纯化抗原和粗抗原诊断包虫病的效果比较

目的 比较纯化细粒棘球蚴囊液抗原和囊液粗抗原诊断包虫病的效果。方法 用Burstein法纯化抗原，与粗抗原平行同步检测包虫病病人、健康人及其它寄生虫病病人血清，以标化阳性预告值（SPPV），标化阴性预告值（SNPV），标准化准确度（SAc)等计算综合积分指数（SII）。结果 两种抗原检测包虫病病人与健康人，其SII值：纯化抗原为96．0％，粗抗原为95．5％。包虫病与其他寄生虫病，其SII值：纯化抗原为94．9％，粗抗原为92．8％。结论 表明Burstein法纯化抗原在诊断包虫病的质和量上均优于囊液粗抗原。     

细粒棘球蚴原头节18 kU纯化抗原ELISA的建立及其对两型包虫病鉴别诊断的意义

目的用细粒棘球蚴原头节18ku纯化抗原建立ELISA诊断方法,用于两型包虫病的鉴别诊断.方法用18ku纯化抗原ELISA方法对44例泡型包虫病(AE)、70例囊型包虫病(CE)、29例囊虫病和30例健康人血清中特异性抗体进行检测,同时用羊包囊液抗原(Bu)常规ELISA法检测上述血清做比较.结果18ku纯化抗原检测不同血清的阳性率为AE90.91%、CE11.43%、囊虫病和健康人血清均为阴性;Bu抗原分别为AE97.73%、CE88.57%、囊虫病51.72%和健康人10.0%.18ku-ELISA对AE血清诊断敏感性为90.91%、特异性93.80%、阳性预示值为83.33%、阴性预示值96.80%.结论两型包虫病患者体内18ku抗体水平存在明显差异,纯化抗原18ku-ELISA可用于两型包虫病的鉴别诊断,较免疫印渍法简便快速.     

使用不同抗原的间接血凝试验在包虫病诊断中应用的评价

本文报告了使用不同抗原的包虫病间接血凝试验方法的实验结果。采用高浓度戊二醛化和1/20000鞣酸处理的绵羊红细胞,用绵羊肝包囊液粗抗原和部分纯化抗原致敏。用包虫病人血清进行方阵滴定,包囊液粗抗原,亲和层析抗原、Oriol氏法纯化抗原和Burstein氏法纯化抗原的最适致敏浓度分别为250、25、25和6.25μg/ml。血清终点稀释度的倒数皆为1024。用包囊液粗抗原对1295名健康人血清做间接血凝试验(IHA)结果,抗体滴度≥64者仅6例(0.46％)。95例牛肉绦虫病人血清的阳性率为1.05％(1/95)。这种致敏红细胞的冻干制剂,在室温下存放18个月后,仍保持稳定。囊液粗抗原、亲和层析抗原、Oriol氏法纯化抗原和Burstein氏法纯化抗原致敏红细胞,对47例包虫病人血清做IHA结果阳性率各为91.49％、44.68％、76.59％和85.12％,阳性血清抗体滴度的几何均值分别为389.29±2.55、247.69±4.20、271.21±2.45和343.65±2.43。29份囊虫病人血清IHA的结果为囊液粗抗原致敏红细胞的阳性率为27.5％,阳性血清的几何均值为128。其他三种抗原致敏的红细胞均为阳性。说明三种纯化抗原致敏红细胞与囊虫病人血清不发生交叉反应。根据本项实验结果建议将Burstein氏法纯化抗原致敏绵羊红细胞的间接血凝试验做为常规方法。     

细粒棘球蚴囊液抗原纯化方法的比较评价

对于绵羊肝脏细粒棘球蚴囊液用常规粗制法,通过抗绵羊全血清抗体免疫吸附柱的亲和层析法,Oriol氏纯化法,Burstein氏纯化法,以及将纯化抗原再经酚提取法制备的六种抗原,以SDS-PAGE,免疫电泳,ELISA,IHA等方法进行了抗原得率、纯度、组份、免疫活性和特异性等方面的比较。结果表明:亲和层析抗原得率最高(l6.25％～22.64％),Oriol氏法纯化抗原最低(3.35％)。与囊液粗抗原相比,纯化抗原中Burstein抗原组份最多。经酚提取的纯化抗原组份最少。各种抗原组份数目显然相差明显,但在免疫电泳中均出现弧5沉淀线。酚提取法不能达到将抗原5和抗原B分离的目的。在ELISA和IHA中,Burstein法纯化抗原的活性最高。作者分析了亲和层析抗原活性低于Burstein和Oriol两种抗原的原因可能是亲和层析抗原缺少68kDa和36.5kDa两种宿主组份。因而认为这两个组份可能同时具有寄生虫抗原的性质。在ELISA试验中,各种纯化抗原均与囊虫病人血清产生部分交叉反应,但比粗抗原低。在IHA试验中,纯化抗原均不与囊虫病人血清产生交叉反应。作者推荐由于Burstein法纯化抗原得率高,提纯程序较简单,抗原活性高而且在IHA中没有与囊虫病人血清的交叉反应,因而可作为常规诊断抗原使用。     

5种抗原检测囊型包虫病血清学评价

目的 评价细粒棘球蚴纯化囊液粗抗原、天然抗原B（nAgB）及其3个重组亚基检测囊型包虫病的效能。 方法 从新疆源细粒棘球蚴原头节中提取总RNA,通过RT-PCR获得编码AgB8/1、AgB8/2和AgB8/3基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,IPTG诱导表达分别得到重组蛋白rAgB8/1、rAgB8/2 、rAgB8/3;羊细粒棘球蚴囊液经透析沉淀获得纯化囊液粗抗原（HCF）、此纯化囊液粗抗原经煮沸离心弃沉淀得到天然抗原B。用制备的5种抗原分别作为包被抗原,应用ELISA法检测囊型包虫病人及其它寄生虫病人和健康人血样中抗体。结果 HCF、nAgB、rAgB8/1、rAgB8/2和rAgB8/3应用于ELISA法检测囊型包虫病人血清的敏感性依次为90.8%（79/87）, 87.4%（76/87）, 67.8%（59/87）, 78.2%（68/87） 和 59.8%（52/87）;特异度依次为96.0%, 96.0%, 96.0%, 98.0% 和 97.0%。纯化HCF、nAgB、rAgB8/1、rAgB8/2和rAgB8/3的诊断效能分别为93.5%, 91.9%, 82.8%, 88.7% 和 79.6%。纯化HCF和nAgB检测的敏感度高于 rAgB8/1、rAgB8/2和rAgB8/3（P<0.05）;rAgB8/2检测的敏感度高于rAgB8/1、和rAgB8/3（P<0.05）;5种抗原检测的特异度之间均无统计学差异（P>0.05）。结论 天然抗原应用ELISA法检测囊型包虫病的效能总体优于重组抗原。     

细粒棘球蚴原头节18ku纯化抗原ELISA的建立及其对两型包虫病鉴别诊断的意义

目的 用细粒棘球蚴原头节18ku纯化抗原建立ELISA诊断方法,用于两型包虫病的鉴别诊断。方法 用18ku纯化抗原ELISA方法对44例泡型包虫病（AE）、70例囊型包虫病（CE）、29例囊虫病和30例健康人血清中特异性抗体进行检测,同时用羊包囊液抗原（Bu)常规ELISA法检测上述血清做比较。结果 18ku纯化抗原检测不同血清的阳性率为：AE90．91％、CE111．43％、囊虫病和健康人血清均为阴性;Bu抗原分别为：AE97．73％、CE88．57％、囊虫病51．72％和健康人10．0％。18ku-ELISA对AE血清诊断敏感性为90．91％、特异性93．80％、阳性预示值为83．33％、阴性预示值96．80％。结论 两型包虫病患者体内18ku抗体水平存在明显差异,纯化抗原18ku-ELISA可用于两型包虫病的鉴别诊断、较免疫印渍法简便快速。     

猪囊虫体表抗原用于 ELISA 诊断囊虫病的研究

应用猪囊尾蚴体表抗原对66例临床确诊的囊虫病人用 ELISA 进行检测,同时以囊液粗抗原作比较观察。阳性率分别为95.5%和68.2%,两者差异非常显著(P<0.005)。两种抗原对同批血清的反应强度也呈现明显差异(P<0.05)。用囊虫体表抗原和囊液粗抗原同时检测50名健康人血清,假阳性率分别为2%与12%;两种抗原与10例包虫病人血清分别有8例和4例出现交叉反应。     

细粒棘球蚴囊液抗原的研究 Ⅰ.抗原的纯化及其免疫诊断价值

依次用硫酸铵分段盐析、超滤、凝胶过滤及等电聚焦电泳方法,从棘球蚴囊液中分离出一组抗原,用PPA—ELIsA法对包虫病患者进行检测,阳性率为81.1%,对其它寄生虫病患者、非寄生虫病患者、健康者检测,结果均为阴性。表明该组抗原有较高的特异性,而灵敏度比粗抗原(91.9%)仅略有降低。     

用间接酶标测定法评价不同猪囊尾蚴抗原在人囊尾蚴病免疫诊断中的价值

用硫酸铵分段沉淀法将猪囊尾蚴及其囊液的蛋白质分别分离为8种抗原,用间接酶标法检测猪囊尾蚴病病人、其他寄生虫病人及正常人血清中的相应抗体。结果表明,在8种抗原制品中,囊液部分提纯抗原P_1诊断囊尾蚴病的阳性率最高。囊尾蚴粗抗原的部分提纯成份P_(25-55)的阳性率次之。 P_1和囊液粗抗原对包虫病病人血清存在严重的交叉反应,而P_(25-55)交叉反应较低。P_1与肺吸虫病病人血清有交叉反应,但P_(25-55)与肺吸虫病人血清无交叉反应。P_25-55的来源比P_1丰富,是此病免疫诊断的实用抗原。     

采用分子筛层析法分离纯化细粒棘球蚴囊液粗抗原

目的分离纯化细粒棘球蚴囊液抗原,去除其中的非特异性反应蛋白,探索优化囊液抗原制备方法。方法采用超滤法浓缩羊肝细粒棘球蚴囊液制备成粗抗原,并采用免疫印迹实验对囊液抗原进行分析,发现非特异性反应的主要蛋白条带。随后采用Superdex凝胶柱通过分子筛层析法对囊液抗原进行纯化。用44份细粒棘球蚴病患者、17份健康人和10份囊尾蚴患者血清进行酶联免疫实验,评估纯化后囊液抗原的检测能力。结果免疫印迹实验发现,非特异性反应的主要条带的相对分子质量(M_r)约为55 000,纯化后去除了该非特异性反应蛋白。纯化后的囊液抗原ELISA检测灵敏度为93.2%(41/44),特异性为94.1%(16/17),约登指数为0.87,与囊尾蚴病交叉反应性为30%(3/10)。未纯化前的灵敏度为90.9%(40/44),特异性为88.2%(15/17),约登指数0.79,与囊尾蚴病交叉反应性为60%(6/10)。纯化前后ELISA检测的灵敏度存在显著性差异。结论本研究采用分子筛层析法对羊源细粒棘球蚴的囊液抗原进行纯化,去除了引起非特异性反应的主要蛋白(M_r 55 000),为后续进行囊液抗原标准化、提高检测能力提供了依据。     

应用多糖抗原酶联免疫吸附试验诊断包虫病的研究

本文应用包虫囊液多糖抗原对45例包虫病患者血清、77例其它寄生虫病患者血清和106例正常人血清进行ELISA测定,并与囊液热稳定抗原和粗抗原比较。其阳性率多糖抗原为93.33％,热稳定抗原为91.11％,粗抗原为95.55％。正常人血清的假阳性率分别为4.70％、3.77％和7.54％。结果显示3种抗原的敏感性无显著差异,而多糖抗原和热稳定抗原的非特异反应(假阳性率)则有所降低,尤以囊虫病更为明显。     

单克隆抗体Dot-ABC-ELISA检测包虫病人循环抗原

作者用活化生物素标记抗细粒棘球蚴抗原单克隆抗体（ＭｃＡｂ）１Ｄ８，以聚氯乙烯（ＰＶＣ）白色薄膜凹孔板为载体，建立了ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ检测包虫病人循环抗原的方法。测定人源包虫囊液抗原的灵敏度为６ｎｇ／３μｌ样品．９２例确诊包虫病人血清循环抗原检出率为７６．１％（７０／９２），在抗体阳性者中循环抗原检出率为８１．６％（６２／７６），抗体阴性者中检出率为５０％（８／１６）。１００份正常人和１２２份羹虫病等其它寄生虫病人血清，仅１份囊虫病人血清出现交叉反应．测定循环抗原对包虫病人，尤其是血清抗体阴性者的免疫诊断有重要价值．本法简便、快速，适于推广．     

Comparison of enzyme-linked immunosorbent assay and indirect immunofluorescence assay in the diagnosis of human strongyloidiasis.

BACKGROUND: An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFA) were evaluated for serological diagnosis of human strongyloidiasis. METHODS: Serum specimens obtained from 46 individuals infected with Strongyloides stercoralis, 37 healthy persons and 381 persons with other parasitic infections were tested using an IgG-ELISA that used crude antigen of S. stercoralis filariform larvae and an IFA. Test sera were pre-incubated with antigens from Ascaris, Toxocara and hydatid protoscolices to remove non-specific antibodies. RESULTS: The sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value for ELISA were 93.5%, 96.1%, 72.9% and 99.2%, respectively, and those for IFA were 87%, 90.1%, 49.4% and 98.4%, respectively. Both assays showed false positivity in hydatidosis, ascariasis and toxocariasis; however, this was less common with ELISA. CONCLUSION: ELISA method using filariform larval antigen may be a sensitive and specific test for human strongyloidiasis, and may be preferable to IFA.     

单克隆抗体夹心ABC-ELISA检测包虫病人循环抗原

应用生物素标记单克隆抗体进行夹心ABC-ELISA检测包虫病人血清循环抗原(HcAg),共检测包虫病人血清103份,62价呈阳性(60.19％);检测囊虫病人血清22份,其它寄生虫病血清54份,正常人血清101份,均未出现假阳性反应。常规ELISA血清抗体阴性的10例包虫病人HcAg 5例呈阳性。HcAg的检测对血清抗体阴性的包虫病人具有辅助诊断意义。     

华支睾吸虫成虫14～33 ku抗原诊断价值的研究

目的探讨纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原在华支睾吸虫病免疫诊断中的应用价值。方法使用SDS-PAGE和电洗提法,从可溶性华支睾吸虫成虫抗原中分离纯化14~33 ku抗原,用此抗原经ELISA方法检测华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、日本血吸虫病、姜片虫病患者血清及健康人血清特异性IgG抗体,并与粗制可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原ELISA结果相比较。结果检测63例华支睾吸虫病患者血清,纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原ELISA阳性率为76.2%,可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原ELISA阳性率均为100%;检测25例卫氏并殖吸虫病、85例日本血吸虫病、27例姜片虫病患者血清,14~33 ku抗原的ELISA交叉反应阳性率分别为8.0%、3.5%、0,而可溶性成虫抗原分别为80.0%、62.4%、14.8%,可溶性成虫脱脂抗原分别为64.0%、55.3%、7.4%;检测127例健康人血清,14~33 ku抗原的ELISA假阳性率为0,可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原的假阳性率分别为5.5%、3.1%。结论纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原用于华支睾吸虫病免疫诊断的特异性优于粗抗原,但敏感性较低。     

单克隆抗体Dot－ELISA检测包虫病人循环抗原的研究

用单克隆抗体－斑点酶联免疫吸附试验（ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测４６例确诊包虫病患者血清循环抗原,３５例呈阳性反应,阳性率为７６．０９％。１４例猪囊虫病人,５０例健康人血清均为阴性,上述结果表明本方法具有较好的敏感性和特异性,而且操作简便,试剂用量少,肉眼判断结果,可用于包虫病的诊断和疗效考核。     

斑点ELISA诊断包虫病方法的改进研究

本文介绍了一种改进的斑点酶标法诊断包虫病的初步结果。对60例经手术证实的包虫病患者的阳性率为93.33％.56例正常人的假阳性率为1.79％,与猪囊虫病患者血清有一定的交叉反应。比较了改进的斑点ELISA、IHA、ELISA的阳性率和假阳性率以及与猪囊虫病患者的交叉反应程度。观察了棘球蚴原液粗抗原与Burstein法提取的纯化抗原的敏感性和特异性及用量与交叉反应的关系。比较了三种底物该法对包虫病的流调和病人的快速诊断有一定的价值。     

斯氏狸殖吸虫抗原分析和血清学诊断方法的研究

[目的 ]分析斯氏狸殖吸虫囊蚴、童虫和成虫各期抗原和建立特异性抗原的斯氏狸殖吸虫病血清学诊断方法。 [方法 ]用SDS PAGE分离斯氏狸殖吸虫的各虫期抗原 ,经免疫印迹识别成虫期特异性诊断抗原。采用电洗脱技术分离 10～ 30kDa蛋白组分 ,建立纯化抗原的dot ELISA血清学诊断斯氏狸殖吸虫病。 [结果 ]斯氏狸殖吸虫病患者血清与成虫抗原的 10～ 30kDa显示较多免疫识别带 ,主带为 2 2、2 4和 2 6kDa。与血吸虫病和华支睾吸虫病患者血清的交叉反应带出现于 6 0～ 90kDa。斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA与成虫粗抗原的ELISA检测 2 8例疑诊病人血清 ,两法阳性率间差异无显著性。而检测 38例感染其它吸虫和肺部疾病患者血清 ,粗抗原的ELISA交叉反应率为 13 2 % (5 /38)。 [结论 ]斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA为斯氏狸殖吸虫病高度特异和敏感的血清学诊断方法。     

Comparison of adult somatic and cysteine proteinase antigens of Fasciola gigantica in enzyme linked immunosorbent assay for serodiagnosis of human fasciolosis

Fasciolosis caused by Fasciola hepatica and Fasciola gigantica is one of the major public health problems in the world and in Iran. Considering that stool examination for Fasciola eggs is not a sensitive method and immunodiagnosis methods are more applicable for this purpose, so the present study was conducted to compare the somatic (S) and cysteine proteinase (CP) antigens of F. gigantica in IgG-ELISA to diagnose human fasciolosis. Serum samples obtained from 100 individuals collected during the fasciolosis outbreak in 1999 in the Gilan province of Northern Iran that were coprologically positive for fasciolosis were analyzed by IgG-ELISA. Sera from healthy control individuals, not infected with any parasitic diseases (n=50) and from others with different parasitic infections including hydatidosis (n=40), toxocariosis (n=20), amoebiosis (n=10), and malaria (n=5) were examined as well. The cut-off point for (S) and CP was 0.40 and 0.35, respectively. All 100 individuals that showed clinical manifestations of fasciolosis, were also seropositive using both antigens, whereas all 50 non-infected controls were seronegative, therefore the sensitivity of the test was 100% for both antigens. The specificity of (S) and CP antigens were calculated as 96.9 and 98.4%, respectively. The positive and negative predictive values of the test regarding (S) antigen were 96 and 100%, whereas these values as for CP antigen were 98 and 100% correspondingly. Two individuals with hydatidosis and two with toxocariasis had antibodies that were reactive against (S) antigen, whereas concerning CP antigen, one individual with hydatidosis and another with toxocariasis showed cross-reactivity against it. We have demonstrated that altogether CP antigen provides a more conclusive diagnosis as possessing lower cut-off and enabling better to discriminate between seronegative and seropositive subpopulations.