Genetic characterization of Vibrio vulnificus strains isolated from oyster samples in Mexico

Vibrio vulnificus strains were isolated from oysters that were collected at the main seafood market in Mexico City. Strains were characterized with regard to vvhA, vcg genotype, PFGE, multilocus sequence typing (MLST), and rtxA1. Analyses included a comparison with rtxA1 reference sequences. Environmental (vcgE) and clinical (vcgC) genotypes were isolated at nearly equal percentages. PFGE had high heterogeneity, but the strains clustered by vcgE or vcgC genotype. Select housekeeping genes for MLST and primers that were designed for rtxA1 domains divided the strains into two clusters according to the E or C genotype. Reference rtxA1 sequences and those from this study were also clustered according to genotype. These results confirm that this genetic dimorphism is not limited to vcg genotyping, as other studies have reported. Some environmental C genotype strains had high similarity to reference strains, which have been reported to be virulent, indicating a potential risk for oyster consumers in Mexico City.     

Toxigenic V. cholerae,V. parahaemolyticus,and V. vulnificus in oysters from the Gulf of Mexico and sold in Mexico City

Oysters can accumulate potentially pathogenic bacteria, such as Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus, and V. vulnificus. The aim of this study was to detect the presence of these Vibrio species and their toxigenic variants in oysters from the Gulf of Mexico sold in Mexico City. Oyster samples were studied using traditional culture and molecular polymerase chain reaction analysis. V. cholerae was present in 30.4% of the samples and its toxigenic variant chxA+ in 26.1%. It was isolated only in deshelled oysters, mainly in the dry season. V. parahaemolyticus was present in 95.7% of the samples and the toxigenic variant was found in 17.4%. V. vulnificus was identified in 60.9% of the samples, 38% of which corresponded to the environmental genotype and 21.7% to the clinical genotype, mainly in the cold season. Consumption of the oysters analyzed poses health risks due to the presence of Vibrio species, especially in deshelled oysters.     

深圳地区环境中创伤弧菌污染的调查与分析

目的了解深圳地区环境中创伤弧菌的污染状况及在不同类别样品中的分布情况。方法采集深圳地区范围内的环境样品,包括海产品、淡水产品、环境水质等,选择分离培养法进行创伤弧菌检测,对分离到的可疑菌株采用生化试验和聚合酶链反应(polymeras chain reaction,PCR)技术进行鉴定。结果在725份样品中,120份检出创伤弧菌,总检出率为16.6%。不同类别样品中,淡水鱼检出率最高为38.6%,其次为近海海水为22.5%、甲壳类产品为19.8%。不同季节采集样品创伤弧菌的检出率差异有统计学意义(P<0.005)。结论深圳地区环境中创伤弧菌污染状况不容乐观,温暖季节应加强对淡水鱼类及海产品进行创伤弧菌污染的监测,预防食物中毒的发生。     

杭州地区临床和环境分离副溶血弧菌菌株携带毒力基因的特征

目的　了解杭州地区临床和环境分离副溶血弧菌菌株的毒力基因特征。方法　对近年从食物中毒病人、临床散发病人和外环境 (小水产品 )中分离的 174株副溶血弧菌菌株 ,应用PCR技术进行耐热直接溶血素基因 (tdh)和耐热直接溶血素相关基因 (trh)的检测。结果　临床来源的副溶血弧菌 (94株来自食物中毒病人和 34株来自散发腹泻病人 )菌株的tdh携带率均大于 97% ,trh携带率为 0 % ;而所有 4 6株分离自环境 (小水产品 )的副溶血弧菌菌株未见有tdh携带 ,仅 1株trh阳性。 1株tdh阴性、trh阳性的副溶血菌株 ,其尿素酶试验为阳性 ,而在其他所有trh阴性的副溶血菌株中 ,不管其tdh是阳性或是阴性 ,尿素酶试验均为阴性。结论　引起杭州地区食物中毒及散发腹泻的副溶血弧菌主要为tdh阳性、trh阴性菌株 ,外环境中存在的trh阳性的副溶血弧菌也是一个潜在的病原     

2010年舟山市市售海虾中创伤弧菌的定量检测及其基因分型

目的:为了解舟山市海虾中创伤弧菌(Vibrio vulnificus,VV)污染状况及其致病基因型别。方法:从舟山市区三大菜场采集市售海虾114份进行VV定性、定量分析及其致病基因检测。结果:114份样品检出23份VV,检出阳性率为20.18%。不同月份检出率有统计学意义(χ2=32.92,P<0.05),8月份检出率最高为56.7%。17株VV菌株为溶血素A基因(vvhA)核酸阳性,vcgC/E和16S rRNA A/B分型结果显示,CAB型8株,CB型5株,CA型4株。结论:舟山市售海虾中VV污染状况夏季较为严重,基因型呈多样性,检出临床分离的主要基因型CB型5株。应对海虾中VV引起食源性感染的潜在风险进行评估,预防VV食源性疾病暴发的发生。     

舟山市市售海虾中创伤弧菌的定量检测分析

目的:为了解海虾中创伤弧菌的污染状况及其季节性变化规律。方法:从舟山市区的三大菜场采集市售的114份海虾样品进行创伤弧菌的定性及定量分析。结果:114份样品,共检出24株创伤弧菌,总体阳性率为21.1%。2月份和5月份检出率相对较低,为3.6%和7.7%;8月份的检出率为56.7%,11月份的检出率为13.3%。四个季度的检出率差别有统计学意义(χ2=31.91,P<0.01)。结论:创伤弧菌在一年四季都存在着潜在的危险,而在夏季被感染的机率明显上升。     

辽宁省腹泻病例中副溶血弧菌表型及基因型特征

目的 了解辽宁地区副溶血弧菌腹泻病例分离株的表型及基因型特征。方法 对2012-2013年辽宁地区101株副溶血弧菌临床分离株进行血清型分型;采用微量肉汤法,进行16种抗菌药物的药敏试验;通过PCR方法对其进行tlh、tdh和trh毒力基因检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对菌株进行基因分型。结果 101株副溶血弧菌分属于25种血清型,其中O3:K6为优势血清型,占37.62%(38/101);对磺胺甲恶唑、链霉素、氨苄西林产生耐药;对环丙沙星、强力霉素、头孢吡肟、甲氧苄啶、亚胺培南、头孢曲松钠等均具有较高敏感性;全部菌株tlh基因阳性;tdh存在于大部分菌株中,所占比例为84.16%(85/101);全部菌株trh基因阴性;O3:K6型菌株tdh基因阳性率100%,明显高于非O3:K6型菌株(76.19%,77/101)(P=0.00081)。101株副溶血弧菌分成63种型别,38株O3:K6型菌株分成19种型别,带型分散,无明显聚集性。结论 辽宁省感染性腹泻病例副溶血弧菌分离株以O3:K6型为主;毒力基因tlh和tdh携带率高,且O3:K6型临床分离株毒力更强;副溶血弧菌对多数抗生素均具有较高敏感性;PFGE结果提示辽宁地区流行的副溶血弧菌存在多克隆来源。     

武汉市6起食物中毒副溶血弧菌分子特征研究

目的：了解武汉地区6起食物中毒病原菌副溶血弧菌分子特征。方法：对6起食物中毒共16株分离株进行药敏分析,运用PCR技术进行耐热性溶血毒素基因（tdh）和耐热性溶血毒素相关溶血素基因（trh）检测,并进行肠道细菌重复基因间共同序列PCR（ER IC-PCR）分析。结果：16株副溶血弧菌对第三代头孢和喹诺酮类较敏感,tdh阳性,trh阴性,ER IC-PCR结果显示每起食物中毒菌株亲缘关系非常紧密,有3起属于同一个群,另外2起属于一个群。结论：武汉地区流行的主要副溶血弧菌分子特征为tdh阳性,trh阴性,ER IC-PCR技术是分析副溶血弧菌引起食物中毒菌株非常有效的工具。     

沈阳地区副溶血弧菌脉冲场凝胶电泳分析

目的 运用脉冲场凝胶电泳技术(pulsed-fieldgelelectro phoresis,PFGE)和PCR技术对辽宁沈阳市2010年7-8月份临床粪便标本分离的副溶血性弧菌进行毒力基因检测和分子分型分析.方法 运用PCR技术检测24株副溶血弧菌的耐热溶血素基因(tdh)、耐热溶血素相关溶血素基因(trh)和不耐热溶血素基因(tl);用PFGE技术对其进行分子分型和聚类分析.结果 24株副溶血弧菌均含有tdh和tl基因,表明均为有毒株;PFGE结果显示,24株菌株可分为10种图谱型,其中17株O3:K6被分为4种型别(仅相差1～3条带),表明17株O3:K6在流行病学上密切相关,提示沈阳地区可能存在副溶血弧菌腹泻病的局部暴发或流行.结论 沈阳地区流行的食源性副溶血弧菌存在基因型的多样性,但以遗传关系密切的O3:K6型为优势型别.     

Prevalence of virulence factors in Escherichia coli isolated from healthy animals and water sources in Brazil

The aim of this work was to verify the presence of seven virulence factors (ST, LT, eae, stx₁, stx₂, INV and EAEC) among Escherichia coli strains isolated from healthy humans, bovines, chickens, sheep, pigs and goats, from two sewage treatment plants and from the Tietê River. We have found a high prevalence of eae, stx₁ and stx₂ in ruminants. The EAEC gene was only found in humans and sewage. No strains presented ST, LT or INV. BOX-PCR fingerprints revealed a high diversity among the strains analysed and a non-clonal origin of strains that presented the same virulence factors. Therefore, we concluded that ruminants may constitute an important reservoir of most diarrheagenic E. coli in Brazil, except for EAEC strains. These results emphasize the importance of the identification of the animal source of fecal contamination for the correct water risk assessment.     

2016—2019年北京市海淀区副溶血性弧菌血清型、毒力基因及分子分型研究

目的　综合分析北京市海淀区副溶血性弧菌血清型分布、毒力基因携带情况和PFGE分型结果,并找出其相关性,从而掌握海淀区副溶血性弧菌的流行特征。方法　对2016—2019年北京市海淀区检出的63株副溶血性弧菌进行血清分型、毒力基因检测和PFGE分型试验。结果　海淀区副溶血性弧菌最优势流行株的血清型为O3:K6,毒力基因组合为tlh+tdh+,占比69.8%（44/63）;63株副溶血性弧菌经PFGE聚类分析得到37种带型,各带型之间相似度为84.8%～100.0%,其中,61株副溶血性弧菌聚集形成5个簇（带型相似度≥90%）;4年间共出现了8次一定时间内（发病日期间隔≤90 d）分离得到的菌株血清型、毒力基因和PFGE带型均一致的情况。结论　海淀区副溶血性弧菌的污染来源相对固定且单一。副溶血性弧菌血清分型和PFGE之间无特殊相关性;毒力基因相同的菌株,PFGE带型相似度更高。     

132株副溶血性弧菌毒力基因及耐药性分析

目的了解2014年-2017年桐乡市副溶血性弧菌分离株毒力基因携带与耐药性情况,为临床更为有效用药提供数据上的支持。方法利用RT-PCR技术对其分离株进行毒力(tlh、tdh、trh)检测;采用纸片扩散法操作,测定其对22种抗生素的耐药性。结果在132株副溶血性弧菌中,毒力基因tlh、tdh和trh阳性携带率分别为100.00%(132/132)、57.58%(76/132)和0.00%(0/132);对氨苄西林、头孢唑啉、哌拉西林、复方新诺明的耐药率分别为31.5%、23.5%、12.5%、12.5%,对除碳青霉烯类和喹诺酮类外的6大类抗生素均有耐药性,而其中对β-内酰胺类抗生素和叶酸代谢途径抑制剂及氯霉素的耐药性相对较高。多重耐药方面,对2种以上抗生素耐药的有15株,占11.90%。结论126株副溶血性弧菌分离株主要携带毒力基因为tlh、tdh。除氨苄西林等9类抗生素外,其余13类在副溶血性弧菌感染的治疗中可作为首选。     

杭州市O139群霍乱弧菌耐药变迁及毒力基因携带

目的 研究杭州市1994～2003年分离的O139群霍乱弧菌耐药性变迁以及携带ctxA、tcpA毒力基因的情况。方法 运用K—B法和PCR，检测90株O139群霍乱弧菌对抗生索的敏感性以及是否携带ctxA、tcpA毒力基因。结果 90株O139群霍乱弧菌中无丁胺卡那耐药的菌株，13株对诺氟沙星和环丙沙星耐药；对氨苄青霉索、复方新诺明分别有5年和6年的耐药率为100％；2002、2003年耐药谱增加到7种。87．87％的O139群霍乱弧菌同时携带ctxA、tepA毒力基因。结论10年来分离自杭州的O139群霍乱弧菌的耐药情况日益严重；O139群霍乱弧菌是否携带ctxA、tcpA毒力基因在对抗生素敏感性方面差异有统计学意义。     

泰州市不同来源副溶血性弧菌分离株毒力基因型和耐药性的比较研究

目的　了解泰州市水产品及腹泻病人中副溶血性弧菌的检出情况,并对检出的所有阳性菌株进行毒力基因和耐药性的比较研究。方法　对采集的水产品和腹泻病人的粪便样本进行副溶血性弧菌的分离及鉴定,运用荧光PCR技术检测副溶血弧菌的tlh(不耐热溶血素)、tdh(耐热直接溶血素)、trh(相关耐热溶血素)这3种毒力基因,采用WHO推荐的纸片扩散法(K-B法)分别对所有阳性菌株进行药敏实验。结果　泰州市2014-2017年采集的水产品和腹泻病人样本中副溶血性弧菌的检出率分别为34.3%(37/108)、1.2%(18/1548),55株阳性菌株中tlh均为阳性,trh均为阴性,水产品分离株均未检出tdh,但腹泻病人分离株tdh的检出率为94.4%(17/18)。腹泻病人分离株对头孢唑啉、氨苄西林、四环素的耐药性高于水产品分离株,其中腹泻病人分离株和水产品分离株对氨苄西林的耐药率分别达到61.1%（11/18）、54.1%（20/37）。结论　本市水产品中副溶血性弧菌的污染情况较为严重,副溶血性弧菌是导致食源性腹泻的主要致病菌之一。腹泻病人分离株的tdh携带率较高而水产品分离株均未携带tdh;腹泻病人分离株对头孢唑啉、氨苄西林、四环素的耐药性高于水产品分离株,而且两种分离株对氨苄西林均有较高的耐药率。     

三亚市食物中毒中人感染副溶血性弧菌的毒力基因及耐药性研究

目的 了解三亚市食物中毒中人感染副溶血性弧菌携带毒素基因及耐药性情况,为副溶血性弧菌食物中毒病人的治疗提供参考依据.方法 利用19种不同的抗生素药敏纸片,采用K-B扩散法进行耐药检测;用荧光定量PCR扩增法,以检测菌株的TDH和TRH基因.结果 经检测的30份菌株,28株携带有TDH基因,阳性率93％,所有菌株均没携带TRH基因.30份菌株对诺氟沙星、头孢曲松、氧氟沙星、头孢哌酮、庆大霉素、氯霉素、头孢克洛、氨苄青霉素、妥布霉素、环丙沙星、洛美沙星、依诺沙星、亚胺培南、萘啶酸未见有耐药株;青霉素G、苯唑西林、羧苄青霉素全部耐药;头孢噻吩、链霉素部分耐药.结论 带有TDH毒力基因是三亚市近年来引起食物中毒中人感染副溶血性弧菌主要分子流行病学特征,所分离菌株对大多数常见抗生素敏感性高.研究结果为评价引起食物中毒的副溶性弧菌的分子流行病学特征和制定可行的防控措施提供了科学依据.     

2018-2019年茂名市水产品中创伤弧菌的分子特征和耐药性分析

目的 对茂名地区2018-2019年水产品中分离的创伤弧菌进行毒力相关基因、耐药性分析和分子基因分型,初步建立该菌区域病原学特征数据库和耐药谱,为创伤弧菌的溯源和临床用药提供依据。方法 采用PCR技术进行毒力相关基因和生物型、血清分型的鉴定;脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）和微量肉汤稀释法进行基因分子分型和药物敏感性（AMS）分析。结果 175份水产品分离出51株创伤弧菌,阳性率为29.14%。41株创伤弧菌毒力相关基因vcg C/E和16S rRNA A/B分型结果显示共有3种型别,分别为CB型、EA型、CAB型;生物分型全为BT1型。药敏结果显示该菌对头孢类抗生素出现较多耐药株。PFGE指纹图谱结果显示41株创伤弧菌有41种分子型别。结论 茂名市水产品中创伤弧菌污染较为严重。毒力基因型别以CB型为主;PFGE型别多,菌株存在遗传多样性。因此,需对茂名水产品中创伤弧菌的食品安全进行风险评估和耐药监测,预防食源性疾病的暴发。     

深圳市2007--2008年腹泻病副溶血弧菌监测及分子特性分析

目的 了解深圳地区2007年和2008年腹泻病副溶血弧菌感染状况和临床分离株的分子生物学特征.方法 4个哨点监测医院每月至少对80份腹泻病例的粪便样本进行致病菌分离培养.对所分离的361株副溶血弧菌进行血清型分型和两个主要毒力基因tdh和trh的检测.对2007年8月和2008年9月6个疑似腹泻暴发地点的60株O3:K6型副溶血弧菌分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型.结果 4个哨点临测医院共检测4384份标本,分离出361株副溶血弧菌,361株副溶血弧菌分属于28种不同的血清型,其中O3:K6型占67.90%,其次是O4:K8和O1:KUT血清型,所占比例分别为7.50%和6.10%.深圳地区腹泻病副溶血弧菌临床分离株主要是tdh+trh-菌株,361株菌株中有337株是tdh+trh-菌株,11株为tdh-trh-菌株,13株为tdh+trh+菌株.60株副溶血弧菌分型得到20种图谱类型,分别属于3个克隆群.分离自同一个地点的副溶血弧菌菌株具有相同的PFGE图谱,来自不同年份的菌株仅有部分菌株有相同的PFGE图谱.结论 深圳地区腹泻患者的副溶血弧菌分离菌株主要以O3:K6型为主,大部分菌株携带tdh基因,少数携带trh基因.来自6个地点的副溶血弧菌都具有相同的PFGE图谱,说明该地区存在副溶血弧菌腹泻病的暴发.但2007年和2008年菌株的PFGE图谱又不相同,说明副溶血弧菌的来源存在多样性.     

2005年上海市霍乱弧菌菌株表型及ctxA毒力基因分析

目的：分析本市2005年不同来源01群和0139群霍乱弧菌菌株表型和ctxA毒力基因特征。方法：以PCR方法，对所有菌株进行ctxA毒力基因检测。采用WHO推荐的改良K—B纸片法，对所有菌株均进行了12种抗菌药物的药敏试验。结果：从病人和外环境中分离出的0139群霍乱弧菌均为产毒株；从病人中分离出的01群霍乱弧菌流行株均产毒，外环境中分离出的非流行株少数也产毒。0139群霍乱弧菌菌株耐药谱较01群霍乱弧菌菌株广；两者对氨苄青霉素、强力霉素、庆大霉素、复方新诺明、利福平耐药率有显著差异。结论：本市2005年霍乱的流行株都是产毒株，但产毒株不一定是流行株。药敏结果显示，对01群和0139群霍乱弧菌应采取不同抗菌治疗，0139群霍乱弧菌多重耐药应引起重视。     

A survey of urease-positive Vibrio parahaemolyticus strains isolated from traveller's diarrhea,sea water and imported frozen sea foods

The frequency of urease-positive Vibrio parahaemolyticus among isolates from patients, imported frozen sea foods and the environment (sea water) was studied. The highest isolation frequency of urease-positive V. parahaemolyticus was found in clinical isolates (11.2% out of 204 strains examined).Urease-positive V. parahaemolyticus was found in 5.7% of 88 frozen sea food-isolates examined, but no strains isolated from sea water were urease-positive. The isolates were further examined for the production of thermostable direct hemolysin (Vp-TDH) and its related hemolysin (Vp-TRH). Both are possible pathogenic toxins produced by mostly clinical isolates of V. parahaemolyticus. Urease-positive strains have a tendency to associate with clinical isolates producing both or neither Vp-TDH and Vp-TRH. Rabbit ligated ileal loops test was performed with several strains of ureasepositive and -negative clinical isolates, and we found that some strains producing urease, even those which do not produce Vp-TDH or Vp-TRH, caused intestinal fluid accumulation.Corresponding author.     

湖南省2005年-2010年霍乱疫情分离株的毒力基因PCR及PFGE分型分析

目的:了解2005年-2010年湖南省霍乱疫情分离到的O139群霍乱弧菌菌株的病原学特征,研究疫情分离株之间的克隆相关性。方法:采用K-B法进行药敏试验;聚合酶链反应(PCR)检测ctxAB毒力基因;脉冲场凝胶电泳对疫情分离代表株进行PFGE分型分析。结果:33株霍乱弧菌对强力霉素、复方新诺明的耐药率较高,分别为39.39%和75.76%,对环丙沙星、诺氟沙星以及丁胺卡那100%敏感;毒力基因的PCR结果显示为所有疫情分离的O139霍乱弧菌均为产毒株,即霍乱肠毒素基因ctxAB阳性;24株分离自2005年和2010年的7起疫情里的O139霍乱弧菌进行PFGE分型及聚类分析后,共分为3个PFGE带型,所有菌株的带型相似率在83%～100%之间。结论:湖南省2005年-2010年霍乱疫情以O139群为主,引起疫情的全部为产毒株,不同年份不同地区之间霍乱疫情的分离菌株之间存在着紧密相关的流行克隆群,对分离菌株进行耐药性监测和进一步的分子分型分析,有助于霍乱的主动监测和传染来源的追踪。