体外模拟二氧化碳气腹对人胃癌细胞迁移运动的影响

目的探讨通过体外模拟气腹环境，观察不同压力二氧化碳（CO2）和氦气（He）对胃癌细胞MKN-45迁移运动的影响。方法将MKN-45细胞置于充满CO2或He的密闭培养箱中，按模拟气腹种类不同分为对照组、CO2气腹组和He气腹组，模拟气腹压力分别12mm Hg和15mm Hg，作用时间均为4h。于处理后用血气分析仪检测培养液pH值；用Transwell法观察细胞迁移运动变化。结果处理结束后即刻检测，CO2组细胞培养液呈酸性，He组细胞培养液呈碱性。CO2组和He组在12mm Hg压力下MKN-45细胞穿过滤膜的数量较对照组差异无明显统计学（P〉0．05），CO2 15mm Hg组细胞穿过滤膜的数量较对照组明显减少（P〈0．01）；He 15mm Hg组与对照组差异无明显统计学（P〉0．05）。结论在临床常用气腹压力下（12mm Hg）CO2对胃癌细胞迁移运动无明显影响。     

长链非编码RNA RP11-363G15.2通过抑制锌指蛋白8基因的表达对肾癌细胞迁移和增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA-RP11-363G15.2在肾癌中的表达及对肾癌细胞PHF8基因表达的抑制作用。方法实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测12对肾癌组织及癌旁组织、肾癌细胞株(ACHN、OS-RC-2、786-O、A498)及人近端肾小管细胞HK-2中RP11-363G15.2的表达。选取表达水平最低的肾癌细胞,分别转染RP11-363G15.2质粒(实验组)和阴性对照质粒(对照组)。qRT-PCR检测两组细胞中RP11-363G15.2和锌指蛋白8(PHF8)mRNA的表达。Western blot检测两组细胞中PHF8、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期依赖性激酶6(CDK6)、波形蛋白(Vimentin)和神经-钙粘素(N-cadherin)蛋白的表达。Transwell迁移实验和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测两组细胞的迁移能力和增殖能力。结果qRT-PCR结果提示,肾癌组织中RP11-363G15.2的表达明显低于癌旁组织(P<0.01),肾癌细胞株中RP11-363G15.2的表达均明显低于人近端肾小管细胞(P<0.01),OS-RC-2细胞中RP11-363G15.2的表达最低(P<0.01)。与对照组相比,实验组OS-RC-2细胞中RP11-363G15.2表达明显增加[(1.06±0.19)vs.(11.09±1.48),t=6.75,P<0.01],PHF8 mRNA表达明显降低[(1.01±0.09)vs.(0.31±0.05),t=6.66,P<0.01]。Western blot结果提示PHF8蛋白表达减少,CDK6、Cyclin D1、Vimentin和N-cadherin蛋白表达减少。与对照组相比,转染RP11-363G15.2后的OS-RC-2细胞迁移能力降低(P<0.01),从第3天开始细胞增殖能力明显降低(P<0.01)。结论RP11-363G15.2在肾癌中低表达,RP11-363G15.2可通过下调肾癌细胞OS-RC-2中PHF8基因的表达,抑制细胞的迁移能力和增殖能力,可能为肾癌的治疗提供了一个新的分子靶点。     

miR-3126-5p靶向 LASP1抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移的机制探讨

目的探讨微小RNA(miRNA)-3126-5p抑制靶基因LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1.LASP1)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株(HT-29、HCT116、LoVo、SW480)和正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中miR-3126-5p的表达水平。选择表达水平最低的细胞株作为实验对象,实验分为2组:阴性对照组(转染miR-NC)和miR-3126-5p组(转染miR-3126-5p),转染48 h后收集各组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞miR-3126-5p的表达水平。采用MTS法和划痕愈合实验分别检测各组细胞的增殖水平和迁移能力。采用生物信息学软件microRNA.org和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-3126-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞靶基因的表达水平。计量资料以均数土标准差(Mean±SO)表示,两两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析结果与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)相比,结直肠癌细胞株miR-3126-5p的表达水平显著降低(P<0.05),表达水平最低的细胞株是HCT116细胞(P<0.01)。阴性对照组和miR-3126-5P组HCT116细胞中miR-3126-5p的表达分别为(1.05±0.16)和(7.91±1.26),差异具有统计学意义(t=5.40,P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组HCT116细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),迁移能力显著下降(t=4.52,F<0.01)。microRNA.org显示miR-3126-5p与LIM和SH3蛋白1(LASP1)基因mRNA存在互补结合位点。miR-3126-5p和L4SP/mRNA能够靶向结合(P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组H CT116细胞中L4SP/基因表达显著降低(t=4.56,P<0.01)。结论结直肠癌细胞株中miR-3126-5p呈低表达,miR-3126-5p能够通过抑制靶基因LASP1降低结直肠癌HCT116细胞的增殖和迁移能力。     

lncRNA PP7080通过调控 TMSG-1表达对胃癌细胞MGC803迁移和增殖的影响

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)PP7080在胃癌组织和细胞株中的表达,明确其对胃癌细胞MGC803迁移和增殖的影响及分子机制。方法:实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测lncRNA PP7080在胃癌组织及癌旁组织、胃癌细胞株及永生化正常胃黏膜上皮细胞株中的表达。选择表达量最少的胃癌细胞株...     

PBK/TOPK表达对膀胱癌BIU-87细胞株增殖及迁移的影响

目的 探讨PBK/TOPK在膀胱癌中的表达及其表达对BIU-87细胞株增殖及迁移的影响。方法 采用QRT-PCR及Western blot检测3例配对膀胱癌及癌旁正常组织中PBK/TOPK的表达。随后,对膀胱癌BIU-87细胞株中PBK/TOPK的表达分别干扰及过表达,通过CCK-8实验检测细胞的增殖,Transwell实验检测细胞的迁移能力。结果 结果一致表明PBK/TOPK在膀胱癌中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。干扰PBK/TOPK表达后,BIU-87细胞的增殖及迁移能力下降(P<0.05) ;而PBK/TOPK过表达后,BIU-87细胞的增殖及迁移能力增强(P<0.05) 。结论 PBK/TOPK高表达于膀胱癌,有助于膀胱癌细胞的增殖及迁移。     

shRNA抑制SGC7901胃癌细胞绿色荧光蛋白基因的表达

目的：观察针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹结构RNA(small hairpin RNA，shRNA)表达载体(SHi—pU6-GFP)对SGC7901胃癌细胞中GFP的抑制作用。方法：设计针对GFP基因的shRNA序列．构建SHi—pU6-GFP质粒。采用质粒pCX—GFP(5510bp)和含有鼠U6启动子pU6（3．3kb)质粒，应用Lipofectamine^TM2000将pCX-GFP质粒和SHi—pU6-GFP质粒转染SGC7901细胞。荧光显微镜观察转染效果和不同时间的转染效率。结果：质粒SHi-pU6-GFP经酶切电泳后，出现3．3kh和约350bp条带，与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符。说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHi—pU6-GFP质粒。SGC7901细胞中观察到转染pCX—EGFP质粒和SHi—pU6-GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少：结论：shRNA可以有效地抑制SGC7901细胞中GFP基因的表达。     

胃癌组织的细胞凋亡和增殖与其临床分期的关系研究

目的探讨胃癌组织中细胞凋亡和增殖细胞核抗原的表达与胃癌临床分期的关系。方法利用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色法,检测40例手术切除的胃癌标本中组织细胞的凋亡指数(AI)及增殖指数(PI),分析两者及其比例与胃癌TNM分期的关系。结果胃癌组织中细胞凋亡指数和增殖指数分别为(4.3±1.2)％和(49.8±15.9)％,凋亡/增殖比率为0.11±0.07,与癌周正常黏膜组织比较,差异有显著性意义(P<0.01);随着TNM分期的进展,胃癌细胞的凋亡指数降低,增殖指数升高,凋亡/增殖比率则逐渐下降,其差异有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论细胞凋亡的减少和细胞增殖的增多与胃癌的发生发展有明显的关系,两者及其比率可作为进展期胃癌的预后监测指标之一。     

lncRNA HAGLR通过靶向miR-93-5p调控胃癌细胞增殖和迁移的分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HAGLR通过靶基因微小RNA(miR)-93-5p调控胃癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞株(HS-746T、BGC823、SGC7901、MGC803)和正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)中HAGLR的表达水平。选择HA...     

胃癌中p16、p53蛋白表达与细胞增殖、浸润、转移及预后的关系

目的 探讨p16、p53蛋白表达与胃癌细胞增殖、浸润、转移及预后的关系。方法 应用免疫组化S－P法研究100例胃癌,20例中、重度异型增生,16例萎缩性胃炎和10例正常胃黏膜p16、p53蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果 正常胃黏膜p16阳性率为80％,p53未表达。萎缩性胃炎、异型增生和胃癌组织中p16阳性率分别为68．8％、35％和43％;p53阳性率分别为12．5％、25％和56％。p16在胃癌中的阳性率与预后明显相关（P＜0．05）;p53阳性率与肿瘤病理分级、Lanren分型有显著相关（P＜0．05）,与预后关系密切（P＜0．01）。从正常胃黏膜到病变组织PCNA指数逐渐上升,以异型增生、胃癌细胞增殖显著（P＜0．01）,癌细胞PCNA指数p16阴性组,p53阳性组高于对照组,与肿瘤大小、浸润浓度密切相关（P＜0．05）。p16、p53阳性表达具有协同性（P＜0．05）。结论 胃黏膜中、重度异型增生有较高的增殖活性,基因水平上已表现出癌变特性,是癌变发生过程中的一个重要阶段。p16、p53蛋白表达在胃癌的发生发展中起重要作用,可作为判断预后的可靠指标。     

姜黄素调控miR-199a-3p基因抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的:探讨姜黄素调控miR-199a-3p的基因表达对前列腺癌C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:将miR-199a-3p抑制物及阴性对照转染至C4-2细胞中,并分别标记为anti-miR-199a-3p组和anti-miR-con组;将仅加入脂质体的C4-2细胞标记为对照组。运用MTT法检测通过姜黄素(0、20...     

不同压力的二氧化碳气腹对胃癌细胞迁移运动和细胞骨架的影响

目的通过体外模拟气腹环境，观察不同压力CO2或He（helium）对胃癌细胞MKN-45迁移运动和细胞骨架的影响。方法将MKN-45细胞置于充满CO2或He的密闭培养箱中，按模拟气腹种类不同分为对照组、CO2气腹组和He气腹组，模拟气腹压力分别为12mmHg和15mmHg，作用时间均为4h。于处理结束后即刻用血气分析仪检测培养液pH值；Transwell法观察细胞迁移运动变化；激光共聚焦显微镜观察细胞骨架变化。结果CO2组细胞培养液呈酸性，He组细胞培养液呈碱性。CO2组和He组在12mmHg压力下MKN-45细胞穿过滤膜的数量较对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。CO2 15mmHg组细胞穿过滤膜的数量较对照组明显减少（P〈0．01）；He15mmHg组与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）；CO2 15mmHg组细胞微丝、微管结构模糊，伪足消失。结论在临床常用气腹压力（12mmHg）下CO2对胃癌细胞迁移运动及细胞骨架无明显影响；在15mmHg压力下，CO2对胃癌细胞迁移运动起抑制作用，其作用机制可能与其细胞骨架受破坏有关。     

氟伐他汀诱导人膀胱癌细胞凋亡抑制细胞增殖与迁移的研究

目的 研究羟甲戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂--氟伐他汀在体外对人膀胱癌T24细胞凋亡、增殖和迁移及侵袭能力的影响,并探讨相关分子机制.方法 MTT法检测氟伐他汀对T24细胞增殖的影响;流式细胞术(PI和Annexin V双染法)检测细胞凋亡率的变化;划痕愈合和Transwell试验检测氟伐他汀对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测Bax、Cleaved-caspase-3等蛋白的表达情况.结果 氟伐他汀在体外能显著抑制T24细胞的增殖,成明显浓度和时间依赖性;可以显著诱导肿瘤细胞凋亡;能显著抑制T24细胞的迁移和侵袭能力.结论 氟伐他汀能显著诱导T24细胞发生凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力.     

高迁移率族蛋白B1对体外人肺动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的 评价高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对体外培养人肺动脉血管平滑肌细胞(hPASMC)增殖、迁移和凋亡的影响.方法 体外培养hPASMC,调整细胞密度(2× 105个/ml)后接种到96孔板(100 μl/孔,2× 105个/ml)、6孔板(1ml/孔,2× 106个/ml)和改良24孔Boyden趋化小室(100μg/孔,5×103个/ml),采用随机数字表法,将其分为5组:对照组(C组)和不同浓度HMGB1组(H1组～H4组),分别在DMEM和含HMGB1 1、10、100、1000 ng/ml的DMEM培养液孵育.孵育24和48 h时,采用MTT法检测细胞增殖率,Boyden小室法检测透膜细胞数,TUNEL法检测hPASMC凋亡情况.结果 与C组比较,H1组～H4组细胞增殖率升高,透膜细胞数增多(P＜ 0.05);与H1组比较,H2组～H4组细胞增殖率升高,H3组和H4组透膜细胞数增多(P＜0.05);与H2组比较,H3组和H4组细胞增殖率升高,透膜细胞数增多(P＜ 0.05);H3组和H4组间各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05);与孵育24h时比较,各组孵育48 h时细胞增殖率升高(P＜0.05).各组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P＞ 0.05).结论 HMGB1可促进hPASMC的增殖和透膜迁移,可能参与肺损伤肺血管重构的发生.     

不同压力CO2气腹对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的通过体外模拟气腹环境,观察CO2在不同压力下对胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡的影响。方法以CO2为气体介质,在气腹机作用下维持密闭培养箱内压力为0、5、10、15mmHg,作用时间为4h。于处理后用血气分析仪检测培养液pH值;MTT法检测细胞增殖情况;通过流式细胞仪观察细胞凋亡指数变化;采用AnnexinV-FITC/PI双标染色、流式细胞仪测定凋亡细胞比例。结果处理结束后即刻检测,CO2组细胞培养液呈酸性,但在恢复正常培养后6h即恢复正常。MTT法检测细胞增殖变化,CO2组0、5、10mmHg压力下处理组与对照组比较无明显差异(P>0.05),而在15mmHg压力下处理组与对照组比较OD490值在前3d无明显差异(P>0.05),在4～7dOD490值下降非常显著(P<0.01)。在CO2环境下,0mmHg组细胞凋亡指数和凋亡比例与对照组相比无明显差异(P>0.05),而5、10、15mmHg组明显大于正常对照组(P<0.05)。结论在较低压力范围内(≤10mmHg)CO2对胃癌细胞增殖、凋亡影响不大,而在15mmHg压力下,CO2可抑制MKN-45细胞增殖,促进其凋亡。     

富组蛋白1对人表皮细胞株HaCaT增殖和迁移功能的影响

目的 了解富组蛋白1( Hst1)对人表皮细胞株HaCaT增殖、迁移功能的影响. 方法 (1)常规培养HaCaT细胞,按照随机数字表法(分组方法下同)分为对照组与100、30、3μg/mL Hst1组以及10 ng/mL重组人表皮生长因子(rhEGF)组、30 μg/mL Hst1+ 10 ng/mL rhEGF组,每组样本数为27.对照组不添加刺激因素,后5组分别加入相应浓度Hst1和(或)rhEGF,培养24、48、72 h采用细胞计数法检测各组细胞增殖水平.(2)将HaCaT细胞分为对照组与100、30、3μg/mL Hst1组,每组样本数为27.对照组不添加刺激因素,后3组分别加入相应浓度Hst1,培养24、48、72 h采用流式细胞术检测各组细胞周期,计算增殖指数(PI).(3)将HaCaT细胞分为对照组、30 μg/mL Hst1组、10 ng/mL rhEGF组、30 μg/mL Hst1+10 ng/mL rhEGF组、15 μg/mL Hst1+5 ng/mL rhEGF组、15 iμg/mL Hst1+ 10 ng/mL rhEGF组,每组样本数为10.对照组不添加刺激因素,后5组分别加入相应浓度的Hst1和(或)rhEGF培养.将各组细胞分为2份,一份用丝裂霉素C处理2h,另一份不作处理,均行划痕实验,划痕后0(即刻)、16、24 h观测细胞迁移情况并计算划痕愈合面积百分比.对数据行方差分析、LSD-t检验或Dunnettt检验. 结果 (1)培养24 h,10 ng/mL rhEGF组、30 μg/mLHst1+ 10 ng/mL rhEGF组细胞数显著高于对照组(t值分别为3.813、5.410,P＜0.05或P＜0.01).与培养48 h时30、3 μg/mL Hst1组比较除外,其余各Hst1和(或)rhEGF处理组培养48、72 h细胞数均显著高于对照组(t值为7.754～24.979,P值均小于0.01).培养72 h,100 μg/mL Hst1组细胞数为(19.21±0.59)×104个,明显高于30 μg/mL Hst1组的(16.19±0.53) ×104个及3 μg/mL Hst1组的(15.38±0.13)×104个(t值分别为11.391、19.017,P值均小于0.01);30.μg/mLHst1+ 10 ng/mLrhEGF组细胞数高于30、3μg/mL Hst1组及10 ng/mL rhEGF组(t值为4.579 ～34.884,P＜0.05或P ＜0.01).各组细胞数均随培养时间的延长而增加.(2)与对照组培养24、48 h比较,100、30 μg/mL Hst1组G0/G1期细胞百分比降低,S期细胞百分比提高(30 μg/mL Hst1组与对照组培养24 h比较除外),PI值显著提高(t值为4.752 ～16.104,P值均小于0.01).3μg/mL Hst1组仅在培养48 h时PI值较对照组显著增加(t=4.609,P＜0.01).培养72 h,仅100 μg/mL Hst1组PI值显著高于对照组(t =8.005,P＜0.01).各Hst1处理组组间比较,各时相点随Hst1浓度降低,G0/G1期细胞百分比呈升高趋势,S期细胞百分比及PI值均呈下降趋势.各Hst1处理组组内比较,随着培养时间的延长,G0/G1期细胞百分比先降低后增加,S期细胞百分比、PI值均先增加后降低.(3)未用丝裂霉素C处理:划痕后16h,30 μg/mL Hst1组划痕愈合面积百分比为(75.9±3.9)％,显著高于对照组、10 ng/mL rhEGF组[(53.0±3.5)％、(61.7±2.5)％,t值分别为12.241、7.598,P值均小于0.01],低于30 μg/mL Hst1+10 ng/mL rhEGF组、15 μg/mL Hst1+5 ng/mL rhEGF组、15 μg/mLHst1+ 10 ng/mL rhEGF组[(95.0±4.1)％、(97.0±3.7)％、(80.5±5.9)％,t值为-11.324～-2.502,P＜0.05或P＜0.01].丝裂霉素C处理:划痕后16h,30 μg/mL Hst1组划痕愈合面积百分比为(54.1±4.5)％,高于对照组[(35.8±5.7)％,t =7.790,P＜0 01],但较未用丝裂霉素C处理时明显下降(t=- 10.863,P＜0.01);与其他Hst1和rhEGF联合处理组相近(t值为0.061 ～2.030,P值均大于0.05).未用丝裂霉素C处理时及丝裂霉素C处理后各组内划痕后24 h与16 h划痕愈合面积百分比相近(F值为0.856～3.062,P值均大于0.05). 结论 Hst1能促进HaCaT细胞增殖和迁移,与rhEGF联合应用时对细胞增殖有协同促进作用,但对细胞迁移无明显协同作用.     

miRNA-6516-5p通过靶向ODC1调控肾癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨微小RNA(miRNA)-6516-5p在肾癌细胞系中的表达及调控肾癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌细胞系和正常近端肾小管上皮细胞系中miR-6516-5p的表达。用脂质体法分别将miR-6516-5p模拟物和无意义序列(NC)瞬时转染至miR-6516-...     

重组人生长激素对胃癌细胞生长的影响

目的　研究重组人生长激素 (rhGH)在体内外对胃癌细胞生长的影响。方法　将大鼠分为对照组、rhGH组、奥沙利铂 (L OHP)组和rhGH L OHP组 4组 ,利用流式细胞仪和裸鼠移植瘤实验等方法测定rhGH对人胃癌细胞株BGC82 3细胞周期、增殖指数 (PI)、肿瘤抑制率和移植瘤核增殖抗原(PCNA)的影响。结果　rhGH组G0 ～G1 期细胞数占 5 2 3% ,S期细胞数占 32 6 % ,G2 ～M期细胞数占14 7% ,PI为 4 7 7% ,肿瘤抑制率为 5 % ,PCNA阳性表达率为 82 7% ,与对照组 (G0 ～G1 期细胞数占4 7 8% ,S期细胞数占 37 0 % ,G2 ～M期细胞数占 15 3% ,PI 5 2 3% ,肿瘤抑制率 0 ,PCNA77 8% )相比差异无显著意义 ;rhGH L OHP组 (G0 ～G1 期细胞数占 86 5 % ,S期细胞数占 5 5 % ,G2 ～M期细胞数占 7 8% ,PI13 5 % ,肿瘤抑制率 4 9 3% ,PCNA 5 8 2 % )与L OHP组 (G0 ～G1 期细胞数占 83 9% ,S期细胞数占 7 9% ,G2 ～M期细胞数占 8 3% ,PI16 2 % ,肿瘤抑制率 4 6 6 % ,PCNA 6 2 5 % )比较差异亦无显著意义 ;rhGH L OHP组与rhGH组和对照组比较 ,G0 ～G1 期细胞肿瘤抑制率明显增加 ,S期细胞、PI和PCNA明显减少。结论　重组人生长激素在体内外不会促进胃癌细胞的增殖。