促红细胞生成素对全脑缺血再灌注损伤大鼠血红素加氧酶-1表达的影响

目的探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠脑缺血再灌注后血红素加氧酶1（HO-1）表达的影响。方法随机将雄性SD大鼠分为缺血再灌注组、治疗组、假手术组。治疗组按照缺血再灌注后不同时间点给予EPO腹腔注射,假手术组不手术,于各时间点断头取脑,用逆转录-聚合酶链反应技术检测大鼠皮层HO-1 mRNA的表达。结果① 全脑缺血再灌注后HO-1 mRNA的表达发生动态变化,缺血后6h开始明显升高,24h达高峰,此后缓慢下降;② EPO能够显著上调全脑缺血后皮层HO-1 mRNA的表达,缺血再灌注后即注射EPO组与缺血再灌注组各时间点HO-1和β-actin吸光度的比值差异有统计学意义（P＜0.05 ）。结论EPO的神经保护作用可能部分通过上调HO-1的表达来实现。     

阿霉素诱导亚铁血红素氧化酶-1对大鼠肝脏缺血再灌注的保护作用

目的:探讨阿霉素诱导亚铁血红素氧化酶-1(HO-1)对大鼠肝脏缺血再灌注的保护作用及其机制。 方法:48只雄性Wistar大鼠,随机分成6组（每组8只）：正常组(N)、阿霉素组(DOX)、原卟啉锌-Ⅸ组(ZnPP)、缺血再灌注组(IR)、阿霉素+缺血再灌注组(DOX-IR)和阿霉素+原卟啉锌+缺血再灌注组(DOX-ZnPP-IR)。测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)含量作为肝功能指标;放射免疫法测定血清肿瘤坏死因子(TNF-α)和内皮素(ET)作为应激标志物指标;应用Western blotting法和免疫组织化学S-P法观察HO-1蛋白表达;透射电子显微镜观察细胞超微结构变化。 结果:DOX-IR组ALT、AST、ET-1和TNF-α值均显著低于IR组 (P<0.05);DOX组与正常组比较,肝功能、ET-1和TNF-α值差异无显著性 (P>0.05);DOX-ZnPP-IR组与IR组比较,肝功能值差异无显著性(P>0.05)。Western blotting法和免疫组织化学S-P法检测显示DOX 组和DOX-IR组 HO-1蛋白表达增加,HO-1在正常肝脏内的表达呈阴性。透射电镜检查IR组肝细胞细可见明显的细胞器损害现象,DOX -IR细胞器受损较轻。 结论：阿霉素预处理可以提高器官对缺血再灌注损伤的耐受性,其机制可能与阿霉素所诱导的HO-1表达有关,小剂量阿霉素对大鼠肝脏未造成明显损害。     

细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1对大鼠缺血心肌的转导及影响

目的:探讨细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法:制备融合蛋白PEP-1/HO-1,通过酶联免疫吸附法检测给予融合蛋白后各时间点血清HO-1水平,探讨动物实验给予融合蛋白的最佳时间点。健康雄性SD大鼠18只,体重220-280g,随机分为3组:正常对照组(C组,n=6)、缺血再灌注组(IR组,n=6)和PEP-1/HO-1处理+缺血再灌注组(HO组,n=6)。制备心肌缺血再灌注损伤模型,于再灌注结束后,测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性及心肌梗死面积。结果:给予融合蛋白后,血清HO-1蛋白浓度在1h和3h达峰值。与C组比较,IR组血清CK和LDH活性升高,心肌梗死面积增加(P<0.05);与IR组比较,HO组血清CK和LDH活性降低,心肌梗死面积减少(P<0.05)。结论:细胞穿透肽PEP-1介导的HO-1对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

血红素加氧酶-1/一氧化碳系统对急性肝损伤大鼠的防治作用

目的:研究血红素加氧酶-1/一氧化碳(HO-1/CO)系统对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制.方法: 随机将30只SD大鼠分成6组,即正常对照组、四氯化碳染毒组(CCl4)、hemin组、hemin+CCl4组、CO组和CO+CCl4组,每组5只大鼠.采用Western blot法测定HO-1蛋白的表达情况;测定各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,肝组织丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及caspase-3活性和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平变化;以HE染色观察肝组织病理形态学改变以及采用TUNEL法观察肝细胞凋亡情况.结果:CCl4成功诱导了大鼠急性肝损伤,表现为染毒24 h后血清ALT,AST水平(2 136.3±163.4 U,1 422.7±221.7 U)以及肝组织MDA浓度(5.28±0.93 μmol/g)、肝组织caspase-3活性(光密度值4.69±1.02)和TNF-α水平(256.3±27.3 ng/L)均显著升高,肝组织SOD活性(45.9±14.8 U/mg)下降,和正常对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01);病理学和TUNEL法检测结果均显示肝有严重损伤,大量肝细胞发生凋亡.给予hemin预处理能显著诱导大鼠肝HO-1的表达,并对肝产生明显的保护作用,表现为大鼠血清ALT,AST水平(287.1±24.3 U,246.2±21.7 U)和肝组织MDA浓度(3.27±1.34 μmol/g)明显降低,肝组织SOD活性(71.4±22.6 U/mg)升高,肝组织TNF-α水平(132.6±19.5 ng/L)和caspase-3活性(光密度值2.49±1.47)明显低于CCl4组;此外,hemin预处理亦使染毒大鼠的病理学指标得到明显改善,细胞凋亡的数目显著减少.腹腔注射低浓度CO亦能降低染毒大鼠ALT,AST水平和MDA浓度,抑制caspase-3活性和TNF-α水平,并使组织SOD活性升高,同时改善肝损伤程度,对肝产生明显保护作用.结论: HO-1诱导表达和给予外源性CO均对急性肝损伤大鼠产生明显的保护作用,提示HO-1/CO系统在防护急性肝损伤的病理生理过程中占有重要地位;HO-1/CO系统的保护机制可能与其减轻脂质过氧化反应,抑制caspase-3活性和降低TNF-α水平有关.     

蓝莓对大鼠肝星状细胞增殖、活化的影响及机制探讨

目的 观察蓝莓对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、活化的影响及其机制.方法 采用Ⅳ型胶原酶消化和Nycodenz密度梯度离心的方法,分离、培养大鼠HSC,加入10%蓝莓低剂量及10%蓝莓高剂量动物血清干预体外培养的HSC,并设10%丹芍化纤阳性对照血清组(阳性对照血清组)和10%生理盐水血清对照组.用MTT比色法测定各组HSC的增殖效应,ELISA方法测培养液上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)的含量,免疫细胞染色法检测各组HSC内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,采用Western印迹检测HSC、核转录相关因子(Nrf2)、Ⅰ型血红素氧化酶(HO-1)的表达.结果 与生理盐水血清组比较,蓝莓血清组均可显著抑制大鼠HSC的增殖(P＜0.05),其抑制率与阳性对照血清组接近;蓝莓低剂量、高剂量血清组培养液上清Col Ⅰ的含量明显减低(P＜0.05);HSC内α-SMA的表达强度降低(P＜0.05),与阳性对照血清组相当;Western印迹检测显示,与生理盐水血清组比较,蓝莓低剂量、高剂量血清组与阳性对照血清组HSC Nrf2和HO-1蛋白表达增多,以监莓低剂量、高剂量血清组增高更为明显(P＜0.05).结论 蓝莓可抑制体外大鼠HSC的增殖和活化,减少细胞外基质的合成,对大鼠肝纤维化有潜在的干预作用,其机制可能与激活HSC Nrf2增加HO-1的表达有关.     

血红素加氧酶1对糖尿病大鼠脊髓背角神经元凋亡及痛敏的影响

目的探讨血红素加氧酶1（heme oxygenase-1,HO-1）对链脲菌素（streptozotocin,STZ）诱导的糖尿病大鼠脊髓背角神经元凋亡和神经病理性疼痛的影响以及两者之间可能存在的关系。方法成年雄性SPF级Wistar大鼠24只,体重180～220g,随机分为3组（n=8/组）：正常对照组（C组）,糖尿病组（B组）,Hemin干预组（A组）。A组、B组单次腹腔注射链脲菌素65mg/kg建立糖尿病模型。建模成功后,A组Hemin25μmol/kg隔天腹腔注射1次,连续6周,B、C组同一时间腹腔注射等体积生理盐水。于注射STZ前以及注射STZ后每周测定大鼠后肢机械性缩足反应阈值（mechanical withdrawal threshold,MWT）,6周后麻醉下取坐骨神经电镜观察病理学变化,处死大鼠取L4-6脊髓,尼氏体染色法光镜下观察脊髓背角组织的形态学变化,免疫组化法测定脊髓背角HO-1蛋白的表达,原位末端标记法（TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL法）检测脊髓背角凋亡神经元并计算凋亡指数。结果 A组大鼠MWT于注射STZ后28d时较B组明显增加（P〈0.05）,35d时显著增加（P〈0.01）,42d达峰值;A组大鼠于注射STZ后42d时脊髓背角神经元中HO-1的表达较B组增强,而B组较C组也有所增强;A组脊髓背角病理改变程度、坐骨神经髓鞘病变程度及脊髓背角神经元细胞凋亡程度均较B组轻微。结论糖尿病神经病理性疼痛大鼠中存在着脊髓背角神经元的凋亡,HO-1表达上调可对其有一定的抑制作用,并能够减轻神经病理性疼痛,糖尿病大鼠痛敏的形成与脊髓背角神经元凋亡之间可能存在着一定的关系。     

溴氰菊酯对大鼠脑血红素氧化酶-1的影响

目的：研究溴氰菊酯（DM）对大鼠脑皮质及海马血红素氧化酶-1（HO-1）mRNA及蛋白表达的影响。方法：健康SD雄性大鼠36只,随机分为对照组（腹腔注射色拉油）、低剂量DM组（腹腔注射1.25mg/kg DM）、高剂量DM组（腹腔注射12.5mg/kg DM）,连续染毒5d,末次染毒24h后以原位杂交法测定皮质及海马HO-1 mRNA的表达,以免疫组化法测定HO-1蛋白表达。结果：与正常对照组相比,高剂量DM组HO-1 mRNA表达阳性细胞数明显增多（P〈0.05）;而HO-1蛋白表达阳性细胞数则在低剂量DM组、高剂量DM组大鼠均明显增高（P〈0.05）,并随着染毒剂量的增加表达明显增强（P〈0.05）。结论：溴氰菊酯可诱导大鼠脑皮质及海马HO-1表达增加,发挥一定保护作用。     

血红素氧化酶-1在前列腺的表达及雄激素和雌激素对其表达的影响

目的 观察雄激素和雌激素去势后大鼠前列腺腹侧叶中血红素氧化酶－1（HO－1）基因表达的影响。方法 采用睾丸切除术创建大鼠去势模型，用RT－PCR方法观察HO－1的转录水平，应用免疫组织化学结合图像分析技术，观察去势，外源性雄激素和雌激素对大鼠前列腺腹侧叶中HO－1蛋白水平及分布的影响。结果 去势组HO－1 mRNA转录水平和HO－1蛋白表达水平显著低于正常对照组（P＜0．01）；外源性给予雄激素组和雌激素组HO－1 mRNA表达水平和HO－1蛋白表达水平明显增高（P＜0．01），且雌激素引起前列腺间质HO－1表达增加。结论 一氧化碳－血红素氧化酶系统可能参与了雌、雄激素引起前列腺异常增殖的病理过程。     

微波照射预处理对诱导兔肝血红素氧化酶-1的实验研究

目的:观察微波照射预处理对家兔肝脏缺血再灌注损伤中的肝功能指标(ALT、AST、LDH)及血红素氧化酶-1(HO—1)活力影响,探讨其保护机制。方法:32只新西兰大白兔被随机分为A、B、C、D共4组。各组于缺血再灌注后2小时、4小时抽血查ALT、AST、LDH。实验结束处死获取肝脏标本,肝脏组织行HO—1免疫组织化学染色,并行HE染色,观察各组病理组织学变化。结果:B、C、D三组的ALT、AST、LDH显著高于A组。用免疫组织化学染色观察发现HO—1在A组和D组中无明显表达,B组和C组的肝细胞胞浆内有较多棕黄色颗粒表达。C组病理改变明显轻于D组。结论:适宜条件的微波照射预处理能明显改善缺血再灌注损伤的肝功能,减轻肝细胞损伤,肝功能的改善与肝脏中被诱导的HO—1的表达有显著关联,表明HO—1可能对肝脏缺血再灌注损伤起着重要的保护作用。     

姜黄素对阿霉素肾病大鼠NADPH氧化酶和nephrin表达的影响

目的通过观察姜黄素对阿霉素肾病大鼠肾组织中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）．氧化酶与肾小球裂隙膜分子nephrin表达的影响,探讨姜黄素治疗肾病综合征的作用机制。方法将Sprague．Dawley大鼠50只随机分为5组（正常对照组、模型组、姜黄素低剂量干预组、姜黄素高剂量干预组和波尼松干预组）。除正常组大鼠外,各组大鼠尾静脉一次性注射阿霉素（5mg／kg）造模。分别在建模后第28天收集24h尿液,第29天处死所有大鼠,取肾脏组织,应用化学比色法检测肾组织氧化应激指标丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）,实时荧光定量聚合酶链式反应法和蛋白质印迹法检测肾组织NADPH氧化酶活性的关键亚基p47phox和neprhinmRNA与蛋白的表达变化。结果与正常对照组相比,模型组大鼠24h尿蛋白量、肾组织MDA含量明显增加,肾组织p47phoxmRNA和蛋白表达明显增加,SOD活性明显下降;肾组织中nephrinmRNA和蛋白表达均明显减少。与模型组比较,姜黄素干预组尿蛋白、肾组织MDA明显减少,SOD活性明显增加。姜黄素干预组可显著下调p47phoxmRNA和蛋白表达;姜黄素干预组nephrinmRNA和蛋白表达均明显增加。结论姜黄素能减轻肾小球滤过屏障损伤,降低尿蛋白,抑制肾组织p47ph“表达和增加nephrin表达可能是其作用机制之一。     

大鼠血红素氧化酶 1的基因克隆和原核表达

目的：从大鼠脾中克隆出血红素氧化酶1（RHO-1）基因，构建其原核表达载体，并在大肠杆菌中表达其蛋白。方法：用RT-PCR从大鼠脾总RNA中扩增出RHO-1 cDNA，并将其克隆入pMD18-T载体， 经TA克隆测序分析后,将阳性TA克隆RHO-1片段亚克隆入pET28a(+)原核表达载体，转化大肠杆菌BL-21，经限制性内切酶图谱鉴定后，阳性菌株经IPTG诱导，SDS-PAGE分析。结果：TA克隆测序分析证实该基因全长870 bp,编码289个氨基酸,所克隆的基因序列与GenBank中登录的RHO-1基因序列完全一致；限制性内切酶图谱结果表明成功构建了RHO-1的原核表达载体；SDS-PAGE结果显示RHO-1基因在大肠杆菌中获得表达。结论：用RT-PCR正确克隆RHO-1基因，构建pET28a(+)/RHO-1表达载体，并成功表达RHO-1融合蛋白。     

肝硬化大鼠肝脏?脾脏血红素氧化酶定位表达的变化

目的:研究肝硬化大鼠肝脏、脾脏血红素氧化酶(HO-1)、HO-2的定位表达的改变。方法:制备大鼠肝硬化模型,用免疫组化染色法观察HO-1、HO-2在细胞内的分布,并在显微镜下用计算机图像分析技术计算两者表达的强弱。结果:与对照组相比,肝硬化组肝脏、脾脏、门静脉HO-1阳性细胞的表达显著增加,且主要分布在肝脏的门管区周围及脾脏的红髓区,而HO-2的变化不明显。结论:HO可能参与肝硬化的发生过程、与门脉高压血流动力学紊乱有关。     

HLA衍生肽对大鼠脾细胞增殖功能及HO-1活性的影响

目的观察一种新型组织相容性白细胞抗原(histocompatibility leukocyte antigen, HLA)衍生肽(RDP1258)的免疫抑制功能并探讨其机制.方法人工固相合成一种HLA衍生肽(RDP1258),用 3 H-TdR法观察其在体外对大鼠脾细胞增殖反应的影响,以酶化学法观察其对脾细胞血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)活性的影响.结果 RDP1258可显著抑制淋巴细胞转化及MLR的增殖反应;该肽体外降低HO活性呈现出剂量依赖性.结论 RDP1258能够显著抑制大鼠脾细胞经丝裂原或同种抗原刺激引起的增殖反应,这种作用可能是通过影响HO-1活性而达到的.     

氯化血红素对大鼠肝脏血红素加氧酶1的诱导表达

目的观察氯化血红素（hemin）对大鼠肝脏血红素加氧酶-1（HO-1）的诱导表达作用。方法SD大鼠18只随机分为两组：氯化血红素处理组共10只，每日早晨hemin15mg／kg腹腔注射，每24h重复1次；生理盐水对照组共8只，每日早晨同时间腹腔注射等量生理盐水，每24h重复1次。第10d处死大鼠后检测血清ALT、AST水平，用免疫组织化学方法观察肝组织HO-1的表达，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测肝组织HO-1mRNA表达。结果hemin处理组与生理盐水对照组大鼠血清ALT，AST水平无明显差异。hemin处理组肝组织HO-1表达明显高于生理盐水对照组。结论hemin能诱导大鼠肝组织HO-1表达明显增加。     

哮喘大鼠的肺组织血红素氧合酶-1的表达及意义

目的:探讨哮喘大鼠肺组织中血红素氧合酶-1(HO-1)的表达情况,以及其与支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)占细胞总数的百分比(EOS%)、气道壁中EOS、全血一氧化碳血红蛋白(COHb)的百分比含量之间的相关性.方法:清洁级雄性SD大鼠20只,随机分为正常对照组和哮喘组,每组10只.测定全血COHb的百分比含量;计数BALF沉渣中细胞总数和分类;计数气道壁中浸润的炎性细胞数;用免疫组织化学染色法观察H0-1在哮喘大鼠肺组织的表达.结果:发现H0-1主要表达于气道上皮细胞,两组H0-1阳性表达的平均吸光度分别为0.07±0.01和0.22±0.03.哮喘组HO-1表达水平显著高于正常组(P＜0.01).HO-1表达水平与全血COHb的百分比含量、BALF中EOS占细胞总数的百分比及气道壁中EOS总数均呈显著正相关(分别为r=-0.943,P<0.01;r=0.912,P＜0.01;r=-0.945,P＜0.01).结论:哮喘大鼠的肺组织H0-1表达水平显著增加,提示HO-1可能参与了哮喘的发病过程.     

Protective effect of heme oxygenase-1 on lung injury induced

Background Intratracheal instillation of blood induces self-repaired acute lung injury. However, the mechanism of repair has been unclear. Heme-oxygenase （HO）-1, which catalyzes heme breakdown, acts as an inducible defense against oxidative stress and plays an important role in inflammation. The objective of this study was to test the role of HO-1 in lung injury caused by intratracheal instillation of red cells. Methods Forty healthy, male Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups： normal group, saline group, erythrocyte group, erythrocyte＋zinc-protoporphyrin （ZnPP, HO-1 inhibitor） group and saline＋ZnPP group. At 2 days after intratracheal instillation of red cells, lung tissues and lavage samples were isolated for biochemical determinations and histological measurements. Results Histological analysis revealed that administration of ZnPP worsened the acute lung injury induced by instilled erythrocytes. HO-1 was over-expressed in the erythrocyte group and in the erythrocyte ＋ ZnPP group. Compared with the erythrocyte ＋ ZnPP group, the levels of total protein, lactate dehydrogenase and tumor necrosis factor-a in the lavage were lower （P 〈0.01）, while the level of interleukin-10 was higher in the erythrocyte group （P 〈0.01）. Conclusion HO-1 protects against erythrocyte-induced inflammatory injury in lung.     

血红素加氧酶-1在高氧肺损伤小鼠中的表达及作用

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在高氧造成的肺损伤转基因小鼠和正常小鼠中的肺部表达水平及其作用.方法 把32只新生小鼠分成4组:野生型组(WT组),特异性转基因小鼠全身高水平表达HO-1组[HO-1-FL(H)组,细胞质]、特异性转基因小鼠全身低水平表达HO-1组[HO-1-FL(L)组,细胞质]和切去C末端HO-1(Nuc-HO-1-TR组,细胞核).把4组小鼠暴露在高氧环境中3d,然后放到正常空气环境中,通过免疫组织化学、免疫荧光等实验技术来观察小鼠3d、7d和14 d肺泡发育情况及HO-1在小鼠肺部表达情况.结果 HO-1在HO-1-FL(H)组小鼠肺部高表达,高氧暴露3d后4组小鼠肺部肺泡发育都受到了损害,在正常空气环境中7、14 d时HO-1-FL(H)组小鼠的肺泡发育恢复得最好.结论 小鼠肺部适度高水平的HO-1表达有助于高氧环境造成的小鼠肺损伤的恢复.     

血红素氧化酶1基因在慢性肺心病大鼠支气管中的定位表达

目的：研究血红素氧化酶—1(HO—1)基因在慢性肺心病大鼠支气管中的表达及分布情况。方法：采用免疫组化、组织原位杂交等技术，对慢性低氧高二氧化碳诱发的肺心病大鼠支气管中的HO-1表达进行定位研究。结果：HO—1及其mRNA在慢性肺心病大鼠各级支气管上皮细胞和平滑肌细胞中广泛表达。结论：对于慢性低氧高二氧化碳诱发的肺心病，HO—1在支气管的表达被诱导。