 24 mg· kg-1 · d-1 (feed contained 0.02％ pioglitazone) + normal saline 0.1 ml,2/d,liraglutide 300 mg/kg,2/d,and pioglitazone 20 mg · kg-1 · d -1 ( feed contained 0.02％ pioglitazone) +liraglutide 300 mg/kg,2/d,respectively.Liraglutide were given at 8:00 and 16:00 via subcutaneous injection after having been diluted with sterilized normal saline.Effect on glucose,lipid metabolism and islet β-cell preservation were assessed after 4 weeks.Oneway ANOVA was adopted for statistical analysis.Results Combination therapy displayed promising anti-hyperglycemic[glycosylated hemoglobin Alc: (4.5 ± 0.6)％vs.(7.3 ±0.4)％,P ＜ 0.001].Glucose tolerance were improved assessed by area under curve(AUC) of glucose by intraperitoneal glucose tolerance test (IPGTT)[(1814 ±91 ) mmol · min · L-1 vs.(4042 ±183) mmol · min · L-1,P ＜0.001];insulin release response to glucose were also preserved as AUC of insulin by IPGTT was higher[( 1639 ±372) μg · min · L-1 vs.(834 ±201 )μg · min · L-1].Combination therapy also reduced circulated free fatty acids and TG[( 202.0 ± 20.4 ) μmol/L vs.( 272.5 ± 21.7 )μmol/L,(0.81 ± 0.28) mmol/L vs.( 1.35 ± 0.21 ) mmol/L],and increased plasma adiponectin [(16.7±2.0)mg/L vs.(10.2±1.8)mg/L].All P value ＜0.05.Islet immunohistochemistry showed that combination therapy significantly increased insulin positive area were[( 59.5 ± 1.5 ) ％ vs.( 22.4 ±1.5) ％]and ratio of Brdu positive β-cells was three folds than vehicle-treated mice[( 2.4 ± 0.5 ) ％ vs.(0.8 ±0.3)％],both greater than each single treatment.Combined therapy significantly improved islet β cell/α cell distribution,which led to islet recovery.Conclusions Combined therapy improves glucose and lipid metabolism,preserves islet β-cell function and stimulates β-cell proliferation,greater than either liraglutide or pioglitazone treatment alone.     

鞣花酸对四氧嘧啶糖尿病小鼠的影响

目的探讨鞣花酸对四氧嘧啶糖尿病小鼠的影响。方法 40只雄性昆明小鼠随机分为正常对照(Con)组10只和四氧嘧啶处理组30只。四氧嘧啶处理组腹腔注射2%四氧嘧啶,将造模成功的21只小鼠分为模型(Model)亚组及鞣花酸低、高剂量亚组,各7只。鞣花酸低、高剂量亚组分别以160mg/kg、320 mg/kg鞣花酸连续灌胃21 d。21 d后处死动物,取肝脏和血清,测定血清ALT,AST活性,肝脏SOD活性及MDA含量等。结果与Model亚组比较,鞣花酸高剂量亚组血糖[(29.12±7.99)vs(19.30±8.08)mmol/L],血清ALT水平[(143.15±57.16)vs(65.38±33.61)U/L]、AST水平[(156.60±39.70)vs(101.11±44.16)U/L]及MDA含量[(2.81±0.81)vs(1.62±0.41)mmol/g]均下降(P0.05),肝脏SOD活性升高[(74.23±18.82)vs(109.94±23.33)U/mg]。结论鞣花酸有降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的作用,以320 mg/kg剂量最为明显。     

二甲双胍抑制2型糖尿病大鼠脂肪组织胎球蛋白A表达的研究

目的探讨二甲双胍对T2DM大鼠外周血及脂肪组织胎球蛋白A(FetA)的影响。方法40只SD大鼠分为普食组(NC组)、T2DM组、二甲双胍治疗组(MET组)及胰岛素治疗组(INS组),每组各10只。高脂高糖饮食联合小剂量STZ建立T2DM大鼠模型,MET组予二甲双胍灌胃,INS组皮下注射胰岛素使其血糖与MET组基本保持一致。16周龄时ELISA检测血清FetA浓度,Western blot法检测脂肪单磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)、核转录因子(NF-κB)及FetA的表达,RT-qPCR法检测脂肪NF-κB及FetA mRNA的表达。结果 T2DM组血清FetA较NC组升高[(11.26±1.76)vs(23.99±4.64)ng/ml,P0.05],脂肪AMPK表达降低[(0.68±0.17)vs(0.11±0.03),P0.05],NF-κB及其mRNA表达升高[(0.53±0.07)vs(0.86±0.14),(1.00±0.10)vs(2.42±0.47),P0.05],FetA及其mRNA表达增多[(0.40±0.07)vs(0.66±0.11),(1.07±0.09)vs(1.98±0.27),P0.05]。与T2DM组比较,MET组血清FetA降低[(23.99±4.64)vs(17.37±3.25)ng/ml,P0.05],脂肪AMPK表达升高[(0.11±0.03)vs(0.49±0.80),P0.05],NF-κB及其mRNA表达减少[(0.86±0.14)vs(0.61±0.09),(2.42±0.47)vs(1.51±0.37),P0.05],FetA及其mRNA表达降低[(0.66±0.11)vs(0.47±0.06),(1.98±0.27)vs(1.25±0.16),P0.05]。与T2DM组比较,INS组各指标变化差异无统计学意义(P0.05)。结论二甲双胍降低T2DM大鼠外周血FetA的浓度,可能通过AMPK-NF-κB抑制脂肪组织FetA来表达。     

缬沙坦对糖尿病大鼠klotho蛋白及氧化应激影响的研究

目的探讨缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏klotho蛋白(KL)和氧化应激的影响。方法糖尿病大鼠随机分为糖尿病(DM)组和缬沙坦干预(VA)组,另设对照(NC)组,每组20只。VA组予缬沙坦55mg/(kg·d)灌胃,NC组及DM组予等量生理盐水灌胃,于4周及12周测定大鼠肾功能、血清KL、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)及超氧化物歧化酶(SOD)活性,免疫组织化学测定肾脏KL的表达水平。结果与NC组比较,DM组4周和12周时KL含量降低[(4.39±0.35)vs(3.73±0.69)ng/ml,(4.16±0.28)vs(3.30±0.37)ng/ml],SOD活性降低[(1.87±0.84)vs(1.69±0.29)U/ml,(1.79±0.48)vs(1.50±0.26)U/ml],8-OHdG增加[(2.74±0.11)vs(3.32±0.91)ng/ml,(2.86±0.28)vs(3.21±0.25)ng/ml](P0.05);与DM组比较,VA组上述指标亦改善,差异有统计学意义(P0.05)。结论糖尿病大鼠KL的表达降低,缬沙坦可提高糖尿病大鼠肾脏KL的表达,抑制氧化应激反应。     

熊去氧胆酸治疗原发性胆汁性胆管炎患者疗效及对血清Nrf2和HO-1水平的影响

目的 探讨熊去氧胆酸(UDCA)治疗原发性胆汁性胆管炎和肝硬化(PBC)患者疗效及对血清核因子相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)水平的影响.方法 2017年1月～2020年1月我院诊治的原发性胆汁性胆管炎患者31例和原发性胆汁性肝硬化患者34例(Child A级15例,Child B级12例,Chil...     

多烯磷脂酰胆碱治疗抗结核药物所致肝损伤患者疗效研究

目的 探讨多烯磷脂酰胆碱治疗抗结核药物所致肝损伤患者的疗效及对血清血红素加氧酶(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响。方法 2018年3月~2019年3月我院消化内科诊治的78例肺结核患者在抗结核药物治疗过程中发生肝损伤,采用随机数字表法将所选患者分为对照组39例和观察组39例,在抗涝治疗过程中分别给予甘草酸二铵胶囊或者多烯磷脂胆碱胶囊口服治疗,两组均连续观察12周。采用ELISA法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)水平,采用放射免疫法测定血清HO-1、GSH-Px和SOD水平。结果 在观察结束时,观察组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平为(28.1±20.5)U/L,显著低于对照组【(59.4±22.7)U/L,P<0.05】,血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平为(345.1±17.3)U/L,显著低于对照组【(45.1±17.3)U/L,P<0.05】;血清TNF-ɑ水平为(7.4±1.5)pg/mL,显著低于对照组【(10.3±1.8)pg/mL,P<0.05】,血清IL-1β水平为(13.7±2.1)ng/mL,显著低于对照组【(34.2±4.8)ng/mL,P<0.05】;血清HO-1水平为(294.1±16.9)U/L,显著高于对照组【(198.8±17.2)U/L,P<0.05】,血清SOD水平为(544.2±13.3)U/L,显著高于对照组【(421.0±12.8)U/L,P<0.05】。结论 应用多烯磷脂酰胆碱治疗抗结核药物所致的肝损伤患者可明显升高血清HO-1和SOD水平,减轻氧化应激反应,可能与疗效较好有关,值得进一步研究。     

可诱导共刺激分子及相关细胞因子在细粒棘球蚴感染小鼠免疫调控中的作用

目的 探讨可诱导共刺激分子(inducible costimulatory molecule,ICOS)及相关细胞因子在细粒棘球蚴感染小鼠免疫调控中的作用.方法 80只BALB/c小鼠(体质量18～ 22 g)随机分为对照组和感染组,每组40只.按10000个原头节/只腹腔注射制备细粒棘球蚴感染小鼠模型,腹腔接种2、8...     

N-乙酰半胱氨酸对非酒精性脂肪性肝炎模型小鼠肝细胞线粒体自噬的影响

目的在非酒精性脂肪性肝炎模型小鼠中探索N-乙酰半胱氨酸(NAC)对肝细胞线粒体自噬的影响。方法C57BL/J6小鼠分别给予16周的正常饮食、高脂高糖(HFCD)饮食和HFCD+NAC饮食。比较HE和Masson染色、ALT、AST、IL-1β、肝组织甘油三酯水平评价小鼠肝损伤。通过免疫荧光染色观察线粒体自噬。比较3组小鼠肝组织内线粒体自噬标志物在mRNA和蛋白水平的变化。结果HFCD组小鼠较对照组ALT[(24.9±2.12)比(176.7±44.32)U/L,P<0.05]、AST[(76.7±9.06)比(291.3±39.66)U/L,P<0.05]、IL-1β[(2.94±0.08)比(9.12±1.21),P<0.05]显著升高,HFCD+NAC组较HFCD组肝功能好转,IL-1β降低[(9.12±1.21)比(6.77±0.58)ng/L,P<0.05]。HFCD组小鼠肝组织内Parkin、PINK1表达降低,同时LC3B II/I比值降低,P62表达量增高。提示HFCD组小鼠肝细胞线粒体自噬水平降低。HFCD+NAC组较HFCD组线粒体自噬水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NAC可能通过改善肝细胞线粒体自噬,进而减轻肝细胞炎症进展。     

组织蛋白酶B抑制剂对小鼠急性肝功能衰竭的保护作用及机制

目的 探讨组织蛋白酶B抑制剂对小鼠急性肝功能衰竭的保护作用及机制.方法 将雄性昆明种小鼠45只分为对照组、模型组和保护组,每组各15只.模型组和保护组一次性腹腔注射脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN),保护组于造模前30 min予组织蛋白酶B抑制剂(CA-074me)腹腔注射,而模型组、对照组分别注射同等体积的0.5％氯化钠溶液作为对照,给药后6h分别取血清、肝组织标本.检测肝功能变化及凝血酶原时间(PT),观察肝脏病理改变,末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝细胞凋亡,免疫组织化学分析细胞色素c表达,RT-PCR检测肝组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达.另取75只小鼠按上述方法分组处理,每组25只,比较各组小鼠24 h存活率.统计学处理采用f检验和x2检验.结果 保护组小鼠24 h存活率明显高于模型组分别为76％(19/25)和36％ (9/25)(x2=8.12,P＜0.05);保护组小鼠血清ALT[(568.50±45.68)U/L比(1394.55±78.58) U/L]、AST[(755.16±51.14) U/L比(1 488.72±64.62) U/L]、TBil[ (22.82±2.04)μmol/L比(52.08±4.10) μmol/L]和PT[(14.26±0.32)s比(17.40±0.30)s]水平均明显低于模型组(均P＜0.05);与模型组比较,保护组小鼠肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞坏死程度明显减轻,凋亡指数明显下降[(18.4±2.6)％比(30.4±2.8)％,P＜0.05];保护组小鼠肝组织中细胞色素c[(0.19±0.02)比(0.33±0.05)]和Caspase-3 [(0.18±0.03)比(0.34±0.05)]表达水平明显低于模型组(均P＜0.05).结论 CA-074me对小鼠急性肝功能衰竭具有保护作用,可减轻肝细胞炎性反应、坏死和凋亡,降低急性肝功能衰竭的病死率,其机制可能与CA-074me下调细胞色素c和Caspase-3的表达有关.     

胰激肽原酶对2型糖尿病小鼠肾小管病变的保护作用及机制

目的 探讨胰激肽原酶（PKK）对2型糖尿病（DM）肾病的作用及分子机制. 方法 将20只4周龄体重22～28 g的健康雄性db/db小鼠随机分为2组,PKK干预组（n=10,PKK腹腔注射60U·kg^-1·d^-1）和DM组（n=10,腹腔注射生理盐水1 ml/g）.以同窝出生的db/m小鼠为正常对照组（n=8,腹腔注射生理盐水1 ml/g）.每周检测小鼠的血糖和体重,每月监测小鼠收缩压与舒张压.干预16周后处死小鼠,留取肾脏组织标本.光镜观察各组小鼠肾小管病理学变化,电镜观察肾小管超微结构的改变.应用免疫组化方法检测肾脏组织中上皮型-钙黏附蛋白的表达水平,实时PCR方法检测小鼠肾脏组织白细胞介素1β（IL-1β）、纤维连接蛋白的mRNA表达水平.采用SPSS16.0软件进行统计学分析,多组资料用单因素方差分析. 结果 （1）干预16周后,DM组和PKK干预组小鼠血糖、体重均高于正常对照组小鼠,肾重/体重指数明显低于正常对照组,其差异有统计学意义[对照、DM、PKK组血糖分别为（5.4±0.6）、（27.4±4.6）、（26.9±3.0） mmol/L,F=86.35,P＜0.01;体重分别为（24.3±3.1）、（42.6±4.8）、（41.5±2.6）g,F=38.82,P＜0.01;肾重/体重指数分别为12.52±2.53、9.01±1.25、9.83±1.18,F=7.27,P＜0.01].DM与PKK组之间差异无统计学意义.3组之间的收缩压与舒张压差异均无统计学意义.（2）电镜提示PKK组DM小鼠肾脏近端与远端小管上皮细胞线粒体肿胀的情况、线粒体数目、近端小管上皮细胞的脂代谢障碍均较DM组改善.（3）免疫组化分析提示,与正常对照组相比,DM组E钙黏附蛋白表达明显减少,PKK干预组显著升高,分别为18.8±1.8、15.8±1.9、19.7±2.9 （F=9.70,P＜0.01）.3组IL-1β的表达分别为2.30±1.22、4.14±3.40、0.92±0.59（F=11.86,P＜0.01）;纤维连接蛋白的表达分别为1.67±0.53、8.45±2.02、2.04±0.79 （F=52.66,P＜0.01）. 结论 胰激肽原酶对2型糖尿病小鼠的肾小管具有保护作用,且机     

新一代免疫抑制剂依维莫司对db/db小鼠的肾脏保护作用

目的：观察哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂依维莫司对糖尿病肾病的保护作用。方法：12只db/m非糖尿病小鼠和12只db/db糖尿病小鼠被随机分为四组,每组6只,分别为db/m非糖尿病小鼠组,db/m非糖尿病小鼠加依维莫司组,db/db糖尿病小鼠组,db/db糖尿病小鼠加依维莫司组。依维莫司治疗剂量为2mg/kg.d,给药时间8周。实验结束后,从眶后静脉丛取血用于生化检查。取小鼠肾脏用于组织学检查。结果：与db/m非糖尿病小鼠比较,db/db糖尿病小鼠血肌酐[（45.4±2.1）μmol/L比（94.3±4.7）μmol/L]、尿素氮水平[（5.96±0.28）mmol/L比（10.58±0.88）mmol/L]明显升高,肾脏重量[（156.67±4.97）g比（182.50±5.47）g]、肾小球面积[（3934±329）μm2比（6586±347）μm2]都明显增大,且肾小球系膜区细胞外基质也明显增多[（21.0±1.5）%比（36.7±2.2）%]。接受依维莫司治疗的糖尿病小鼠,血肌酐（63.2±4.2）μmol/L,尿素氮（7.55±0.62）mmol/L,肾脏重量（163.50±4.64）g,肾小球面积（4663±252）μm2显著下降（P〈0.05）。结论：依维莫司能够延缓糖尿病肾病的进展。     

TLR介导的Nrf2抗氧化通路在对乙酰氨基酚药物性肝损伤中的保护作用

目的研究内毒素(LPS)及Toll样受体(TLR)在对乙酰氨基酚(APAP)药物性肝损伤中的保护作用及其相关机制。方法雄性C57BL/6小鼠40只,分为4组,每组10只。空白对照组腹腔注射0.9%氯化钠溶液,LPS组腹腔注射LPS 10μg/kg,APAP组腹腔注射APAP 300 mg/kg,LPS+APAP组在APAP造模前16 h给予LPS 10μg/kg预处理。通过比较各组血清ALT和AST水平,并通过HE染色评价肝组织损伤程度,观察LPS对小鼠肝损伤的保护作用。测定相应时间点的肝脏组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的变化以及肝组织DHE染色,评价小鼠氧化应激水平。应用Western印迹及RT-PCR检测肝脏Nrf2,Gclc及HO-1的表达水平。结果 LPS预处理可明显减轻APAP所致的肝脏氧化应激反应及肝损伤程度。LPS预处理组的小鼠血清ALT(518.3±142.3对4542±498.4 U/L)、AST(643.3±105.6对5432.1±569.2 U/L)水平及肝组织MDA(78.0±14.5对141.7±26.4 mmoL/mg)水平与模型组相比明显降低,而GSH(6.2±1.7对3.5±1.0μmol/g)水平明显升高(P0.05),肝组织病理损伤明显减轻。同时,LPS预处理可明显促进Nrf2及其下游抗氧化基因的表达。结论 LPS在小鼠APAP肝损伤中起到保护作用,作用机制与Nrf2抗氧化通路的激活相关,可能成为药物性肝损伤的新的治疗策略。     

臭氧化盐水对肝细胞Keap1-Nrf2-ARE通路的激活作用

目的 研究臭氧化盐水对肝组织细胞Keap1-核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化元件(ARE)通路中Nrf2的作用.方法 采用成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为正常对照组(NC组)、模型组、臭氧等渗盐水(OS)组,OS对照组(OSC组).OS组、OSC组分别予5 ml/kg OS,模型组予5 ml/kg氧气盐水每日尾静脉注射,连续15 d,第16天分别予OS组及模型组50%CCl4橄榄油溶液2ml/kg腹腔注射造肝损伤模型.NC组及OSC组予植物油2ml/kg腹腔注射,24 h后,检测大鼠血清ALT、AST、肝组织总抗氧化能力(TAOC)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT).再提取处死大鼠肝组织的核蛋白,应用Western blot测定其细胞核中Nrf2的含量,免疫荧光组织化学技术检测细胞内Nrf2的分布.结果 与模型组比较,OS组大鼠ALT、AST降低[(1240.4±188.2)U/L、(1245.4±176.9)U/L对比(539.8±175.3)U/L、(546.0±130.2)U/L)],差异有统计学意义(P<0.01),TAOC、GSH,GPx,CAT 活性升高,分别为(0.72±0.24)U/mg、(1.05±0.21)mg/g,(676.9±115.1)U/mg、(45.2±14.3)U/mg对比(1.37±0.19)U/mg、(2.23±0.55)mg/g、(1024.6±162.9)U/mg、(68.2±9.9)U/mg,差异有统计学意义(P<0.01).与NC组比较,OSC组大鼠肝组织TAOC、GSH、GPx,CAT活性升高,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05).Western blot及免疫荧光均显示O3能增强肝细胞核内Nrf2的表达,Keap1-Nrf2-ARE通路的激活在O3抗氧化过程中发挥了重要的作用.结论 臭氧化盐水静脉注射可减轻CCl4所致大鼠肝损伤.其机制可能通过激活Keap1-Nrf2-ARE通路及其下游基因,增强细胞抗氧化和抗自由基的能力.

Abstract：

Objective To study the effect of ozonized saline on the activation of the Keapl-Nrf2ARE signaling pathway in rat liver cells. Methods Twenty maleSprague-Dawley rats were randomly divided into ozonized saline(OS) group, model group, ozonized saline control (OSC) group and normal control (NC)group. The rats in OS group and model group were intravenously administered with OS or oxygen saline (5 ml/kg) respectively, once a day for 15 days, and then intraperitoneally injected with CCU dissolved in Oliver oil. The rats in OSC group were pretreated with OS for 15 days. The rats in NC group were fed normally for 15 days. On the 16th day, the rats in OSC group and NC group were intraperitoneally injected with Oliver oil (2 ml/kg) without CCU. After 24 hours of CCU or olive oil intraperitoneal injection, the serum levels of alanine transaminase (ALT) and aspertate aminotransferase (AST) were measured. The liver tissues were also collected for detection of total anti-oxygen capability (TAOC), glutathione (GSH), catalase (CAT), Glutathione peroxidase (GPx). Western Blot was used to detect Nrf2 and immunofluorescence staining assay to display intracelluar distribution of Nrf2. Results Compared with the rats in model group,the serum ALT and AST levels of rats in OS group were significantly lower (P < 0.01) ,which were (1240.4 ± 188.2) U/L and (1245.4 ± 176.9) U/L vs (539.8 ± 175.3) U/L and (546.0 ± 130.2) U/L, and the TAOC, CAT, GPx and GSH activity of rats in OS group were significantly higher, which were (0.72 ± 0.24) U/mg, (1.05 ±0.21) mg/g, (676.9 ± 115.1) U/mg and (45.2 ± 14.3) U/mg vs (1.37 ± 0.19) U/mg, (2.23 ± 0.55) mg/g,(1024.6 ± 162.9) U/mg and (68.2 ± 9.9) U/mg, respectively. In contrast with NC group, pretreatment of OS in OSC group elevated TAOC, CAT, GPx and GSH activity (P < 0.01 or P < 0.05). Ozonized saline can strengthen the Nrf2 expression in liver cells. Conclusions Preconditioning injection of ozonized saline can reduce rat's liver injury induced by CCl4- The ozonized saline, as a novel Nrf2 activator, can reduce the oxidative damage of radical oxygen species (ROS) and the deleterious substance by activating the KeaplNrf2-ARE signaling pathway and its downstream genes expression.     

慢病毒介导miR-203过表达对酒精性肝病大鼠肝损伤的保护作用及其机制研究*

目的 探讨miR-203对酒精性肝病(ALD)大鼠肝损伤的保护作用及其作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分为ALD组(A组)、NC-miRNA/ALD组(B组)和miR-203/ALD组(C组)。将慢病毒质粒经尾静脉注射感染大鼠,并采用酒精饮料喂养法建立ALD模型,采用Realtime PCR法检测大鼠肝组织miR-203水平,常规行病理学检查,评估大鼠肝组织损伤情况。使用市售试剂盒检测大鼠肝组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)水平,采用Western Blot法检测肝组织IL-1β和NF-κB蛋白表达。结果 在建模8 w末,C组大鼠肝组织miR-203水平为(2.8±0.1),显著高于B组【(1.3±0.5),P＜0.05】;C组动物血清AST、ALT和TBIL水平分别为(89.5±7.9)U/L、(38.5±10.1)U/L和(27.8±5.1)μmol/L,显著低于B组【(162.8±16.5)U/L、(69.6±7.5)U/L和(54.9±7.8)μmol/L,P＜0.05】;C组肝组织匀浆SOD和CAT水平分别为(57.6±11.4)U/mg和(54.6±9.9)U/mg,显著高于B组【(41.6±7.6)U/mg和(45.7±6.0)U/mg,P＜0.05】,而MDA水平为(2.8±0.1)nmol/g,显著低于B组【(5.0±0.2)nmol/g,P＜0.05】;Western Blot检测结果表明,C组肝组织IL-1β蛋白和NF-κB表达分别为(0.7±0.2)和(0.3±0.1),显著低于B组【(1.2±0.3)和(1.0±0.2),P＜0.05】。结论 miR-203过表达对ALD大鼠肝损伤起到了保护作用,其可能的机制是增强了抗氧化和抗炎作用。