复方贞术调脂方对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用及机制研究

目的 观察复方贞术调脂方（FTZ）对胰岛素抵抗（IR） HepG2细胞的作用,为开拓FTZ的治疗范围,阐明FTZ调节糖脂代谢的机制提供实验依据.方法 用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞使其产生胰岛素抵抗,用高、中、低3个剂量的FTZ干预后,葡萄糖氧化酶法检测HepG2细胞培养液上清液中葡萄糖的含量,实时荧光定量PCR检测HepG2细胞胰岛素信号PI-3Kp85 mRNA的表达,Western blot检测HepG2细胞胰岛素信号转导蛋白IRS1表达.结果 模型细胞培养基上清液中葡萄糖含量高于正常细胞（P＜0.05）.给予FTZ（1、25、100μg/mL）后,HepG2细胞培养基上清液中葡萄糖含量均低于模型细胞葡萄糖含量（P＜0.05）.胰岛素抵抗细胞与正常细胞相比PI-3Kp85 mRNA和IRS1的蛋白表达显著降低（P＜0.05）.给予FTZ干预后,与胰岛素抵抗细胞相比PI-3Kp85 mRNA和IRS1的蛋白表达显著增加（P＜0.05）.结论 FTZ可改善胰岛素抵抗HepG2细胞对葡萄糖的摄取.其改善胰岛素抵抗的作用机制之一可能是通过上调胰岛素信号PI-3Kp85 mRNA和IRSl蛋白质在胰岛素抵抗HepG2细胞的表达.     

染料木苷对FFAs诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的观察染料木苷对游离脂肪酸(FFAs)诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。方法软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗,给予不同浓度的染料木苷(1、2、4μmol/L)、罗格列酮(1μmol/L)干预,采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响,以葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量(GC),使用Western blot法检测肝细胞葡萄糖转运体1(GLUT1)蛋白的表达水平。结果不同浓度的染料木苷对HepG2细胞增殖无影响;与对照组比较,软脂酸作用24h后,HepG2细胞在胰岛素刺激下的GC降低,GLUT1表达减少(P0.05,P0.01);与模型组比较,染料木苷组HepG2细胞GC随浓度增加而明显提高,GLUT1蛋白表达明显增加(P0.05,P0.01)。结论染料木苷能改善软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。     

CuSO4对HepG2细胞相关炎症指标的影响

目的 观察CuSO4对肝细胞癌(HCC)细胞株HepG2细胞核因子-κB(NF-κB)等相关炎症指标的影响.方法 用含不同浓度CuSO4的RPMI-1640培养液孵育HepG2细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测其对细胞增殖的抑制作用;Western blot法检测不同浓度的CuSO4对HepG2细胞炎症指标NF-κBp65、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-6(IL-6)和γ干扰素(IFN-γ)等表达水平的影响.结果 CuSO4在一定浓度范围内可抑制HepG2细胞的增殖;CuSO4呈一定浓度依赖性地下调HepG2细胞中NF-κB、IFN-γ和IL-5蛋白的表达,上调IL-1β、IL-4和IL-6蛋白的表达.结论 CuSO4能抑制HepG2细胞的增殖,并可通过下调NF-κBp65、IFN-γ和IL-5蛋白的表达并上调IL-1β、IL-4和IL-6蛋白的表达来抑制HepG2细胞的炎症反应.     

塞来希布抑制人肝癌HepG2细胞生长及COX-2、NF-κB表达

目的:观察塞来希布(celecoxib)对人肝癌细胞株HepG2细胞生长及COX-2和NF-κB表达的影响,探讨celecoxib抗肿瘤作用的机制。方法:用不同浓度的celecoxib作用于HepG2细胞,检测其对HepG2细胞增殖和凋亡以及COX-2、NF-κB表达的影响。结果:celecoxib呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡;celecoxib处理组HepG2细胞COX-2和NF-κB蛋白表达明显减弱(P<0.05),COX-2蛋白表达和NF-κB蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论:celecoxib明显抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制COX-2和NF-κB的蛋白表达有关。     

胰岛素抵抗的分子学机制

胰岛素受体底物(IRS)丝氨酸磷酸化是胰岛素信号转导通路中的一种时间依赖性生理反馈机制,代谢及炎症应激阻断其磷酸化进而导致胰岛素抵抗。诱导胰岛素抵抗的因素激活了包括抑制性κB激酶(IKKβ)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶、雷帕霉素靶蛋白通路和p70S6激酶在内的激酶,进而导致失控的IRS丝氨酸磷酸化。因此,这些激酶是抗胰岛素抵抗的潜在药物靶点,IKKβ/核因子κB或JNK通路靶向治疗未来可能发展为糖尿病治疗方法。     

地黄寡糖改善HepG2细胞胰岛素抵抗的分子机制研究

目的研究地黄寡糖改善HepG2细胞胰岛素抵抗的分子机制。方法运用RT-PCR技术,检测地黄寡糖对胰岛素抵抗HepG2细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)、胰岛素受体(IR)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)和2(GLUT2)基因表达的影响。结果地黄寡糖能够促进胰岛素抵抗HepG2细胞中PPAR-α、IR、GLUT4 mRNA的表达;能够明显降低GLUT2基因mRNA的表达。结论地黄寡糖对HepG2胰岛素抵抗具有明显的改善作用,其机制可能与激活PPAR-α、调节HepG2内IR及GLUT2 mRNA的表达有关。     

葛根芩连汤对自发肥胖型2型糖尿病ZDF大鼠FFA及NF-κB/IRS2通路的影响

目的:观察葛根芩连汤(Gegen Qinlian Decoction,GQD)对自发肥胖型2型糖尿病(T2DM)ZDF大鼠血清中游离脂肪酸(FFA)、胰腺组织中核因子(NF)-κB、胰岛素受体底物2(IRS2)的影响。方法:8只雄性ZDF(fa/+)大鼠设为正常对照组,成模的雄性ZDF(fa/fa)大鼠24只随机分为模型组、二甲双胍组和葛根芩连汤组。二甲双胍组、葛根芩连汤组分别予二甲双胍0.3 g·kg-1·d-1、葛根芩连汤13.8 g·kg-1·d-1,正常对照组和模型组给予同体积的0.9%Na Cl溶液灌胃,均连续灌胃8周。每2周测大鼠体质量、空腹血糖(fasting blood-glucose,FBG);给药8周后取材,全自动生化法检测FFA,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)含量,计算胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,IRI)、胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index,ISI),免疫印迹(Western blot,WB)法检测NF-κB、IRS2的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量、FBG、FFA、FINS、IRI均显著升高,ISI明显降低(P0.01);胰腺组织中NF-κB蛋白相对表达量升高,IRS2的蛋白相对表达量下降(P0.05,P0.01)。与模型组比较,葛根芩连汤组大鼠体质量、FBG、FFA、FINS、IRI均明显降低,ISI明显升高(P0.05,P0.01);胰腺组织中NF-κB蛋白相对表达量明显降低,IRS2蛋白相对表达量明显升高(P0.01)。结论:葛根芩连汤可有效改善胰岛素抵抗、提高组织对胰岛素的敏感性,其作用机制可能与相关低度炎症反应中的细胞因子有关。     

持续表达的丙型肝炎病毒NS4B激活HepG2细胞内质网应激反应的研究

目的研究持续表达的丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)对HepG2细胞内质网应激反应的影响。方法 NS4B重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)NS4B通过脂质体转染HepG2细胞,G418筛选、基因组PCR和Western blot鉴定稳定转染细胞;RT-PCR检测稳定转染细胞内人X盒结合蛋白1(XBP1)mRNA剪接,荧光素酶试验检测稳定转染细胞内GRP78启动子、XBP1启动子和核因子κB(NF-κB)活性。结果基因组PCR和Western blot鉴定证实NS4B基因整合到转染HepG2细胞的染色体上,并有效表达;在NS4B稳定转染的HepG2细胞中,检测到XBP1mRNA剪接、XBP1和Grp78启动子激活、Ca2+稳态变化及NF-κB激活。结论 NS4B在HepG2的稳定表达诱导了内质网应激反应,揭示NS4B可能通过诱导肝细胞内质网应激反应在HCV感染及其致病性中发挥作用。     

FK228对TNFα诱导人肝癌细胞HepG2 凋亡及核因子κB活化的影响

目的 研究FK228对TNFα诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡及核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活化的影响.方法 培养HepG2细胞分别用TNFα刺激和FK228+TNFα共同作用,western blot分析细胞核中NF-κBp65及其细胞浆中抑制因子I κBα的表达;用流式细胞技术测定细胞凋亡.结果 组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228(4～32 ng/mL)能抑制TNFα诱导的NF-κBp65的核转移,减少胞浆中IκBα的降解,且增强TNFα诱导的细胞凋亡.结论 FK228减少胞浆中IκBα降解、抑制NF-κB的活化可能是诱导HepG2细胞凋亡、发挥抗肿瘤作用的重要机制.     

核转录因子-κB圈套策略对肝癌细胞HepG2凋亡的影响

目的:观察NF-κB圈套寡核苷酸(Decoy ODNs)对NF-κB活性的影响,进一步探讨其对人肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制。方法:设计NF-κB圈套寡核苷酸,将FITC标记的NF-κB Decoy ODNs转染HepG2,共聚焦显微镜观察其核内定位,描记生长曲线;凝胶阻滞法(EMSA)检测转染前后NF-κB活性;再分别用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。Western blot检测HepG2细胞中Bcl-2和Fas的含量。结果:NF-κB Decoy ODNs转染HepG2细胞后定位于胞核,NF-κB活性明显下降,其显著抑制细胞生长,促进HepG2细胞凋亡;低活性NF-κB可以下调Bcl-2、增加Fas的表达水平。结论:NF-κB圈套寡核苷酸促进肝癌细胞HepG2凋亡的机制可能与其下调NF-κB的活性,使促凋亡蛋白Fas表达增加和降低抑凋蛋白Bcl-2表达有关。     

HBV感染各阶段血清乙肝表面抗原与HBV DNA及年龄的相关性分析

目的:探析未接受抗病毒干预治疗的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者各阶段的血清乙肝表面抗原(HBsAg)定量值与HBV DNA及患者年龄的关系.方法:2015年3月~2016年12月在我院就诊但未接受抗病毒治疗的498例慢性HBV感染患者的临床资料.根据临床诊断结果,将入选者分成非活动性HBsAg携带组(145例)、慢性HBV携带组(57例)、乙型肝炎E抗原(HBeAg)(+)慢性乙型肝炎(CHB)组(151例)、HBeAg(-)CHB组(65例)、HBeAg(-)乙肝肝硬化(LC-B)组(43例)和HBeAg(+)LC-B组(37例)6组.对血清HBsAg定量与血清HBV DNA及患者年龄进行相关性分析.结果:各组间的HBsAg定量值有统计学差异,其中HBeAg(-)、(+)的CHB组间HBsAg水平差异显著.除外非活动性HBsAg携带的HBV感染者的HBV DNA与血清HBsAg定量值呈显著正相关性.HBV感染者的血清HBsAg定量值与其年龄间存在显著负相关性.年龄>40岁的非活动性HBsAg携带者血清HBsAg定量值明显低于同年龄段的HBeAg(-)CHB患者.结论:HBV感染各阶段的血清HBsAg水平各不相同,该水平与患者的年龄及HBV DNA关系密切,是区分年龄超过40岁的非活动性HBsAg携带者与HBeAg(-)CHB患者的一个重要预测指标.     

原发性肝癌患者亲环素B特异性T细胞反应研究

目的 探讨亲环素B (Cyp B)特异性T细胞反应强度变化在原发性肝癌患者中意义.方法 以北京佑安医院收治的107例HBV相关肝病患者为研究对象,分为慢性肝炎组(49例)、肝硬化组(22例)及肝癌组(36例).采集患者外周血并分离外周血单个核细胞.采用体外合成Cyp B全序列多肽技术,运用ELISPOT方法分析107例患者外周血单个核细胞对Cyp B合成肽的细胞反应情况.结果 慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者Cyp B特异性T细胞反应强度分别为0[0～0]SFU/106PBMCs、0[0～0]SFU/106PBMCs及20[0～60] SFU/106PBMCs,3组比较差异有统计学意义(P=0.0210);3组反应频率分别为18.4％(9/49)、18.2％(4/22)及47.2％(17/36),差异有统计学意义(P=0.071).CypB 90～208氨基酸肽段诱导的T细胞反应强度高于1～107氨基酸肽段[(34.3±5.3) SFU/106pBMCs vs.(70.0±11.0)SFU/106PBMCs],差异有统计学意义(t=2.922,P=0.0064).生存分析显示,Cyp B特异性T细胞反应阴性组肿瘤复发率明显高于Cyp B特异性T细胞反应阳性组(P=0.0492).结论 肝癌患者外周血中存在Cyp B特异性T细胞反应,可能成为肝癌预警标志物和未来肝癌免疫治疗的新靶点.     

HBsAg阳性产妇分娩婴儿乙肝免疫接种低和无应答的影响因素

目的 探讨可能导致HBsAg阳性产妇分娩的婴儿乙肝免疫接种后免疫低和无应答的因素.方法 回顾性分析2013-2014年在首都医科大学附属北京佑安医院收治的HBsAg阳性产妇分娩的832例新生儿的临床资料,新生儿出生后6h内及21d接种乙型肝炎免疫球蛋白200 IU,出生当天和出生后l、6个月注射乙型肝炎疫苗10μg.出生后6h内、7月龄抽取股静脉血,检查HBV标志物和HBV DNA定量.按照产妇孕期是否接受抗病毒治疗、母乳喂养、父亲HBsAg情况、母亲HBeAg情况分组,评估上述因素对婴儿乙肝免疫接种应答情况的影响. 结果 产妇孕期接受抗病毒治疗组的婴儿低和无应答率为8.6％(25/290),未行抗病毒治疗组的婴儿低和无应答率为7.0％(38/542),差异无统计学意义(x 2=0.60,P=0.44).母乳喂养组婴儿的低和无应答率为8.8％(18/204),人工喂养组低和无应答率为7.2％(45/628),差异无统计学意义(x 2=0.52,P=0.47).父亲HBsAg阳性组的婴儿低和无应答率为20.0％(5/25),父亲HBsAg阴性组的婴儿低和无应答率为7.2％(58/807),差异无统计学意义(x 2=3.00,P=0.08).母亲HBeAg阳性组的婴儿低和无应答率为9.9％(33/335),母亲HBeAg阴性的婴儿低和无应答率为6.0％(30/497),差异无统计学意义(x 2=3.55,P=0.06).结论 HBsAg阳性产妇分娩的婴儿中,母亲孕期采用抗病毒治疗、母乳喂养、父亲HBsAg阳性和母亲HBeAg阳性对婴儿乙肝免疫应答无明显影响.     

云南汉族人群Apo B位点扩增片段长度多态性分析

采用ＰＣＲ方法对云南汉族人群的ＡｐｏＢ位点进行了Ａｍｐ－ＦＬＰ分析，检出１２个等位基因，２６种基因型，扩增惩段工度分布于６００－１１００ｂｐ之间，等位基因频率范围为０．００３９－０．４６４８，杂合度为６６．４１％，ＤＰ为０．８６１０．研究结果表明，ＡｐｏＢ位点在云南汉族人群具有高度多成性分布，在法医学及其他学科领域里均具有较高的应用价值，此外 ，本研究建立的ＰＣＲ实验方法将有利于在基层部门推广应用     

风门穴与肺俞穴针刺安全深度及角度的应用解剖研究

采用钢针标定法和层次解剖法,在46具成年人尸体上,研究风门穴与肺俞穴的解剖结构和针刺深度及角度。结果显示:向下直刺的解剖结构依次是皮肤、浅筋膜、斜方肌、菱形肌、上后锯肌、竖脊肌、肋提肌、肋间内膜、胸内筋膜、肋胸膜,向下直刺的平均危险深度,风门穴为49.51 mm,肺俞穴为44.88 mm;向外下斜刺,当针体与矢状面夹角在20~25°时,危险深度最小;向内下斜刺,当针体与矢状面夹角大于20°时,比较安全。     

脂多糖和IL-2对乙型肝炎疫苗体外诱导B细胞应答研究

目的在乙型肝炎疫苗体外诱导B淋巴细胞产生HBs-Ab过程中，通过脂多糖和IL-2作为有效刺激物质，使用多秆组合方法进行观察比较，了解影响抗体产生的体外诱导因素。方法用乙型肝炎疫苗刺激组（A组）、乙型肝炎疫苗＋脂多糖刺激组（B组）、乙型肝炎疫苗＋脂多糖＋IL-2刺激组（C组）三组进行淋巴细胞培养和诱导，比较HBs-Ab产生情况，用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定HBs-Ab含量。结果在脂多糖和IL-2的刺激诱导下。能有效促进B淋巴细胞产生HBs-Ab。结论实验证明脂多糖是激活人血B淋巴细胞的有效丝裂原，IL-2可促使活化B细胞增生及产生抗体，脂多糖和IL-2联合作用，可增强乙型肝炎疫苗诱导体液免疫水平。     

乙型肝炎病毒2型的研究

１９８７年Ｃｏｕｒｓａｇｅｔ等首次报道发现有ＨＢＶ感染者血清中测不到抗－ＨＢｃ，并将其血清中的这种病毒命名为乙型肝炎病毒２（ＨＢＶ－２）型，随后，各国均有报道。我们对２．７万例ＨＢｓＡｇ阳性的原始检测记录进行回顾性调查，具有上述血清学特征者占４％，并对收集到的２５例血清样品进行了严格鉴定，结果显示其中绝大多数（８０％，２０／２５）仍为ＨＢＶ感染，２０％（５／２５）各项乙型肝炎指标全阴性，其中有７例为抗－ＨＢｃ阴性，但它们的核心基因，经Ｈ８Ｖ－ＤＮＡ－ＰＣＲ扩增仍为阳性。本研究未发现有与ＨＢＶ不同的毒株。     

淮安市淮安区新生儿乙肝疫苗计划免疫策略实施效果的监测评价

目的 :评价近期淮安市淮安区新生儿乙肝疫苗计划免疫策略实施效果及其影响因素。方法 :采用血清流行病学调查方法,调查7~12月龄幼儿的乙肝疫苗接种史,检测HBs Ag、抗-HBs和抗-HBs。对新生儿的乙肝疫苗免疫效果及其影响因素进行分析评价。结果:共对2 320名幼儿开展了调查。乙肝疫苗计划免疫及时接种率高达99.6%,均全程接种了疫苗。监测对象的HBs Ag阳性率0.13%,核心抗体阳性率为2.1%,估计乙肝疫苗保护率在93.4%,母婴阻断成功率为91.6%,幼儿HBs Ag阳性的原因为母婴阻断失败,所有母婴阻断失败幼儿的母亲为HBe Ag阳性感染者。接种5 g苗的幼儿抗体低、无应答率为26.3%,高于计划免疫中接种10 g疫苗的地区。出生低体重幼儿的低、无应答率高于出生正常体重幼儿。结论 :目前乙肝疫苗计划免疫的规范接种率高,幼儿HBV慢性感染率低,幼儿的慢性HBV感染主要归因于母婴阻断失败。应提高乙肝疫苗计免免疫中的接种剂量。     

植物血凝素和聚肌胞治疗流行性乙型脑炎30例疗效观察

作者于1998年使用植物血凝素(PHA)和聚肌胞(Poly I:C),治疗乙型脑炎30例,取得满意疗效。治疗组治愈率为96.7％,对照组为72.2%,两组间差异具有显著性P<0.01。     

安体维康联合拉米夫定治疗乙肝病毒感染的临床研究

目的探讨安体维康和拉米夫定联用治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的临床疗效。方法选择慢性HBV感染患者105例。其中46例慢性HBV携带者，随机分为治疗组25例。对照组21例；59例慢性乙型肝炎，随机分为治疗组32例，对照组27例。治疗组均给予安体维康和拉米夫定口服，对照组给予灵芝气血宝口服。两组肝功能异常者均加用凯西菜、肝力宝等进行保肝治疗。结果口服拉米夫定和安体维康3个月时，血清中HBeAg和HBVDNA转阴率，慢性HBV携带者分别为24％和76％，与对照组相比差异显著(P＜0．05)；慢性乙型肝炎分别为46．88％和81．25％，与对照组相比差异显著(P＜0．05)。结论安体维康和拉米夫定联用能明显提高瑚BeAg和船HBVDNA的转阴率．疗效明显。