性别差异对脓毒症大鼠心肌Toll样受体4和髓样分化蛋白-2 基因表达的影响

目的:探讨性别差异对脓毒症大鼠心肌Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白-2(MD-2)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的影响。方法:取40只清洁级Wistar大鼠,雌雄各半,分为正常雌雄性对照组(各10只),雌雄性脓毒症组(各10只)。采用腹腔注射5mg/kg内毒素(LPS)制作脓毒症大鼠模型,无菌留取大鼠心肌组织标本,利用RT-PCR法检测心肌组织TLR4、MD-2以及TNF-α基因表达,利用放免法检测大鼠血浆雌二醇含量。结果:正常雌雄性大鼠心肌组织均可表达少量TLR4、MD-2及TNF-α基因,两组差异无统计学意义(P>0.05),但是注射LPS后雌性大鼠心肌组织各项指标明显低于雄性大鼠(P<0.01)。相关分析表明,雌性及雄性脓毒症大鼠心肌组织TLR4及TNF-α基因表达与相应性别大鼠血浆中雌二醇含量呈显著负相关(P<0.05)。结论:LPS注射后大鼠心肌组织TLR4、MD-2及TNF-α基因表达存在性别差异,内源性雌激素的作用可能导致雌性脓毒症大鼠心肌组织对LPS的反应性弱于雄性。     

桂枝挥发油干预LPS致大鼠急性肺炎模型肺Toll样受体2、4和MYD88基因表达的研究

目的:研究桂枝挥发油(VORC)对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺炎模型肺Toll样受体2(111R2)、Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路髓样分化蛋白88(MyD88))mRNA的影响;方法:VORC(0.1 mL/kg、0.05 mL/kg、0.0025 mL/kg)灌胃(ig)给药5天,末次给药后1 h用LPS(1mg/kg)大鼠尾静脉注射制备急性肺炎模型,注射后6 h无菌取肺,实时荧光定量PCR方法检测,TLR2、TLR4和MYD88 mRNA的表达;结果:LPS尾静脉注射6 h,模型组TLR2、TLR4和MYD88 mRNA较空白组表达相对增高了6.41、6.50、4.89倍;VORC各剂量组TLR2、111R4和MYD88 mRNA均较模型组表达显著降低;结论:桂枝挥发油抗炎的药效学作用可能与抑制TLR2、TLR4和MYD88 mRNA表达,继而抑制其下游信号通路有关.     

β-榄香烯对HepG2和HT-29细胞体外抗癌作用的实验研究

目的探讨β-榄香烯对肝癌和结肠癌的作用,为临床上利用β-榄香烯治疗肿瘤提供理论依据。方法体外培养HepG2肝癌细胞和HT-29结肠癌细胞,用生长曲线和MTT法观察β-榄香烯对两种细胞生长的影响。结果β-榄香烯组在培养的第6d、第7d、第8d能显著抑削HT-29细胞增殖;β-榄香烯在培养的第6d能显著抑制HepO2细胞增殖;在第2d、在第3d、在第4d,与对照组相比,β-榄香烯对HT-29和HepG2细胞增殖的抑制作用显著（P〈0．05）。结论β-榄香烯能明显抑制体外培养的HT-29和HepG2细胞生长。     

β-榄香烯对HepG2和HT-29细胞体外抗癌作用的实验研究

目的 探讨β-榄香烯对肝癌和结肠癌的作用,为临床上利用β-榄香烯治疗肿瘤提供理论依据.方法 体外培养HepG2肝癌细胞和HT-29结肠癌细胞,用生长曲线和MTT法观察β-榄香烯对两种细胞生长的影响.结果 β-榄香烯组在培养的第6d,第7d、第8d能显著抑制HT-29细胞增殖;β-榄香烯在培养的第6d能显著抑制Hep02细胞增殖;在第2d,在第3d、在第4d,与对照组相比,β-榄香烯对HT-29和HepG2细胞增殖的抑制作用显著(P<0.05).结论 β-榄香烯能明显抑制体外培养的HT-29和HepG2细胞生长.     

Toll样受体4与髓样细胞触发受体1在脓毒症的诊断中研究现状

脓毒症是感染引起的全身炎症反应综合症,其发病率、死亡率都很高,目前仍是临床危重症患者死亡的主要原因之一。对脓毒症的早期诊断尤为重要,本文就Toll样受体4及髓样细胞触发受体1在脓毒症诊断中的研究做一综述。     

早产产妇外周血Toll样受体4及协同分子表达的意义

目的 探讨早产产妇外周血Toll样受体4(TLR4)及协同分子MD2、CD14 mRNA的表达水平及与亚临床绒毛膜羊膜炎的关系.方法 选择早产自然分娩组 20 例,足月妊娠自然分娩组 28 例,足月要求剖宫产 10 例.RT-PCR检测母血中TLR4、MD2、CD14 mRNA的表达.并通过同一产妇胎盘HE染色,观察TLR4、MD2、CD14与亚临床绒毛膜羊膜炎的表达变化.结果 早产自然分娩组TLR4、MD2 mRNA明显高于足月自然分娩组(P<0.05),CD14 mRNA在两组均高表达,但无统计学差异(P>0.05);早产及足月自然分娩组TLR4、MD2、CD14 mRNA表达均高于足月剖宫产组,早产自然分娩组与足月剖宫产组比较有统计学差异(P<0.05),但足月自然分娩组TLR4、MD2 mRNA与足月剖宫产组比较无统计学差异(P>0.05).妊娠合并亚临床绒毛膜羊膜炎患者TLR4、MD2、CD14 mRNA表达水平较无亚临床绒毛膜羊膜炎患者高,且存在正相关性(r分别为0.635、0.467、0.404,P<0.05).产妇外周血单个核细胞TLR4与MD2、CD14 mRNA表达两两正相关.结论 孕妇外周血表达TLR4、MD2及CD14,与孕周、分娩方式及感染情况有关,可能参与了分娩发动,尤其是早产分娩发动.     

Toll样受体2/4在人牙龈上皮细胞的表达研究

目的:探讨Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)在人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGECs)的表达情况,以及上述受体在脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激下表达水平的改变?方法:采用逆转录PCR技术检测TLR2?TLR4 在HGECs的基因表达,采用real-time PCR技术和流式细胞技术检测1 μg/ml牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)?LPS或1 μg/ml大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli) LPS刺激后,该细胞TLR2?TLR4表达水平的改变?结果:来自不同个体的HGECs均表达TLR2,TLR4 mRNA?1 μg/ml P.gingivalis LPS刺激后,TLR2基因和蛋白表达水平均明显增高(P < 0.05);1 μg/ml E.coli LPS刺激后,TLR4基因和蛋白表达水平明显增高(P < 0.05)?结论:TLR2?TLR4在HGECs存在稳定表达,并能被LPS的刺激活化,提示上述两种受体可能参与了牙周组织的炎症和免疫反应?     

IP6诱导HT-29细胞凋亡中线粒体通路的实验研究

目的 探讨bcl-2、细胞色素C(Cyt-C)及Ca2+参与的线粒体通路在肌醇六磷酸(IP6)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡过程中的作用.方法 以3.3 mmol/L的IP6作用3 d和6个月的HT-29细胞为实验组,以未经IP6作用的HT-29细胞作为对照.应用RT-PCR法测定IP6 作用不同时间细胞内bcl-2 mRNA表达的改变,免疫细胞化学法检测细胞内Cyt-C水平的变化,Fura-2法测定IP6对HT-29细胞内Ca2+表达的影响.结果 与对照组相比,IP6作用组均有效抑制bcl-2的表达,上调胞浆内Cyt-C及Ca2+水平.结论 在IP6 诱导HT-29细胞凋亡的过程中,bcl-2、Cyt-C、Ca2+ 等因素参与的线粒体凋亡通路可能起到了重要的作用.     

重组人干扰素对手足口病大鼠的治疗作用及对Toll样受体/髓样分化因子相关信号分子的影响

目的观察重组人干扰素(rh IFN)α-2b对手足口病大鼠的治疗作用及其对Toll样受体(TLR)/髓样分化因子(MyD88)相关信号分子的影响。方法取郑州儿童医院感染性疾病科分离的肠道病毒71-BJ(EV71-BJ),测定EV71-BJ毒株对7日龄无特定病原级Sprauge Dawley(SD)大鼠的半数致死量(LD50)。另取7日龄无特定病原级SD大鼠60只,随机分为对照组、模型组及rh IFNα-2b低、中、高剂量组,每组12只。模型组及rh IFNα-2b低、中、高剂量组大鼠一次性腹腔注射15倍稀释的LD50EV71-BJ毒株100μL,对照组一次性腹腔注射生理盐水100μL,根据各组大鼠的表现进行临床评分,染毒第4天临床评分3～4分者即为建模成功。取rh IFNα-2b低、中、高剂量组建模成功的大鼠,分别给予2、4、8万单位rh IFNα-2b溶入0. 2 m L生理盐水中肌肉注射,对照组、模型组大鼠肌肉注射0. 2 m L生理盐水,每日1次,连续给药3 d。末次干预后24 h脱颈处死各组大鼠,取腹主动脉血,检测各组大鼠全血T淋巴细胞亚群CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+及血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4、IL-10水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠脑组织中TLR2、My D88、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子相关因子6(TRAF-6) mRNA相对表达量; Western blot法检测各组大鼠脑组织中TLR2、My D88、NF-κB、TRAF-6蛋白相对表达量。结果各组大鼠全血CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+、血清IFN-γ、IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、My D88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量比较差异均有统计学意义(F=72.310、57.107、98.928,F=161.175、28.874、22. 637,F=108. 493、122. 121、120. 966、154. 783,F=151. 001、194. 357、89. 442、210. 210,P <0. 05)。与对照组比较,模型组及rh IFNα-2b各剂量组大鼠全血CD4~+、CD4~+/CD8~+及血清IFN-γ水平均显著降低(P <0. 05),全血CD8~+、血清IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、My D88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量均显著升高(P <0.05)。与模型组比较,rh IFNα-2b各剂量组大鼠全血CD4~+、CD4~+/CD8~+及血清IFN-γ水平均显著升高(P <0.05),全血CD8~+、血清IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、MyD88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量均显著降低(P <0. 05)。与rh IFNα-2b低剂量组比较,rh IFNα-2b中、高剂量组大鼠全血CD4~+、CD4~+/CD8~+及血清IFN-γ水平均显著升高(P <0. 05),全血CD8~+、血清IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、MyD88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量均显著降低(P <0. 05)。与rh IFNα-2b中剂量组比较,rh IFNα-2b高剂量组大鼠全血CD4~+、CD4~+/CD8~+及血清IFN-γ水平均显著升高(P <0. 05),全血CD8~+、血清IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、MyD88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量均显著降低(P <0. 05)。结论 rh IFNα-2b可有效改善手足口病大鼠的症状和免疫状态,其中高剂量rh IFNα-2b效果最佳,其作用可能与抑制TLR/MyD88信号通路中相关基因和蛋白表达有关。     

Toll样受体2、4/MyD88/NF-κB信号通路及相关分子在COPD发病机制中的作用及临床意义

目的 探讨Toll样受体2、4/MyD88/NF κB信号通路及相关分子在慢性阻塞性肺疾病（COPD）发病机制中的作用及临床意义。方法 选取2017年1月～2018年12月南充市中心医院呼吸内科治疗的112例COPD患者为研究对象,根据疾病进展分为急性加重期组（n=52）与稳定期组（n=60）,并选取同时段于该院健康体检者为对照组（n=68）。应用实时荧光定量PCR法检测3组外周血单个核细胞（PBMC)中TLR2、TLR4、MyD88、NF κB mRNA表达水平,采用ELISA法检测3组血清中IL 1β、IL 10、TNF α、CRP及sICAM 1等炎性因子表达水平。选取急性加重期患者外周血进行全血培养,分别用生理盐水（NS）、脂多糖(LPS)、LPS +TLR4Ab、肽聚糖（PNG）、PNG+TLR2Ab处理,检测PBMC中mRNA及血清炎性因子表达水平。结果 急性加重期组患者TLR2、TLR4、MyD88、NF κB mRNA水平及血清中IL-1β、IL 10、TNF α、CRP、sICAM 1等炎性因子显著高于稳定期组和对照组,稳定期组患者各mRNA水平及血清炎性因子水平高于对照组（均P＜0.05）。NS对照组的各mRNA水平及血清炎性因子水平显著低于其他4组（均P＜0.05）;单独经LPS处理后各mRNA水平及血清炎性因子显著增加,且经过LPS+TLR4Ab处理后,各mRNA水平及血清炎性因子显著降低（均P＜0.05）;单独经PNG处理后各mRNA水平及血清炎性因子显著增加,经PNG+TLR2Ab处理后各mRNA水平及血清炎性因子显著降低（均P＜0.05）。结论 COPD患者外周血单核细胞Toll样受体2、4/MyD88/NF κB信号通路处于活化状态,可促进下游炎性因子释放,参与COPD炎症过程。     

RhoC-shRNA对结肠癌细胞HT-29细胞生物学行为的影响

目的探讨RhoC-shRNA对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法构建RhoC-shRNA表达载体,以脂质体转染法将之稳定转染入HT-29结肠癌细胞株,Western blot检测转染细胞中RhoC蛋白表达的抑制情况,观察转染前后结肠癌细胞周期、凋亡和侵袭能力的变化。结果成功构建RhoC-shRNA真核表达载体,并且转染入结肠癌细胞后,细胞中RhoC蛋白表达水平明显受到抑制,并且抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,降低肿瘤细胞侵袭能力。结论下调RhoC蛋白的表达可抑制结肠癌细胞HT-29的体外增殖和侵袭能力。     

熊果酸对结肠癌细胞作用机制的初步研究

目的:探讨熊果酸对结肠癌细胞株HT-29凋亡的作用机制。方法:不同浓度的熊果酸处理HT-29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色检测熊果酸对HT-29细胞的增殖抑制效应,采用形态学、TUNEL法、流式细胞术检测细胞凋亡的发生,应用免疫组织化学法检测凋亡相关基因caspase-9,bax表达的变化。结果:熊果酸对HT-29细胞有中度增殖抑制效应,HT-29细胞出现显著的细胞凋亡征象:TUNEL显示细胞固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体。流式细胞术检测在G1期之前出现sub-G1峰,凋亡率最高为11.63%,熊果酸的作用具有浓度和时间依赖性。细胞凋亡过程中,凋亡相关基因caspase-9和bax的表达逐渐增强。结论:熊果酸通过促进caspase-9的活化、上调bax的表达,对HT-29细胞具有凋亡的作用。     

HT-29人结肠癌细胞缺氧对鞘氨醇激酶-1表达的影响

目的：研究体外缺氧对HT-29人结肠癌细胞鞘氨醇激酶-1（SK-1）表达及细胞迁移的影响。方法：模拟体外缺氧环境,应用RT-PCR及Western blot检测缺氧对HT-29细胞SK-1表达的影响,以及观察细胞迁移能力的情况。结果：缺氧状态下HT-29细胞SK-1 mRNA及蛋白表达增强,细胞迁移能力增强;且U0126具有抑制SK-1表达增强的作用。结论：缺氧状态下HT-29细胞迁移能力和SK-1基因表达存在一定关系。     

Survivin siRNA提高人结肠癌HT-29细胞对顺铂化疗敏感性的实验研究

目的 以siRNA抑制结肠癌HT-29细胞内survivin的表达,探讨HT-29细胞对顺铂(cisplatin,cDDP)的增敏效果.方法 转染siRNA于HT-29,检测survivin siRNA处理对survivin、Bax、Bcl-2蛋白表达及胱天蛋白酶-3(caspase-3)活性的影响.cDDP处理后,...     

CAPE对人结肠癌HT-29细胞生长抑制和凋亡的作用

目的 探讨咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的作用.方法 用不同浓度CAPE处理HT-29,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测CAPE对HT一29细胞的增殖抑制效应;采用AO/EB染色和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生.结果 CAPE对HT-29细胞的生长具有明显抑制作用,呈剂量和时间依赖性.AO/EB染色发现CAPE作用后凋亡细胞数量增加.流式细胞仪检测细胞凋亡率显示,2.5、5.0、7.5、10 μg,/mL处理HT-29细胞24 h后,细胞凋亡率上升,呈剂量依赖性.结论 CAPE对人结肠癌HT-29细胞具有明显的生长抑制和诱导凋亡作用.     

白花蛇舌草提取物对结肠癌HT-29细胞bcl-2和bax表达的影响

目的 观察白花蛇舌草提取物在体外对结肠癌HT-29细胞株增殖和bcl-2和bax表达的影响.方法 采用人结肠癌细胞HT-29细胞常规体外培养,随机设空白组和不同浓度白花蛇舌草提取物组,干预24 h,倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响;RT-PCR检测药物作用后的bax和bcl-2的表达.结果 白花蛇舌草提取物干预后,HT-29的细胞密度明显减少,细胞变小;抑制HT-29细胞增殖,并呈现出量-效作用;bax的表达随药物剂量增加而增加,bcl-2的表达随药物剂量增加而减少.结论 白花蛇舌草提取物能显著抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖,通过上调bax和下调bcl-2的表达来诱导细胞凋亡,起到抗HT-29细胞的作用.     

二烯丙基二硫通过细胞外信号调节激酶途径调节HepG2细胞Survivin表达

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法W estern b lot法检测survivin、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）和p-ERK1/2的表达;AO/EB染色观察细胞形态学变化。结果ERK1/2抑制剂PD98059抑制DADS诱导survivin表达的作用。PD98059与DADS联合应用可以促进HepG2细胞凋亡。结论DADS诱导HepG2细胞survivin的表达与ERK1/2信号通路有关。     

脱氧胆酸对结肠癌细胞株HT29环氧合酶-2转录后调控作用的影响

目的研究脱氧胆酸对结肠癌细胞株HT29中环氧合酶2（COX-2）转录后调控的影响。方法通过荧光定量PCR,荧光素酶报道基因技术检测脱氧胆酸对COX-2转录后调控的影响。结果脱氧胆酸可促进COX-2mRNA半衰期的延长,上调含COX-23’UTR的荧光素酶报道基因的表达。结论脱氧胆酸上调结肠癌细胞株HT29中COX-2转录后调控,其主要作用位点在COX-23’UTR上。     

TPL与5-FU联合作用对人结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究雷公藤内酯醇(TPL)与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响。方法:常规培养HT-29细胞,MTT比色法检测不同浓度TPL与5-FU单独或联合应用对HT-29细胞的增殖抑制率,透射电镜在亚细胞结构形态上证实凋亡细胞,流式细胞学定量分析凋亡细胞比例,免疫细胞化学分析突变型P53、bcl-2蛋白表达的变化。结果:①TPL与5-FU单独应用均能抑制HT-29细胞的增殖,且在一定范围内存在浓度依赖性。两药联合作用最高增殖抑制率最高达到(94.92±2.76)%,48 h凋亡率达(41.71±1.38)%。②TPL与5-FU在低剂量联合应用时对HT-29细胞增殖抑制作用有协同效应(CI<1),其机制可能为促进细胞凋亡。③与对照组比较,TPL与5-FU单独应用及联合应用后HT-29细胞突变型P53蛋白表达率均有显著降低,而bcl-2蛋白表达没有明显变化。结论:TPL与5-FU在小剂量联合应用时为协同效应,可能通过下调突变型P53蛋白诱导凋亡从而抑制细胞生长。本结果对于结肠癌的治疗具有一定的临床意义。     

塞来昔布对人结肠癌细胞系HT-29增殖的抑制及其对miRNA表达谱的影响

目的研究塞来昔布对人结肠癌细胞系HT-29增殖的抑制作用及其对HT-29细胞微小核糖核酸（mi-RNA）表达谱的影响。方法采用CCK-8比色还原法观察塞来昔布对HT-29细胞增殖的抑制作用;miRNA芯片技术检测塞来昔布作用前后HT-29细胞miRNA的表达变化,实时定量RT-PCR验证其结果。结果塞来昔布对HT-29细胞增殖有显著的抑制作用,且呈剂量时间效应关系,其半数抑制浓度为（237.73±1.65）μmol/L;塞来昔布作用于HT-29细胞48 h后,获得28个与塞来昔布干预相关的miRNAs（P〈0.01）,其中8个下调,20个上调。结论塞来昔布对miRNA表达谱的影响可能是其抑制HT-29细胞株生长的作用途径之一。