FISH与传统细胞遗传学方法在产前诊断中应用的比较

1．FISH的原理 荧光原位杂交技术（FISH：fluorescence in situ hybridization）是原位杂交技术的一个分支，是一种高度灵敏、高特异性以及分辨率强的基因和染色体分析技术，它通过标记核酸探针（已知碱基顺序）与细胞内的末知待测的核酸按碱基互补配对原则进行特异性原位结合（即杂交），然后通过荧光显色，直接观察和确定细胞核中或染色体上的核酸序列的有无、相互位置和相对量关系。     

原位杂交组织化学的进展

原位杂交组织化学(in situ hybridization histoche-mistry ISHH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学或免疫组织化学方法在核酸原有的位置上把它显示出来,这一技术即原位杂交组织化学.其目的是研究单     

非放射性标记的原位杂交技术及其应用

核酸原位杂交技术就是利用碱基序列已知的带有标记的核酸探针与组织切片、细胞或染色体上待测同源核酸进行杂交,从而对样品中待测核酸进行定性、定位和相对定量分析的一种研究方法。依标记物性质不同,可分为放射性和非放射性。前者标记的原位杂交技术虽有较高灵敏度,但它却有不稳定、相对不安全、自显影时间长、废物难以处理及昂贵等缺点,故发展了一种较灵敏、安全、快速、简便及价廉的非放射性标记的原位杂交技术。本文较详细地介绍了它的原理、方法、发展过程、不同的标记检测体系的比较以及应用。     

组织芯片技术及其应用

生物芯片 (ｂｉｏｃｈｉｐ)是指采用微量点样等方式 ,将核酸片段、多肽分子、组织切片和细胞等生物样品有序地固定于支持物 (如玻片、硅片、尼龙膜等载体 )的表面 ,组成密集二维阵列 ,然后与已标记的待测生物样品中的靶分子进行杂交、或用免疫组织化学、原位杂交等技术使待检分     

FISH在产前诊断应用中应注意的相关事项和几点建议

FISH技术的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针,按照碱基互补的原则,与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合,形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列,因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。FISH现被广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究待许多领域。     

染色体原位杂交技术发展现状

染色体原位杂交技术是建立在DNA变性、复性动力学基础上,利用核酸分子的碱基序列配对的互补性,将已知的带有标记的DNA探针与细胞标本的染色体上经变性解链后的单链DNA,通过二者特定碱基序列互补,结合成长性核酸杂交分子,经放射性、非放射性方法在染色体上显示出其位置。1970年Pardue等在细胞学标本上建立了DNA-DNA杂交方法标记着染色体原位杂交方法的产生。1974     

分子灯塔设计核酸测定原理及应用

分子灯塔是一种在分子杂交基础上发展的一种荧光探针。这种探针5′端标记荧光物质,3′端连接荧光淬灭剂,而且在5′端和3′端设计互补碱基序列,使探针形成茎环结构。在检测核酸时具有快速、重复性好、灵敏度和特异性高、结果明确等优点。本文就分子灯塔的设计原理、分析特点和在核酸测定中的应用前景简要综述。     

显色原位杂交技术在乳腺癌HER-2/neu原癌基因检测上的应用及意义

对于检测常规甲醛固定的乳腺癌石蜡组织切片中HER-2／neu原癌基因的核苷酸序列技术方法而言,荧光原位杂交法（FISH）一直是公认比较敏感和经典的检测方法。而显色原位杂交法（chromogenic in situ hybridization,CISH）作为一种核酸原位分子杂交技术方法,也可用于常规甲醛固定的乳腺癌石蜡组织切片中的HER-2／neu原癌基因的检测。     

基于石墨烯场效应晶体管的病毒核酸检测技术

目的本研究旨在开发一种高灵敏且简便的检测方法, 实现对病毒核酸的快速检测。方法建立了一种基于石墨烯场效应晶体管的新型核酸检测方法。通过在石墨烯传感界面锚定化学小分子, 然后修饰上DNA四面体探针, 实现了对病毒核酸的检测。通过测试传感器件的转移特性曲线, 可将探针与目标物杂交结合的生物信号转化为器件的电学信号, 并通过晶体管器件的信号放大作用, 实现了对目标分子的高灵敏检测。结果靶向新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)RNA的ORF1ab序列的DNA四面体探针与目标RNA通过碱基互补配对原则进行杂交结合。测试了唾液中不同浓度条件的2019-nCoV的核酸模拟样本, 观察到随着目标核酸的浓度增加, 晶体管传感器件的狄拉克点产生规律性的向左偏移。在100 μl的待测液, 传感器件的最低检测浓度可达0.05拷贝/μl, 且响应时间低至5 min。结论本研究开发了一种基于石墨烯场效应晶体管检测方法, 极大地提高了对病毒核酸的检测灵敏度并缩短了检测时间。     

一种基于流式细胞仪分选后的细胞原位分子杂交

原位分子杂交是从组织细胞原位显示特定核酸序列存在的技术 ,它对一些异质性的细胞群体如血液 ,脑组织等 ,常不能准确阐明特定核酸序列表达于何种类型的细胞 ,或在某一细胞群体是否有特定基因的表达。在对中枢神经系统 (CNS)胶质细胞的研究中 ,参考相关报道[1 ,2 ] ,我们将流式细胞仪技术与原位分子杂交结合 ,对经分选的小胶质细胞进行细胞原位分子杂交分析 ,取得了满意结果。1　材料与方法1 .1　主要试剂及材料　小胶质细胞标记物同工凝集素GSA IB4 (FITC标记 )、2 0×SSC购自Sigma公司 ,诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)与肿瘤坏死因子 …     

核酸分子的化学发光标记和化学发光检测

非同位素标记是核酸分子杂交和检测的关键技术。在已知的各种非同位素标记检测方法中,化学发光标记和检测以其灵敏度高、安全无害和操作简便等优点,愈来愈受到重视。本文对核酸分子的化学发光标记和核酸杂交分子的化学发光检测作一简要介绍。     

荧光原位杂交的原理及在产前诊断中的应用

荧光原位杂交（fhorescenceinsituhybridization．FISH）是近几年来由细胞遗传学、分子生物学及免疫学技术相结合而产生的一种新技术。由于其兼备了细胞遗传学与分子生物学技术，克服了使用单一细胞遗传学技术的局限性，故在产前诊断、基因定位、肿瘤细胞遗传学、临床遗传病检测等研究领域显示出重要应用价值。下面就有关荧光原位杂交的原理及在产前诊断中的应用作一简单介绍。所谓FISH即利用生物素（biotin）等标记的已知外源核酸作为探针，通过特定的碱基互补序列与玻片（包括组织切片、细胞滴片、染色体制片）上待测核酸进行原位杂交…     

核酸杂交技术及其在医学上的应用

核酸杂交技术原是遗传工程的一个重要组成部分,但近年来它在医学和分子生物学的研究中,得到了巨大发展。在新的诊断方法的研究中,它具有巨大潜力,越来越受到人们的重视。其工作原理是:用人工标记的一段单链的DNA或RNA序列,作为探针去检查样品。如果样品中含有探针的同源核酸序列,探针就与样品中的互补核酸序列形成氢键结合,也就是退火,这一过程叫核酸杂交。一般说这段DNA或者RNA序列都是已知的基因。检测的样品可以是病源微生物,也可以是微生物的DNA提取物,人体组织,体液和人体的分泌物等。     

化学发光法在DNA杂交分析中的应用

化学发光法在ＤＮＡ杂交分析中的应用袁津玮，周宜开（武汉同济医科大学环境医学系武汉４３００３０）用于检测特异ＤＮＡ和ＲＮＡ序列的核酸杂交分析技术，作为分子生物学的最基本技术之一，已广泛应用在生命科学，尤其是医学的各个领域。传统的核酸分子杂交采用的是放射...     

一种非同位素通用探针系统

本文报道了一种应用非同位素方法检测核酸的通用探针系统。这一探针系统运用了两种单链的 DNA探针。第一探针为载有特异核酸片段的单链质粒载体,特异核酸片段的序列与待测核酸的序列互补,这一探针不经过标记;第二探针的核酸序列与第一探针质粒部分的核酸序列互补,它采用化学方法(转氨反应)标记了生物素。     

原位分子杂交中脱片问题浅析

核酸分子杂交技术是当今分子生物学研究的重要手段。原位分子杂交技术是分子生物学和组织化学结合的成果,能准确定位组织细胞内的特定基因表达。但分子杂交实验操作步骤繁琐,实验周期长,条件要求高,涉及实验试剂多,常常因为很小的因素而导致实验失败。     

核酸提取方法的研究进展

随着近年来分子生物学技术的高速发展，以核酸杂交、核酸扩增和核酸序列分析为代表的分子诊断和检测技术在诸多领域中日益凸显出至关重要的作用。新型的分子生物学检测技术包括聚合酶链反应（PCR）、微芯片、高通量测序等，然而，所有现代分子生物学检测技术首先面临的问题就是如何从复杂多样的生物样本中迅速有效地分离和提取所需要的基因组核酸，而且抽提后的核酸质量及其完整性都会直接影响到随后的实验结果。目前，全世界的研究者在核酸分离提取的技术方法上也取得了许多突破性的进展，本文将就新型的核酸分离提取方法作一综述。     

DNA探针的扩增制备技术

核酸分子杂交是分子病理学研究中的一项新技术,近年来国内少数病理实验室已开始此项工作。但是由于DNA探针扩增制备技术在病理实验室中尚未得到广泛开展,使探针来源受限,限制了杂交技术的应用。目前虽然有较多文献对DNA探针扩增制备技术作了介绍,但由于许多探针扩增方法要依赖特殊的设备和试剂,给工作带来了诸多不便。我们在工作中参照     

核酸定量检测技术的进展及应用

随着分子生物学技术的发展,克隆、分子杂交、聚合酶链反应(PCR)等核酸检测技术在各实验室中得到普及应用。以丙型肝炎病毒(HCV)为例,常规PCR只能定性检测体内有无HCV而无法判断其病毒含量。实际上,HCV在患者体内并不是一成不变的,HCV含量的高低与患者的病情轻重、预后、治疗反应等都有关,因此核酸的定量检测技术在临床及实验室研究中均有较大意义。根据其方法、原理的不同,大致分为两类:一类是直接定量检测核酸,主要是通过应用标记探针的杂交反应来定量检测结果:另一类是将待测核酸利用扩增后再通过酶免疫法(EIA)、发光分析、荧光…     

第三代测序技术简介

Heliscope单分子测序技术与SMRT技术都是基于边合成边测序的思想。Heliscope单分子测序仪,将待测序列打断成小片段并在3′末端加上Poly(A),在另一端加上Cy3荧光标记。然后与表面带有寡聚Poly(T)的平板杂交。再加入DNA聚合酶和Cy5荧光标记的dNTP进行DNA合成反应,每轮加一种dNTP。洗脱后检测,用荧光信号判断反应位置碱基。用化学试剂去掉荧光标记,进行下一轮反