雌激素对大鼠去卵巢后白细胞介素-6介导的骨吸收的影响

目的观察雌激素对去卵巢大鼠骨髓细胞白细胞介素6(IL6)、IL6受体、gp130基因表达以及骨髓源性破骨细胞形成的影响。方法健康3月龄雌性SD大鼠72只,随机平均分为假手术对照组、去卵巢组和雌激素组(苯甲酸雌二醇02mg/kg,皮下注射,每周1次)。分别于术后2、4、6、12周每组各取6只大鼠骨髓细胞作细胞培养和提取RNA。培养第6天计数破骨细胞数,第12周取左侧胫骨作骨形态计量学检测。结果骨形态学显示去卵巢后出现骨吸收亢进,雌激素对其有抑制作用。去卵巢后2周,去卵巢组破骨细胞形成数即多于对照组(1450±169对901±141,P<005),骨髓细胞IL6和IL6受体mRNA表达均显著升高(P<005,P<001),第4～6周,上述改变达高峰,至第12周仍呈有意义增高;从2～12周,上述各指标雌激素组均明显低于去卵巢组(P<005,P<001)。各组未见gp130基因表达水平有明显变化。结论雌激素可以抑制大鼠去卵巢后骨髓源性破骨细胞的生成,这一效应可能与其抑制骨髓细胞在去卵巢后过度表达IL6、IL6受体基因有关。     

去卵巢大鼠骨髓源性破骨样细胞增殖、分化的改变及雌激素的影响

目的　通过体外骨髓细胞培养诱导破骨样细胞 (osteoclast likecells ,OLC)的形成 ,观察去卵巢对成年大鼠OLC形成及活性的影响以及给予雌激素后的改变。　方法　 3月龄SD大鼠分为对照组、去卵巢组及雌激素替代组。术后 12周处死大鼠 ,取股骨分离骨髓细胞 ,在条件培养液中诱导其向破骨细胞分化。活体观察OLC形成情况并于培养的第 6天行细胞染色 ,以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色 (+)、细胞核≥ 3个的细胞为OLC ,计数各组OLC及骨陷窝。　结果　 3组中去卵巢组OLC出现早且数量〔(2 7 75± 0 92 )个 /玻片〕明显高于其它两组〔(17 93± 0 6 9)个 /玻片和 (12 81±0 6 1)个 /玻片 ,P <0 0 1〕。雌激素处理能明显抑制OLC的形成 ,但雌激素替代组的OLC仍多于对照组 (P <0 0 5 )。骨陷窝形成的变化与OLC数量改变一致。　结论　本实验结果显示大鼠去卵巢后 ,骨髓干细胞分化形成OLC数量明显增多 ,且活性增强。补充雌激素能够有效抑制OLC形成增加及其活性增强。故雌激素抑制骨吸收的机制至少部分是作用于骨髓干细胞向破骨细胞的分化。     

细胞因子对白血病抑制因子和IL-6在骨髓基质细胞表达的调节

目的 :研究白细胞介素 1(IL 1)、TNF α、白细胞介素 4 (IL 4 )对骨髓基质细胞白血病抑制因子 (LIF)和白细胞介素 6 (IL 6 )表达的调节。方法 :用酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定各细胞因子作用下的LIF与IL 6水平 ,用逆转录 聚合酶链反应 (PT PCR)测定各细胞因子作用下的LIF与IL 6转逆子水平。结果 :在IL 1、TNF α作用下LIF与IL 6水平明显升高 (P <0 .0 5 ) ,IL 4作用下IL 6水平明显升高 (P <0 .0 5 ) ,而LIF水平却明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 :IL 1、TNF α有上调骨髓基质细胞LIF与IL 6表达 ,IL 4能上调骨髓基质细胞IL 6表达 ,却下调LIF的表达。     

补肾中药对去卵巢大鼠骨密度的影响

目的　寻找安全有效的治疗骨质疏松症的药物。方法　通过卵巢摘除 (OVX)建立原发性骨质疏松 (POP)模型 ;研究不同剂量的补肾中药对去卵巢大鼠骨密度的影响。结果　高、中剂量中药组能提高全身各部位的骨量 (与 OVX组比较 P<0 .0 5) ,这种功能与尼尔雌醇作用相当 (P>0 .0 5) ;高、中剂量中药组能提高去卵巢大鼠雌激素水平 ,同时能降低去卵巢大鼠体内 HOP和 AL P水平 (与 OVX组比较 P<0 .0 5)。结论　补肾中药具有提高骨密度的功能 ,其机理与该药具有类雌激素样作用及能同时抑制成骨细胞和破骨细胞的作用     

补肾通络方对骨质疏松大鼠骨吸收的影响

目的研究补肾通络方对去卵巢骨质疏松(OP)大鼠骨代谢相关因子细胞核因子κΒ受体活化因子配体/骨保护素(RANKL/OPG)的影响。方法通过卵巢去势的方法造成大鼠OP模型,分别进行补肾通络方、补肾中药、通络药灌胃,每日1次,连续70 d。并设立阳性对照组、模型组及假手术组。实验结束后,取血、大鼠脊椎及股骨,分别进行血清学检测、骨密度(BMD)检测。通过Western印迹检测骨组织RANKL/OPG蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠血清白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、RANKL/OPG蛋白表达均显著增加(P0. 01),BMD水平显著减少(P0. 01)。与模型组相比,给药组BMD均不同程度增加,RANKL/OPG表达均不同程度下降(P0. 05)。结论补肾通络方通过抑制RANKL/OPG蛋白表达,从而抑制破骨细胞活性,减少骨吸收。     

骨质疏松大鼠骨髓白细胞介素6受体亚单位gp80和gp130基因的表达

以竞争性RT-PCR研究骨质疏松模型大鼠骨髓白细胞介素6受体亚单位gp80和gpl30基因的表达。结果表明这些骨质疏松大鼠的gp80和gp130 mRNA基因表达增加，该变化可能为雌激素丢失所致骨质疏忪的形成机制之。     

年龄相关的骨髓细胞分化对成骨和破骨影响的实验研究

目的　从骨髓细胞分化角度研究年龄相关的成骨和破骨细胞分化的机理 ,探讨老年性骨质疏松症的发生机理。方法　通过骨髓细胞培养 ,应用组织形态学、流式细胞仪分析和分子生物学技术 ,采用碱性磷酸酶 (AL P)染色和骨钙素检测等手段观察青年大鼠和老年大鼠骨髓细胞分化成成骨和破骨细胞的状况。结果　青年大鼠骨髓基质细胞 (MSCs)形成成骨细胞数比老年大鼠多 (P<0 .0 1 ) ;老年大鼠骨髓细胞形成破骨细胞数比青年大鼠多 (P<0 .0 1 )。结论　大鼠骨髓细胞分化成成骨细胞的能力与年龄呈负相关 ,分化成破骨细胞的能力与年龄呈正相关。     

甲状旁腺素相关肽对骨髓基质细胞中RANKL及OPG基因的表达影响

目的 研究甲状旁腺素相关肽(PTHrP)对骨髓基质细胞RANKL／OPG基因表达的影响。方法 分离小鼠骨髓细胞后，45ng／ml的PTHrP刺激，第6天时观察破骨细胞生成情况。90ng／mlPTHrP刺激贴壁鼠骨髓基质细胞3d和6d，实时荧光PCR检测破骨细胞分化因子RANKL及骨保护素OPG基因的表达情况。结果在PTHrP的刺激下，大量破骨细胞生成。骨髓基质细胞在PTHrP的刺激下，RANKI基因表达升高，OPG基因表达降低。结论 PTHrP刺激破骨细胞生成是通过上调RANKI基因表达，下调OPG基因的表达实现的。     

缺氧肺动脉高压大鼠肺组织中白细胞介素6和Janus激酶表达的变化

目的　研究缺氧肺动脉高压 (HPH)肺组织中白细胞介素 6(IL 6)及Janus激酶 (JAKs)表达的变化。方法　雄性Wistar大鼠 60只 ,随机分为缺氧 1周 (H1)、缺氧 2周 (H2 )、缺氧 3周 (H3)、缺氧4周 (H4)和常氧 (N)组 ,每组 12只。常压缺氧舱复制HPH大鼠模型。应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测肺组织IL 6和JAKsmRNA的表达水平 ;免疫组化法检测肺组织JAKs蛋白的含量和细胞形态学变化。结果　 (1)H1、H2 和H3 组大鼠肺组织IL 6mRNA水平 (分别为 1 67± 0 0 9、2 2 6± 0 12、1 55± 0 11)显著高于N组 (1 2 0± 0 11,P均 <0 0 1) ;H1、H2 和H3 组大鼠肺组织JAK1mRNA水平 (分别为 2 11± 0 0 9、2 85± 0 12、2 3 6± 0 13 )显著高于N组 (1 62± 0 10 ,P均 <0 0 1) ;H1、H2 和H3 组大鼠JAK2mRNA水平 (分别为 1 41± 0 0 7、2 0 2± 0 13、1 3 6± 0 0 9)显著高于N组 (1 0 1± 0 0 9,P均 <0 0 1) ;H1、H2 和H3 组大鼠肺组织JAK3mRNA水平 (分别为 0 86± 0 11、1 45± 0 10、0 91± 0 13 )显著高于N组 (0 55± 0 0 8,P均 <0 0 1) ;H1、H2 组大鼠肺组织TYK2mRNA水平 (分别为 1.3 6± 0 .10 ,1.76± 0 .11)显著高于N组 (0 .57± 0 .0 7,P均 <0 .0 1) ;其中H2 组大鼠肺组织表达IL 6和J     

IL-6、TNF-α与绝经后骨质疏松

绝经后骨质疏松的发病机理与雌激素衰减、细胞因子改变有密切的关系。雌激素在基因水平抑制白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。当雌激素水平降低时,IL-6、TNF-α的基因表达增加,体内IL-6、TNF-α水平升高,促进破骨细胞的增殖、分化、融合,使骨吸收增加,骨代谢偶联失衡,从而导致骨质疏松。     

缝隙连接蛋白43在去卵巢大鼠骨细胞中的表达及其与骨质疏松的关系

目的　探讨去卵巢致骨质疏松大鼠骨细胞中缝隙连接蛋白 4 3(Cx4 3)的表达及意义。　方法　采用 10月龄未孕产Wistar雌性大鼠 30只 ,随机分为去卵巢组、假手术组和尼尔雌醇治疗组。于术后 8周末测量 3组大鼠全身及腰椎骨密度 (BMD) ,采用放免法测定血清雌二醇水平 ,采用SABC免疫组化法观察Cx4 3在成骨细胞和破骨细胞中的表达情况 ,采用 3’ OH末端DNA原位标记技术观察凋亡细胞变化。　结果　术后 8周末去卵巢组全身及腰椎BMD和血清雌二醇水平明显低于假手术组和尼尔雌醇治疗组 (P <0 0 1)。去卵巢组成骨细胞内Cx4 3阳性表达率 (13 80 %±1 14 % )低于假手术组 (6 3 6 0 %± 2 4 6 % )和尼尔雌醇治疗组 (6 3 6 0 %± 2 12 % ) (P <0 0 1) ,而破骨细胞内去卵巢组Cx4 3阳性表达率 (6 6 10 %± 1 37% )高于假手术组 (42 2 0 %± 1 93% )和尼尔雌醇治疗组 (41 80 %± 1 81% ) (P <0 0 1)。去卵巢组成骨细胞的凋亡变化 (49 30 %± 3 86 % )高于假手术组 (2 4 2 0 %± 2 78% )和尼尔雌醇治疗组 (2 5 5 0 %± 3 0 3% ) (P <0 0 1) ,破骨细胞凋亡变化(5 80 %± 1 14 % )低于假手术组 (19 2 0 %± 1 75 % )和尼尔雌醇治疗组 (19 70 %± 1 6 9% ) (P <0 0 1)。而上述观察指标中假手术组和尼尔雌醇治疗     

去卵巢大鼠骨质疏松凋亡细胞及其相关因素观察

目的　探讨去卵巢大鼠骨细胞凋亡活性及其相关因素。方法　采用3′-OH末端DNA原位标记技术观察凋亡细胞活性;采用免疫组化SABC法观察bcl-2、Fas、转化生长因子（TGF）β1的表达情况。结果　去卵巢大鼠成骨细胞的凋亡细胞活性为（40.5±5.2）%,较假手术组(24.5±3.0)%与去卵巢+尼尔雌醇/左炔诺孕酮治疗组［OVX+N/L组,（26.4±2.9)%］明显增加,差异有显著性(P＜0.01);去卵巢大鼠破骨细胞的凋亡细胞活性为（8.4±1.2）%,明显低于假手术组(24.0±2.9)%与OVX+N/L组(26.5±3.1)%,差异具有显著性(P＜0.01)。3组成骨细胞与破骨细胞内bcl-2阳性表达率均较低,差异无显著性(P值均>0.05);去卵巢大鼠组成骨细胞内Fas(80.0%)高于假手术组（40.0%）和OVX+N/L组（40.0%）,而破骨细胞内Fas(20.0%)低于假手术组(70.0%)和OVX+N/L组(73.3%),后者差异有显著性(χ2=7.94,P＜0.05),OVX组成骨和破骨细胞内TGFβ1(分别为20.0%、0),均低于其他两组,前者差异有极显著意义(χ2=13.104,P＜0.01)。结论　去卵巢大鼠骨丢失主要是由于雌激素水平低下引起破骨细胞凋亡减少、成骨细胞凋亡活性增加致骨吸收功能明显增加而超过骨形成所致;TGFβ1的分泌可能需要雌激素的刺激,TGFβ1表达可能抑制成骨细胞凋亡,促进破骨细胞凋亡,Fas可能诱导破骨细胞凋亡。     

PCP大鼠肺泡巨噬细胞C/EBPε、IL-6、TNFαmRNA表达的研究

目的　研究脂多糖 (LPS)刺激PCP大鼠肺泡巨噬细胞后C/EBPε、IL - 1、IL - 6、TNFα的mRNA表达和相互调变关系及其对PCP大鼠肺泡巨噬细胞的免疫调节作用。方法　取PCP大鼠的肺泡巨噬细胞 ,加入LPS培养 ,分别于 1h、4h、8h及2 4h取贴壁细胞 ,提取总RNA ,用半定量RT -PCR检测C/EBPε、IL - 6、TNFα的mRNA表达。结果　我们发现 ,PCP大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的诱导下 ,TNFα和IL - 6的表达在 1～ 2 4h内表达均明显增强 (p <0 0 5 ) ,C/EBPε的表达呈逐渐上升趋势 ,8h后可见高表达 (p <0 0 5 ) ,C/EBPε达到高峰的时间较TNFα和IL - 6晚。 结论　PCP大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的诱导下 ,产生具有免疫活性的细胞因子 (如IL - 6、TNFα等 )明显增加 ,这些细胞因子作为生物信息正反馈回上游基因 ,进一步引起C/EBPε表达增强。     

乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨密度及骨M-CSF,IL-6mRNA的影响

目的观察乳铁蛋白(LF)对去卵巢大鼠骨密度(BMD)及骨组织巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和白细胞介素-6(IL-6)的影响及其防治骨质疏松作用可能机制。方法将6月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组,10只)与去卵巢模型组(Ovx组,60只),Ovx组再分为未治疗组(Con组)、雌激素组(E2组:0.1mg/kg·周-1)、不同剂量乳铁蛋白干预组(LF1组:0.01g/kg·周-1,LF2组:0.1g/kg·周-1,LF3组:1.0g/kg·周-1,LF4组:2.0mg/kg·周-1),每个亚组10只大鼠。治疗24周后,用微计算机断层扫描(micro-CT)检测大鼠右侧股骨、L2-4骨密度;用实时荧光定量聚合酶链反应(RealtimeRT-PCR)测量大鼠左股骨中M-CSF和IL-6mRNA的表达。结果与Con组相比,LF3和LF4组右侧股骨、L2-4骨密度明显增高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),与Con组相比,LF3和LF4组左股骨M-CSF和IL-6mRNA明显降低,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论乳铁蛋白可增加去卵巢大鼠骨量及骨密度;可能通过调节M-CSF和IL-6mRNA水平降低破骨活动、减少骨量丢失。     

UPAN改善去卵巢大鼠海马神经元存活信号转导通路中信号转导蛋白的表达

目的　通过观察去卵巢大鼠海马组织神经元存活信号转导通路中几个相关蛋白的表达情况 ,研究缺乏雌激素是否引起神经元病变 ;评估UPAN(APPN端 11肽、App63 73 )是否能改善雌激素缺乏引起的这种病变。　方法　雌性Wistar大鼠 ,随机分 3组 :假手术组 (C组 ) ,去卵巢对照组 (OVX组 ) ,UPAN治疗组 (UPAN OVX组 )。C组做假手术 ,OVX组和UPAN OVX组做双侧卵巢切除术。UPAN OVX组从去卵巢第 7周开始用UPAN治疗 6周 ,用免疫组化方法观察Akt、cAMP应答元件结合蛋白 (CREB)的表达 ;免疫印迹法检测Akt、CREB、磷酸化cAMP反应结合蛋白 (pCREB)的表达。　结果　免疫组化结果表明去卵巢大鼠海马组织Akt/PKB ,CREB表达减少 (P <0 0 5 ) ,UPAN治疗组Akt/PKB ,CREB表达比去卵巢组明显增加 (P <0 0 5 )。免疫印迹法检测结果表明去卵巢大鼠海马组织 pCREB表达减少 ,UPAN治疗组pCREB表达比去卵巢组明显增加。 结论　去卵巢大鼠因雌激素缺乏引起海马神经元存活信号转导通路障碍 ,UPAN有明显治疗作用。     

雄黄在多发性骨髓瘤治疗中的作用

目的 :研究雄黄治疗多发性骨髓瘤 (MM )的作用机制 ,并对其临床效果进行观察。方法 :采用MTT法、双抗体夹心ELISA法检测 15例MM患者应用雄黄治疗前后血清中白细胞介素 6 (IL 6 )活性及其受体 (sIL 6R)水平。结果 :MM患者血清中IL 6活性及sIL 6R水平明显高于健康对照组 (P <0 .0 1) ;应用雄黄治疗 5 0天后 ,MM患者血清中IL 6活性及sIL 6R水平无明显降低 (P >0 .0 5 ) ,Ⅲ期MM患者的IL 6活性显著高于Ⅰ、Ⅱ期 (P <0 .0 5 ) ,但sIL 6R水平两者差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。用雄黄治疗 15例患者 ,3例完全缓解 ,5例有效 ,7例无效。结论 :雄黄可能不是通过降低IL 6活性及sIL 6R水平来抑制肿瘤细胞生长的。     

雌激素对自发性高血压大鼠心肾纤维化的影响

为探讨雌激素对自发性高血压大鼠心肾纤维化的影响 ,将雌性自发性高血压大鼠随机分为假手术、去卵巢雌激素治疗组和去卵巢安慰剂组。分别测量治疗前后大鼠血压和体重 ,3个月后测左心室重和血清雌二醇水平 ,采用免疫组织化学方法及计算机图像分析仪检测转化生长因子 β1 在心脏及肾脏的表达 ,采用苦味酸天狼星红染色及计算机图像分析仪检测心肌间质胶原容积分数。结果发现 ,去卵巢雌激素治疗组血压和转化生长因子 β1 在心、肾的表达和左心室重 体重以及心肌间质胶原容积分数等明显低于去卵巢安慰剂组 (P <0 .0 5 ) ,与假手术组无明显差别 ;去卵巢安慰剂组上述指标均高于假手术组 (P <0 .0 5 )。以上提示 ,自发性高血压大鼠去卵巢后血压升高 ,雌激素替代治疗后能抑制其血压升高 ,抑制其心肾纤维化。     

去卵巢大鼠骨细胞中间隙连接蛋白43表达的研究

目的　研究去卵巢致骨质疏松大鼠骨细胞中间隙连接蛋白 43(Cx43)的表达及意义。方法　采用 1 0月龄未孕产 Wistar雌性大鼠 30只 ,随机分为去卵巢组、假手术组和尼尔雌醇治疗组。于术后 8w末测量三组大鼠全身及腰椎骨密度 (BMD) ,采用放免法测定血清雌二醇水平 ,采用SABC免疫组化法观察 Cx43在成骨细胞和破骨细胞中的表达情况。结果　术后 8w末去卵巢组全身及腰椎 BMD和血清雌二醇水平明显低于假手术组和尼尔雌醇治疗组 (P<0 .0 1 )。去卵巢组成骨细胞内 Cx43阳性表达率 (1 3.8%± 1 .1 4 % )低于假手术组 (63.6%± 2 .46% )和尼尔雌醇治疗组(63.6%± 2 .1 2 % ) (P<0 .0 1 ) ,而破骨细胞内去卵巢组 Cx43阳性表达率 (66.1 %± 1 .37% )高于假手术组 (42 .2 %± 1 .93% )和尼尔雌醇治疗组(41 .8%± 1 .81 % ) (P<0 .0 1 )。上述指标假手术组和尼尔雌醇治疗组差异无显著性。结论　去卵巢大鼠 Cx43在成骨细胞中表达下降 ,而在破骨细胞中表达增加 ,在成骨和破骨细胞中 Cx43表达的变化可能是去卵巢大鼠发生骨质疏松的机制之一。     

英卡膦酸钠对去卵巢大鼠骨质疏松的作用

目的　观察英卡膦酸钠对去卵巢 (OVX)大鼠骨质疏松症的影响。方法　将 6 1只 6月龄Wistar大鼠分为 8组 :(1)基线组 (n =8)于 6月龄时处死 ;其余大鼠行去卵巢手术或假手术 :(2 )去卵巢后 6周组 (n =8)于去卵巢后 6周处死 ;(3)假手术组 (n =8) ;(4)去卵巢后 14周组 (n =8) ;(5 )去卵巢后雌激素治疗组 (n =9) ;去卵巢后英卡膦酸钠胃肠用药组分为 (6 )低剂量组 (n =6 )、(7)中剂量组 (n =7)和 (8)高剂量组 (n =7)。治疗组自去卵巢后 6周开始共用药 8周。于手术后 14周时处死后 6组大鼠 ,分别留取右侧胫骨、股骨和血尿标本 ,进行骨组织计量学静态和动态指标的分析、股骨远端松质骨外周定量CT检查、股骨远端凹入实验和血尿骨转换指标测定。结果　雌激素和三个英卡膦酸钠治疗组的胫骨近端次级骨小梁体积较去卵巢后 14周组显著增加 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,伴有骨小梁结构改善。高剂量英卡膦酸钠组的股骨远端松质骨骨密度较去卵巢后 14周组显著增加 (P <0 .0 1) ,其松质骨的最大载荷较去卵巢后 14周组显著升高 (P <0 .0 5 )。英卡膦酸钠的以上作用呈剂量依赖性增加。结论　英卡膦酸钠能有效地治疗OVX大鼠的骨质疏松症。     

过敏性鼻炎口服液对变应性鼻炎动物模型骨髓IL-5的影响

目的观察过敏性鼻炎口服液对变应性鼻炎大鼠骨髓中白细胞介素-5(IL-5)表达的影响,以探讨该药治疗变应性鼻炎的作用机理。方法 40只大鼠随机分为过敏性鼻炎口服液实验组、扑尔敏对照组、盐水对照组、正常对照组;造模完成后第2天,前3组分别予过敏性鼻炎口服液、扑尔敏、生理盐水灌胃7d;最后处死动物,取骨干髓腔将骨髓细胞冲洗出,离心沉渣涂片。采用免疫组化方法检测骨髓中IL-5的表达。结果过敏性鼻炎口服液实验组的骨髓IL-5与扑尔敏对照组、盐水对照组相比差异均有统计学意义(P0.01),与正常对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论过敏性鼻炎口服液能降低骨髓IL-5,抑制AR的发生,这可能是过敏性鼻炎口服液治疗变应性鼻炎患者的作用机理之一。