前列腺素E1对人肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道活动的影响

目的：探讨前列腺素E1（PGE1）对人肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道（KCa）活动的影响。方法：选择因消化道疾病手术而无血管病变的患者的肠系膜动脉小分支,用酶消化法获得单个平滑肌细胞（SMC）,应用膜片钳技术观察PGE1对KCα的影响。结果：在内面向外膜片下,PGE1可使KCa开放概率（Po）增加,平均开放时间（To）延长,平均关闭时间（Tc）缩短,并增大单通道电流幅值。结论：PGE1激活KCa,增加K^ 外流,引起细胞膜超极化从而舒张血管。     

内皮素-1对高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道活性的影响

目的　探讨内皮素 1(ET1)对高血压病患者血管平滑肌细胞KCa通道活性的影响。方法　选择高血压病患者 18例 ,血压正常者 17例 ,两组患者均于腹部手术时取肠系膜动脉小分支用酶消化法获得单个血管平滑肌细胞。以膜片钳技术检测KCa通道的活性 ,记录不同钳制电压下单通道电流的平均开放时间 (To)、平均关闭时间 (Tc)、平均开放概率 (Po)、电流幅值 (Am) ,并绘制成电流 电压关系曲线。再分别加入Ca2 + (10 -8、10 -7、10 -6mol/L)、ET1(2× 10 9mol/L、4×10 9mol/L、6× 10 9mol/L、8× 10 9mol/L)后检测To、Tc、Po、Am等参数变化。结果　①高血压病患者KCa通道活性变化 :于细胞内面向外膜片下 ,在对称性高钾液中 ,高血压病组KCa通道平均开放概率增加 ,关闭时间延长、开放时间缩短。在浴液中分别加入Ca2 + 后 ,两组KCa通道均被明显激活 ,但血压正常组Po的增加显著高于高血压病组 (P <0 .0 0 1)。②ET1对高血压病患者KCa通道活性的影响 :血压正常者在内面向外式膜片下 ,Po、Tc均先增加后降低 ,显示低浓度时兴奋、高浓度时抑制 ,然而高血压病患者肠系膜血管平滑肌KCa通道对ET1则缺乏反应。结论　高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞KCa通道活性明显高于血压正常者 ,但对Ca2 + 的敏感性降低。ET1对高血压病人KC     

Mg^2＋对猪冠冠脉平滑肌细胞钙激活钾通道的激活作用的初步研究

研究Ｍｇ＾２＋对猪冠脉肌细胞钙激钾通道的作用，以揭示Ｍｇ＾２＋扩血管作用的电生理机制。方法：应用膜片钳制技术ｉｎｓｉｄ－ｏｕｔ方式记录冠脉平滑肌上的单通道活动，经ＰＣＬＡＭＰ软件进行微机采用储存数据和数据的分析处理。结论：Ｍｇ＾２＋对钙激活钾驼的激活作用可能为Ｍｇ＾２＋调节心血管活动的重要机制之一。     

大鼠血清对猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通道的作用

目的:研究大鼠血清对猪冠状动脉平滑肌细胞(SMC)钙激活钾通道(KCa)的作用,为血清药理学方法与膜片钳技术结合应用于相关离子通道机制研究奠定基础.方法:用EGTA处理血清中的Ca2 、Mg2 等离子,用膜片钳单通道技术研究处理后的血清对SMC上的KCa的影响.结果:处理后的血清浓度依赖性的不可逆性的阻断SMC上的KCa.在细胞贴附式膜片(cell-attached patch)下,血清10、50、100、150μl·ml-1,使通道开放概率从0.0285±0.0102分别降低到0.0205±0.0046(n=7,P>0.05)、0.0145±0.0007(n=7,P<0.05)、0.0045±0.0002(n=7,P<0.01)、0(n=7,P<0.01).在内面向外式膜片(inside-out patch)下,血清10、50、100、150μl·ml-1,使通道开放概率从0.3821±0.0491分别降低到0.1298±0.0331(n=7,P<0.05)、0.0405±0.0048(n=7,P<0.05)、0.0117±0.0011(n=7,P<0.01)、0.0008±0.0005(n=7,P<0.01).随着血清浓度的增加,通道活动逐步减少至完全抑制,这种作用冲洗后不可逆.结论:血清对猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通道有一定阻断作用.     

川芎嗪对正常人体肠系膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的作用

目的：研究川芎嗪（（tetramethylpyrazine,TMP））对正常人体肠系膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道宏观电流（large-conductance Ca^2＋-activated potassium channels,BKCa）的作用,探讨TMP对BKCa的作用机制。方法：用急性酶分离法分离人体肠系膜动脉平滑肌细胞,采用全细胞穿孔膜片钳技术记录该细胞上的大电导钙激活钾通道宏观电流,并测试TMP对该电流的作用。结果：TMP在0.73、3.67mmol/L时可明显地可逆性地激活正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa,在0.73mmol/L浓度时,测试电压从-50～＋60mV时差异都有统计学意义,其中测试电压在-50mV时,电流密度从0.25±0.03pA/pF增加到0.34±0.039pA/pF（P〈0.01,n=12）,测试电压在＋60mV时,电流密度从8.37±1.75pA/pF增加到14.12±2.66pA/pF（P〈0.01,n=12）;TMP在3.67mmol/L时可明显地可逆性地激活正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa,测试电压从0～＋60mV时差异都有统计学意义,其中测试电压在0mV时,电流密度从1.25±0.23pA/pF增加到1.90±0.31pA/pF（P〈0.05,n=7）,测试电压在＋60mV时,电流密度从10.57±3.61pA/pF增加到20.32±4.68pA/pF（P〈0.05,n=7）。但TMP在8.07mmol/L时可明显地可逆性地抑制正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa,测试电压从-60～＋60mV时差异都有统计学意义,其中测试电压在-60mV时,电流密度从0.28±0.02pA/pF降低到0.15±0.04pA/pF（P〈0.01,n=6）,测试电压在＋60mV时,电流密度从10.49±0.44pA/pF降低到1.83±0.68pA/pF（P〈0.01,n=6）。结论：TMP在0.73、3.67mmol/L下,可激活正常人体肠系膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道,而在8.07mmol/L时可明显地可逆性地抑制正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa。在低浓度和较高浓度下TMP对正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa有不同效应的实验结果,为TMP应用于临床提供了实验依据     

雌激素对正常人肠系膜血管平滑肌细胞自发性瞬时外向电流的作用

目的 研究雌激素(estrogen,E)对正常人肠系膜血管平滑肌细胞自发性瞬时外向电流(spontaneous transientoutward currents,STOCs)的作用,探讨雌激素对该细胞上大电导钙激活钾通道(Large-ounductance Ca2 -activated potassiumchannels,BKCa)的作用机制.方法 用急性酶分离方法分离人肠系膜血管平滑肌细胞,采用全细胞穿孔膜片钳技术记录谊细胞上的自发性瞬时外向电流.结果 雌激素可浓度依赖性地激活正常人肠系膜血管平滑肌细胞上的STOCs,当雌激素浓度从0μM增加到10、70、200、300μM时,其幅度和频率都增加.其中幅度分别增加了(68.15±10.82)%(n=10,P<0.01)、(131.63±35.33)%(n=10,P<0.01)、(192.02±57.85)%(n=10,P<0.01)、(269.34±70.64)%(n=10.P<0.01);频率分别增加了(29.30±8.61)%(n=10,P<0.01)、(89.17±21.76)%(n=10,P<0.01)、(164.33±43.51)%(n=10,P<0.01)、(205.09±62.49)%(n=10,P<0.01).结论 雌激素可直接激活正常人肠系膜血管平滑肌细胞自发性瞬时外向电流,是通过增加其幅度和频率而激活的,为进一步探讨雌激素对大电导钙激活钾通道的作用机制提供了实验依据.     

丹参素异丙酯对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜钙激活钾通道影响的研究

目的研究丹参素异丙酯[β-（3,4-二羟基苯基）-α-羟基丙酸异丙酯]对单个人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜上钙激活钾通道的影响。方法取急性酶分离的人肠系膜动脉平滑肌细胞,用膜片钳技术记录其全细胞电流,在全细胞记录模式下,观察不同浓度丹参素异丙酯对全细胞钙激活钾电流的影响。结果①比较含三种不同钙浓度电极内液所记录到的外向电流,发现电流密度随钙浓度增加而增加;②丹参素异丙酯采用两种浓度：5mol/L、10mol/L;用药后5min两组IKCa增幅改变值分别为（13±3）和（36±7）;③丹参素异丙酯使IKCaI-V曲线（I-V Curve）上移,用药后5min两组IKCa峰值电流密度增幅最大值分别为（19±2）和（40±3）。结论丹参素异丙酯具有激活钙激活通道,促进K＋外流的作用,且有浓度依赖性,浓度高者作用更为明显。其促进K＋外流的作用可能是其血管舒张的离子基础。     

大电导钙激活钾通道对子宫平滑肌作用的分析

大电导钙激活钾(large conductance Ca2+-activated K+-channel,BKCa)通道在未妊娠和妊娠子宫平滑肌细胞中是最主要的钾通道。BKCa通道的激活可导致细胞膜超极化,从而抑制电压依赖性钙通道的激活及钙离子的内流,引起平滑肌舒张。近年来的研究结果证实,子宫平滑肌细胞中BKca通道的激活、失活和变异与产科多种生理现象及疾病的发生有关,如可调控妊娠维持、分娩启动、产后出血、早产等。本文主要分析BKCa通道的基本结构,并总结分析近年来关于BKCa通道在生理妊娠及病理妊娠中相关作用的研究进展。     

雌激素激活血管平滑肌细胞钙激活钾通道的非基因组机制研究进展

大电导钙激活钾通道(BKCa)由形成孔道的α亚基及具有调节作用的β亚基组成,因其电导大,对调节平滑肌细胞功能起重要作用,从而成为近年来研究的热点。研究发现雌激素经细胞膜上的雌激素受体介导,通过胞内多种信号转导通路激活内皮型一氧化氮合酶进而产生NO直接或间接激活BKCa通道,产生快速血管效应。随着分子生物学及膜片钳技术的发展,人们在雌激素对BKCa调节机制方面进行了深入的研究,本文就此内容进行综述。     

大电导钙激活钾通道在平滑肌细胞中的调节机制

大电导钙激活钾通道由形成孔道的α亚基及具有调节作用的β亚基组成,因其电导大,对调节平滑肌细胞功能起重要作用,从而成为近年来研究的热点。大电导钙激活钾通道的调节机制多种多样,现对其近年来调节机制的研究进展作一综述。     

异丙酚对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜外向钾通道电流的影响

目的 :研究异丙酚对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜外向钾通道电流的影响。方法 :用酶消化法获得急性分离的人肠系膜小动脉平滑肌细胞 ,采用全细胞膜片钳技术记录外向钾通道电流。结果 :在刺激电压 (Vt)- 70mV～ +70mV条件下 ,引发一外向钾电流 ,该电流可被 3mmol/LTEA阻滞 6 1%± 5 % ,异丙酚 (4 3μmol/L、86 μmol/L)分别增加外向钾通道电流幅值达 (13± 3) %和 (36± 7) %。 结论 :异丙酚增强人肠系膜小动脉平滑肌细胞外向钾通道电流 ,提示钾通道开放增加可能介导异丙酚引发的血管扩张。     

大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钙激活氯通道与细胞质钙的关系及意义

目的观察大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）膜钙激活氯通道（ClCa）与细胞质钙的关系及意义。方法大鼠PASMCs获取采用急性酶分离法。荧光光度法检测细胞质内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）；全细胞膜片钳技术测定PASMCs钙激活氯电流（ICl（Ca））；等长张力测定法观察ClCa阻滞剂尼氟灭酸（NFA）和Indaryloxyacetic acid（IAA-94）对大鼠肺动脉张力的影响。结果环匹阿尼酸（CPA）和苯福林（PE）均可引起[Ca^2＋]i升高；升高的[Ca^2＋]i可以引出ICl（Ca）；NFA和IAA-94可以舒张CPA、PE引起的肺动脉环收缩。结论生理条件下大鼠PASMCs的ClCa是钙依赖性的；细胞外Ca^2＋内流及细胞质内Ca^2＋释放均可激活该通道，其参与了血管活性药诱导的肺动脉收缩。     

大鼠消化道平滑肌细胞KATP通道的牵张敏感性

目的探讨大鼠结肠平滑肌细胞上是否存在ATP敏感K+通道(ATP-sensitive potassium channel,KATP)及其牵张敏感性。方法用RT-PCR方法检测SD大鼠结肠平滑肌组织KATPmRNA的表达;联合应用单通道膜片钳技术和压力钳技术,采用inside-out模式记录大鼠结肠平滑肌细胞上KATP通道的电活动。结果在大鼠结肠平滑肌组织中可检测出较高水平的KATPmRNA的表达;用inside-out模式在大鼠结肠平滑肌上可记录到KATP通道的电活动,该通道在膜电位钳制电压为+60 mV时电导值为(44.5±1.5)pS。KATP通道特异性阻断剂——glibenclamide能抑制该通道的活动。且该KATP通道在负压刺激下开放概率增加。结论大鼠结肠平滑肌细胞上分布有KATP通道,该KATP通道对牵张刺激敏感。     

MitoK_(ATP)-PKC通路对人体肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道的影响

目的 以人体肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)为研究对象,研究线粒体膜上ATP敏感的钾通道(MitoKATP)对HPASMCs膜电位及电压门控钾通道(KV1.5)表达的影响,以及蛋白激酶C(PKC)在其信号转导中的可能作用.方法 从人正常肺组织分离出HPASMCs进行培养.利用激光共聚焦显微镜技术检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),全细胞膜片钳技术记录细胞膜电流变化,Western blot检测KV1.5蛋白和PKC-α的表达情况.结果 ①Diazoxide组肺动脉平滑肌细胞PKC-α的表达比正常对照组明显增强(P<0.05);这种作用可被5-羟基癸酸盐(5-HD)的作用所逆转;单独应用5-HD,平滑肌细胞PKC-α的表达与对照组比较差异无显著性意义.② Diazoxide作用24 h可明显抑制Kv电流以及下调Kv1.5蛋白的表达(P<0.05);佛波酯(PMA) 作用24 h也可明显抑制Kv电流以及下调Kv1.5蛋白的表达(P<0.05),而加入R0-31-8220可以逆转PMA的这一作用;Diazoxide和PMA同时应用较其中之一单独应用对人肺动脉平滑肌细胞Kv电流和Kv1.5表达有更加明显的抑制作用(均P<0.05);Diazoxide与R0-31-8220同时应用则部分逆转了Diazoxide对肺动脉平滑肌细胞Kv电流和Kv1.5表达的抑制(均P<0.05).结论 MitoKATP的开放和ΔΨm的增加可抑制Kv通道的活性和表达,可能参与并影响了肺动脉高压的发生发展, PKC在其中可能起介导作用.     

内皮素通过增强库容性钙内流促进肺血管平滑肌细胞增生

目的通过观察内皮素-1(ET-1)诱导人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)增生的作用机制及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)变化,探讨ET-1在肺动脉高压(PAH)发病过程中的作用,为进一步干预治疗提供有效的基础依据。方法体外培养HPASMCs并分为:正常对照组和内皮素组(ET-1:0.01μmol/L,0.1μmol/L,1.0μmol/L)。分别应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和细胞计数检测细胞的增生情况,荧光钙成像法测定[Ca2+]i,运用RealTime-PCR、WesternBlotting检测编码钙库操控性钙通道(SOC)的规范瞬时受体电位1(TRPC1)基因及蛋白表达情况。结果ET-1可促进HPASMCs增生,且ET-1诱导的细胞增生依赖于细胞外Ca2+的内流,ET-1处理的细胞中[Ca2+]i和库容性钙内流(CCE)显著升高,同时TRPC1基因转录与蛋白表达也明显增加。结论ET-1能显著促进肺血管平滑肌细胞增生,其机制可能与上调编码SOC的TRPC1表达、增加库容性钙内流使肺血管平滑肌细胞的[Ca2+]i异常升高有关。     

人脐动脉平滑肌细胞体外培养的生物学特性及其永生株的初步建立

目的 建立人脐动脉血管平滑肌细胞（HUASMC）原代．传代培养的最佳方法，并初步建立其永生株。方法 采用人脐动脉血管中膜组织块贴壁法原代培养，比较不同培养养基对原代及传代细胞增殖的影响；选择标记为新霉素（G418）的带有端粒酶催化亚基（hTERT)基因的重组质粒导入人脐动脉血管平滑肌细胞。结果 经α肌动蛋白鉴定，组织块贴壁洒可获得高纯度的HUASMC。原代培养的HUASMC1－4代细胞增殖能力强，生长旺盛，此后细胞的增殖逐渐降低，到第10代几乎丧失增殖力。原代培养以MCDB131为最佳培养基。hTERT转染细胞克隆由长梭形变为短梭形，接触抑制消失，生长速度快，目前已传至20代，增殖能力与第1代无差别。转染前后平滑肌特异的α－肌动蛋白表达阳性。结论 hTERT转染的HUASMC保留了HUASMC的基本生物学特征，能保持较强的增殖能力持续传代。     

人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞Ca2+通道的电生理特性

目的研究人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞L型Ca2+通道的特性及其激动剂BayK 8644对通道的影响.方法培养SK-N-SH细胞,用膜片钳细胞贴附式技术记录和研究L型Ca2+通道的特性.结果SK-N-SH细胞L型Ca2+通道电导为(27.8±2.56)pS,平均开放时间为(0.65±0.08)ms,平均关闭时间的短关闭时间常数(0.53±0.05)ms,长关闭时间常数(6.02±3.46)ms.Bay K 8644使Ca2+通道平均开放时间延长(P＜0.05),但不影响其电导(P＞0.05).结论人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞上存在L型Ca2+通道,与其他神经元上L型Ca2+通道特性相近.     

低氧通过Ca~(2+)-NFAT信号通路促进肺动脉平滑肌细胞增生

目的通过观察低氧对肺动脉平滑肌细胞增生的影响及作用机制,探讨低氧在肺动脉高压发病过程中的作用,为肺动脉高压的进一步干预治疗提供可靠的理论依据。方法培养人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cell,HPASMCs)并分为以下几组:正常对照组、低氧组(24h、48h、72h)、低氧并处理组(低氧48h并在细胞外液中加入EDTA2mmol/L或VIVIT4μmol/L)。分别应用细胞计数法检测细胞的增生情况、荧光钙成像法测定细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)、激光共聚焦显微镜观察活化T细胞核因子c3(nuclear factor of activated Tcells,NFATc3)在细胞核内外分布的变化。结果低氧呈时间依赖性促进HPASMCs增生;低氧处理的细胞静息[Ca2+]i和库容性钙内流(capacitative calcium entry,CCE)显著升高,NFATc3的核转位增多。EDTA(Ca2+螯合剂)或VIVIT(NFAT特异性抑制剂)能够明显抑制低氧诱导的细胞增生现象。结论低氧能促进HPASMCs的增生,其机制可能是通过增加静息[Ca2+]i和库容性钙内流,使HPASMCs内的Ca2+异常升高并导致NFATc3转位至核内,进而促进与增生有关的基因的表达。