不同细胞因子活化的NK细胞形态及功能的研究

目的 研究白细胞介素-2(IL-2),IL-2及白细胞介素-12(IL-12),IL-2及白细胞介素-18(IL-18),IL-2、IL-12及IL-18活化的自然杀伤细胞(NK细胞)的形态及对黑色素瘤细胞的杀伤率.方法 提取NK细胞,IL-2 6 000 IU/mL,IL-2 6 000 IU/mL+IL-12 10 ng/mL,IL-2 6 000 IU/mL+IL-18 100 ng/mL,IL-2 6 000 IU/mL+IL-12 10 ng/mL+IL-18 100 ng/mL活化,3 d后流式细胞仪检测其前向角散射(FSC)值,酶联免疫吸附法(ELISA)检测干扰素γ(IFNγ)含量,以B16黑色素瘤细胞为靶细胞检测NK细胞对肿瘤细胞杀伤率.结果 IL-2+IL-12、IL-2+IL-18、IL-2+IL-12+IL-18活化的NK细胞FSC值明显比仅用IL-2活化的NK细胞大(P<0.05),并且分泌的IFN量高(P<0.05),但对B16黑色素瘤细胞杀伤率低.结论 同时应用IL-12及IL-18与IL-2活化的NK细胞能够分泌较高的IFNγ,但是对肿瘤细胞的杀伤作用较低.     

联合应用NK细胞及CTL对黑色素瘤B16细胞的影响

目的 探讨联合应用自然杀伤(NK)细胞及细胞毒T细胞(CTL)对黑色素瘤B16细胞的作用.方法 提取NK细胞及CTL,分别用白细胞介素-2(IL-2)(6 000、600 IU/L)及植物血凝素(8 μg/mL)活化,流式细胞仪检测细胞表面受体,将NK细胞及CTL互为靶细胞及效应细胞进行细胞毒性实验;以黑色素瘤B16细胞为靶细胞检测CTL的杀伤率.结果 NK细胞表面受体NK1.1+的百分比在87%以上,NKp46+在90%以上;CTL表面受体CD3+的百分比在99%以上,CD8+在98%以上.NK细胞与CTL相互无细胞毒性,联合应用NK细胞与CTL明显增加对黑色素瘤B16细胞的杀伤作用.结论     

抗瘤Ⅰ号对小鼠体内细胞因子产生及NK细胞活性的影响

抗瘤Ⅰ号（ＡＴ－Ⅰ）是临床抗肿瘤及肿瘤辅助治疗的有效复方中药制剂。实验检测了ＡＴ－Ⅰ对正常及荷瘤小鼠体内ＩＬ－２、ＩＬ－６产生及ＮＫ细胞活性的影响，结果显示ＡＴ－Ⅰ对正常小鼠ＩＬ－２、ＩＬ－６及荷瘤小鼠ＩＬ－２产生均有促进作用；同时还能提高正常及荷瘤小鼠ＮＫ细胞的杀伤活性，提示ＡＴ－Ⅰ是具有生物反应调节作用的中药制剂。     

活化脐血T细胞和NK细胞的抗原及细胞因子表达研究

目的：比较γＩＬ－２及抗ＣＤ３ｍｃＡｂ＋γＩＬ－２对脐血单个核细胞（ＭＮＣ）的免疫表型及细胞因子的影响。方法：采用间接玫瑰花结法实验测定２３例脐血ＭＮＣ表面的分化抗原,ＥＬＩＳＡ双抗夹心法测定肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）、白介素－６（ＩＬ－６）、白介素－８（ＩＬ－８）。结果：γＩＬ－２及抗ＣＤ３ｍｃＡｂ＋γＩＬ－２激活的脐血ＭＮＣ其分化抗原发生明显变化。１、两组与未活化相比：ＣＤ３＾＋、ＣＤ８＾     

乳腺癌患者肿瘤细胞HLA表达及机体免疫状态的研究

目的 :探讨乳腺癌患者免疫状态和癌细胞组织相容性抗原 (HLA)Ⅰ类分子、Ⅱ类分子表达在肿瘤发生、发展和转移中的变化。方法 :于术前检测乳腺癌和乳腺纤维腺瘤患者外周血T淋巴细胞亚群比例 ,并应用流式细胞术检测癌组织和纤维腺瘤组织的HLAⅠ类分子、HLAⅡ类分子的表达情况。结果 :HLAⅠ类分子、HLAⅡ类分子在乳腺癌组织的表达均显著低于乳腺纤维腺瘤组织 ;HLAⅠ类分子在淋巴结转移组表达显著低于未转移组 ,更显著低于乳腺纤维腺瘤组 ;HLAⅠ类分子表达乳腺癌Ⅰ期显著高于Ⅱ期 ,Ⅱ期显著高于Ⅲ期 ;HLAⅡ类分子表达由I期到Ⅲ期呈降低趋势但在各期间差别不显著。乳腺癌患者外周血CD4 CD8 比值低于正常对照组 ,差异显著 ;CD4 CD8 I期显著高于Ⅲ期 ;但与Ⅱ期无显著差异 ;乳腺癌患者外周血CD3 、CD4 、CD8 淋巴细胞所占比例在各组、各期间均无显著差异。结论 :HLA分子的低表达与乳腺癌的发展、转移、预后有关 ;CD4 CD8 比值、HLAⅡ类分子可作为判断肿瘤预后的参考指标 ;HLAⅠ类分子表达降低程度和肿瘤恶化程度相一致 ,可作为反映肿瘤转移的参考指标。     

人卵巢癌细胞特异CTL系的免疫学特性初步研究

目的 探讨人卵巢癌细胞体外刺激、诱导的肿瘤特异细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶细胞的杀伤活性。方法 应用建株的人卵巢癌细胞（OVA－319）,在体外定期刺激、诱导肿瘤患者外周血淋巴细胞,经微量淋巴细胞毒试验和流式细胞术分别测定扩增的淋巴细胞组织相容性白细胞抗原（HLA）Ⅰ类分子表型和膜表面免疫标志物,并通过4－甲基偶氮唑盐（MTT）法分析其对肿瘤细胞的杀伤活性。结果 经卵巢癌细胞刺激、诱导3周后扩增的淋巴细胞主要为T细胞抗原受体（TCR）－α、β及CD8阳性的CTL,具有明显特异性杀伤肿瘤细胞的作用,并发现经OVA－319细胞刺激、诱导后不同个体的卵巢癌患者CTL的杀伤活性与效靶细胞的HLA－A、B位点相同数成正比。结论 肿瘤细胞体外激活的CTL具有特异杀伤靶细胞作用,提示CTL特异杀伤作用与刺激细胞、靶细胞及本身CTL表型的HLA－A、B位点密切联系。     

IL-12与IL-18在体外培养系统中诱导肿瘤特异性CTL杀伤活性的比较

目的：分别应用重组人白细胞介素12（rhIL-12）及重组人白细胞介素18（rhIL-18）在体外培养系统(CCs)中诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),比较IL-18与IL-12诱导的肿瘤特异性CTL的杀伤活性，探索IL-18的抗肿瘤作用机制。方法：采用Stem Sep^TM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及DCs细胞，流式细胞仪分析细胞表型，¹²⁵I-UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性。结果：在CCs中、在肿瘤抗原存在的条件下，rhIL-18和rhIL-12均能诱导产生针对U251、MCF7特异性CTL，其作用能力与rhIL-18和rhIL-12的浓度呈剂量依赖关系，但rhIL-18诱导肿瘤特异性CTL的作用明显高于rhIL-12（P<0.01）；rhIL-18和rhIL-12在诱导肿瘤特异性CTL过程中具有协同作用，两者联合应用诱导肿瘤特异性CTL的能力明显高于单独应用rhIL-18和rhIL-12（P<0.01）。结论：rhIL-18和rhIL-12在CCs中均能够诱导并促进CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应，rhIL-18诱导的肿瘤特异性CTL的能力明显高于rhIL-12，两者在诱导肿瘤特异性CTL过程中具有协同作用。     

Comparison of the quantities and subset distributions of natural killer cells among different races

Background Natural killer （NK） cells play critical roles in host immune defense, while the quantities and subset distributions may vary among different races. To address the difference, we compared these variables among Chinese Han, the Caucasians and the Blacks. The study may provide critical background information for both basic research and clinical investigation. Methods Blood samples collected from populations of different races were tested within 12 hours after collection and subsets of NK cells were characterized using flow cytometry. Results The absolute NK count in the Chinese Han was significantly higher than that in the Caucasian. The Han and Caucasian groups showed higher percentages of cytotoxic subset compared to that of the Black group. The percentage of cytokine-producing subset of Chinese Han group was lower than that of Caucasian and Black groups. Black group had a higher percentage of function-unknown NK subset than that of the Han and Caucasian groups. Conclusion Our data indicated that NK cell count and the distribution of different subsets varied among different races, which should be taken into consideration in related investigations.     

NKT细胞与肿瘤免疫

1　概述　　自然杀伤Ｔ细胞 (ＮＫＴ细胞 )是由Ｂｕｄｄ等在 1987年首先报道的 ,以后有大量的研究表明这类细胞是不同于传统Ｔ细胞的新一类Ｔ细胞 ,在发育、表型及免疫功能等方面有其自身的特殊性。　　ＮＫＴ细胞具有广泛的特性区别于传统的Ｔ细胞和ＮＫ细胞。典型的ＮＫＴ细胞在小鼠中定义为ＮＫ1.1+ αβＴＣＲ+ 细胞 ,它们受ＣＤ1ｄ限制而不依赖于ＭＨＣ ,具有高度偏向的ＴＣＲ库 ,其α链为单一恒定的链 ,由Ｖα14和Ｊα2 81基因片段编码 ,与之相连的 β链常为Ｖβ8、Ｖβ2或Ｖβ7;而人类为Ｖα2 4与ＪαＱ基因编码 ,与之相连的 β链为…     

自然杀伤T细胞在溃疡性结肠炎不同证型患者的表达与意义

目的:探索自然杀伤T细胞(NKT)在溃疡性结肠炎(UC)不同证型患者的表达与意义.方法:收集行结肠镜检查的湿热型及脾肾阳虚型UC患者各25例,选取20例行肠镜检查的健康体检者作为对照组.收集以上三组观察对象的外周血及结肠黏膜活检组织,采用流式细胞术检测NKT及其细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的百分含量.结果:湿热组外周血NKT为(1.87±0.76)％,脾肾阳虚组为(2.79±1.35)％,对照组为(4.48±2.26)％.以上三组任意两组均有统计学差异(F=5.632,P=0.000).外周血IFN-γ及TNF-α与NKT类似,均表现为湿热组＜脾肾阳虚组＜对照组,且任意两组间有统计学差异(P=0.003、0.015).与外周血比较,三组观察对象结肠黏膜组织内的NKT显著降低(P＜0.05);仅湿热组外周血IFN-γ显著高于结肠黏膜,而仅脾肾阳虚组外周血TNF-α高于对照组(P＜0.05).结论:NKT及其细胞因子含量降低在UC不同证型的鉴别起到重要作用.     

CD3AK细胞冻融提取液的抗肿瘤活性研究

为研究ＣＤ３ＡＫ细胞冻融提取液的抗肿瘤作用,作者采集正常人外周血分离单个核细胞（ＰＢＭＣ）,先用抗ＣＤ３的单克隆抗体（ＣＤ３ＭｃＡｂ）的ｒＩＬ－２诱导和激活,使之成为ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ）,再制备ＣＤ３ＡＫ的冻融提取液,然后进行体内,外抗肿瘤实验。结果;低剂量的ＣＤ３ＭｃＡｂ和ｒＩＬ－２能明显诱导ＰＢＭＣ的活化和增殖;激活后的ＣＤ３ＡＫ细胞冻融提取液可抑制小鼠肝癌实体瘤细胞Ｈ２     

CIK细胞的制作及对不同肿瘤细胞株体外抗肿瘤作用的研究

目的:制备细胞因子激活杀伤(CIK)细胞并观察其生物学特性及对不同肿瘤细胞株的杀伤作用.方法:外周血单个核细胞用无血清培养基经干扰素γ(IFN-γ),CD3McAb,白介素2(IL-2),白介素1α(IL-1α)诱导,制作CIK细胞,以淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)作为对照,流式细胞仪检测CIK细胞的免疫表型,MTT法检测其对不同肿瘤细胞株的杀瘤活性.结果:CIK细胞与LAK细胞相比增殖速度快、最终增殖倍数高.CIK细胞主要由CD3和CD56双阳性细胞构成.CIK细胞对多种肿瘤细胞具有较强的杀伤活性.结论:CIK细胞过继免疫治疗是一种非常有前景的抗肿瘤治疗方法.     

抗原诱导的人CTL细胞活性的实验研究

目的：探讨观察所提抗原及其对人脐血细胞（CTL）诱导的特异性抗肿瘤作用。方法：用密度梯度离心法提取人肿瘤抗原,并测定诱导的人脐血细胞CTL活性。结果：小肠纤维肉瘤Ag诱导4d后,不同效价实验组CTL活性均有升高,效价为1：100的抗原诱导的CTL活性最强。乳腺癌抗原诱导8d后,效价1：100实验组CTL活性显著提高。结论：所提两种抗原效果良好,可明显诱导脐血CTL活性,以效价1：100实验组最佳。     

浸润巨噬细胞、自然杀伤细胞与甲状腺自身免疫

作者用 APAAP 法对37例甲状腺标本作免疫组化研究,结果发现在桥本甲状腺炎(HT)与非毒性甲状腺肿(NTG)间浸润单个核细胞中 Ki-M8~+细胞比例差异显著(p<0.05),而 NKH-1~+细胞比例差异不显著.在 HT 与 Graves 病(GD)间以及 GD 与 NTG 间,无论是 Ki-M8~+细胞抑或 NKH-1~+细胞比例差异均不显著.Ki-M8~+细胞浸润程度与滤泡细胞 HLA-DR 抗原表达成正相关.Ki-M8~+及 NKH-1~+细胞多呈散在浸润,在有破坏的 HT 甲状腺滤泡中常见 NKH-1~+细胞,作者认为是自然杀伤细胞攻击甲状腺滤泡的证据之一.     

小鼠脾脏NK细胞的辐射效应

用~(125)I—UdR释放法检测了不同剂量(0. 025～18Gy)X线全身照射后24h小鼠脾脏NK细胞活性。发现高剂量辐射(4～18Gy)时,NK细胞活性降低,低剂量辐射(0. 025～0. 5Gy)时,NK细胞活性增高。根据全脾细胞数量随照射剂量增加发生的急剧变化,进一步验证了NK细胞具有相对辐射抗性。基于本实验结果,提出了低剂量辐射对NK细胞活性可能具有辐射刺激作用。     

Role of natural killer T cells in Graves’ disease

Objective To explore the role of natural killer T (NK T) cells in the pathogenesis of Graves’ disease.Methods NK T cell deficient mice and wild BALB/c mice were immunized with cells expressing TSH receptor once every two weeks 6 times. Two weeks after the final immunization, the mice were killed and serum thyroxine levels, anti-TSH receptor antibodies and thyroid pathological changes were examined.Results The mean levels of TT 4 and TRAb in the immunized NK T cell deficient group were slightly elevated but significantly different from those of the non-immunized control group, while comparable to those in the immunized wild group. There were no significant changes of the activity levels of TSAb or TSBAb in the immunized NK T cell deficient mice compared to those in immunized wild control mice. Thyroids from immunized NK T cell deficient mice showed mild hypertrophy of some follicles as compared with non-immunized control mice. This change was comparable to immunized wild control mice.Conclusion NK T cells may not be involved in the pathogenesis of Graves’ disease.